Trypanosoma cruzi: associação entre infectividade e expressão de glicoproteínas de superfície com atividade sinalizadora de cálcio

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Data
1998
Autores
Ruiz, Rita de Cássia [UNIFESP]
Orientadores
Yoshida, Nobuko [UNIFESP]
Tipo
Tese de doutorado
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Resumo
Neste trabalho investigamos alguns aspectos do processo de invasao celular do T cruzi associados a mobilizacao de calcio no parasita e na celula hospedeira. Tracamos como principais objetivos: a) determinar se existe correlacao entre a capacidade de formas metaciclicas de diferentes cepas de T cruzi em invadir celulas de mamifero e a expressao de moleculas de superficie gp9O, gp82 e gp35/50. b) analisar comparativamente a capacidade da gp9O, gp82 e gp35/50 de induzir sinal de Ca 2+ na celula hospedeira e/ou no parasita. Os resultados de ensaio de invasao celular mostraram que as formas metaciclicas da cepa CL invadem celulas de mamifero (Hela, Vero) em maior numero (6-8 vezes) em comparacao a cepa G. A analise da expressao das glicoproteinas de superficie gp9O, gp82 e gp35/50 atraves da marcacao das formas metaciclicas com 125I seguida de imunoprecipitacao, immunoblotting e citometria de fluxo, revelou que a cepa G difere da cepa CL pela expressao de gp9O e pela presenca de maiores niveis de gp35/50. Quanto a gp82, cuja expressao e comparavel nas duas cepas. a analise da sequencia de amlnoacidos, deduzida a partir da sequencia de CDNA. revelou 97,9 por cento de identidade entre a cepa G e CL. Mostramos que o extrato sonicado de formas metaciclicas (G e CL) e capaz de induzir o aumento de [Ca2-]i em celulas Hela, e que grande parte dessa atividade e devida a gp82, a julgar pela inibicao de 50-70 por cento que resulta da incubacao do extrato parasitario com o anticorpo monoclonal 3F6 dirigido contra a gp82. Nos experimentos com a glicoproteina purificada de tripomasstigotas metaciclicos, observamos que: a) a gp9O, gp82 e gp35/50, ligam-se as celulas Hela de maneira dose dependente e saturavel, o que caracteriza uma ligacao do tipo receptor-dependente. b) a gp82 induz maior aumento de [Ca2+]i nas celulas Hela quando comparada a gp35/50, enquanto a gp9O nao induz a mobilizacao de Ca2+ de maneira significativa, do mesmo modo que a gp63 de Leishmania (L.) amazonensis, utilizada como controle. c) as proteinas recombinantes contendo as sequencias da gp9O ou da gp82, geradas em bacterias, ligam-se as celulas Hela do mesmo modo que as moleculas nativas, indicando que os carboidratos das cadeias oligossacaridicas ou a ancora GPI nao estao envolvidas na adesao a celula hospedeira. Observamos nos ensaios de mobilizacao de Ca2+ intracelular nas formas metaciclicas observamos que a mesma e induzida pelo extrato ...(au)
Descrição
Citação
São Paulo: [s.n.], 1998. 96 p.