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    Ação dos esteroides ovarianos sobre a quantidade dos glicosaminoglicanos sulfatados e do ácido hialurônico nas mamas de ratas ovariectomizadas
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2016-11-17) Torres, Sueli Maria Preda dos Santos [UNIFESP]; Simoes, Manuel de Jesus [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/5987164343458678; http://lattes.cnpq.br/2539410198240163; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    The extracellular matrix (ECM) act an essential role in the function of mammary epithelial cells and glycosaminoglycans have long been attracting clinical interest in all areas of medicine for their important role in cell recognition, migration, cell proliferation and differentiation. OBJECTIVE: Evaluate the morphology and the concentration of glycosaminoglycans in the breast of female rats treated with estrogen and/or progesterone. MATERIAL AND METHODS: Sixty female rats were divided into six groups with 10 animals each: G1 (5 months) and GII (18 months) in the proestrus phase were treated with vehicle; the other animals were ovariectomized, and immediately after were treated with vehicle (GC) or with hormones ? (GE) treated with oestradiol benzoate (37.6 mg/animal); (GP) ? treated with medroxyprogesterone acetate (11.28 mg/animal) and (GEP) ? treated with oestradiol benzoate (37.6 mg/animal), more medroxyprogesterone acetate (11.28 mg/animal). In the GE group, the oestradiol was administered subcutaneously for seven days; in the GP group, the progestogen was administered subcutaneously for 23 dats; in the GEP group, the oestradiol was administered once a day in the first seven days and the progestogen throughout the next 23 days, subcutaneously. Twenty four hours after the last administration of hormones, the animals were euthanized, and the first pairs of inguinal breasts were removed, part of them being fixated in formaldehyde at 10% (morphological evaluation) and the other part submerged in acetone (evaluation of the glycosaminoglycans). The material destined to the morphology was included in paraffin, and the cuts were stained by hematoxylin-eosin. The material destined to the biochemistry was processed to the electrophoresis in agarose gel to sulfated GAGs analysis, and the hyaluronic acid was analyzed with a Elisa-Like fluorimetric method. The statistical analysis was made by the analysis of variance (ANOVA) followed by the Bonferroni test (p<0.05). RESULTS: The breasts of the groups with ovaries (GI and GII) as well as the ovariectomized control group (GC) have shown to be atrophic, wherein we observed typical alveoli with secretion in the lumen in the groups (GE) and (GEP); yet in the animals treated with progestogen (GP), we noticed alveoli formed basically by cells that occupied almost all the alveolar light. In relation to the data of the sulfated glycosaminoglycans we noticed higher concentration in the oophorectomized group (GC) due to high concentration of dermatan sulfate (GC = GE > GP = GEP > GII = GI; p<0.05). And in relation to the hyaluronic acid we found higher concentration in the animals of five months (GI > GII, GC, GE, GEP > GP; p<0.005).CONCLUSION: Oestradiol and progesterone had a trophic effect in the breast parenchyma. However, the administration of oestradiol beforehand changes the action of progesterone in the rat?s mammary tissue.
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    Aspectos histomorfológicos e imunohistoquimicos da adrenal de ratas pinealectomizadas e tratadas com melatonina
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2010-11-25) Fuchs, Luiz Fernando Portugal [UNIFESP]; Baracat, Edmund Chada [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Introduction: The pineal gland is the modulator of mammal’s reproduction, it has some influence in gonads and in the estrous cycle thru hipotalamus-ovary-adrenal axis. Objectives: The objective of this study is to analyze the histomorphology and imunnohistochemical of the pinealectomized and treated with melatonin female rat’s adrenals. Material and methods: Forty adult female rats were divided in 4 groups of 10 animals each. GI – no surgery intervention, with vehicle administration; GII – falsely pinealectomized with vehicle administration; GIII – pinealectomized with vehicle administration; GIV – pinealectomized with melatonin administration (10μg/animal) during the night. After 60 days of experiment, all animals where anesthetized, and the adrenal removed and fixed in 10% formaldehyde. After histological processing to be embedded in paraffin, some slides were stained by H.E. and others submitted to imunnohistochemical to detection of Caspase-3 clivated (apoptosis) and vascular endothelial growth factor VEGF. The obtained data were submitted to statistics (P<0,05). Results: Morphologically, there weren’t modifications in the glomerulosa zone in any of the studied groups. In GIII there was a slightly increase of the adrenal size and the reticularis zone presented with volumous nucleus rich in eurocromatin. In GIV those findings from the previous group had been reversed. In immunohistochemical, there was a decrease in apoptosis detected by Caspase-3 in the GIII (fasciculate zone) and GIV (fasciculata and reticularis zone). VEGF had its smaller reaction in the reticularis zone in all groups, the only difference being the fasciculate zone in GIII, which had shown an increase of the reaction. Conclusion: our data suggests that exogenous melatonin can reverse the effects of pinealectomy.
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    Avaliação da inflamação e estresse oxidativo em ovários de ratas adultas expostas à nicotina durante a fase intrauterina e amamentação
    (Universidade Federal de São Paulo, 2022-02-07) Freitas, Izabela Maria Mota de [UNIFESP]; Paccola, Camila Cicconi [UNIFESP]; Gil, Cristiane Damas [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/6047408996026135; http://lattes.cnpq.br/8116023354222658; http://lattes.cnpq.br/4996146898661742
    A nicotina, um dos principais componentes tóxicos do cigarro, é considerada uma substância teratogênica capaz de perturbar o desenvolvimento embrionário, além de reduzir a fertilidade de homens e mulheres. Nos ovários, pode induzir alterações morfológicas e prejudicar a formação dos folículos, sendo uma possível causa de alterações no ciclo reprodutivo e antecipação de menopausa em mulheres cujas mães fumaram durante a gravidez. Isso porque a nicotina é capaz de aumentar a geração de radicais livres, atuando como um potente pró-oxidante em amostras biológicas. Ela também pode aumentar a expressão de citocinas inflamatórias na prole exposta através da mãe e causar alterações no sistema imunológico em recém-nascidos. Considerando que muitas mulheres fumam durante a gravidez e a amamentação, e tendo em vista o impacto dos danos do tabagismo à saúde da mulher e da prole, este trabalho tem como objetivo analisar os efeitos da nicotina sobre ovários de ratas adultas, as quais foram expostas durante as fases intrauterina e amamentação, por meio da exposição materna. Para tal, ovários de proles adultas foram analisados em relação ao estresse oxidativo e à inflamação. Os resultados mostraram que a exposição à nicotina aumentou o estresse oxidativo no ovário (pelo MDA), porém não ocasionou danos ao DNA das células ovarianas (8-OHdG), além de causar alterações nos níveis da proteína anti-inflamatória AnxA1 e de seu receptor Fpr1, aumentar os níveis de IL-1β e reduzir a população de mastócitos nos ovários. Estes resultados mostram que a exposição materna à nicotina é capaz de induzir o estresse oxidativo e levar a alterações inflamatórias em ovário de prole adulta exposta durante as fases intrauterina e amamentação.
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    Avaliação do colágeno no osso de ratas diabéticas tipo 1 tratadas com isoflavonas
    (Universidade Federal de São Paulo, 2022-11-29) Vieira, Magno César [UNIFESP]; Simões, Manuel de Jesus [UNIFESP]; Carbone, Adriana Aparecida Ferraz [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/9174521191304809; http://lattes.cnpq.br/5987164343458678; http://lattes.cnpq.br/5998705224419140
    Neste trabalho, o modelo “ratas diabéticas ovariectomizadas” foi utilizado pensando nas mulheres em menopausa e diabéticas com um tratamento alternativo com isoflavonas da soja, baseamo-nos em dados que mostram um aumento no número de mulheres que procuram utilizar-se de terapias hormonais. Objetivo: Analisar a matriz extracelular no osso de ratas diabéticas tratadas com isoflavonas ou 17β- estradiol. Métodos: Foram utilizadas 60 ratas (Rattus norvegicus albinus), fêmeas, adultas, ±3 meses de idade. Os animais foram separados em seis (6) grupos, a saber: controle Sham (n=10) animais não ovariectomizados na fase de estro; Sham+DM (n=10) controle Sham ratas diabéticas não ovariectomizadas na fase de estro; OVX (n=10) controle, ratas ovariectomizadas que receberam veículo propilenoglicol; OVX+DM (n=10) ratas diabéticas ovariectomizadas que receberam veículo propilenoglicol (fase de estro); OVX+DM+ISO (n=10) animais diabéticos ovariectomizados tratados com isoflavonas da soja (150mg/Kg, por gavagem); OVX+DM+E2 (n=10) animais diabéticos ovariectomizados tratados com estrogênio (17β-estradiol, 10μg/Kg, por via subcutânea). Para a indução do diabetes Tipo 1, as ratas receberam uma única injeção intraperitoneal de 60 mg/Kg de estreptozotocina (STZ, Sigma-Aldrich). O diabetes foi confirmado três dias após a injeção da estreptozotocina. Todos os animais foram tratados durante 30 dias consecutivos, e ao final, os animais foram anestesiados e os fêmures removidos e processados para estudo em H.E. e Picro Sirius Red. Para a análise dos resultados foi utilizado Oneway ANOVA seguido do teste de Tukey. Foram considerados estatisticamente significativos experimentos cujo valor de p foi menor que 5% (p ≤ 0,05) para significância estatística. Os cálculos foram feitos com o programa SPSS versão13 (SPSS, Chicago, IL). Resultados: Os resultados obtidos foram os seguintes: Peso corporal: não foi diferente entre os grupos não diabéticos Sham e OVX e, os grupos de ratas diabéticas Sham+DM, OVX+DM, OVX+DM+ISO e OVX+DM+E2 (p>0,05). No entanto, houve uma diminuição significativa do peso corporal nos grupos de ratas diabéticas em comparação com os grupos não diabéticas Sham e OVX (p<0,001). Sensibilidade à Insulina: Os valores mais baixos de insulina tolerância foram observadas no OVX+DM (2,41±0,95). Os grupos Sham (4,64±0,95) e OVX (4,57±0,58) apresentaram os maiores valores de sensibilidade à insulina (p<0,001). x Os grupos OVX+DM+ISO e OVX+DM+E2 apresentaram valores semelhantes, inferiores aos Sham e OVX e superior ao grupo OVX+DM. Histomorfometria e Análise Bioquímica de Glicosaminoglicanos Sulfatados: O volume do osso trabecular foi maior nos grupos de ratas diabéticas ovariectomizadas OVX+DM+E2 (26,35±2,13) e OVX+DM+ISO (18,36±173), tratadas, respectivamente, com 17β estradiol e isoflavonas e menor no OVX+DM (8,32±2,52), grupo de ratas diabéticas ovariectomizadas que receberam veículo propilenoglicol em fase de estro. Resultados semelhantes foram encontrados em relação à espessura do osso cortical, que foi maior no OVX+DM+E2 (398,4±1,74) e OVX+DM+ISO (295,6±1,45) e menor no OVX+DM (142,6±2,74) (p<0,05). Com relação ao sulfato de condroitina foi encontrado nos ossos de todos os grupos de animais estudados. Picro Sirius Red: As fibras colágenas de substância óssea trabecular e cortical das epífises dos fêmures apresentaram maior intensidade de birrefringência nos grupos (OVX+DM+ISO 330,2±2 e OVX+DM+E2 414,8± 33,7) tratados, respectivamente, com isoflavonas e 17β estradiol
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    Efeito de concentrações suprafisiológicas de hormônios esteroides gonadais na resposta de estresse em ratas
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2018-02-08) Mariotti, Flora Franca Nogueira [UNIFESP]; Le Sueur-Maluf, Luciana [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    It Is Estimated That Infertility Affects About 10-15% Of Couples Of Childbearing Age Within The World Population, While Annually 7-10% Of Couples Of Reproductive Age In Brazil Rely On Services Specialized In Fertility Disorders Treatment. From A Psychosocial Perspective, Infertile Individuals Experience Intense Psychological Stress, Related To Emotional Disorders, Which Have Repercussions On Marital And Social Relationships. While The Stress Impact On Assisted Reproduction Treatment (Art) Success Has Been Comprehensively Studied, The Role Of Supraphysiological Concentrations Of Gonadal Hormones (Commonly Experienced By Women In Treatment) On Stress Response, Remains To Be Elucidated. The Aim Of This Study Was To Evaluate The Effect Of Supraphysiological Levels Of Gonadal Hormones On The Induced-Stress Response In Female Wistar Rats. In Order To Mimic The Context Of Art In Rodents, Female Rats (11 Weeks Old) With Proven Regular Cycle Were Submitted To The Superovulation Protocol (150 Ui/Kg Ip Of Pregnant Mare
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    Efeito do extrato padronizado de Ginkgo biloba (EGb) sobre neuropeptídeos hipotalâmicos envolvidos na regulação da homeostase energética de ratas ovariectomizadas
    (Universidade Federal de São Paulo, 2020) Ático, Esther Milani [UNIFESP]; Telles, Mônica Marques [UNIFESP]; Machado, Meira Maria Forcelini; http://lattes.cnpq.br/4132670114734847; http://lattes.cnpq.br/8143359335123923; http://lattes.cnpq.br/2177243368818619
    A menopausa é um processo fisiológico natural do corpo feminino que ocorre em torno dos 50 anos de vida e é marcado por diversas e profundas alterações em todos os sistemas do organismo. A carência de estrógeno é considerada a principal causa dos sintomas. Onde diversas alterações endógenas resultam em uma predisposição para o ganho de massa corporal, além de mudanças no metabolismo que favorecem o estabelecimento de uma consequência importante da menopausa, a obesidade. O desenvolvimento da obesidade, a qual tem como característica um grande acúmulo de tecido adiposo, também induz o estabelecimento de um perfil inflamação crônico dos tecidos periféricos e do sistema nervoso central (SNC), condição que promove vários riscos para uma série de outras desordens metabólicas como hipertensão e diabetes. Promover seu controle é, portanto, de extrema importância, e novas terapias farmacológicas, baseadas em produtos naturais, poderiam ser uma alternativa para este fim. Desse modo, visando compreender o efeito do tratamento com o extrato padronizado de Ginkgo biloba (EGb) sobre neuropeptídios envolvidos na homeostase energética em fêmeas ovariectomizadas, ratas de dois meses de idade foram submetidas à cirurgia de ovariectomia (OVX) ou falsa ovariectomia (FOVX). 60 dias após a cirurgia, as ratas dos grupos OGb e FGb receberam gavagem diária do tratamento com 500 mg/kg de EGb, enquanto as fêmeas OS e FS receberam gavagem diária com solução salina a 0,9% como veículo, durante 14 dias. As ratas ovariectomizadas apresentaram um aumento no ganho de massa corporal após a realização da cirurgia, que condiz com a alteração corporal que ocorre na menopausa. Porém, não houve diferença estatística na expressão dos neuropepetídeos NPY e POMC no hipotálamo lateral (HL) após o tratamento com EGb. Desta forma, estudos mais abrangentes e aprofundados se fazem necessário para a elucidação dos mecanismos de ação do extrato sobre os diferentes núcleos hipotalâmicos relacionados a regulação da homeostase energética.
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    Efeitos da melatonina na histomorfologia, na expressão dos receptores esteroídicos, do VEGF e do PCNA em ovários de ratas pinealectomizada
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2009) Romeu, Lucrecia Regina Gomes [UNIFESP]; Motta, Eduardo Leme Alves da [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
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    EFEITOS DA MELATONINA SOBRE O SISTEMA DE APOPTOSE NO ÚTERO DE RATAS ADULTAS
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2012-02-01) Ferreira, Cecília da Silva [UNIFESP]; Soares Júnior, José Maria [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Introdução: A melatonina é o principal produto liberado pela glândula pineal em diversas espécies de vertebrados, com importante função na regulação do sistema neuroendócrino, controlando o ritmo circadiano de processos fisiológicos, estado sono/vigília, pressão arterial sistêmica, resposta imunológica e apoptose, bem como o funcionamento do sistema reprodutor. Objetivos: Analisar os efeitos da melatonina sobre apoptose no útero de ratas submetidas à luz contínua. Material e Métodos: 20 ratas adultas e virgens (Rattus novergicus, Wistar), com ciclo estral regular, foram divididas em dois grupos: GContr, grupo controle que recebeu veículo e GExp tratado com melatonina (0,4 ug/ml), ambos submetidos à luz contínua por 90 dias. Todos os animais foram pesados na data inicial do tratamento e após 30, 60 e 90 dias, quando foram eutanasiados e o útero retirado e processado para técnicas de imunoistoquímica e biologia molecular (qRT-PCR). A evolução de peso corporal foi avaliada por teste estatístico ANOVA e teste de comparações múltiplas de Tukey e os ensaios imunoistoquímicos pelo teste t de Student com nível de rejeição da hipótese de nulidade fixado em 0,05 ou 5% (p< 0,05) para todos testes. Os resultados obtidos do qRT-PCR foram analisados por software específico SAbiosciences e expressos em fold change de expressão. Resultados: Após o período de 90 dias tratamento, todos os animais apresentaram ganho de peso em relação aos dados iniciais. Nos animais do GExp houve o predomínio da hiperexpressão de diversos genes próapoptóticos envolvidos tanto na via extrínseca quanto intrínseca comparados aos dados do GContr. A expressão das proteínas Bax, Faslg e caspase-3 clivada no tecido foi moderada e de localização citoplasmática em células epiteliais endometriais e no estroma nos dois grupos. Embora a proteína Fasestivesse predominantemente expressa no estroma no grupo GContr, não houve diferença estatística no nível de expressão de todas as proteínas entre os dois grupos. Conclusão: Nossos dados sugerem que a melatonina aumenta a expressão de genes pró-apoptóticos sem incremento das proteínas envolvidas com a apoptose.
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    Efeitos da nicotina sobre a regularidade do ciclo estral e o desenvolvimento dos folículos ovarianos de ratas adultas expostas durante as fases intrauterina e de amamentação
    (Universidade Federal de São Paulo, 2022-02-09) Souza, Jaqueline Castelani de [UNIFESP]; Paccola, Camila Cicconi [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/8116023354222658; http://lattes.cnpq.br/8323772823826849
    Estudos evidenciam alterações na fertilidade de proles expostas à nicotina, principal componente do cigarro. Os efeitos podem ocorrer durante o desenvolvimento pré e pós-natal, como alteração do início da puberdade e variação dos níveis de hormônios sexuais, tanto no sexo masculino quanto feminino, além de irregularidade dos ciclos reprodutivos e antecipação da menopausa. Porém, os dados existentes na literatura são conflitantes em relação ao tipo de alteração e à fase em que ocorrem, o que ressalta a importância da realização deste projeto. Desta forma, este trabalho teve como objetivo verificar os efeitos da exposição à nicotina, durante a fase intrauterina e a amamentação, sobre a regularidade do ciclo estral e a incidência de proliferação e morte celular nos ovários de ratas albinas adultas. Para isso, ratas prenhes receberam uma bomba osmótica contendo 2mg/kg/dia de nicotina a partir do primeiro dia de prenhez, a fim de expor a prole durante toda gestação e amamentação. As proles femininas foram avaliadas quanto à regularidade do ciclo estral, por meio de coleta de células da parede vaginal, por 10 dias consecutivos (2 ciclos), a partir do 90 dia pós-natal. Após este período foi realizada a eutanásia e, os ovários coletados foram submetidos à avaliação imuno-histoquímica de proliferação (Ki67) e morte celular (Bcl-XL) das células foliculares. Os resultados referentes à regularidade do ciclo reprodutivo mostraram prolongamento do ciclo estral de ratas expostas à nicotina, relacionado principalmente à maior duração da fase de diestro. Com relação ao desenvolvimento de folículos ovarianos, não foram observadas alterações das taxas de proliferação e de morte de células foliculares diante da exposição à nicotina. De qualquer forma, pode-se concluir que a nicotina é capaz de afetar a regularidade dos ciclos reprodutivos, possivelmente impactando o tempo de vida fértil das fêmeas expostas.
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    Efeitos do 17 beta-estradiol e das isoflavonas da soja no útero de ratas diabéticas e ovariectomizadas
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2020-12-16) Fonseca, Caio Cesar Navarrete Da [UNIFESP]; Simoes, Manuel De Jesus [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo
    Introduction: Hormonal therapy (HT) with estrogen has benefits to climacteric symptoms in women, but it also brings a risk increase to breast and endometrium cancer. Soy isoflavones are phytoestrogens with weaker influence, whereas its administration could be solo or combined by those substances. A diabetic (Di) and ovariectomized (Ovx) animal model is proposed to a better understanding of its impacts in the uterus morphology. Objectives: Evaluate the isolated or combined effects of 17 beta-estradiol (E2) or soy isoflavones (Iso) in the uterus of ovariectomized and diabetic rats. Methods: 50 Wistar rats were separated into 10 groups: (I) sham-operated; (II) ovariectomized; (III) Ovx+E2 (10 µg/Kg/day); (IV) Ovx+Iso (200 mg/kg/day); (V) Ovx+E2+Iso; (VI) Sham+Di; (VII) Ovx+Di; (VIII) Ovx+E2+Di; (IX) Ovx+Iso+Di; and (X) Ovx+E2+Iso+Di. Uterine horns were collected after 50 days of treatment to histomorphometry analysis, and blood proceeded through biochemistry. Results: Uterine horns of Ovx rats had no trophic effect to the isoflavones replacement. The uterus and its lumen were increased in animals with E2 replacement, solo or combined with soy isoflavones. Triglycerides and HDL levels improved in animals treated with soy isoflavones. Diabetes had an impact in uterine morphology by discretely reducing it. Replacement with E2 stimulated the collagen fibers organization into uterine endometrium. Conclusions: Animals without diabetes were evaluated and soy isoflavones improved the lipid profile with no uterotrophic impact, and prevented the increased weight loss from diabetic animals. The combination of HT with 17 betaestradiol and soy isoflavones had similar results with the HT replacement with estradiol, and through those points it is not an alternative to the traditional therapy.
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    Effects of glucosamine on the tibial epiphyseal disk of ovariectomized rats: morphologic and morphometric analysis
    (Faculdade de Medicina / USP, 2007-01-01) Maganhin, Carla Cristina [UNIFESP]; Toledo, Olga Maria Szymanski [UNIFESP]; Regina Ct, Gomes [UNIFESP]; Simões, Ricardo dos Santos [UNIFESP]; Baracat, Edmund Chada [UNIFESP]; Soares Junior, Jose Maria [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP); University of São Paulo Medical School of Medicine
    OBJECTIVE: The aim of this study was to analyze the effect of glucosamine sulfate on the tibial epiphyseal disk of the ovariectomized rats. METHODS: After ovariectomy (OVx), 28 female rats were randomly divided into 4 experimental groups with 7 animals each, treated as follows: OVx 21 - vehicle (NaCl 0.9%) 0.5 mL/day) for 21 days; OVx GS21 - 230 mg/kg/day glucosamine sulphate for 21 days; OVx 45 - treated with NaCl 0.9% as above for 45 days; and OVx - GS45230 mg/kg/day glucosamine sulphate for 45 days. Seven intact animals in the proestrous phase were used as controls (CG). Upon treatment completion, the animals were sacrificed and the left knee joint was dissected and prepared for histological analysis. RESULTS: The percentage of remaining cartilage in new bone of the CG; that found in THE OVx GS45 group was significantly less than that of the OVx 21, OVx GS21, and OVx 45 groups. The percentage of trabecular bone in proestrous animals was the highest. The OVx GS45 group showed higher values compared with the other ovariectomized groups. These results were paralleled by the findings regarding the cells of the proliferative zone, since the CG had the highest values, and the values of the OVx GS45 group were greater than those of the OVx 21, OVx GS21, and OVx 45 groups. CONCLUSION: Our studies suggested that glucosamine may stimulate tibial cartilage and bone growth after ovariectomy in rats.
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    Influência do estrógeno na regulação da autofagia e apoptose dos osteócitos no processo alveolar de ratas ovariectomizadas
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2015-06-24) Florencio-Silva, Rinaldo [UNIFESP]; Cerri, Paulo Sérgio [UNIFESP]; Simões, Manuel de Jesus [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/5987164343458678; http://lattes.cnpq.br/3278495911207882; http://lattes.cnpq.br/3283859903356767; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    A autofagia é um processo que reduz o estresse celular, aumentando a sobrevivência das células. O estrógeno é um hormônio que inibe a reabsorção óssea e a apoptose de osteócitos, promovendo a homeostase óssea. Porém, ainda não está claro se o estrógeno interfere no processo de autofagia para garantir a sobrevivência dos osteócitos. Objetivos: Avaliar a influência do estrógeno na incidência de autofagia e de apoptose nos osteócitos do processo alveolar de ratas ovariectomizadas. Material e métodos: Sessenta e seis ratas adultas foram SHAM-operadas (SHAM) ou ovariectomizadas (OVX) e tratadas com estrógeno (Grupo OVXE) ou receberam solução veículo (Grupos SHAM e OVX), por 15, 30 e 45 dias. Seis ratas SHAM e seis OVX foram eutanasiadas antes dos tratamentos para obtenção dos grupos basais (SHAMBL e OVXBL). Após os tratamentos e eutanásia, as maxilas contendo o primeiro molar foram processadas para inclusão em parafina e Araldite. Cortes corados com HE foram submetidos à histomorfometria para obtenção da área óssea interradicular, número de osteócitos e de lacunas vazias; outros foram submetidos aos métodos da prata para análise dos prolongamentos dos osteócitos e do TRAP para quantificação de osteoclastos. Cortes foram submetidos ao método do TUNEL e à imuno-histoquímica para análise de apoptose (caspase-3 clivada, BAX, Bcl2 e HMGB1) e autofagia (beclina-1, LC3II, p62, ou imunofluorescência para LC3II e p62), além da análise ultraestrutural. Cortes também foram submetidos aos métodos do TUNEL/TRAP combinados e cortes semifinos foram submetidos ao método de Sudan Black para detecção de lipídeo. Resultados: O grupo OVXBL mostrou maior porcentagem de osteócitos caspase-3, TUNEL e p62-positivos, menor porcentagem de osteócitos beclina-1 e LC3II-positivos, e maior número de lacunas vazias e de osteoclastos, em comparação ao grupo SHAMBL. O grupo tratado com estrógeno por 15 dias apresentou menor porcentagem de osteócitos caspase-3 e TUNEL-positivos, e maior porcentagem de osteócitos LC3II-positivos, em comparação ao grupo OVX. O grupo tratado por 30 dias mostrou menor número de lacunas vazias e de osteócitos TUNEL e p62-positivos em comparação ao OVX. O grupo tratado por 45 dias evidenciou maior área óssea e número de osteócitos, menor porcentagem de osteócitos caspase-3, BAX, TUNEL e p62-positivos, assim como maior porcentagem de osteócitos beclina-1 e LC3II-positivos, quando comparado ao grupo OVX. O tratamento com estrógeno por 15 e 30 dias promoveu diminuição significante no número de osteoclastos, em comparação aos grupos OVX. Notou-se maior porcentagem de osteócitos com citoplasma positivo ao HMGB1 e menor porcentagem de osteócitos com núcleo HMGB1- positivo nos grupos OVX. Gotículas de lipídios foram observadas com maior frequência nos osteócitos dos grupos OVX. A análise ultraestrutural evidenciou osteócitos com gotículas lipídicas ocupando amplas regiões citoplasmáticas, principalmente nos grupos OVX, e osteócitos com características ultraestruturais de apoptose. Conclusões: Nossos resultados indicam que a deficiência estrogênica diminui a autofagia e aumenta a apoptose dos osteócitos, enquanto o tratamento com estrógeno mantém a viabilidade dos osteócitos aumentando a autofagia e inibindo a apoptose, sugerindo uma associação inversamente proporcional entre esses dois processos nessas células. Esta associação inversamente proporcional entre autofagia e apoptose reforça a ideia de que o estrógeno deve participar no processo de controle da autofagia, além de reduzir a apoptose em osteócitos.
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    Embargo
    Quantificação do mRNA BNP Miocárdico em Ratas Submetidas à Isquemia/Reperfusão na Ausência de Distensão Ventricular
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2009-06-24) Ramos, Lafayete William Ferreira [UNIFESP]; Carvalho, Antonio Carlos [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Aims. To determine whether a relation exists between ischemia/reperfusion and myocardial BNP mRNA expression independent of variations in intracavitary diastolic volume and consequently, of cardiomyocyte stretching. Methods. Twenty-three rats were subjected to the following conditions: control (C), 15 minutes of ischemia (I15), or ischemia plus 15 (R15), 30 (R30) or 45 (R45) min of reperfusion in the in situ hearts. Isolated hearts of sixteen additional rats (sham, n=8; occlusion, n=8) were perfused for studies in the absence of ventricular distension. All hearts were divided in two segments (ischemic and non-ischemic). Ventricular distension was avoided by excluding the atria and mitral valves. In both experiments, BNP mRNA was quantified by real-time PCR in both non-ischemic and ischemic regions. Results. In the in situ hearts, myocardial BNP mRNA values at R15 (4.24±0.75) in the ischemic region were higher than in other groups (C: 1.43±0.81, p=0.044; I15: 3.05±0.62, p=0.048; R30: 0.76±0.84, p=0.001; R45: 1.47±0.60, p=0.046, [ANOVA]). In isolated hearts without ventricular distension, myocardial BNP mRNA (arbitrary units) content at R15 in ischemic regions (4.54±0.26) was greater than in nonischemic regions in both occlusion (3.51±0.20, p<0.001) and sham (3.38±0.25, p=0.0001 and 3.47±0.19, p=0.0001) groups. Conclusion. The present data show that ischemia/reperfusion is responsible for increased BNP mRNA myocardial content independent of changes of ventricular cavity diastolic volume.