Detecção de mutações no gene N-RAS em crianças com leucemia linfoblástica aguda diagnosticadas pelo grupo mineiro de tratamento das leucemias agudas (GMTLA)

Abstract

Mutacoes de ponto nos codons 12, 13 e 61 do proto-oncogene N-ras foram detectadas em varias neoplasias humanas. Para determinar a incidencia e o significado prognostico das mutacoes do gene N-ras em LLA de crianca, estudamos 170 pacientes com LLA tratados entre 1988 e 1994 pelo protocolo GMTLA, com acompanhamento minimo de tres anos. A presenca de mutacoes de ponto nos codon 12 e 13 foi estudada no DNA extraido de esfregacos de medula ao diagnostico, usando a amplificacao in vitro pela reacao em cadeia da polimerase (PCR), analise do polimorfismo de conformacao em helice simples (SSCP) seguidas pela hibridizacao com sondas alelo especificas e clonagem em vetor pMOS Blue T com posterior sequenciamento. Em 101 criancas o DNA extraido dos esfregacos foi tambem estudado para o exon 2 pela PCR, analisados pelo SSCP e o fragmento sequenciado apos clonagem em vetor. Os resultados mostraram uma frequencia de 4,11% de mutacoes no codon 12, 13 e 1,98% no exon 2 do gene N-ras em criancas com LLA. Quando analisadas 101 criancas que tiveram os dois exons estudados, a frequencia de mutacoes foi 6,93%, nao sendo diferente dos trabalhos da literatura que estudaram casuisticas semelhantes. Uma nova mutacao no codon 64 do gene N-ras foi detectada pelo sequenciamento em um paciente do presente trabalho, Nao foram observadas diferencas estatisticamente significativas comparando-se os dois grupos de pacientes com e sem mutacoes, e as variaveis sexo, idade, contagem de leucocitos ao diagnostico, estado nutricional e fatores de risco segundo o protocolo BFM de tratamento da LLA infantil. O numero de casos com reatividade ao PAS maior que 5% foi significantemente maior no grupo de criancas sem mutacoes no codon 12 e 13 do N-ras quando comparadas com o grupo com mutacoes. A comparacao das variaveis sobrevida global e tempo para qualquer recaida nao indicou diferencas significantes entre os pacientes com mutacao no codon 12 e 13 do N-ras e aqueles sem esta anormalidade. Estes resultados sugerem que, na crianca com LLA, as mutacoes do gene ras sao pouco frequentes ao dignostico e que a deteccao da ativacao deste gene possa ser de pequeno valor prognostico