Navegando por Palavras-chave "Sementes"

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    Ação de proteínas isoladas de sementes de Bauhinia sobre o desenvolvimento de fungos patogênicos
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2005) Assis, Maria Lucia de [UNIFESP]; Oliva, Maria Luiza Vilela [UNIFESP]
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    Associacao das vicilinas de sementyes de feijao-de-corda Vigna unguiculata (L.)WALP. com a matriz peritrofica das larvas da broca de cana-de-acucar Diatraea saccharalis (F.)
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2002) Mota, Antonio Chagas [UNIFESP]
    As proteinas de reservas (vicilinas) das sementes de EPACE-10 e 1'81D1045 de Vigna unguiculata foram avaliadas quanto ao seu comportamento no tubo digestivo de larvas da broca da cana-se-acucar Diatraea saccharafs. As sementes de EPACE-10 e 1T81 D 1045 sao, respectivamente, susceptivel e resistente ao ataque por Callosobruchus MUCtrlatus. Amostras de viciinas purificadas dos dois cultivares foram incbadas com a matriz peritrofica das larvas da broca da cana e feitos varios bioensaios. A incubacao de solucao de vicilinas crescentes das vicilinas com a MP das larvas a temperatura ambiente por 15 minutos analisada por eletroforese com SDS, mostrou as bandas majoritarias de aproximadamente 50.000 (caracteristico das vicilinas) nao apareciam. So visualizava-se polipeptideos muito abaixo dessa faixa. Agora quando se incubava vicilina com MP das larvas a 55ºC em diferentes tempos; e aquecia-se parte da amostra apos a reacao, a eletroforese se apresentavam com um padrao totalmente diferente. Foi possivel visualisar que as vicilinas estavam sendo hidrolisadas por alguma protease da matriz peritrofica. Um fato interessante foi que quando as amostras incubadas eram aquecidas apos o tempo de reacao reapareceram as suas bandas majoritarias. Demonstrando que a maior parte das moleculas de vicilinas se ligam a MP de Diatraea saccharafs. Entao, as vicilinas ao entrarem em contato com a MP se ligam e tambem sao digeridas na matriz peritrofica deste inseto. Amostras de vicilinas com MP foram incubadas a diferrentes temperaturas (30, 40, 50, 60, 70 e 80ºC). A eletroforese deste bioensaio mostrou que esta protease e desnaturada na faixa dos 60ºC...(au)
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    Caracterizacao de inibidores seletivos de serinoproteinases no genero Bauhina (Leguminosae: Caesalpinioideae)
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 1993) Sallai, Roberto C [UNIFESP]
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    Caracterizacao de proteases, inibidores de proteases e uma proteina de reserva (cratilina) de sementes de Cratylia mollis
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 1998) Paiva, Patricia Maria Guedes [UNIFESP]
    Uma atividade endopeptidasica (Cm-endopepbdase), uma atividade aminopeptidasica (Cm-aminopeptidase), isoinibidores de tripsina (CmTIl e CmTI2) e uma proteina tipo vicilina (cratilina) foram isoladas e parcialmente caracterizadas de sementes de Cratylia moiiis. Cm-endopepbdase hidrolisa Bz-Arg-p-Nan e Ac-Phe-Arg-p-Nan, e termosenslvel, seu pH otimo de acao situa-se entre 7,5 e 8,0 e massa molecular estimada e 80.000. Eletroforese em gel de poliacrilamida, em presenca de DTT, revelou uma banda de massa molecular 45.000. Em cromatografia de fase reversa, em coluna de C-18, Cm-endopepddase apresentou um tempo de retencao de 24 minutos. A atividade em presenca de agentes quelantes, inibidores e reagentes grupos -SH indica que a enzima e uma serinoproteinase que pode depender de metal e talvez tenha um grupo SH importante para a sua estrutura. A hidrolise de Bz-Arg-p-Nan foi estudada em presenca de metais e foi apenas parcialmente inibida por ions de zinco. A preparacao de Cm-endopepbdase apresentou atividade proteolitica sobre caserna e hidrolisou a ligacao Phe-Ser da bradicinina, Lys-bradicinina e Met-Lys-bradicinina; TPCK inibiu parcialmente a hidroiise de bradicinina. Cm-amjnopepddase hidrolisa preferencialmente Leu-b-Na e, semelhante a endopeptidase, e termosensivel, o pH otimo de acao situa-se na faixa de pH alcalino, e ocorre com massas moleculares de 80.000 e 45.000, na ausencia e na presenca de agente redutor, respectivamente. A cromatografia de fase reversa en coluna de C-18 revelou que a enzima e mais hidrofobica que Cm-endopepbdase, sendo eluida aos 30 minutos. A atividade aminopeptidasica foi parcialmente inibida por bestatina e puromicina e foi sensivel a metais, sendo totalmente abolida em presenca de zinco e parcialmente inibida com calcio, cobalto, magnesio e manganes. CmTI isolado por diferentes procedimentos, inclusive cromatografia em tripsina-Sepharose, e estavel na faixa de pH de 2,0 a 10,0 e em diferentes temperaturas. Da cromatografla de gel filtracao foi isolado o dimero do inibidor, com massa molecular 21.000. A eletroforese em gel de poliacrilamida revelou que o monomero tem massa molecular 11.000. Da cromatografia de fase reversa foram isoladas duas formas do inibidor e cujas estruturas primarias apresentaram alta homologia entre si mesmas e com inibidores da familia Bowman-Birk. Em relacao a sitios reativos, os isoinibidores diferem apenas quanto ao segundo sitio...(au)
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    Clonagem, expressão e caracterização de um inibidor de tripsina isolado de sementes de Bauhinia variegata
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2001) Souza, Adriana Florentino de [UNIFESP]; Sampaio, Claudio Augusto Machado [UNIFESP]
    Ha mais de uma decada que os inibidores vegetais de proteases, principalmente aqueles envolvidos no processo de coagulacao sanguinea, vem sendo estudados em nosso grupo. Ao longo desses anos, varios inibidores extraidos de sementes do genero Bauhinia foram purificados e sequenciados. Esses inibidores apresentam alta homologia e algumas diferencas na inibicao de serinoproteases. O inibidor de tripsina isolado das sementes de Bauhinia variegata (BvTI) apresenta alta homologia com o inibidor de Fator Xa isolado das sementes de Bauhinia ungulata (BuXI). No entanto, o Bvrl nao apresenta inibicao sobre o Fator Xa. A comparacao das estruturas primarias do BvTI e BuXI indica que ha diferenca em alguns residuos de aminoacidos na regiao do sitio reativo (Oliva et ai., 1996). O emprego de tecnicas de quimica de proteinas nos forneceram dados substanciais a respeito da especificidade dessas proteinas para que entao pudessemos dar um novo enfoque ao estudo desses inibidores utilizando tecnicas de biologia molecular e assim, pudessemos tentar esclarecer a especificidade desses inibidores da familia Kunitz para diferentes serinoproteases. Para tanto resolvemos: ' - Clonar e expressar o gene de um BvTI, inibidor de tripsina isolado das sementes de Bauhinia variegata, e a regiao do sitio reativo do BvTI, RS-BvTI, ativos na superficie de fago filamentoso, empregando o Sistema Phage Display; - Estabelecer um sistema de expressao para o BvTI em E. coli, utilizando o vetor pET-14b; Por fim, caracterizar as proteinas recombinantes. Para a clonagem molecular do BvTI, primeiramente foi realizada a extracao do RNA total das sementes prematuras de B. variegata, que foi empregado como molde para a sintese do cDNA fita dupla, empregando-se tecnicas de RT-PCR e PCR. O cDNA fita dupla foi clonado ao fagomideo pCANTAB 5E e utilizado para a transformacao de bacterias TG1. O clone pAS 1.1.3 teve a sequencia de seu inserto determinada pelo sequenciamento de nucleotideos, o qual revelou um cDNA de 733 pb, incluindo o gene codificador de um BvTI (175 aa). A comparacao da sequencia de aminoacidos deduzida do BvTI clonado com outros inibidores isolados de Bauhinia revelou a autenticidade do gene clonado...(au)
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    Contribuicao ao estudo histologico e histoquimico do ingluvio de columba livia com a glandula do leite em repouso e em atividade
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 1974) Inforzato, Maria Apparecida Damy [UNIFESP]
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    Estrutura e especificidade de inibidores do tipo SBTI da familia Kunitz purificados das sementes de Bauhinia ungulata, Bauhinia variegata, Enterolobium contortisiliquum, Leucaena leucocephala e Swartizia pickellii
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 1997) Batista, Isabel de Fatima Correia [UNIFESP]; Sampaio, Claudio Augusto Machado [UNIFESP]
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    Estrutura primaria de inibidores de enzimas digestivas extraidos de sementes de Algaroba (Prosopis juliflora)
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 1995) Negreiros, Andre Newton do Monte [UNIFESP]
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    O fitocromo na germinacao de sementes fotossensiveis de Rumex obtusifolius L., Cucumis anguria L. e Lactuca sativa L
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 1983) Takaki, Massonori [UNIFESP]
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    Galactomananos de sementes de leguminosas nativas brasileiras: ocorrência e metabolismo
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 1988) Buckeridge, Marcos Silveira [UNIFESP]; Dietrich, Sonia Machado de Campos [UNIFESP]
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    Inibição de trombina e tripsina por material isolado de sementes de Echinodorus paniculatus
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 1996) Souza, Adriana Florentino de [UNIFESP]; Oliva, Maria Luiza Vilela [UNIFESP]
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    Inibidor de quimiotripsina de sementes de Schizolobium parahyba (Vell) Toledo: caracterizacao fisico-quimica e sequenciamento parcial
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 1992) Souza, Elizabeth Maria Tala de [UNIFESP]
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    Inibidores do tipo kunitz das sementes baihinia bauhinioides e bauhinia rufa: ação sobre elastases de catepsina G
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2000) Oliveira, Cleide de [UNIFESP]; Oliva, Maria Luiza Vilela [UNIFESP]
    O inibidor de elastases isolado das sementes de Bauhinia bauhinoides, e denominado BbEI, foi purificado por cromatografia de troca-ionica em resina DEAE-Sephadex, seguida por cromatografia de afinidade em resina tripsinaSepharose, sendo o material nao retido cromatografado em coluna de trocaionica HiTrap Q, e posteriormente em coluna de fase reversa C4- A estrutura primaria do inibidor mostra homologia com inibidores vegetais da familia do tipo Kunitz, entretanto, o BbEI nao contem nenhum residuo Cys, Os inibidores vegetais do tipo Kunitz apresentam como caracteristicas estruturais de 160 a 180 residuos de aminoacidos, e normalmente contem quatro residuos Cys que formam duas pontes dissulfeto. O BbEI apresenta massa molecular de 18.034 Da. O sitio reativo do BbEI foi determinado experimentalmente compreendendo a sequencia R57FETPLAIHIITEW69, e o residuo Ala 63 esta na posicao Pl. Dois outros inibidores de elastases, o BrEl-l e o BrEl-ll, foram purificados das sementes de Bauhinia rufa, apresentando tambem homologia com os membros da familia Kunitz, como observado atraves da determinacao das suas sequencias parciais. O inibidor BrEI-II e bem distinto dos demais pela presenca da sequencia RGD na porcao N-terminal da molecula. O papel da sequencia RGD deste inibidor na adesao celular merece ser investigado. Baseado na sequencia do sitio reativo do BbEI, substratos peptidicos de fluorescencia apagada foram sintetizados, e os parametros cineticos da hidrolise da Ala no sitio de clivagem foram determinados para a (PPE). O peptideo substrato de fluorescencia apagada, o Abz-FETPLAIHIITEQEDDnp, foi hidrolisado por PPE com baixo valor de Km e alta efiCiência catalitica (kcat/km=6,8 x l0 4 M-1.seg-1), um valor 10 vezes mais alto comparado com a hidrolise do substrato MeO-Suc-Ala-Ala-Pro-Val-pNan por PPE
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    Investigação da ação anti-inflamatória dos inibidores isolados das sementes de Bauhinia bauhinioides
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2004) Oliveira, Cleide de [UNIFESP]; Oliva, Maria Luiza Vilela [UNIFESP]
    Inibidores do tipo Kunitz de plantas são proteínas encontradas principalmente na família de leguminosas. Os inibidores de Bauhinia foram caracterizados de diversas espécies. Esses inibidores de Bauhinia apresentam uma diferença principal quando comparados aos outros inibidores tipo Kunitz pois estes são destituídos de pontes dissulfeto (Oliveira et a1.,2001; Oliva et al., 2001). Dois inibidores foram isolados das sementes de Bauhinia bauhinioides: o Inibidor de Calicreína Plasmática de B. bauhinioides (BbKI) e Inibidor de Cruzaína de B. bauhinioides (BbCI). 0 BbKI inibe tripsina (Ki = 20 nM), calicreína plasmática (Ki = 0.39 nM), calicreína tecidual (Ki = 200 nM), plasmina (Ki = 33,17 nM) e quimotripsina (Ki = 3.90 pM). BbCI inibe elastase pancreática porcina (Ki 2.5 nM), elastase de neutrófilos humano (Ki 5.3 nM), catepsina G (Ki 160 nM) exceto enzimas anticoagulantes, tripsina e quimotripsina. 0 sítio reativo de BbCI é VRFETPLAIAIITESFFL sendo Ala o aminoácido da posição P1, ao passo que, o sítio reativo de BbKI é VRFESPLRINIIKSYFL tendo Arg na posição P1. BbCI inibe elastase de neutrófilo (Ki = 5.3 nM) e catepsina G (Ki = 160 nM) e PPE (40 nM). A ação desses inibidores foi estudada em modelos de inflamação como edema de pata e pleurisia. Ambos inibidores reduzem o edema da pata de rato induzido por carragenina. 0 BbKI reduziu o edema de pata na primeira (20 por cento) e segunda hora (31 por cento) após sua administração, indicando um bloqueio da liberação de cinina, enquanto a redução do edema pelo BbCI indica interferência sobre os mediadores inflamatórios (cininas e prostaglandinas) da segunda a quarta horas (24, 44 e 40 por cento, respectivamente). No modelo de pleurisia, tanto BbKI como BbCI promovem uma diminuição significante da migração celular (BbKI 35 por cento e BbCl 45 por cento), confirmado por microscopia intravital. Deste modo, inibidores de B. bauhinioides podem ser ferramentas úteis nos estudos dos processos inflamatórios.
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    Isolamento e caracterização preliminar de inibidores de proteinases de enterolobium contortisiliquum, torresea cearnsis, bauhinia petandra e bauhinia bauhinioides
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 1988) Oliva, Maria Luiza Vilela [UNIFESP]; Sampaio, Claudio Augusto Machado [UNIFESP]
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    Promotores e inibidores de crescimento em sementes de Carica Papaya L
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 1974) Gherardi, Elenita [UNIFESP]
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    Purificação e caracterização da B-galactosidase de sementes de copaifera langsdorffii e suas relações com o metabolismo do xiloglucano
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 1995) Alcantara, Paulo Henrique Netto de [UNIFESP]; Dietrich, Sonia Machado de Campos [UNIFESP]
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    Purificação e caracterização de duas aminopeptidases de sementes de Zea mays
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2001) Kikuti, Carlos Massayuki [UNIFESP]; Alves, Kaethy Bisan [UNIFESP]
    As aminopeptidases estao amplamente distribuidas, tanto no reino animal como no vegetal. Elas sao enzimas que hidrolisam ligacoes peptidicas da porcao N-terminal de peptideos, e tambem hidrolisam aminoacil-a-naftilamidas (AA-NA) e aminoacil-p-nitroanilidas (AA-Nan). A atividade aminopeptidasica e encontrada somente nas regioes do embriao e aleurona das sementes de Zea mays. Tambem foi verificado que o extrato de embrioes apresenta maior quantidade de atividade aminopeptidasica por grama do que o extrato de cotiledones. Do sobrenadante do extrato de embrioes, duas enzimas foram purificadas (LAP e RAP) por cromatografia de troca ionica, gel filtracao e interacao hidrofobica. As duas enzimas foram separadas somente pela ultima cromatografia. Na SDS-PAGE, as duas aminopeptidases apresentaram somente uma banda proteica cada, na presenca ou na ausencia de agente redutor, ambas com massa moleculare de 110 kDa. A homogeneidade da LAP foi verificada por HPLC em coluna C-18, sendo eluido apenas um pico proteico com 53,705 min de tempo de retencao, primeiramente com um gradiente linear simultaneo de concentracao de acetonitrila (4,5 - 6,3 por cento) e isopropanol (1 ,5 - 9 por cento), seguido por 90 por cento de acetonitrila em 0,1 por cento de TFA em agua. A homogeneidade da RAP foi verificada por HPLC em resina C-4, sendo eluido apenas um pico proteico com 51,785 min de tempo de retencao, com um gradiente linear de concentracao de acetonitrila (0 - 90 por cento) em 0,1 por cento de TFA em agua. A LAP de embrioes de milho apresentou valores de KM da ordem de 10-SM para Leu-NA e 10-4M para Met-NA, e nao apresentou atividade sobre Ala-, Arge Glu-NA. Os valores de efiCiência catalitica (VmaX/KM) mostraram que Leu-NA e 25 vezes melhor substrato do que Met-NA. A LAP apresentou as seguintes caracteristicas: pH otimo 7,0; estabilidade a -20, 4 e 25§C por pelo menos 30 dias; absorcao maxima de luz a 595 nm; ativacao por a-mercaptoetanol e ditioeritritol; leve inibicao por ions sodio e calcio; inibicao por ions cobalto e pOHMB; sem inibicao por EDTA, o-PHE, aminoacidos, o-naftilamina, pnitroanilina e bestatina. A RAP de embrioes de milho apresentou valores de KM da ordem de 10-5M para Arg- e Leu-NA e 10-4M para Ala- e Met-NA. Os valores de efiCiência catalitica (Vmax/Kna) mostraram que Arg-NA e cerca de 3 vezes melhor substrato do que Leu-NA; 33 vezes melhor do que Met-NA e 50 vezes melhor do que Ala-NA. A RAP e ativada por ions cloreto e magnesio, nao e inibida por...(au)
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    Purificação e caracterização de uma aminopeptidase de semente de Enterolobium contortisiliquum
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 1991) Costa, Rita Heloisa da [UNIFESP]; Alves, Kaethy Bisan [UNIFESP]