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    Alterações em vias de reparo causadas pelo Cloridrato de Metilfenidato em células germinativas e tecido testicular: um estudo preliminar
    (Universidade Federal de São Paulo, 2024-12-11) Pagliari, Laura Eduarda Scarpa Cabral [UNIFESP]; Vilela, Vanessa Vendramini [UNIFESP]; Gomes, Ana Clara da Costa Nunes [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/3419372674559999; http://lattes.cnpq.br/7430244790148504; http://lattes.cnpq.br/9660631876530675
    O cloridrato de metilfenidato (MFD) é um dos medicamentos mais amplamente utilizados no tratamento do Transtorno de Déficit de Atenção e Hiperatividade (TDAH). Essa droga age por meio do bloqueio da recaptação pré-sináptica de dopamina e noradrenalina, gerando um efeito estimulante. Nos últimos anos houve um aumento significativo tanto no diagnóstico de casos de TDAH, quanto no consumo desta classe de medicamentos, inclusive para fins off-label, sendo um deles como intensificador cognitivo. Uma recente descoberta mostrou que o MFD apresenta efeitos genotóxicos duradouros em células germinativas masculinas, porém sem indícios de serem causados por estresse oxidativo. Neste trabalho, foi investigada a possibilidade de tais danos serem causados por alterações nas vias de reparo do DNA. Para investigar possíveis interferências, foram utilizadas células germinativas e tecido testicular de ratos Wistar em dois experimentos: ratos tratados com uma dose única e alta do medicamento (tratamento agudo - 20 mg/kg) e ratos tratados com uma dose compatível com a dose terapêutica indicada para humanos, por 30 dias (tratamento subcrônico - 5 mg/kg). Alvos relacionados à sinalização de reparo do DNA foram investigados (γH2AX, PARP1 e S6K2), bem como proteínas relacionadas à função mitocondrial (TOM20 e COX4). As técnicas de imunocitoquímica e citometria de fluxo foram utilizadas para identificar e quantificar a presença de γH2AX e western blot para a γH2AX e demais proteínas estudadas. Os resultados sugerem que o MFD reduziu a histona γH2AX no tecido testicular logo após o tratamento subcrônico. Em contrapartida, foi observado aumento da S6K2 neste mesmo tecido, após o tratamento subcrônico. Houve aumento duradouro da PARP-1 nas células germinativas após o tratamento agudo. A quantificação da COX4 se mostrou aumentada, ao passo que não foi observada alteração significativa de TOM20. Conclui-se que o MFD interfere em mecanismos de reconhecimento de dano genômico, possivelmente comprometendo a eficiência da sinalização de reparo de quebras no DNA e a estabilidade genômica; por outro lado, a função mitocondrial aparenta estar normal, o que reforça a ideia de que os danos genômicos não devem ser causados por estresse oxidativo.
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    Efeito do inibidor farmacológico de mTOR (rapamicina) na resposta de linfócitos T CD8+ gerados pela imunização prime-boost heteróloga
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2019-10-31) Moraschi, Barbara Ferri [UNIFESP]; Vasconcelos, Jose Ronnie Carvalho de [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/2376141137368343; http://lattes.cnpq.br/6120115424538581; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Vaccination protocol known as heterologous prime-boost is a powerful strategy to elicit effector CD8+ T cells against the parasite Trypanosoma cruzi. It consists in the use of plasmid DNA, followed by a deficient recombinant human adenovirus type 5, both carrying the ASP-2 gene of T. cruzi. Published experimental viral infections, suggested that the inhibition of mTOR, a kinase involved in differentiation, metabolism, migration, and cell death mechanisms, enhances memory CD8+ T population. However, this method to promote a higher memory response in protozoan infection/immunization is not described. Thus, our aim was to analyze the role of rapamycin, the pharmacological inhibitor of mTOR, in immunization-induced CD8+ T response against T. cruzi. For this purpose, C57BL/6, A/Sn, or CD4+ knockout mice were immunized and treated daily with rapamycin during 35 days the evaluation of CD8+ T cell responses by immunophenotyping, intracellular staining, ELISPOT assay and in vivo cytotoxicity. Our results showed that rapamycin-based treatment enhanced the frequency of specific CD8+ T cells and the percentage of the polyfunctional population, which degranulates and secretes both IFN- and TNF, when compared to the immunized group. This Increasing was also observed 95 days after the first dose even in mice immunized with ten-fold lower doses of plasmid/adenovirus. Moreover, mice susceptible to experimental infection by T. cruzi immunized with reduced immunization doses, treated with rapamycin, and infected with trypomastigotes showed a survival rate of 100% whereas the immunized-group rate varied to 42%. Therefore, we sought to identify which CD8+ T cell mechanisms were being modulated by the inhibition of mTOR. It was seen that the in vivo proliferation was higher in the group treated with rapamycin, and CD8+ T effector and memory cells generated by immunization and treatment had a more energetic metabolic profile, which is closely related to function and differentiation of T cells. Taken together, our data provides a new approach to vaccines development against intracellular parasites, since rapamycin has an adjuvant effect on CD8+ T response through modulation of mTOR activity.
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    Efeitos da Suplementação com Whey Protein e da Prática de Exercícios Físicos no Músculo Esquelético de Idosos: uma Revisão da Literatura
    (Universidade Federal de São Paulo, 2021-02-26) Rebelo, Rachel Soares Macedo [UNIFESP]; Lambertucci, Rafael Herling [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/5826005580515987; http://lattes.cnpq.br/7726580702379579; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    O envelhecimento é capaz de promover diversas mudanças dentro e fora do organismo, especialmente alterações na composição corporal, como a perda de massa magra e a redução da força, processos conhecidos como sarcopenia e dinapenia, respectivamente. A manutenção da saúde nessa etapa da vida pode ser realizada pela adoção de hábitos saudáveis, principalmente com a manipulação da dieta e protocolos de treino individualizados que priorizem o treinamento resistido. O objetivo deste estudo foi apresentar os principais benefícios da suplementação com whey protein e da prática de exercícios físicos no tecido muscular esquelético de idosos, por meio de uma revisão narrativa de literatura, a partir da Biblioteca SciELO e PubMed no período de 2000 a 2020. Os resultados demonstraram que idosos se beneficiam do treinamento de força e da suplementação com whey protein, pois ambos os estímulos são capazes de interagir com a mesma via de sinalização para aumento de força e hipertrofia muscular, por meio do complexo mTOR.
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    HPV-16 E7 expression up-regulates phospholipase D activity and promotes rapamycin resistance in a pRB-dependent manner
    (Biomed Central Ltd, 2018) Rabachini, Tatiana; Boccardo, Enrique; Andrade, Rubiana; Perez, Katia Regina [UNIFESP]; Nonogaki, Suely; Cuccovia, Iolanda Midea; Villa, Luisa Lina
    Background: Human Papillomavirus (HPV) infection is the main risk factor for the development and progression of cervical cancer. HPV-16 E6 and E7 expression is essential for induction and maintenance of the transformed phenotype. These oncoproteins interfere with the function of several intracellular proteins, including those controlling the PI3K/AKT/mTOR pathway in which Phospolipase D (PLD) and Phosphatidic acid (PA) play a critical role. Methods: PLD activity was measured in primary human keratinocytes transduced with retroviruses expressing HPV-16 E6, E7 or E7 mutants. The cytostatic effect of rapamycin, a well-known mTOR inhibitor with potential clinical applications, was evaluated in monolayer and organotypic cultures. Results: HPV-16 E7 expression in primary human keratinocytes leads to an increase in PLD expression and activity. Moreover, this activation is dependent on the ability of HPV-16 E7 to induce retinoblastoma protein (pRb) degradation. We also show that cells expressing HPV-16 E7 or silenced for pRb acquire resistance to the antiproliferative effect of rapamycin. Conclusion: This is the first indication that HPV oncoproteins can affect PLD activity. Since PA can interfere with the ability of rapamycin to bind mTOR, the use of combined strategies to target mTOR and PLD activity might be considered to treat HPV-related malignancies.
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    Successful everolimus therapy for SEGA in pediatric patients with tuberous sclerosis complex
    (Springer, 2013-12-01) Cappellano, A. M. [UNIFESP]; Senerchia, A. A. [UNIFESP]; Adolfo, F. [UNIFESP]; Paiva, P. M. [UNIFESP]; Pinho, R. [UNIFESP]; Covic, A. [UNIFESP]; Cavalheiro, S. [UNIFESP]; Saba, N. [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Tuberous sclerosis complex (TSC) is associated with hamartomatous growths including subependymal giant cell astrocytomas (SEGAs). Although, SEGAs are slow-growing glioneuronal tumors, they represent a significant cause of morbidity and mortality due to the risk of sudden death from acute hydrocephalus. Neurosurgical resection has been the mainstay of therapy, since radiotherapy and chemotherapy were proved inefficient in those tumors. Recent studies support the use of everolimus for subependymal giant cell astrocytomas associated with tuberous sclerosis and suggest it might represent a disease-modifying treatment for other aspects of tuberous sclerosis.We describe the clinical and radiological progression of three pediatric patients with definitive diagnosis of TSC and SEGA, which have been treated with everolimus.Up to 34 % sustained SEGA decrease was observed in the three cases. All three patients have experienced seizure control and two of them have showed cognitive and behavioral improvement. Everolimus has been well tolerated by all. No severe adverse events have been observed to date.Everolimus offers significant promise in treating SEGAs. Studies are required to explore optimal therapy duration and management upon discontinuing therapy.