Navegando por Palavras-chave "Rato"

Agora exibindo 1 - 20 de 22
  • Imagem de Miniatura
    Item
    Acesso aberto (Open Access)
    Alterações degenerativas induzidas pela privação de sono paradoxal em glândula sublingual de ratos
    (Universidade Federal de São Paulo, 2023-04-26) Aguiar, Gabriel Carvalhal de [UNIFESP]; Ribeiro, Daniel Araki [UNIFESP]; Souza, Ana Carolina Flygare [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/3721735477545941; http://lattes.cnpq.br/9969803499258672; http://lattes.cnpq.br/4018439041598806; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    O ser humano passa cerca de um terço de sua vida dormindo, processo este fundamental para a manutenção e equilíbrio dos mecanismos psicossocial e biológico. O sono é um processo natural e complexo, e a falta dele pode acarretar e/ou agravar problemas de saúde, tais como diabetes, hipertensão, depressão, diminuição da função imunológica, dentre outros. Nesse contexto, o presente estudo teve como objetivo avaliar se a privação de sono é capaz de deflagrar processo proliferativo e apoptótico nas glândulas sublinguais de ratos. Para isso, 24 ratos foram distribuídos em três grupos, Controle (n=8), no qual os animais não foram submetidos a qualquer procedimento; Privação do Sono (n=8) os animais foram submetidos por um período de 96 horas consecutivas à privação de sono; e Rebote (n=8), os animais foram submetidos à privação de sono paradoxal por 96 horas consecutivas, seguidos por 96 horas sem intervenção. Foram investigadas alterações histopatológicas e imunoexpressões das proteínas Ki-67, p16, Caspase-3 clivada e BCL-2. Os resultados demonstraram que a privação de sono paradoxal induziu degeneração tecidual a partir da presença de picnose, vacúolos e áreas de retenção salivar, nos grupos experimentais. A expressão de Caspase 3 clivada e bcl2 aumentou tantos nos grupos privação de sono como rebote. A análise do ki-67 demonstrou um aumento da expressão somente no grupo rebote, associado à diminuição da proteína p16. Com isso, a privação do sono se mostra capaz de deflagrar processo degenerativo no parênquima glandular, por meio da desregulação da apoptose e atividade proliferativa na glândula sublingual de ratos.
  • Imagem de Miniatura
    Item
    Acesso aberto (Open Access)
    Avaliação da memória de discriminação e atenção seletiva em ratos Wistar machos jovens adultos expostos a doses ambientalmente relevantes de tributilestanho (TBT)
    (Universidade Federal de São Paulo, 2022-05-30) Morais, Talita Trindade de [UNIFESP]; Silva, Regina Cláudia Barbosa da [UNIFESP]; Castro, Ítalo Braga de [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/0426330018731301; http://lattes.cnpq.br/7507421915981968; http://lattes.cnpq.br/9323926463255676
    Os organoestânicos (OES) compreendem um grupo de compostos de estanho, utilizados como biocidas em tintas anti-incrustantes de embarcações, em fábricas de papel, pesticidas agrícolas, na fabricação do policloreto de vinila (PVC) e na preservação da madeira com a finalidade de inibir a bioincrustação. Dentre os compostos organoestânicos o tributilestanho (TBT), foi economicamente viável proporcionando solução efetiva nestes casos, mas, em contrapartida esse biocida apresenta um elevado custo ambiental devido a sua alta persistência e toxicidade sobre organismos. O TBT atravessa a barreira hematoencefálica de animais, produzindo efeitos neurotóxicos. O objetivo deste estudo foi investigar os efeitos da exposição subcrônica ao TBT (20 e 600 ng/g; v.o., N = 12) ou a solução veículo (v.o., N = 12), em ratos Wistar machos jovens adultos, durante 30 dias consecutivos, do dia pós-natal (DPN) 28 ao 58 na modulação das respostas comportamentais no Teste de Reconhecimento de Objetos Novos (NOR) realizado nos DPNs 59 e 60 e de Inibição por Pré-Pulso (IPP) do reflexo de sobressalto acústico realizado no DPN 61. O teste NOR avalia a retenção da memória de discriminação em roedores e o IPP do reflexo de sobressalto acústico mede um aspecto da cognição relacionado à atenção seletiva. A atividade locomotora no teste NOR e o ganho de peso corporal também foram avaliados. Os resultados mostraram que houve déficit na memória de longo prazo nas duas concentrações utilizadas, aumento da atividade motora e aumento de peso na menor concentração. Entretanto, a exposição subcrônica ao TBT não afetou as respostas de IPP e de amplitude de sobressalto. Estes dados sugerem que o TBT nestas concentrações pode prejudicar a memória de discriminação de ratos Wistar machos jovens adultos, além de induzir hiperatividade locomotora e provocar aumento de peso. Diferentes mecanismos biológicos combinam-se com o período da adolescência podendo tornar o organismo mais vulnerável aos efeitos do TBT.
  • Imagem de Miniatura
    Item
    Acesso aberto (Open Access)
    Comparação dos efeitos do laser de baixa potência e do ultrassom de baixa intensidade no processo de reparo ósseo em tíbia de rato
    (Associação Brasileira de Pesquisa e Pós-Graduação em Fisioterapia, 2011-06-01) Oliveira, Poliani de; Sperandio, Evandro Fornias; Fernandes, Kelly Rossetti [UNIFESP]; Pastor, Fabio Alexandre Casarin; Nonaka, Keico Okino; Renno, Ana Claudia Muniz [UNIFESP]; Universidade Federal de São Carlos; UFSCar Departamento de Ciências Fisiológicas; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    BACKGROUND: Electrophysical agents such as Ultrasound (US) and low-level laser therapy (LLLT) have been increasingly used in physical therapy practice. Studies suggest that these devices are able to stimulate osteoblast proliferation and osteogenesis at the fracture site, resulting in a greater deposition of bone mass and speeding up the consolidation process. OBJECTIVE: The aim of this study was to analyze the effects of US and LLLT on the bone healing process, through biomechanical and histological analysis of the bone callus. METHODS: A total of 30 rats were randomly allocated into three groups: control group fracture without treatment (GC); fracture group treated with pulsed US, burst 1.5 MHz, 200us, 1KHz, 30 mW/cm² (GUS) and fracture group treated with laser 830nm, 100mW, 120J/cm² (GL). Bone defects were performed with a circular drill of 2mm in diameter in the animal's tibias. The treatments were carried out after surgery consisting of 7 applications every 48 hours. After 14 days the animals were sacrificed and the tibias were removed to perform the analysis, being the right tibia designated for biomechanical analysis, while the left tibia for histological analysis. RESULTS: The biomechanical analysis showed no statistically significant difference between biomechanical properties of the CG, CL and GUS. In morphometric analysis, both GUS and GL showed a significantly higher woven bone tissue area compared to the control group. However, when the two treatment modalities were compared, there were no statistical differences between them. CONCLUSION: Both devices used in this study were able to accelerate the bone healing process in rats.
  • Imagem de Miniatura
    Item
    Acesso aberto (Open Access)
    Desenvolvimento dos Gonócitos e Espermatogônias Tronco em Ratos: Proliferação, Distribuição e Morte Revisitadas
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2011-02-22) Zogbi, Camila [UNIFESP]; Stumpp, Taiza [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    As espermatogônias tronco são células responsáveis pela produção contínua dos gametas masculinos, os espermatozóides. Essas células se diferenciam a partir dos gonócitos, porém, pouco se sabe sobre sua biologia e sobre os processos pelos quais elas se diferenciam. Embora sejam células de grande importância, não há informações precisas sobre a dinâmica de formação dessas células a partir dos gonócitos nem sobre o número total e a distribuição das espermatogônias indiferenciadas nos testículos, o que dificulta a interpretação de estudos nessa área. A proposta deste trabalho foi analisar a proliferação, morte e distribuição dos gonócitos e pré-espermatogônias nos testículos de ratos no desenvolvimento embrionário e pós-natal, em períodos críticos do desenvolvimento testicular. Foram utilizados ratos com idades de 19dpc, 1, 3, 5, 8, 11 e 15dpp, cujos testículos foram analisados quanto à distribuição, proliferação e apoptose dos gonócitos e pré-espermatogônias durante o desenvolvimento testicular. A análise morfológica dos testículos, o método de TUNEL, a imunomarcação das proteínas p53 e caspase-3 clivada foram empregados para investigação de apoptose, enquanto a densidade numérica (Nv), quantificação de gonócitos, densidade de comprimento cordonal (Lv), comprimento cordonal total (L), volume total dos cordões seminíferos e estimativa do número total de gonócitos foram utilizados para investigação da distribuição dessas células. A citometria de fluxo foi empregada para avaliar a proliferação dos gonócitos através do uso do kit Guava Cell Cycle. Para identificar as espermatogônias indiferenciadas nas idades de 11 e 15dpc foi utilizada a imunomarcação da proteína OCT4. Durante a análise morfológica testicular observou-se que ocorre redução do número de gonócitos por seção testicular nos primeiros cinco dias após o nascimento e que as primeiras espermatogônias são observadas aos 8dpp. Foi observado aumento da Lv nos animais de 1dpp em relação aos de 19dpc. Dos 3 aos 11dpp, houve aumento progressivo da Lv, que voltou a diminuir aos 15dpp. Houve crescimento muito acentuado dos cordões seminíferos entre 19dpc e 1dpp. Após o nascimento, o crescimento continuou até os 15dpp, mas foi menos intenso. Já a Nv de gonócitos foi inversamente proporcional ao crescimento testicular, enquanto o número estimado de gonócitos foi cerca de quatro vezes maior aos 1dpp em relação aos de 19dpc. Isto explica os dados obtidos a partir da análise morfológica na qual a frequência de gonócitos por seção testicular diminuiu nos cinco primeiros dias após o nascimento. Após o nascimento, o número de gonócitos permaneceu estável até os 5dpp, sugerindo que não há morte ou proliferação dessas células nessas idades. Não foram detectados gonócitos em apoptose nas idades estudadas, embora corpos apoptóticos tenham sido observados. Esses corpos apoptóticos eram muito raros dos 19dpc aos 5dpp e começaram a se tornar mais frequentes aos 8dpp, atingindo sua frequência máxima aos 15dpp. Também aos 15dpp, células positivas para TUNEL e caspase 3 clivada foram observadas, mas essas células não puderam ser identificadas devido ao fato de sua morfologia já estar consideravelmente alterada. Contudo, todos os gonócitos de 19dpc até 8dpp foram positivos ao emprego da caspase-3 clivada, embora apresentassem morfologia normal. Isto indica que a caspase-3 clivada pode ter outra função, que não seja apoptótica, no desenvolvimento dos gonócitos. A análise ao citômetro de fluxo nas idades de 19dpc a 5dpp mostrou que mais da metade dos gonócitos encontravam-se em fase G0/G1 do ciclo celular, indicando que muitas estão em quiescência nestas idades. Não houve marcação da proteína OCT4 nas espermatogônias, o que impossibilitou a quantificação dessas células nas idades de 8, 11 e 15dpp. Os dados do presente estudo sugerem que a diminuição da frequência de gonócitos por seção testicular nos primeiros dias após o nascimento não é consequência de apoptose dessas células, como tem sido sugerido na literatura, mas sim de sua redistribuição ao longo dos cordões seminíferos. Como não há indícios de que estas células estejam proliferando nessas idades, menos gonócitos são observados por seção testicular. Concluiu-se ainda que a proteína OCT4 não está presente nos testículos de rato nas idades pós-natais, diferentemente do observado em camundongo. Estudos estão sendo realizados para verificar quando os gonócitos retomam a proliferação, quando a população definitiva de espermatogônias tronco é formada e quais seriam os marcadores ideais para estudos das espermatogônias indiferenciadas no rato.
  • Imagem de Miniatura
    Item
    Embargo
    Detecção de Marcadores para Células Germinativas em Ratos Durante a Fase Embrionária: Diferenças e Semelhanças com Camundongos
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2011-02-22) Zanetti, Giselly Encinas [UNIFESP]; Stumpp, Taiza [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Germ cells are the only cells capable of transmitting genetic information from generation to generation. Germ cell development has been widely studied in different species. Among mammals, the mouse is the model used in the majority of the studies on Primordial Germ Cell (PGC) differentiation, sex-determination and genetics. The results obtained in the present study show that the rat is also a very important model for studies about germ cell development. For this study, PGC, gonocyte and Sertoli cell markers were used such as: GCNA1, MVH, SSEA1 and OCT4 to germ cells and GATA4 to Sertoli cells. The choice of theses markers was based in the studies performed with mice, once there is not enough available information about the expression of germ cell markers in the rat during the embryonic phase. The presence these markers was investigated through immunofluorescence and immunohistochemistry. The results showed that SSEA1, GCNA1 and MVH proteins show very distinct labeling pattern in mice and rats. SSEA1 and GCNA1 proteins were undetectable in the PGC. However MVH was detected in migrating PGC and in those that had already colonized the gonad. A similar labeling pattern was also observed in humans, suggesting some degree of similarity between these two species. The transcription factor OCT4 showed similar labeling to that described in mice. However, we observed that OCT4 is not detected in germ cells from dos 19dpc on. The results obtained in this study are of extreme relevance, since important differences between the rats and mice germ cells were shown. These results show the importance of including the rat as an experimental model in the studies about germ cells development.
  • Imagem de Miniatura
    Item
    Embargo
    Dieta hiperlipídica poliinsaturada afeta as vias insulínica e inflamatória em hipotálamo de ratos
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2010-08-25) Pimentel, Gustavo Duarte [UNIFESP]; Ribeiro, Eliane Beraldi [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Insulin leads an anorexigenic response by acting on hypothalamic neurons. Studies suggest that resistance to its action is involved with diet-induced obesity (diet rich in saturated fatty acids) and its association with hypothalamic inflammation. However, the effects of polyunsaturated fatty acids on insulin and inflammatory signaling pathways are poorly undestood. Thus, we evaluated the hypophagic effect of ICV insulin and molecular steps of insulin signaling and inflammatory response in the hypothalamus of rats fed Control diet (15% energy from fat) or high-fat diets (50% energy from fat) enriched with soy or fish oils from 2 until 4-months-old. Both groups had similar energy intake and protein levels of IR, IRS-1, IRS-2, Akt, mTOR, p70S6K, AMPK, TLR2, TLR4, IL-6R, TNF-£R e NFƒÛBp50. Althought the animals fed the soy diet had normal body mass, lipid profile and peripheral insulin sensitivity, they had higher fat pads weight and serum leptin. Moreover, the soy rats were not sensitive to hypophagic effect of ICV insulin, regarding with the result that no significant phosphorylation of protein kinase B (PKB/Akt). When we assessed the hypothalamic inflammatory profile, we observed that soy diet lead to greater TRAF6 and NFƒÛBp65 expression and that fish diet reduced the levels of TNF-£, IL-6 and TRAF6 and increased IL-10 receptor levels, an anti-inflammatory protein. Overall, these results suggest that, unlike the high-fat soy diet, the high-fat fish diet did not have deleterious effects on the central anorexigenic mechanism of insulin, probably due to improve of peripheral metabolism and hypothalamic inflammatory profile, suggesting a protection against obesity.
  • Imagem de Miniatura
    Item
    Acesso aberto (Open Access)
    Dinâmica da expressão de SOX2 durante a transição gonócito-espermatogônia em rato: possível relação com a emergência das espermatogônias tronco
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2015-08-27) Oliveira, Ticiana Volpato [UNIFESP]; Stumpp, Taiza [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/1024329256080770; http://lattes.cnpq.br/8686935485016317; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Investigar possíveis marcadores e função do SOX2 na fase de gonócito e no surgimento das espermatogônias tronco/indiferenciadas, além de definir a fase mais adequada para a obtenção de células tronco pluripotentes in vitro a partir das células germinativas masculinas. Métodos: Ratos com 1, 5, 8 e 25 dias pós-parto (dpp) tiveram os testículos analisados quanto à expressão dos genes e das proteínas SOX2, RB1, NANOG e PIWIL4. Resultados: A proteína SOX2 estava presente no citoplasma dos gonócitos nas idades de 1dpp e 5dpp e passou a ser detectada no núcleo das pré-espermatogônias aos 8dpp. A expressão da proteína SOX2 foi confirmada por Western Blot. Esses dados nos levam a sugerir que a proteína SOX2 talvez exerça função no processamento de RNAs. É possível que as pré-espermatogônias que apresentam marcação nuclear de SOX2 estejam destinadas a tornarem-se espermatogônias tronco. Conclusões: Visto que a detecção de SOX2 no núcleo das pré-espermatogônias coincide com a retomada da expressão da proteína OCT4 e dos gene Oct4 e Nanog, levanta-se a hipótese de que as pré-espermatogônias que expressam SOX2 nuclear e OCT4 são as melhores candidatas a se tornar espermatogônias tronco. Entretanto, os mecanismos envolvidos ainda precisam ser esclarecidos. Após 10 dias de co-cultura com células de Sertoli, as pré-espermatogônias de ratos com 8dpp geraram clusters.
  • Imagem de Miniatura
    Item
    Acesso aberto (Open Access)
    Efeito do consumo de extrato de chá verde, por ratas, durante a gestação e lactação sobre o metabolismo das mães, da prole aos 28 dias, e da prole tratada com dieta hiperlipídica
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2017-09-28) Hachul, Ana Claudia Losinskas [UNIFESP]; Oyama, Lila Missae [UNIFESP]; Nascimento, Claudia Maria da Penha Oller do [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/9974551337615485; http://lattes.cnpq.br/7125541171554727 ; http://lattes.cnpq.br/1375831965683360; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Objetivo: O objetivo deste estudo foi elucidar o efeito do consumo materno de extrato de chá verde, por ratas, durante a gestação e lactação, promove alterações no metabolismo das mães, filhotes com 28 dias e, após o desmame com 10 semanas de dieta hiperlipídica. Métodos: Após o esfregaço vaginal, as ratas Wistar foram divididas em dois grupos, durante a gestação e lactação: MC – receberam água e ME – receberam extrato de chá verde (400mg/kg massa corporal/dia), ambos com dieta controle. Após a lactação, 28 dias, as mães e um de seus filhotes machos foram eutanasiados, formando os grupos: FC – filhotes de mãe que receberam água e FE – filhotes de mãe que receberam extrato de chá verde. Após o desmame os filhotes machos foram tratados por 10 semanas, formando os seguintes grupos: filhotes de mães que receberam água: continuaram recebendo dieta controle e água (CA); ou passaram a receber dieta hiperlipídica e água (HA); e filhotes de mães que receberam extrato de chá verde: passaram a receber dieta controle e água (CE); ou passaram a receber dieta hiperlipídica e água (HE). Realizamos a evolução da massa corporal; massa relativa dos tecidos adiposos retroperitoneal, mesentérico e gonadal, fígado e músculo gastrocnêmico; a concentração sérica da glicose, triacilglicerol, colesterol total, HDL-colesterol, lipopolissacarideos e dos hormônios insulina, leptina e adiponectina; teste de tolerância oral à glicose; concentração dos mediadores inflamatórios IL-6, IL-10, IL-1β e TNF-α nos tecidos; analisamos a atividade das enzimas superóxido desmutase, glutationa peroxidase e catalase; a expressão protéica da forma fosforilada da proteína do complexo NF-κB-p50. Resultados: As mães que receberam extrato de chá verde apresentaram aumento na concentração das citocinas inflamatórias com redução na atividade da enzima catalase, adicionalmente os seus filhotes, aos 28 dias de vida, diminuíram a massa relativa do tecido adiposo e a atividade da enzima superóxido desmutase, com aumento nas citocinas inflamatórias no tecido adiposo, adiponectina e LPS sérico. Porém, após o tratamento com dieta hiperlipidica, os animais provenientes do grupo chá apresentaram redução no colesterol total, das citocinas inflamatórias e p-NFκB-p50 no tecido adiposo e aumentaram LPS e a glicemia basal do TTOG. Por outro lado, quando os seus filhotes receberam dieta controle, aumentou a concentração de HDL-colesterol, a concentração das citocinas inflamatórias no tecido adiposo seguido de redução no LPS sérico, p-NFκB-p50 do tecido adiposo e na glicemia basal no TTOG. Além disso, os grupos com dieta hiperlipídica aumentaram o ganho de massa corporal, a concentração de leptina, insulina, HOMA-IR, a AUC do TTOG, a massa relativa dos tecidos adiposos, acompanhado de redução na concentração de triacilglicerol, da razão adiponectina/SAT e das citocinas inflamatórias no tecido adiposo. Conclusão: concluimos que o consumo materno de extrato de chá verde, durante a gestação e lactação, induziu um estado pró-inflamatório nas mães, filhotes com 28 dias e nos filhotes adultos que receberam dieta controle, porém foi capaz de melhorar os efeitos deletérios decorrentes do consumo de dieta hiperlipídica. Mostrando que o consumo de extrato de chá verde durante a gestação e lactação altera o metabolismo da prole e das mães.
  • Imagem de Miniatura
    Item
    Acesso aberto (Open Access)
    Efeito imunossupressor dos gangliosídeos: estudo in vivo
    (Sociedade Brasileira para o Desenvolvimento da Pesquisa em Cirurgia, 2000-01-01) Castro, Lc [UNIFESP]; Barbiéri, Clara Lúcia [UNIFESP]; Von Kossel, K [UNIFESP]; Nigro, Ajt [UNIFESP]; Montero, Edna Frasson de Souza [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Imunomodulação mais específica e eficaz é uma meta importante a ser atingida na área de órgão. Neste sentido, foi estudado previamente o papel imunomodulador dos gangliosídeos in vitro. No presente trabalho objetivou-se avaliar este efeito agora in vivo, mimetizando a situação do transplante alogênico. Foram utilizados 26 ratos Wistar 1 EPM, machos, com 3 meses de idade, pesando cerca de 250g, procedentes do Centro de Desenvolvimento de Pesquisa Experimental em Medicina e Biologia. Os animais fora mantidos por 5 dias, para adaptação, no biotério setorial da Disciplina de Técnica Operatória e Cirurgia Experimental da UNIFESP-EPM, recebendo água e ração própria para a espécie. Os animais foram distribuídos em grupos conforme segue: grupos experimento (que receberam 1, 3 e 6 mg/kg/dia de gangliosídeos) e um grupo controle que recebeu veículo, todos por via intramuscular durante 7 dias consecutivos. No 8º dia, com os animais anestesiados com éter etílico foi feita a remoção cirúrgica do baço de todos os animais, os quais foram sacrificados por exsanguinação, ainda sob efeito anestésico. Os baços removidos foram processados para a obtenção de linfócitos os quais foram cultivados em placa de cultura com 96 poços, distribuídos da seguinte forma: 1,5x10(5) linfócitos viáveis de cada animal dos grupos experimento e controle foram cultivados com 1,5x10(5) linfócitos viáveis de um rato não tratado, sendo assim realizada a reação mista de linfócitos. Os linfócitos provenientes dos animais dos grupos controle e 1 mg apresentaram aumento da proliferação sem nenhuma alteração. Por outro lado, foi observada uma taxa de inibição ao redor de 70% sobre a proliferação linfocitária dos animais dos grupos 3 e 6 mg comparados aos animais dos grupos controle e 1 mg. O resultado desta investigação estimula a utilização dos gangliosídeos no tratamento da rejeição alogênica.
  • Nenhuma Miniatura disponível
    Item
    Restrito
    Efeitos da carbamazepina sobre espermatozoides epididimários e a capacidade reprodutiva de ratos adultos e possíveis impactos sobre o desenvolvimento reprodutivo da prole (geração F1)
    (Universidade Federal de São Paulo, 2024-01-15) Santos, Marina Nunes dos [UNIFESP]; Oliva, Samara Urban [UNIFESP]; Miraglia, Sandra Maria [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/7489168456011888; http://lattes.cnpq.br/5886968082690915; http://lattes.cnpq.br/7075826792106019
    INTRODUÇÃO: A carbamazepina (CBZ) é um fármaco amplamente utilizado no controle de convulsões, no tratamento da neuralgia do trigêmeo e de desordens afetivas. Alterações nas características seminais, nos níveis de hormônios sexuais, na espermatogênese e na fertilidade masculina têm sido observadas durante e após tratamentos prolongados com CBZ. Apesar da falta de estudos que evidenciem a ação desse medicamento sobre o epidídimo e o processo de maturação espermática, é importante considerar possíveis efeitos diretos da CBZ nos espermatozoides epididimários, dada sua alta lipossolubilidade. OBJETIVOS: Portanto, este estudo teve como objetivos investigar: a) a possível ação direta da CBZ sobre parâmetros quantitativos, qualitativos e funcionais dos espermatozoides epididimários em ratos adultos; b) os efeitos da CBZ em ratos machos tratados desde a pré-puberdade até a fase adulta sobre o desenvolvimento da genitália externa, qualidade espermática, comportamento sexual e capacidade reprodutiva; c) a possível ocorrência de malformações congênitas na prole de ratos machos tratados com CBZ; d) os efeitos sobre a reprodução masculina em ratos da geração F1. RESULTADOS: Até o momento, nossos resultados indicam impactos substanciais na qualidade espermática e na saúde reprodutiva masculina tanto na exposição aguda quanto na crônica à CBZ. Os espermatozoides epididimários apresentaram uma série de alterações significativas, incluindo redução na motilidade progressiva, deterioração na integridade da cromatina, fragmentação do DNA nuclear e alterações morfológicas, particularmente nas regiões da cabeça e cauda do espermatozoide. Além disso, é importante destacar que, apesar de não terem sido observadas alterações no comportamento sexual dos animais tratados cronicamente com CBZ, foram identificadas alterações placentárias significativas em animais submetidos a essa exposição crônica. Adicionalmente, observou-se a ocorrência de alterações esqueléticas na prole desses animais. CONCLUSÕES: As alterações espermáticas quantitativas e qualitativas observadas em diferentes protocolos de tratamento, níveis de dosagem de CBZ e em grupos etários enfatizam os efeitos multifacetados da CBZ na espermatogênese e maturação espermática.
  • Imagem de Miniatura
    Item
    Acesso aberto (Open Access)
    Efeitos da nicotina nas estruturas do eixo hipófise-gônadas de ratos: uma comparação entre os achados de 1° e 2° gerações após exposição materna
    (Universidade Federal de São Paulo, 2022-12-15) Souza, Grasielly dos Santos [UNIFESP]; Miraglia, Sadra Maria [UNIFESP]; Paccola, Camila Cicconi [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/8116023354222658; http://lattes.cnpq.br/7489168456011888; http://lattes.cnpq.br/0006639375143384
    O tabagismo pode levar a diversas doenças e causar redução da fertilidade tanto em homens quanto em mulheres. Dentre os diversos componentes do cigarro prejudiciais à gravidez, destaca-se a nicotina. Ela pode causar redução do fluxo sanguíneo placentário, comprometendo o desenvolvimento do bebê com consequências neurológicas, reprodutivas e endócrinas. Objetivo: Com base nisso, objetivamos avaliar os efeitos da nicotina na hipófise e gônadas de ratos expostos durante a gestação e amamentação (1ª geração- F1), e se os possíveis danos observados atingiriam a 2ª geração (F2). Métodos: Ratas Wistar prenhes receberam 2mg/kg/dia de nicotina durante toda a gestação e lactação. Parte da prole foi avaliada no primeiro dia neonatal (F1) para análises macroscópicas, histopatológicas e imuno-histoquímicas do cérebro e das gônadas. Outra parte da prole foi mantida até os 90 dias de idade para acasalamento e obtenção de proles que tiveram os mesmos parâmetros avaliados no final da gestação (F2). Resultados: Encontramos alguns neonatos e fetos malformados, mas as malformações foram mais frequentes e diversificadas em F2 expostos à nicotina. Alterações cerebrais, incluindo redução da proliferação e aumento da morte celular na região do mesencéfalo e glândula pituitária, também foram mais evidentes em F2, assim como aumento da distância anogenital em fetos do sexo feminino. Aumento da morte celular e diminuição da proliferação celular também foram observados nas gônadas, porém apenas pequenas alterações de mastócitos foram verificadas nas gônadas e cérebros de ratos expostos, tanto em F1 quanto em F2. Conclusão: Os dados indicam que a exposição pré-natal à nicotina causa alterações transgeracionais no eixo pituitário-gonadal de ratos.
  • Imagem de Miniatura
    Item
    Acesso aberto (Open Access)
    Efeitos da restrição crônica de sono rem em respostas comportamentais relacionadas aos sintomas cognitivo e negativo da esquizofrenia em ratos wistar machos adolescentes
    (Universidade Federal de São Paulo, 2021-09-23) Thomaz, Lucas de Santana Cardoso [UNIFESP]; Silva, Regina Cláudia Barbosa da [UNIFESP]; Suchecki, Deborah [UNIFESP]; Rosenstock, Tatiana Rosado; http://lattes.cnpq.br/0735654567907174; http://lattes.cnpq.br/8336590636180811; http://lattes.cnpq.br/7507421915981968; http://lattes.cnpq.br/7568518661400988; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    O sono é considerado um dos comportamentos mais importantes do ponto de vista vital, estando relacionado à saúde física e mental dos organismos e exercendo função restauradora crucial. Estudos indicam que a restrição crônica de sono REM pode estar relacionada a diversas alterações neurobiológicas, contribuindo para o surgimento de desordens cognitivas e emocionais e transtornos psiquiátricos como a esquizofrenia. Pacientes com esquizofrenia apresentam déficit de Inibição por Pré-Pulso (IPP) e comportamentos depressivos que se correlacionam com alguns dos sintomas positivos e negativos deste transtorno e. Os primeiros sintomas surgem mais comumente durante a adolescência. O objetivo do presente estudo foi investigar os efeitos da restrição crônica de sono REM em ratos adolescentes na modulação de respostas comportamentais relacionados à atenção e à depressão através dos testes de IPP do reflexo de sobressalto acústico e Teste do Splash (TS), respectivamente. O ganho de peso corporal também foi avaliado. Foram utilizados 39 ratos Wistar machos pesando 45-300 g distribuídos em dois grupos experimentais: controle (IPP N = 8; TS N = 12) e restrição do sono REM (RSREM) (IPP N = 8; TS N = 11). Do dia pós natal (DPN) 32 a 52, os ratos do grupo RSREM passaram por 18 h diárias de restrição do sono REM. Em DPN 54, os animais foram submetidos aos testes comportamentais de IPP ou TS sendo eutanasiados imediatamente em seguida. Os resultados mostraram que os ratos do grupo RSREM apresentaram déficit na resposta de IPP, indicando déficit atencional. No TS, este grupo apresentou uma maior latência para o início da autolimpeza e menor frequência deste comportamento parâmetros correlacionados à anedonia. Conjuntamente, estes resultados apontam para uma possível utilização da restrição crônica de sono REM como um modelo experimental translacional para o estudo da fisiopatologia da esquizofrenia. Compreendendo a adolescência como um período crítico do neurodesenvolvimento e considerando a importância do sono durante este período, pode-se hipotetizar que a restrição de sono durante esta fase pode constituir-se como um fator ambiental de risco importante predispondo ao transtorno.
  • Imagem de Miniatura
    Item
    Acesso aberto (Open Access)
    Estudo da hipertermia induzida pela privação de sono: possível participação da Interleucina-1beta
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2011-01-26) Gomes, Vanessa Leonora [UNIFESP]; Hipólide, Débora Cristina [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    A privacao de sono (PS) e um modelo bem estabelecido para verificar os efeitos prejudiciais da vigilia prolongada e para o estudo das funcoes do sono. Durante este tipo de manipulacao, algumas alteracoes fisiologicas sao observadas, sendo notoria a reducao da capacidade em manter o padrao termorregulatorio, marcada por uma elevacao da temperatura corporea logo nas primeiras 24 horas de PS, que se mantem por pelo menos 96 horas de protocolo de PS. Sabe-se tambem que a PS induz aumento na producao de citocinas, como a Interleucina-1 (IL-1), um pirogeno classico, que medeia o comportamento doentio observado em animais submetidos ao desafio imunologico com lipopolissacarideo (LPS). Ratos submetidos a PS e ratos submetidos a administracao de LPS, apresentam aumento de citocinas e aumento de temperatura. A fim de investigar a participacao da IL-1 no aumento de temperatura induzido pela PS e comparar a magnitude e natureza dessa hipertermia com aquela produzida por LPS, administramos 2 ƒÊg/Kg de anticorpo anti-1 via intraperitoneal (i.p.) em ratos PS pelo metodo das plataformas multiplas modificado ao longo de 96 horas e em ratos tratados com 100 ƒÊg/Kg de LPS (i.p.). O presente estudo fornece evidencias de que a IL-1 nao desempenha papel primordial na hipertermia induzida pela privacao de sono, ao contrario da febre induzida por LPS, que tem participacao notavel da IL-1. Tal fato sugere o envolvimento de outros mecanismos e mediadores, bem como a sinergia entre estes na hipertermia induzida pela PS. Tambem identificamos que o aumento de temperatura e verificado dentro da 2a hora de PS, enquanto que o aumento de temperatura induzida por LPS e observado 4 horas apos sua administracao, sugerindo diferenca na ativacao temporal ou mesmo a existencia de mecanismos distintos para o disparo de ambos. Sabe-se que existe um alto custo metabolico associado ao aumento da temperatura corporea e sua manutencao, por isso aventa-se que a elevacao de temperatura verificada na PS nao seja apenas um efeito do estresse, mas um fenômeno determinado por outros fatores, ainda desconhecidos e que precisam ser melhor investigados.
  • Nenhuma Miniatura disponível
    Item
    Somente Metadadados
    Estudo morfofuncional das células de Sertoli de ratos albinos tratados com etoposide na fase pré-púbere
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2006-12-31) Stumpp, Taiza [UNIFESP]; Miraglia, Sandra Maria [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Spermatogenesis is a complex and controlled process in which Sertoli cells play a key role. In the testis, endocrine, paracrine and autocrine mechanisms that control spermatogenesis occurrence. The Sertoli cells synthesize substances which are essential for these mechanisms. Among them is transferrin. This protein is an important iron transporter that binds Fe+3 ions and transports them to cells via receptor-mediated endocytosis. It has been demonstrated that testicular transferrin constitutes 5% of all proteins secreted by Sertoli cells. In addition, it is a reliable instrument of investigation of the function and maturity of these cells, both in vitro and in vivo (Holmes et al., 1982; 1984). Tranferrin secreted by Sertoli cells is internalized by germ cell lineage through receptor-mediated endocytosis. It was recently demonstrated that, in addition to transport iron, transferrin exert antiapoptotic activity through Fas/FasL route, shows high antioxidant activity and play important role against reactive oxygen species (ROS). Although the Sertoli cells are considered the most resistant cell in the testis, they can be affected by germ cell damage or death. Studies showed that after apoptotic germ cell death, caused by gamma irradiation, Sertoli cell function is harmed. Apoptosis is responsible for germ cell number in the seminiferous epithelium under normal and adverse conditions. In normal conditions, apoptosis controls the number of germ cells that Sertoli cells are able to support. In addition to radiation, other adverse situations can interfere with germ cell apoptosis frequency. Chemotherapic drugs, e. g., provoke accentuated increase of germ cell apoptosis in the testis. Spermatogonia and primary spermatocytes are the main target of these drugs, because they undergo continuous mitosis and meiosis, respectively. Etoposide is an efficient chemotherapeutic drug administered against a large variety of malignant neoplasms. However, in spite of its beneficial effects against cancer, some reports have emphasized its toxicity, such as myelotoxicity and loss of fertility, on mammal. In fact, this drug might cause germ cell apoptosis and consequent severe depletion of seminiferous epithelium may occur in post-treated patients. Studies have shown that Sertoli cells play key role in etoposide action in the testis, because these cells express MRP1, a protein located in their basal plasma membrane. This protein functions as a bomb, which transports drugs, that entered Sertoli cells, back to the extracellular compartment. Furthermore, in addition to germ cell death, we observed a significant increase of numerical density of the Sertoli cells occurred in 64 day-old rats treated with etoposide in prepubertal phase. This phenomenon was surprising, since etoposide is mainly known to interfere with topoisomerase II, an important enzyme engaged in DNA replication and particularly abundant in cells undergoing rapid division; otherwise, this phenomenon does not normally occur in Sertoli cells at the studied age. Thus, based on Sertoli cell number alteration observed in our recently published work and considering the controversy about the action of the chemotherapeutic drugs on Sertoli cells, we decided to investigate Sertoli cell function and morphology in rats treated with etoposide during the prepubertal phase to assess a possible direct action of etoposide on Sertoli cells. Prepubertal 25 day-old albino Wistar rats were treated with the total dose of 40mg/Kg of etoposide. This dose was fractioned in eight doses of 5mg/Kg/day, which were administered during eight consecutive days. In this study we also investigated a possible cytoprotector action of iron-free transferrin (apotransferrin) on seminiferous epithelium. Thus, three apotransferrin doses were utilized: 0.1mg, 0.5mg and 1.0mg. Apotransferrin was administered: 24h before etoposide treatment beginning (i.e., when rats were 24-day-old), 30 minutes before each etoposide injection and 24h after the last etoposide injection. Thus, the rats were distributed in 14 groups: six treated only with etoposide; five controls treated with 0.9% saline solution; three treated with etoposide + apotranferrin. The control groups and five groups treated only with etoposide were sacrificed in different periods after the end of the treatment: 12h and 13, 32, 95 and 148 days. Each of these groups was composed by 13 rats; the testes of 10 rats were removed, processed for inclusion in paraffin and submitted to intratesticular transferrin labeling and to PAS+H method for Sertoli cell function and morphology, respectively. The testes of the other three rats were perfusion-fixed with 2.0% formaldehyde + 2.5% glutaraldehyde solution for ultrastructural analysis of Sertoli cell morphology under transmission electron microscope (TEM). The last group treated only with etoposide and the groups treated with etoposide + apotransferrin had five rats each and were sacrificed when they were 64-day-old. This age was chosen for transferrin protection investigation because, at this age, the rats showed the most accentuated alterations in the seminiferous epithelium after etoposide treatment. These rats were sacrificed and their testes were processed for paraffin embedding and stained with PAS+H for histopathological and morphometric analyses. In the control groups, accentuated transferrin labeling in the seminiferous epithelium was observed. In general, the etoposide-treated groups showed accentuated reduction of transferrin labeling in the seminiferous epithelium. This reduction caused diminution of volume density of transferrin labeled testicular tissue in all groups, except for the prepubertal. There was no difference in the interstitial tissue transferrin labeling among control and etoposide-treated groups; all groups showed accentuated labeling of this tissue. These data indicate that etoposide provoked alteration of Sertoli cell function, causing reduction of transferrin synthesis by this cell. However etoposide did not affected global transferrin production. During analysis under light microscope, morphological alteration of Sertoli cell nuclei were observed in the etoposide-treated groups; these cells did not show evident nucleoli. Sertoli cell nuclei in the tubular lumen were also observed. The analysis under TEM confirmed that etoposide causes accentuated Sertoli cell morphological alteration in all etoposide-treated groups. Some Sertoli cells showed degenerative characteristics and other cells showed morphological features of immature Sertoli cells, which were not compatible with the studied ages. All the morphological alterations observed in this study suggest the etoposide exert activity directly on Sertoli cell. This study also showed that, under the experimental conditions here utilized, apotransferrin did not protect the seminiferous epithelium against harmful effects of etoposide.
  • Imagem de Miniatura
    Item
    Acesso aberto (Open Access)
    Expressão do Complexo APC, GSK3- β, Axina e βcatenina na carcinogênese bucal quimicamente induzida pela 4-nitroquinolina 1-óxido em ratos
    (Universidade Federal de São Paulo, 2012-03-16) Carvalho, Juliana Gonçalves [UNIFESP]; Ribeiro, Daniel Araki [UNIFESP]; Carvalho, Carolina Prado de França [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/9969803499258672; http://lattes.cnpq.br/3936428085478540; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Objetivo: Este estudo teve como objetivo avaliar a imunoexpressão do complexo APC, GSK-3β, Axina e β-Catenina, componentes da via WNT, durante a carcinogênese bucal quimicamente induzida pela 4-nitroquinolina 1-óxido em ratos. Material e métodos: Ratos Wistar machos foram distribuídos em três grupos de 10 animais cada e tratados com 50 ppm de 4NQO administrada na água oferecida no bebedouro aos animais, durante um período de 4, 12 e 20 semanas. Paralelamente, foram utilizados 10 animais controle para os respectivos períodos de tratamento. Foram feitas análises macroscópica, histopatológica e imunoistoquímica da língua desses animais. Resultados: O grupo exposto a 4NQO por 4 semanas não apresentou nenhuma alteração macroscópica ou histopatológica quando comparado ao grupo controle. Os animais expostos por 12 e 20 semanas apresentaram leucoplasia, lesões ulceradas e exofíticas, bem como, hiperplasia e hiperqueratose com displasia de grau leve a moderado e carcinoma de células escamosas de tipo bem diferenciado, respectivamente. A expressão das proteínas APC e Axina apresentou padrão moderado no grupo controle. Os grupos experimentais demonstraram uma diminuição em sua expressão quando comparadas ao grupo controle. GSK-3β, apresentou resultados similares em todos os grupos. Os grupos controle e 4 semanas apresentaram imunopositividade moderada para a β-Catenina. Após 12 e 20 semanas de exposição a 4NQO, a expressão foi considerada altamente positiva, praticamente em todas as camadas do epitélio. Conclusão: A diminuição da imunopositividade das proteínas APC e Axina aliado ao aumento da imunoexpressão de β-Catenina estão associados ao risco e a progressão do câncer bucal.
  • Imagem de Miniatura
    Item
    Acesso aberto (Open Access)
    Expressão dos marcadores ki-67, cox-2 e caspase-3 clivada em pele de ratos expostos à radiação ultravioleta e a agrotóxico organofosforado
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2017-05-30) Fernandes, Tania Rita Moreno de Oliveira [UNIFESP]; Plapler, Helio [UNIFESP]; Oshima, Celina Tizuko Fujiyama [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/8007052437699905; http://lattes.cnpq.br/2871630525937037; http://lattes.cnpq.br/3761179025980217; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Ultraviolet radiation and pesticides are proven to be carcinogenic to several organs and tissues. We investigated, by immunohistochemical techniques, the Ki-67, Cox-2 and Cleaved Caspase-3 clivada markers as indicators of neoplastic or pre-neoplastic changes in the skin of rats exposed to these two variables in an isolated or associated way. Forty-four Wistar female rats with three months of age, average weight of 200 ± 30g, were used. The animals were divided into four random groups, each one with 10 animals and observed for 15 weeks. Group A was the control group. Group B was exposed to UVR-B. The animals from group C were exposed to UVR-B followed by a layer of pesticide and, in group D, only one layer of pesticide was applied to the skin of the animals. At the end of the 15th week of the experiment, the animals were euthanized and their lesions resected, submitted to histopathological and immunohistochemical examination and analyzed by the hematoxylin-eosin staining and streptavidin-biotin-peroxidase methods. In group D - exposed only to the organophosphorus pesticide, a predominance of atrophy of the skin and its appendages were observed. Control group did not presented changes. At the end of the experiment, in response to UVR-B and UVR-B + pesticide, all the animals had cellular alterations indicative of neoplasia or cutaneous pre-neoplasia. Considering the immunohistochemical analysis, in relation to Ki-67, we observed that it was not possible to evince statistically significant difference among the groups. However, we observed that the group D (pesticide), even without clinical alterations, presented a high percentage of this protein already. Cox-2 was modestly expressed in the UVR-B + pesticide and pesticide groups. Only the animals in the UVR-B group expressed it mostly. Differently than expected, low immunostaining was evidenced when UVR-B was associated with the pesticide. Cleaved caspase-3 clivada presented 100% positivity in all study groups except control group, with no statistical differences among them. We conclude that UVR-B was responsible for most of the alterations found, And that the organophosphorus pesticide showed increased immunohistochemistry of proliferative cutaneous cellular activity through the increase of Ki-67.
  • Imagem de Miniatura
    Item
    Acesso aberto (Open Access)
    Morfologia das células intersticiais de ovários policísticos de ratas: um estudo experimental
    (Federação Brasileira das Sociedades de Ginecologia e Obstetrícia, 2012-07-01) Lombardi, Leonardo Augusto [UNIFESP]; Simões, Ricardo Santos; Maganhin, Carla Cristina [UNIFESP]; Silva, Cecilia Ferreira da; Maciel, Gustavo Arantes Rosa; Baracat, Edmund Chada [UNIFESP]; Soares Júnior, José Maria [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP); Universidade de São Paulo (USP)
    PURPOSES: To evaluate the histomorphometry of ovarian interstitial cells, as well as the blood sex steroid concentrations of female rats with polycystic ovaries induced by continuous light. METHODS: Twenty female rats were divided into two groups: Control Group - in the estrous phase (CtrlG), and a group of rats with polycystic ovaries induced by continuous illumination (POG). CtrlG animals were maintained on a light period from 07:00 a.m. to 07:00 p.m., and POG animals with continuous illumination (400 Lux) for 60 days. After this period all animals were anesthetized and blood was collected for the determination of serum estradiol (E2), progesterone (P4), and testosterone (T), followed by removal of the ovaries that were fixed in 10% formalin and processed for paraffin embedding. Five-µm histological sections were stained with hematoxylin and eosin and used for histomorphometric analysis. Morphological analyses, cyst count, determination of concentration and of the nuclear volume of interstitial cells were performed with the aid of a light microscope adapted to a high resolution camera (AxioCam), whose images were transmitted to and analyzed by the computer using AxioVision Rel 4.8 software (Carl Zeiss). Data were analyzed statistically by the Student's t-test (p<0.05). RESULTS: Morphological analysis showed the presence of ovarian cysts in POG animals and corpora lutea in CtrlG animals, as well as evidence of the origin of interstitial cells from the internal theca of these cysts. POG animals presented increased serum estradiol levels (pg/mL) compared to CtrlG animals (POG=124.9±4.2>CtrlG=73.2±6.5, p<0.05), the same occurring with testosterone levels (pg/mL) (POG=116.9±4.6>CtrlG=80.6±3.9, p<0.05). However, progesterone levels (ng/mL) were higher in CtrlG than in POG animals (CtrlG=16.3±2.0>POG=4.2±1.5, p<0.05). Morphometry showed a significant increase in nuclear volume in POG animals (POG=102.1±5.2>CtrlG=63.6±16.5, p<0.05), as well as in the area occupied (%) by interstitial cells (POG=24.4±6.9>CtrlG=6.9±3.2, p<0.05) compared to CtrlG animals. CONCLUSION: The interstitial cells of the rat polycystic ovary probably originate from ovarian cysts due to the degeneration of granulosa cells and differentiation of the internal theca cells. The elevations of serum testosterone and estradiol were probably due to the significant increase in cell activity and in the area occupied by interstitial cells.
  • Imagem de Miniatura
    Item
    Acesso aberto (Open Access)
    Papel da caspase-3 na quiescência dos gonócitos de ratos
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2019-01-31) Santos, Marina Nunes Dos [UNIFESP]; Teixeira, Taiza Stumpp [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    The germ cell lineage arises from a progenitor cell population in the epiblast called primordial germ cells (PGC). These cells erase their somatic program and enter a germ cell program after what they migrate to the gonads through the gut endoderm and their dorsal mesentery. During their migration and just after they enter the gonadal ridges, the male PGC proliferate for a short period and then enter in quiescence. These cells are then called gonocytes. Because gonocytes are quiescent cells, very few studies about them are available, so that the mechanisms of the quiescence establishment and regulation are not well known. Studies by our group showed that rat gonocytes are mitotic until 18 days post coitum (dpc) and enter in quiescence at 19dpc. During this period, they stay arrested in G0/G1 and no death or proliferation is observed. Our group also showed very abundant and intense caspase-3 (Casp3) labeling in the cytoplasm of all gonocytes, suggesting that this enzyme may play a non-apoptotic role during rat gonocyte quiescence. In addition, there is evidence that Casp3 cleaves the pluripotent marker NANOG in embryonic stem cells, which is also expressed by the male germ cells. Aim: The aim of this study was to investigate if Casp3 and NANOG interact and whether the inhibition of Casp3 activity leads to alterations of the expression of cell cycle genes in the quiescent gonocyte. Methods: For this, 19dpc testis were collected, dissociated and the isolated gonocytes were incubated in vitro with Casp3 inhibitor for 24h. The expression of cell cycle, apoptosis and pluripotency markers was analyzed by qPCR. Gonocyte viability was investigated by propidium iodide and flow cytometry. Protein extraction was performed from whole 19dpc testes for the investigation of Casp3 and NANOG protein expression. Results: The analysis of gonocyte viability showed that the cultures treated with Casp3 inhibitor presented more dead gonocytes than the control cultures. The inhibition of Casp3 also lead to an increase of Pcna expression as well as a decrease of p21cip, p27kip, Bcl2 and Kras expression. When compared with gonocytes that were not maintained in culture for 24h, the cultured gonocytes showed an increase of p21cip expression in control and treated cultures and of p27kip in the control cultures. The expression of Sox2 and Nanog was not detected in the cultured gonocytes, although Sox2 have been detected in non-cultured gonocytes. Casp3 protein was detected in 19dpc testis extract, although NANOG protein was not detected. Conclusion: The results obtained here lead us to conclude that Casp3 inhibition affects the expression of classical cell cycle markers, suggesting that this enzyme plays a non-apoptotic role in male germ cell development by controlling the cell cycle.
  • Imagem de Miniatura
    Item
    Acesso aberto (Open Access)
    Papel do Resveratrol na reversão do dano reprodutivo causado pela nicotina em ratos machos adultos, expostos à nicotina durante a fase intrauterina e a amamentação
    (Universidade Federal de São Paulo, 2021-11-10) Francisco, Camila Monteiro [UNIFESP]; Miraglia, Sandra Maria [UNIFESP]; Paccola, Camila Cicconi [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/8116023354222658; http://lattes.cnpq.br/7489168456011888; http://lattes.cnpq.br/8114784332903472
    A nicotina causa alterações reprodutivas que culminam em infertilidade e subfertilidade masculina. Resveratrol, um polifenol, é excelente modulador biológico, com possível capacidade de reversão do dano reprodutivo. Ele pode agir modulando a proteína Sirtuina 1 (SIRT1), que atua positivamente na reprodução masculina, mas que pode ser afetada pela nicotina. Objetivos: Investigar a capacidade do resveratrol em reverter danos reprodutivos ocorridos em ratos machos adultos, expostos à nicotina durante a vida intra-uterina e a amamentação. Materiais e Métodos: Quarenta e oito ratos Wistar machos, nascidos de mães expostas e não expostas à nicotina durante a gravidez e lactação, foram distribuídos em 4 grupos: Controle “Sham” (CS), Resveratrol (R), Nicotina (N) e Nicotina + Resveratrol (NR). As mães dos ratos pertencentes aos grupos N e NR foram expostas à nicotina (2 mg/kg/dia- equivalente ao fumo moderado) durante a gravidez e lactação, utilizando-se um implante subcutâneo de minibomba osmótica. Ratos machos dos grupos R e NR receberam resveratrol (300 mg/kg de peso corpóreo, por gavagem) durante 63 dias seguidos, a partir da puberdade. A eutanásia dos animais ocorreu aos 114 dias. Resultados: Nicotina não alterou o peso corpóreo, a biometria dos órgãos reprodutivos e os parâmetros quantitativos de espermatozóides das proles, quando adultas. Porém, ela causou piora evidente dos parâmetros de qualidade (morfologia, motilidade, integridade do acrossoma, atividade mitocondrial, integridade do DNA e estrutura da cromatina). O tratamento diário com resveratrol, desde a puberdade até à fase adulta, promoveu melhora significante de todos os parâmetros espermáticos qualitativos, levando alguns deles próximos a valores observados no grupo controle. O resveratrol também melhorou a integridade morfológica e a expressão de SIRT1 no epitélio seminífero, nas proles expostas à nicotina. Discussão e Conclusão: Nicotina atravessa a membrana placentária e está presente no leite de mães fumantes. Ela reduziu a qualidade espermática nas proles adultas oriundas de mães a ela expostas durante a gestação e lactação. Resveratrol restaurou os parâmetros reprodutivos alterados da prole masculina adulta, exposta à nicotina. A ação moduladora epigenética do resveratrol pode estar envolvida na reversão dos danos causados pela nicotina. Assim, ele pode ser um candidato promissor a ser investigado em relação às estratégias adjuvantes em tratamentos de infertilidade masculina.
  • Imagem de Miniatura
    Item
    Acesso aberto (Open Access)
    Reprogramação epigenética das células germinativas de rato e sua associação com a expressão de retrotransposons e de genes de defesa do genoma
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2015-02-27) Tesser, Renato Borges [UNIFESP]; Teixeira, Taiza Stumpp [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/1024329256080770; http://lattes.cnpq.br/1171517590790197; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    As celulas germinativas primordiais (CGP) derivam das celulas epiblasticas no inicio da vida embrionaria e migram ate as gonadas. Neste periodo, as CGP passam por reprogramacao epigenetica, durante a qual o DNA e globalmente desmetilado, alterando o padrao de expressao genica, incluindo a expressao dos retrotransposons. Nosso grupo observou que a expressao da proteina MVH, que e especifica para as células germinativas e parece estar relacionada com o controle da expressao de retrotransposons e das proteinas PIWIL em camundongos, ocorre mais cedo no rato do que em camundongos. Assim, o objetivo deste estudo e investigar o periodo de reprogramacao das CGP de rato e o controle da expressao dos retrotransposons em comparacao com as CGP de camundongos. Para isso, investigou-se a relacao entre a expressao das proteinas MVH, DAZL e PIWILs, a expressao dos genes de protecao do genoma (Piwil1, Piwil2, Piwil4, Tex19.1, Aszl1 e Mov101L) e a expressao dos retrotransposons Iap e Line-1 nas CGP e testiculos pos natais de rato. Investigou-se tambem se a expressao dos genes relacionados a protecao do genoma e controlada por metilacao. A presenca das proteinas MVH e DAZL foi observada nas CGP entre 13 e 15dpc, mas nao aos 12dpc. As proteinas PIWIL1 e PIWIL2 foram detectadas apenas na fase adulta, em celulas meioticas, coincidindo com a localizacao das proteinas DAZL e MVH, embora a expressao dos respectivos genes tenha sido observada nas CGP aos 15dpc. Foi observada expressao de PIWIL4 nas CGP dos 12 aos 15dpc. A expressão dos genes de protecao do genoma e dos retrotransposons Line-1 e Iap foi observada nas CGP aos 15dpc e em testiculo adulto. Os dados obtidos indicam que as proteínas MVH, DAZL e PIWIL4 estao presentes no desenvolvimento das CGP de rato e sua expressao, bem como o periodo de reprogramacao epigenetica, tem inicio mais cedo do que em camundongos, sugerindo que o controle da expressao dos retrotransposons nas CGP desses animais e diferente daquele observado em camundongos.