Navegando por Palavras-chave "Sulfatos de Condroitina"

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    Alteracoes do contreudo e na estrutura do condroitim sulfato e do heparam sulfato urinario de pacientes portadores de neoplasias
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 1998) Paiva, Ismar [UNIFESP]
    Estudos tem demonstrado um aumento significativo na quantidade de condroitim sulfato presente em massas tumorais quando comparado ao conteudo presente nos tecidos normais adjacentes. Outrossim, pacientes com tumores excretam na urina um condroitim sulfato com baixo grau de sulfatacao, quando comparado aos individuos normais, alem de uma mudanca na razao de heparam sulfato e condroitim sulfato, consequente ao aumento na excrecao de heparam sulfato. O presente trabalho amplia estes estudos e compara o perfil dos glicosaminoglicanos excretados por pacientes com diferentes tipos de tumores. Amostras de urina de 18 individuos saudaveis foram utilizadas como controle e de 43 pacientes com as seguintes neoplasias: 14- Leucemia linfocitica aguda (LLA), 2- Leucemia mielocitica aguda (LMA), 5- Leucemia mielocitica cronica (LMC), 10- Linfoma nao Hodgkin, 1-Linfoma de Burkitt, 4- Carcinomas epidermoide, 5- Adenocarcinomas, l - Hepatoma e 1- Nefroblastoma. Estas amostras foram coletadas e os glicosaminoglicanos extraidos. A identificacao e as analises estrutural dos glicosaminoglicanos urinarios foram feitas por eletroforese e degradacao com enzimas especificas (condroitinases e heparitinases), seguindo-se a identificacao e quantificacao dos seus produtos dissacaridicos por cromatografia em papel. Os resultados mostraram diminuicao significativa na razao condroitim sulfato/heparam sulfato (CS/HS) para os pacientes com neoplasia. Os condroitim sulfatos mostraram aumento significativo da unidade dissacaridica nao sulfatada com concomitante reducao das unidades 6-sulfatadas. Analise por Western blot, usando-se um anticorpo contra o inibidor de tripsina urinario mostrou que as fracoes purificadas estavam livres deste proteoglicano que contem condroitim nao suifatado. Os heparam sulfatos de portadores de neoplasia apresentam tambem diminuicao da 6-suifatacao, que leva a um aumento significativo das unidades N-sulfatadas e N-acetiladas. A maioria dos pacientes com cancer ate entao analisados, apresenta um condroitim sulfato e heparam sulfato urinario estruturalmente anomalos e estes estudos poderiam ser uteis no diagnostico e acompanhamento do tratamento do cancer
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    Características bioquímicas e morfológicas de proteoglicanos de matriz extracelular de miométrio e leiomioma humanos
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2003) Berto, Alessandra Gutierrez Andrade [UNIFESP]; Michelacci, Yara Maria Correa da Silva [UNIFESP]
    Demonstramos que a glicosilacao de proteoglicanos de matriz extracelular esta modificada em leiomioma, um tumor benigno de musculatura lisa de utero, em comparacao com o miometrio normal. Esse tumor e composto por feixes de fibras musculares lisas) envolvidas por matriz extracelular Proteoglicanos sao importantes componentes da superficie celular) e da matriz extracelular e proteoglicanos individuais interagem especificamente com outros componentes) da matriz como colageno, laminina e fibronectina, bem como com fatores de crescimento e citocinas No presente trabalho demonstramos que decorim e o principal proteoglicano de miometrio normal e de leiomioma. As sequencias de aminoacidos N-terminais sao identicas em decorim extraido de leiomioma ou de miometrio, mas o decorim tumoral e glicosilado com cadeias d~ galactosaminoglicanos mais longas Alem disso, essas cadeias contem uma proporcao maior de acido -D-glucuromco/acido -L-iduronico, em comparacao com o tecido de origem. Para determinar se essas alteracoes na glicosilacao de proteoglicanos correlacionam com modificacoes da organizacao da matriz extracelular, comparamos a arquitetura geral do leiomioma com o miometrio normal. Metodos histoquimicos e de imunofluorescencia mostraram uma reorganizacao das fibras musculares e da matriz extracelular com alteracoes na distribuicao de glicosaminoglicanos (azul de alcian) glicoproteinas (PAS) e colagenos (picro-sirius red). Finas fibras reticulares, possivelmente compostas por colageno tipos I e III, foram substituidas por fibras mais grossas possivelmente mais ricas em colageno tipo I. Imunofluorescencia de decorim e colageno mostra que ambos se localizam na matriz extracelular. Analise matematica (MATLAB) das imagens demonstrou que colageno tipo colocaliza com o decorim em ambos os tecidos, ao contrario do colageno tipo IV, que nao colocaliza com deconm. A quantidade relativa de decorim esta aumentada, e a distribuicao de colageno e decorim esta completamente modificada no tumor em comparacao com o tecido normal. Versicam tambem foi identificado na matriz extracelular de miometrio e leiomioma com concentracoes aumentadas no tumor. As cadeias de glicosaminoglicanos, independentemente do esqueleto proteico a que estao ligadas, foram imunolocalizadas por epitopos gerados pela acao de condroitinases AC (condroitim sulfato) e B (dermatam sulfato) de F. heparinum. Novamente, observou-se marcacao mais intensa no leiomioma, tanto para dermatam sulfatoa(au)
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    Caracterização de glicosaminoglicanos urinários de pacientes portadores de mucopolissacaridose do tipo IV A
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2006) Coulson-Thomas, Vivien Jane [UNIFESP]; Toma, Leny [UNIFESP]
    A Mucopolissacaridose do tipo IVA (MPS IVA) é uma doença genética do tecido conjuntivo, que envolve mutações no gene N-acetil galactosamina-6-sulfato sulfatase. Esta enzima participa da degradação seqüencial do condroitim sulfato (CS) e queratam sulfato (KS), removendo sulfato da N-acetilgalactosamina-6-sulfato e galactose–6-sulfato do terminal não redutor destes GAGs. Quando esta enzima está ausente, os órgãos acumulam produtos de digestão incompleta destes GAGs, levando a um aumento na excreção de tais compostos na urina. Neste estudo nós analisamos KS e CS purificados de urina doada por pacientes portadores de MPS IVA e de indivíduos normais. GAGs totais foram extraídos da urina de indivíduos normais e pacientes utilizando uma resina de troca iônica . O KS foi isolado, incubando GAGs totais com extrato bruto de enzimas da F. heparinum, que digere todos os GAGs, com exceção do KS. Os produtos menores remanescentes foram separados do composto intacto por cromatografia de gel filtração sequenciais, Sephadex G-25 (PD10) e Sephadex G-10. KS foi detectado através de eletroforese em poliacrilamida e confirmado com queratanases específicas. Na tentativa de separar KS e CS, mantendo a integridade de ambos, os GAGs totais foram submetidos a cromatografia em Sephadex G-50 para fracionamento de acordo com a massa molecular. O perfil de eluição de CS foi detectado com reagente de carbazol que reage com ácido urônico, presente no CS e não no KS. Este foi detectado nas frações através de blotting com o anticorpo monoclonal específico para queratam sulfato. A maior parte do KS foi detectado na membrana de nitrocelulose, indicando um possível KS-ligado a peptídeo na urina. O mesmo procedimento de blotting foi realizado, e a membrana de nitrocelulose corado com reagente Ponceau, revelando a presença de proteína comigrando com o KS previamente detectado. Para confirmar o complexo KS-peptídeo GAGs totais foram submetidos a cromatografia hidrofóbica em coluna de Octyl-Sepharose, e eluídos com um gradiente linear de sulfato de amônio 2M e uma lavagem final com isopropanol50%. Uma população de KS foi retida na coluna, sendo eluído apenas com isopropanol 50%, devido à interação hidrofóbica do peptídeo com a resina. KS, CS e proteína foram detectados nessa população retida. Amostras de GAGs totais foram submetidos a uma reação química de β-eliminação, que remove açucares O-ligados a proteínas, e então aplicados a HPLC, em colunas de fase reversa, C4 Ultrasphere rotein and C18 Sephasil. Vários fragmentos protéicos ou peptídicos foram purificados nas colunas, que estão sendo sequenciados para análise estrutural..
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    Condroitinases de flavobacterium heparinum: isolamento, caracterizacao e estudo da estrutura de confroitim sulfatos
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 1975) Michelacci, Yara Maria Correa da Silva [UNIFESP]
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    Efeito da hiperosmolaridade na expressao de glicosaminoglicanos em celulas IMCD
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2003) Souza, Carolina Melo de [UNIFESP]
    A habilidade de adaptacao a condicoes adversas e uma caracteristica fundamental das especies vivas como bacterias, plantas e animais. A variacao de osmolaridade do meio constitui-se num estresse ubiquo para todas as especies vivas e esta presente desde a transicao da vida exclusivamente marinha ate a conquista do meio terrestre. A resposta celular ao estresse hiperosmotico foi filogeneticamente preservada e aprimorada, portanto esse e um bom modelo para o estudo de adaptacao. Durante o processo de adaptacao cronica a hiperosmolaridade a linhagem celular mIMCD3 (murine Inner Medullary Collecting Duct) apresenta alteracoes bioquimicas tais como (acumulo de osmois organico e sintese de °Heat Shock Proteins). Os osmois organicos tem a capacidade de aumentar a osmolaridad celular sem causar danos as suas estruturas e funcoes. As Heat Shock Proteins atuam como chaperonas moleculares ligando-se a peptideos desnaturados e auxiliando na aquisicao da conformacao terciaria das proteinas. Alem disso, as celulas cronicamente adaptadas apresentam um retardo no ciclo celular e uma diminuicao da sintese de proteinas. Nao existem trabalhos relacionando componentes da superficie celular e matriz extracelular em celulas da linhagem mIMCD3 cronicamente adaptadas a hiperosmolaridade. Assim, o objetivo desse trabalho e estudar possiveis alteracoes na sintese de proteoglicanos por celulas da linhagem mIMCD3 cronicamente adaptadas a hiperosmolaridade. Para a adaptacao o meio de cultura foi suplementado com uma solucao equimolar de NaCl e ureia, cuja concentracao aumentava progressivamente a cada dois ou quatro dias. Culturas confluentes eram entao metabolicamente marcadas com [35S]-sulfato. A identificacao e quantificacao dos proteoglicanos e glicosaminoglicanos foi realizada atraves de eletroforese em gel de agarose. A celula IMCD-iso (controle: ~310mOsm) sintetiza e secreta para o meio de cultura heparam sulfato e condroitim sulfato. Curiosamente, quando essas celulas atingem a adaptacao maxima (IMCD HT: ~1060mOsm) a sintese de condroitim sulfato e totalmente abolida, o que nao ocorre com a sintese dea(au)
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    Estudo da regeneração de lesões no sistema nervoso central por terapia celular combinada a terapia gênica
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2008) Coulson-Thomas, Yvette May [UNIFESP]; Porcionatto, Marimélia Aparecida [UNIFESP]
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    Glicosaminoglicanos sulfatados de Artemia sp: peculiaridades estruturais dos condroitim e heparam sulfatos
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 1991) Chavante, Suely Ferreira [UNIFESP]; Nader, Helena Bonciani [UNIFESP]
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    Influência do diabete melito experimental sobre a excreção urinária dos glicosaminoglicanos
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 1998) Cadaval, Ricardo Augusto de Miranda [UNIFESP]; Kohlmann Júnior, Osvaldo [UNIFESP]
    Estudamos os efeitos do diabete melito experimental sobre a excrecao urinaria dos glicosaminoglicanos e albuminuria, em ratos da Wistar nos quais induzimos diabetes atraves da estreptozotocina, pelo periodo de 12 semanas. Para a determinacao do padrao de excrecao urinaria dos glicosaminoglicanos, heparam sulfato e condroitim/dermatam sulfato. Obtivemos os seguintes resultados: 1. O estado diabetico acompanhou-se de pequeno acr'scimo de peso corporal, menor que o de rato normal para o mesmo periodo de acompanhamento. Quando efetuamos nefrectomia o peso corporal nao apresentou alteracao, mas quando este procedimento foi realizado nos animais com diabete melito, o acrescimo de peso foi igual aos animais com apenas diabetes. 2. A pressao arterial de cauda elevou-se de forma progressiva nos animais com diabete melito com ou sem nefrectomia nao apresentaram variacao significante da pressao em relacao ao seus periodos basais. 3. A excrecao urinaria de albumina, reflexo esta da presenca de nefropatia diabetica em animais diabeticos, mostrou que apos a 2a.semana de inducao do diabetes houve elevacao signifiante dos valores de albuminuria, mostrando com isso que a lesao renal induzida pelo diabete melito foi precocemente diagnosticada com a determinacao de albumina urinaria. A presenca da nefrectomia e per se condicao suficiente para induzir lesao renal, que pode ser detectada com a determinacao da albuminuria. Os mescanismos aqui envolvidos sao semelhantes ao promovidos pelo diabete, pelo menos em parte, isto e, aumento da pressao hidraulica do capilar glomerular e aumento do gradiente transglomerular. Isto explica por que os animais com diabete melito e nefrectomia apresentaram maiores valores de albumina, ja que tiveram pressao arterial de cauda semelhante na l2a. semana. 4. Os glicosaminoglicanos urinarios foram isolados atraves de complexacao com resina carionica, eluicao com NaCl e precipitacao com alcool absoluto. Foram identificados por eletroforese em gel de agarose e quantificados por densidometria. 5. Observamos que o diabete melito promoveu reducao da ordem de aproximadamente 10 vezes em relacao ao seu periodo basal apos a 4a. semana de inducao do diabete melito. A realizacao da nefrectomia promoveu queda menos acentuada dos glicosaminosglicanos totais, heparam sulfato e condroitim/dermatam sulfato que a apresentadfa pelos animais diabeticos. Quando a nefrectomia foi realizada nos animais diab'eticos, houve queda significante...(au)
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    Proteogalactosaminoglicanos de miométrio e leiomioma humanos: ácido D-glucurônico X ácido L-idurônic
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 1999) Berto, Alessandra G, Andrade [UNIFESP]; Sampaio, Lucia de Oliveira [UNIFESP]
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    Proteoglicanos de soro bovino e do meio condicionado por células endoteliais em cultura
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 1998) Ferreira Gerab, Irani [UNIFESP]; Nader, Helena Bonciani [UNIFESP]
    O presente trabalho permitiu o desenvolvimento de um metodo de purificacao de proteoglicanos do meio condicionado por celulas endoteliais em cultura. Os proteoglicanos foram isolados utilizando dois tipos de cromotografia de troca ionica (Lewatit e DEAE-celulose), cromotografia de afinidade Blue-Sepharose e por eletroforese em gel de agarose na presenca de inibidores de proteases. Meio condicionado em presenca de [35S]-sulfato foi utilizado como marcador do rendimento da extracao. Pela analise e quantificacao dos proteoglicanos por eletroforese em gel de agarose verificamos a presenca de um proteoglicano de heparam sulfato (PGHS) e de um proteoglicano de condroitim sulfato (PGCS), entretanto a quantidade de PGCS observada foi muito maior do que a esperada, uma vez que experimentos utilizando isotopos radioativos mostravam que celulas endoteliais produzem 90(por cento) de PGHS e somente 10(por cento) de PGCS. Como este proteoglicano poderia ser derivado do soro fetal bovino (SFB) que esta no meio de cultura, submetemos uma aliquota do mesmo aos procedimentos de purificacao, e verificamos que o PGCS realmente deriva do SFB. Ao analisarmos soro adulto bovino (SAB), observamos que esse proteoglicano e tipico de soro bovino. O proteoglicano de heparam sulfato purificado do meio condicionado por celulas endoteliais e de alto peso molecular (200kDa), e apos b-eliminacao liberou cadeias de heparam sulfato de 21kDa. A analise da estrutura das cadeias de heparam sulfato apos diGestão com heparitinases revelou que o mesmo possui 41(por cento) de deltaGIcA-GIcNS,6S; 24(por cento) de deltaGIcA-GIcNS; 5(por cento) de deltaGIcA-GIcNAc,6S e 30(por cento) de deltaGIc-GIcNAc. Esse foi o primeiro proteoglicano de meio condicionado analisado sem marcacao metabolica. Somente cerca de 30(por cento) desse proteoglicano possui afinidade pela antitrombina III e o mesmo nao interage com fibronectina. O PGCS de soro fetal e de soro adulto bovino tem caracteristicas similares: peso molecular superior a 200kDa, e a incubacao com condroitinase ABC, liberou uma proteina com 160kDa, e por b-eliminacao obtivemos cadeias de condroitim sulfato com 18kDa. A degradacao das cadeias de condroitim sulfato mostrou algumas diferencas entre o condroitim sulfato presente no proteoglicano do soro adulto bovino: no soro fetal bovino, 18(por cento) da molecula e composta de disacarideo 6-sulfatado, 77(por cento)...(au)
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    Purificação e utilização das condroitinases B e AC de Flavobacterium heparinum no estudo dos proteoglicanos de matriz extracelular
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2004) Aguiar, Jair Adriano Kopke de [UNIFESP]; Michelacci, Yara Maria Correa da Silva [UNIFESP]