Aspectos moleculares da infectividade de formas tripomastigotas metaciclicas de Trypanosoma cruzi
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Data
1997
Autores
Dorta, Miriam Leandro [UNIFESP]
Orientadores
Tipo
Tese de doutorado
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Resumo
Estudamos neste trabalho alguns aspectos do processo de invasao celular pelo T.cruzi. Em particular, o papel das glicoproteinas de superficie de formas metaciclicas, a gp82 e a gp35/50, foi analisado. Utilizando um total de quatro tipos celulares e 11 diferentes cepas de T.cruzi, observamos que, independente do tipo de celula utilizada, seja fagocitica ou nao fagocitica, de origem humana ou murina, determinadas cepas (Y e CL) apresentam alto nivel de invasao, enquanto outras (G e Tulahuen) sao pouco invasivas. Os nossos resultados mostraram haver uma correlacao entre infectividade de formas metaciclicas de T.cruzi oin vitroo e oin vivoo. A importancia da mobilizacao de Ca2+ da celula hospedeira na invasao pelas formas metaciclicas de T.cruzi foi demonstrada em ensaios de inibicao da invasao por fatores que interferem com a mobilizacao desse ion. O tratamento de celulas HeLa com tapsigargina ou ionoforo de calcio A23187, na ausencia de Ca2+ extracelular, diminuiu significativamente o indice de invasao. Desde que o efeito inibitorio na ausencia de Ca2+ extracelular, assim como na presenca de CdCl2 (antagonista nao especifico de canais de calcio) foi pequeno, enquanto o efeito inibitorio de tapsigargina foi consideravel, postula-se que a liberacao de Ca2+ de compartimentos intracelulares, mais que o influxo de calcio do meio extracelular, esteja regulando o processo de invasao celular por tripomastigotas metaciclicos. Observamos um aumento de calcio intracelular, [Ca2+]i, na celula hospedeira alguns segundo apos o contato com formas metaciclicas vivas ou com extrato sonicado do parasita, de ordem de 100% ou mais acima do nivel basal. Extrato sonicado de formas epimastigotas foi incapaz de desencadear o sinal de Ca2+. As glicoproteinas, gp82 e gp35/50, na sua forma purificada, foram capazes de induzir aumento de [Ca2+]i na celula hospedeira. Tanto a gp35/50 quanto a gp82 ligam-se as celulas HeLa de maneira dose dependente e saturante e inibe significativamente a invasao celular. A gp82 inibiu em cerca de 80% e 60% respectivamente a entrada de formas metaciclicas das cepas CL e G em celulas HeLa, enquanto a inibicao por gp35/50 foi de cerca de 80% para a cepa G e 30% para a cepa CL. A identificacao da gp82 como principal molecula de superficie de formas metaciclicas envolvida na invasao celular levou-nos a determinar a regiao dessa molecula relevante neste processo. Os resultados dos ensaios com as varias proteinas recombinantes contendo diferentes sequencias da gp82 sugerem que o dominio central da molecula, entre os aminoacidos 224-356, e requerido para a interacao com a celula ospedeira. Embora dados da literatura indiquem a mobilizacao de lisosomas da celula hospedeira como requisito para a entrada de T.cruzi, em nossos experimentos nem sempre conseguimos visualizar a associacao de lisosomas com tripomastigotas metaciclicos durante o processo de invasao
Descrição
Citação
São Paulo: [s.n.], 1997. 84 p.