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    Alterações em células de tumor de mama MCF-7 após superexpressão da enzima heparanase-1
    (Universidade Federal de São Paulo, 2022-07) Silva, Mariane Barros Ribeiro da [UNIFESP]; Pinhal, Maria Aparecida da Silva [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/7511274763693292; http://lattes.cnpq.br/2778388041557973
    Introdução: A enzima heparanase-1 (HPSE1) é uma endo-β-glucuronidase que cliva cadeias de heparam sulfato (HS) e heparina e está diretamente relacionada com a carcinogênese. Objetivo: O objetivo do estudo foi avaliar como a superexpressão de HPSE1 pode promover alterações moleculares em células de tumor de mama humano do subtipo molecular luminal A (MCF-7). Métodos: Células MCF-7 foram estavelmente transfectadas com o cDNA de HPSE1 e a avaliação da expressão de receptores específicos, bem como dos diferentes proteoglicanos de heparam sulfato (PGHS) foi realizada por ensaios de RT-PCR quantitativo, microscopia confocal e citometria de fluxo. A atividade enzimática de HPSE1 foi determinada por degradação de heparam sulfato biotinilado. A quantificação de ácido hialurônico (AH) foi determinada por ensaio de Elisa-like. A identificação e quantificação dos glicosaminoglicanos sulfatados (GAG) foi realizada por marcação com [35S]-sulfato. A estrutura do HS foi determinada por cromatografia líquida de alta pressão (HPLC). A proliferação celular foi obtida por incorporação de bromodeoxiuridina (BrdU). O ensaio de clonogenicidade foi realizado para a determinação da capacidade de formação de colônias. A viabilidade celular e o perfil de exossomos foram avaliados após tratamento com os quimioterápicos Fauldoxo, Paclitaxel e Fauldcispla. Resultados: Os resultados mostraram que a superexpressão de HPSE1 altera a expressão de isoformas do receptor CD44 e aumenta a expressão de HER2, porém não afeta o padrão de proliferação celular e capacidade de formação de colônias. Houve alteração do perfil de GAG, estrutura do HS, bem como aumento da expressão das enzimas que participam da biossíntese de HS, após superexpressão de HPSE1. Os dados também evidenciaram aumento significativo dos PGHS, sindecam-2, sindecam-3 e sindecam-4 e diminuição de sindecam-1 em células tranfectadas com HPSE. Análises in sílico e in vitro mostraram correlação direta entre o nível de expressão de sindecam3 e do fator indutor de hipóxia (HIF-1α) com HPSE1. Conclusão: Os resultados revelam inúmeras alterações do perfil de expressão de moléculas cruciais envolvidas na carcinogênese, indica possível utilização de HPSE1 como um marcador adicional no diagnóstico do câncer de mama auxiliando também no desenvolvimento de potencial terapias alvo.
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    Embargo
    Análise de glicosaminoglicanos e proteoglicanos em linhagens tumorais de próstata
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2010-10-27) Aquino, Renata de Oliveira [UNIFESP]; Toma, Leny [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Proteoglicanos (PG) são macromoléculas encontradas na superfície celular, matriz extracelular e grânulos citoplasmáticos, que desempenham importante papel na interação célula-célula e célulamatriz. Diversos estudos mostraram alterações significantes no conteúdo de PG encontrados no estroma do tumor, e estas mudanças influenciam o crescimento e invasão tumoral. No presente estudo, células de câncer de próstata DU145 e PC3, de diferentes origens metastáticas, cérebro e osso, respectivamente, foram analizadas num estudo comparativo para GAGs e PGs. Marcação das células com [35S] Na2SO4 e análise estrutural dos GAGs com enzimas específicas, mostraram aumento de produtos 6-O-sulfatados no HS e CS das células PC3, comparado à DU145. Produtos de HS das células PC3 foram representadas pelo aumento de dissacarídeos Nacetilados- 6-O-sulfatados (DGlcA-GlcNAc,6OS) e dissacarídeos trissulfatados (DIdoA,2S-GlcNS,6S). Produtos 6- e 4-O-sulfatados (DUGalNAc4S, 6S) também estão presentes no CS das células PC3, mas em menor quantidade na DU 145. Estudos na literatura têm demonstrado a presença de Ido.A,2S como requerimento fundamental para a ligação de HS ao bFGF. Contudo, estudos ainda mostraram a necessidade de requerimentos estruturais adicionais de 6-O-sulfatação de resíduos de glucosamina-N-sulfato para a promoção da atividade mitogênica do fator de crescimento. Altos níveis de PGHS foram encontrados em ambas as células, comparado a PGCS. Sindecam-1 está diminuído em células PC3, em relação à DU145. Entretanto, uma compensação ocorreu com um aumento de sindecam-2, detectado por PCR em tempo real, e corroborado por microscopia confocal e citômetro de fluxo com dupla marcação. A presença de sindecam-2 nas células PC3, além de alterações na distribuição subcelular, comparada à DU145, representa possivelmente um papel importante na carcinogênese prostática. Com relação aos estudos de migração, as células DU145 mostraram perfil mais migratório, talvez devido às vantagens seletivas para extravazamento adquiridas por este tipo de células para superar a barreira da membrana hematoencefálica. Coletivamente, estes reultados demonstram características bioquímicas e celulares diferentes encontradas nas duas linhagens celulares, que refletem as peculiaridades da colonização órgão-específica e seleção celular que ocorrem durante o processo de metástase.
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    Restrito
    Análise morfofuncional da matriz extracelular aortica de ratos wistar submetidos à dieta hipersódica
    (Universidade Federal de São Paulo, 2022-09-01) Souza, Vanessa Rodrigues de [UNIFESP]; Borges, Luciano de Figueiredo [UNIFESP]; Lacchini, Silvia; http://lattes.cnpq.br/1388456714004346; http://lattes.cnpq.br/6933592497390944; http://lattes.cnpq.br/1100356817456544
    Objetivo: As doenças cardiovasculares constituem uma das principais causas de morte no Brasil e no mundo. O alto consumo de cloreto de sódio (sal) na dieta é um problema relacionado ao desencadeamento dessas doenças. Experimentos com animais vêm sendo realizados a fim de desvendar os mecanismos associados ao “sal” como fator de estresse. Fora verificado em estudos anteriores que a sobrecarga salina com NaCl 1% provocou remodelamento vascular com produção local de substâncias pró-inflamatórias (Angiotensina II), independentemente da elevação da pressão arterial. Ratos Wistar machos com 4 semanas de idade foram empregados e acompanhados até a 16ª semana de vida com objetivo de estudar a organização da matriz extracelular (MEC). Métodos: Os animais foram randomicamente separados em dois grupos experimentais: controle ou sobrecarga salina com NaCl 1% na água de beber durante doze semanas. Ao final do tratamento os animais foram submetidos à gaiola metabólica e também à avaliação da pressão arterial. A artéria aorta foi coletada e preparada para análise histológica dos seguintes componentes da MEC: fibras de colágeno (coloração pelo Sírius Red), proteoglicanos (PGs) e glicosaminoglicanos (GAGs) sulfatados e carboxilados (colorações pelo Azul de Alcian pH 2,5 e Azul de Toluidina pH 7,0). Resultados: Este modelo de sobrecarga salina não induziu importantes alterações hemodinâmicas sistêmicas do ponto de vista clínico, mas foi capaz de provocar alterações na organização dos elementos matriciais. Possivelmente a dieta hipersódica desencadeou mecanismos regulatórios, que apesar de não alterar drasticamente a quantidade dos elementos da MEC, provocou alterações na organização dos mesmos. Conclusão: É possível que o desarranjo da MEC seja resultado da ação de proteases matriciais desencadeado por uma alteração hemodinâmica regulatória local. Portanto, a redução no consumo de sal é recomendada tendo em vista a manutenção da histofisiologia cardiovascular, inclusive para indivíduos normotensos. Mais estudos serão necessários para uma investigação mais criteriosa. Porém, estes indícios encontrados contribuem para a geração de evidências que visam elucidar os mecanismos associados aos malefícios do excesso de sal na dieta, colaborando para o delineamento de estratégias preventivas e terapêuticas
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    Avaliação do colágeno no osso de ratas diabéticas tipo 1 tratadas com isoflavonas
    (Universidade Federal de São Paulo, 2022-11-29) Vieira, Magno César [UNIFESP]; Simões, Manuel de Jesus [UNIFESP]; Carbone, Adriana Aparecida Ferraz [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/9174521191304809; http://lattes.cnpq.br/5987164343458678; http://lattes.cnpq.br/5998705224419140
    Neste trabalho, o modelo “ratas diabéticas ovariectomizadas” foi utilizado pensando nas mulheres em menopausa e diabéticas com um tratamento alternativo com isoflavonas da soja, baseamo-nos em dados que mostram um aumento no número de mulheres que procuram utilizar-se de terapias hormonais. Objetivo: Analisar a matriz extracelular no osso de ratas diabéticas tratadas com isoflavonas ou 17β- estradiol. Métodos: Foram utilizadas 60 ratas (Rattus norvegicus albinus), fêmeas, adultas, ±3 meses de idade. Os animais foram separados em seis (6) grupos, a saber: controle Sham (n=10) animais não ovariectomizados na fase de estro; Sham+DM (n=10) controle Sham ratas diabéticas não ovariectomizadas na fase de estro; OVX (n=10) controle, ratas ovariectomizadas que receberam veículo propilenoglicol; OVX+DM (n=10) ratas diabéticas ovariectomizadas que receberam veículo propilenoglicol (fase de estro); OVX+DM+ISO (n=10) animais diabéticos ovariectomizados tratados com isoflavonas da soja (150mg/Kg, por gavagem); OVX+DM+E2 (n=10) animais diabéticos ovariectomizados tratados com estrogênio (17β-estradiol, 10μg/Kg, por via subcutânea). Para a indução do diabetes Tipo 1, as ratas receberam uma única injeção intraperitoneal de 60 mg/Kg de estreptozotocina (STZ, Sigma-Aldrich). O diabetes foi confirmado três dias após a injeção da estreptozotocina. Todos os animais foram tratados durante 30 dias consecutivos, e ao final, os animais foram anestesiados e os fêmures removidos e processados para estudo em H.E. e Picro Sirius Red. Para a análise dos resultados foi utilizado Oneway ANOVA seguido do teste de Tukey. Foram considerados estatisticamente significativos experimentos cujo valor de p foi menor que 5% (p ≤ 0,05) para significância estatística. Os cálculos foram feitos com o programa SPSS versão13 (SPSS, Chicago, IL). Resultados: Os resultados obtidos foram os seguintes: Peso corporal: não foi diferente entre os grupos não diabéticos Sham e OVX e, os grupos de ratas diabéticas Sham+DM, OVX+DM, OVX+DM+ISO e OVX+DM+E2 (p>0,05). No entanto, houve uma diminuição significativa do peso corporal nos grupos de ratas diabéticas em comparação com os grupos não diabéticas Sham e OVX (p<0,001). Sensibilidade à Insulina: Os valores mais baixos de insulina tolerância foram observadas no OVX+DM (2,41±0,95). Os grupos Sham (4,64±0,95) e OVX (4,57±0,58) apresentaram os maiores valores de sensibilidade à insulina (p<0,001). x Os grupos OVX+DM+ISO e OVX+DM+E2 apresentaram valores semelhantes, inferiores aos Sham e OVX e superior ao grupo OVX+DM. Histomorfometria e Análise Bioquímica de Glicosaminoglicanos Sulfatados: O volume do osso trabecular foi maior nos grupos de ratas diabéticas ovariectomizadas OVX+DM+E2 (26,35±2,13) e OVX+DM+ISO (18,36±173), tratadas, respectivamente, com 17β estradiol e isoflavonas e menor no OVX+DM (8,32±2,52), grupo de ratas diabéticas ovariectomizadas que receberam veículo propilenoglicol em fase de estro. Resultados semelhantes foram encontrados em relação à espessura do osso cortical, que foi maior no OVX+DM+E2 (398,4±1,74) e OVX+DM+ISO (295,6±1,45) e menor no OVX+DM (142,6±2,74) (p<0,05). Com relação ao sulfato de condroitina foi encontrado nos ossos de todos os grupos de animais estudados. Picro Sirius Red: As fibras colágenas de substância óssea trabecular e cortical das epífises dos fêmures apresentaram maior intensidade de birrefringência nos grupos (OVX+DM+ISO 330,2±2 e OVX+DM+E2 414,8± 33,7) tratados, respectivamente, com isoflavonas e 17β estradiol
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    Avaliação histológica, ultraestrutural e molecular de córneas com ceratocone e dos efeitos do crosslinking rápido sobre os ceratócitos cultivados em modelo 3D
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2021) Covre, Joyce Luciana [UNIFESP]; Gomes, Jose Alvaro Pereira [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo
    Purpose: Characterize healthy and keratoconus human corneas and keratocytes using histochemical, ultrastructural and molecular analysis and to evaluate the effects of crosslinking treatment at different times on healthy and KC keratocytes cultured in the 3D model. Methods: Cornea samples from control and KC patients were collected and processed for histological, biochemical, immunohistochemical and ultrastructural analyses. Primary keratocytes from control and KC corneas were isolated by collagenase digestion and cultured in DMEM/Ham\'s F12 medium supplemented with 2 % fetal bovine serum. After these cells reach the confluence state (~30 days), they were processed for Western blot analysis to evaluate protein levels implicated in cell structure, adhesion and signaling and an analysis of the lipid profile was performed. Cultured keratocytes were also subjected to CXL treatment at different times. After 24 hours viable cells were quantified by MTT and LDH techniques and apoptotic cells were counted using the caspase 3 marker. The levels of pro-inflammatory cytokines IL-6 and IL-8 and MMP-3, MMP-9 from the supernatants were tested by an enzymelinked immunosorbent assay (ELISA). Results: Histological analysis showed that stroma from KC corneas presented disorganized collagen fibers compared to control samples. Picrosirius-polarization analysis demonstrated enhanced birefringence of collagen networks from control corneas compared to KC. Densitometry of yellow-red/ green birefringence of collagen fibers confirmed these findings and indicates a loss of collagen alignment in the KC. Ultrastructural analysis of KC cornea demonstrated loose fibrillar networks of stroma with small and thin collagen fibril diameters compared to the control samples. In addition, cultured KC cells showed reduced levels of vimentin, focal adhesion kinase (FAK), β1-integrin, keratocan and the activation of Src tyrosine. By contrast, lumican levels were increased in the KC cells and in the corneal stroma. In the analysis of the lipid profile, the potential biomarkers were shown to be completely different in cells with keratoconus compared to control cells (normal). After 24 hours of treatment with CXL, cell viability assessed by MTT and LDH assays indicated that there were no significant changes in the healthy and keratoconus groups. On the other hand, the immunofluorescence analysis showed increased levels of caspase 3 cleaved in healthy cells and keratoconus after 24 hours of treatment with CXL for 30 minutes. The quantification of the levels of pro-inflammatory cytokines IL- 8 and IL-6 and MMP-3 and -9 did not change. Conclusion: Our findings provide that KC is associated with a marked alteration of structural and molecular patterns of corneal stroma and keratocytes. This may be of significance for explanation of pathogenesis of corneal ectactic diseases.
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    Biologia vascular: síntese e remodelamento de moléculas da matriz extracelular e de superfície de células endoteliais em artéria carótida de camundongos ApoE-/-.
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2021) Russo, Thatiane Amaral [UNIFESP]; Regatieri, Juliana Luporini Dreyfuss [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo
    The endothelium is composed of a monolayer of cells and their basemant membrane, which line the inside of the blood vessels and are responsible for maintaining vascular homeostasis. Under physiological conditions, it maintains vascular tone, laminar blood flow, coagulation process, cell proliferation and migration and control of the inflammatory response. Endothelial cells (ECs) respond to mechanical forces such as cell stretching and shear stress, influencing cellular behavior such as: morphology, migration, adhesion and angiogenesis, where many extracellular matrix (ECM) and cell surface components play a fundamental role. Endothelial dysfunction can cause cardiovascular diseases, such as hypertension, thrombosis and atherosclerosis, and these diseases can be modulated by the mechanical forces applied to the artery wall. This study aimed to investigate the remodeling of ECM and molecules associated with this remodeling in ECs submitted in vitro to two mechanical stimuli, cell stretching and shear stress, both in physiological and pathological conditions. After the stimuli, tests of cell behavior (adhesion, cell migration and formation of capillary structures), analysis of the biosynthesis of glycosaminoglycans by incorporating 35S, immunofluorescence, qPCR and qPCR array were performed. Both mechanical forces induced changes the ECs morphology, cell adhesion, migration and formation of capillary structures in culture were modulated positively in physiological conditions and negatively in pathological situations. The pathological mechanical forces applied to ECs induced a higher gene expression of syndecan-4, perlecan, versican, decorin, fibronectin, collagen III α1, connexin-43, VEGFA, TGF-β1 and TGF-β3. In addition, in vivo assays with ApoE-/- deficient mice were used as an animal model to study ECM remodeling in atherosclerotic disease. For this purpose the carotids of ApoE-/- mice were analyzed by high resolution ultrasound, demonstrating that there was an increase in the internal diameter and internal thickness (IMT) of these vessels, characterizing an artery dysfunction. Then these carotids were removed and subjected to analysis of gene expression by qPCR and qPCR array, immunofluorescence and histopathology. It was possible to observe a higher gene expression and a higher fluorescence intensity of syndecan-4, perlecan, versican and connexin-43 in carotids of ApoE-/- mice when compared to wild type control mice. The results of the qPCR array demonstrated higher expression of adhesion molecules, laminins and integrins and genes related to ECM proteolysis in carotids of ApoE-/- mice when compared to wild type control mice. This study helps to understand the remodeling and associated molecules of the ECM in in vitro and in vivo models of cardiovascular diseases, and how the endothelium can be affected by the mechanical forces of cell stretching and shear stress.
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    Caracterização morfométrica e de organização das fibras colágenas e proteoglicanos na cabeça do fêmur de camundongos MDX submetidos ou não à exacerbação da doença por exercício físico
    (Universidade Federal de São Paulo, 2021-09-22) Marangoni, Kevin Pereira [UNIFESP]; De Oliveira, Flavia [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/3387760393535776; http://lattes.cnpq.br/5620060448568039; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Introdução: A Distrofia Muscular de Duchenne (DMD) é uma doença genética causada por uma alteração do gene codificador de distrofina no cromossomo X de seres humanos e causa fraqueza muscular progressiva, causada pela atrofia do tecido muscular e intensa inflamação. A DMD acomete principalmente os músculos esqueléticos, contudo, alterações no tecido ósseo também são descritas. Dessa maneira, o objetivo do estudo é avaliar, na epífise proximal do fêmur de camundongos mdx submetidos ou não ao exercício físico, a morfometria, bem como a estrutura do colágeno e proteoglicanos da cartilagem articular, com o intuito de se verificar possíveis alterações morfológicas consequentes da ausência de distrofina. Materiais e métodos: Utilizando o exercício físico como meio para exacerbação da progressão da doença, foram utilizados camundongos C57BL/10 e C57BL10-DMD/mdx com 24 semanas de idade, os quais foram distribuídos em 3 grupos (n=10 cada): Controle (Ctrl), mdx sedentários (Mdx-S) e mdx treinados (Mdx-T), sendo que o grupo Mdx-T foi induzido à prática de exercícios físicos intensos diariamente. Após o período de 8 semanas os animais foram eutanasiados com 32 semanas de idade e o fêmur coletado para análise histológica (hematoxilina/eosina, picrosirius, Safranina-O) e morfométrica. Resultados: Os principais resultados mostraram que apenas o grupo Mdx-S apresentou área da cartilagem articular menor que o grupo controle. Ademais, verificaram-se alterações na organização das fibras colágenas e dos proteoglicanos na cartilagem articular dos animais mdx, independente do grupo (Mdx-S ou MDX-T). Conclusão: Os animais distróficos demonstraram meio extracelular deficiente, caracterizado pela diminuição da síntese de proteoglicanos e desorganização das fibras colágenas, o que pode significar que o processo natural da distrofia muscular pode ter efeito negativo sobre a homeostasia da cartilagem articular de camundongos distróficos, contudo, a exacerbação da doença por exercício físico não demonstrou ter envolvimento com estes achados.
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    Correlação entre os glicosaminoglicanos, proteoglicanos e colágenos e a gravidade da doença de Dupuytren
    (Universidade Federal de São Paulo, 2023-11-27) Lenzi, Luiz Guilherme De Saboya [UNIFESP]; Faloppa, Flavio [UNIFESP]; Nader, Helena Bonciani [UNIFESP]; Santos, João Baptista Gomes dos [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/7175631659428994; http://lattes.cnpq.br/2431910521925594; http://lattes.cnpq.br/3695111273396745; http://lattes.cnpq.br/8191223392689753
    Introdução: A doença de Dupuytren (DD) é uma condição fibroproliferativa típica da mão, resultante de fatores genéticos, epigenéticos e ambientais. Sua origem está relacionada à síntese de matriz extracelular (MEC), uma rede complexa de diferentes tipos de macromoléculas. Alterações em seu conteúdo e disposição têm impacto nos processos fisiológicos normais e nas condições patológicas. Objetivo: correlacionar os glicosaminoglicanos, proteoglicanos e colágeno na matriz extracelular de doentes com diferentes estágios clínicos da doença de Dupuytren. Métodos: O estudo envolveu 14 pacientes categorizados em quatro grupos com base nos seus estágios I, II, III e IV. A análise das moléculas foi realizada a partir da biópsia da fáscia palmar e de amostras de urina, por meio da utilização de métodos cromatográficos, análises de mRNA, detecção de proteínas na microscopia confocal e microscopia CARS (microscopia de dispersão coerente antistokes de Raman). Resultados: Foram observadas alterações significantes no conteúdo e disposição do condroitim sulfato, dermatam sulfato e colágeno na fáscia palmar dos doentes em comparação com o tecido normal, independentemente do grau da doença. Pela primeira vez na literatura, foi possível associar o aumento da expressão do versicam, agrecam e do decorim de forma significante. Além disso, a excreção de glicosaminoglicanos sulfatados está significantemente diminuída na urina dos doentes com DD. Conclusão: Os dados indicam que os proteoglicanos e a disposição do colágeno são possíveis marcadores do estádio da doença. Ademais, a diminuição da excreção urinária de glicosaminoglicanos sugere um efeito sistêmico da doença.
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    Efeito modulatório de proteoglicanos sobre a atividade da enzima óxido nítrico sintase endotelial em células CHO
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2015-04-29) Lucena, Sheyla Varela [UNIFESP]; Tersariol, Ivarne Luis dos Santos [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/4859954582615304; http://lattes.cnpq.br/2148891529881163; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Introdução. A interação das células com a matriz extracelular (MEC) e com as células vizinhas são essenciais para o desempenho das funções celulares. A maneira pela qual as células adquirem informações sobre o meio extracelular se dá por meio de interações mediadas por receptores específicos entre a MEC e os constituintes de superfície celular, tais como, integrinas, proteoglicanos entre outros. Dados da literatura mostram que os proteoglicanos, via suas cadeias de glicosaminoglicanos (GAGs), são capazes de interagir com várias proteínas da MEC e com integrinas da superfície celular que por sua vez, interagem com moléculas da MEC. Essas interações GAGs/integrina modulam a formação do complexo ternário integrina/GAGs/proteínas da MEC controlando dessa forma o papel biológico das integrinas. Estímulos mecânicos derivados da MEC podem ser transmitidos para o meio intracelular pela interação direta ou indireta das integrinas que se associam com proteoglicanos em regiões de "lipíd rafts" e no complexo focal de adesão controlando a produção intracelular de NO. [Objetivos] Considerando que os proteoglicanos controlam a atividade de integrinas na superfície celular, decidimos investigar a influência dos GAGs nos mecanismos responsáveis pela produção de óxido nítrico em células selvagem CHO-K1, bem como, em células mutante CHO-745, defectiva da enzima xilosiltransferase, enzima fundamental para a biossíntese de GAGs. [Métodos] Analisamos o balanço redox nas células CHO-K1 e CHO-745 pela quantificação de GSH/GSSG, de grupos tióis, da razão NADP/NADPH, bem como, pela análise da expressão gênica das enzimas GPx, TRX e catalasepor RTPCR. Analisamos a susceptibilidade das células CHO para a morte celular frente a sobrecarga do agente pró-oxidante. Os níveis intracelulares de espécies reativas de oxigênio (EROS), de superóxido e de óxido nítrico foram analisados em ambas as linhagens celulares CHO por sondas fluorescentes em microscopia TIRF e confocal. Também foi analisada a expressão gênica das isoformas de NADPH oxidase e NO sintase envolvidas na produção de superóxido e NO nas células CHO por westem blottíng e citometria de fluxo. A localização celular da enzima eNOS nas células CHO foi analisada por microscopia confocal. Verificamos a via de sinalização celular envolvida no controle da atividade da enzima eNOS nas células CHO por western blotting, microscopia TIRF e confocal. [Resultados]. Nossos resultados mostram que as células mutantes CHO-745 são mais susceptíveis a morte celular induzida por agente pró-oxidante que as células selvagem CHO-K1. Verificamos que as células mutantes CHO-745 produzem espontaneamente cerca de 12 vezes mais EROS do que as células selvagens CHO-K1. A principal fonte de EROS produzidos espontaneamente pelas células CHO-745 está associada a sua elevada produção de NO, o qual também cerca de 12 vezes maior nas células mutantes CHO-745 em relação às células selvagem CHO-K1. Os resultados mostram que a isoforma eNOS é a principal responsável pela produção de NO nas células CHO. Os resultados mostram que a presença de GAGs, verificada nas células CHO-K1 inibe a via de sinalização Integrina/FAKlPI3K/Akt,. a qual leva a ativação da eNOS por fosforilação de Ser1177. Além disso, as células CHO-K1 apresentam maior ativação constitutiva da enzima PKC, cerca de duas vezes mais, do que as células CHO-745. Essa ativação da PKCa resulta na fosforilação no resíduo inibitório Thr495 da eNOS. A elevada produção de NO nas células CHO-745 promoveu também uma elevada taxa de S-nitrosilação de resíduos de cisteína em suas proteínas, bem como, elevada taxa de nitração de grupos fenólicos de tirosina. Ainda foi observado que as células CHO-745 possuem uma concentração basal de superóxido menor em comparação com as células CHO-K1. Nossos resultados mostram que as células CHO-745 apresentam níveis elevados de expressão gênica das enzimas GPx, TRX e catalase em resposta a sua maior produção de EROs. [Conclusão] Esses resultados mostram que a enzima eNOS está muito mais ativada nas células mutante CHO-745 do que as células CHO-K1 devido a sua maior fosforilação do resíduo excitatório Ser1177 e menor fosforilação em seu resíduo inibitório Thr495, a fosforilização desses resíduos é modulada por GAGs/PG da superfície celular. Esses resultados mostram que os GAGs estão envolvidos no controle do balanço oxidativo/nitrosativo celular.
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    Acesso aberto (Open Access)
    Estudo das alterações de proteoglicanos e glicosaminoglicanos em linhagens celulares de câncer colorretal humano
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2009-03-25) Ricci, Ritchelli [UNIFESP]; Toma, Leny [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Proteoglycans (PG) are complex macromolecules composed of linear polysaccharide chains, the glycosaminoglycans (GAGs), covalently attached to a core protein. These GAG chains contain sulphate groups at various positions, giving rise to specific domains, which allows them to interact with extracellular matrix molecules, including various growth factors. In this study, we have used a transwell coculture system to analyse the interaction between human fibroblasts stromal cells and human colonic carcinoma cell line (Caco-2) and investigate the effects of this interaction on cell proliferation and glycosaminoglycans synthesis. Soluble components exchanged between the cell lines in Transwell system caused a marked increase of Caco-2 cell proliferation, not observed on fibroblasts. An increase of GAGs biosynthesis was observed in both cell lines, whereas a prominent increase of CS was observed mainly in stromal cells, as determined by incorporation of 35SNa2SO4. Confocal microscopy showed significant increase of versican production by fibroblasts cells. TGF-â was also tested exhibiting a significant increase on GAG synthesis mainly in fibroblasts cells, producing a strong CS-stimulating response. These results suggest that this growth factor may be responsible for the CS increase observed in stromal cells. Caco-2 cells previously analyzed in this work were used to compare with a cell line with increased metastatic potential, HCT116. A normal rat intestinal epithelium cell line, IEC-6 was used as control. Labeling of cells with 35S-Na2SO4 and investigation of GAGs with specific enzymes showed an increased 6-O-sulfation of HS and CS. GAGs structural data were confirmed by Real Time PCR with elevation of specific heparan-6-O-sulfotransferase mRNA expression on Caco-2 and HCT116 cells, compared to IEC-6. The most extensively studied aspect of relationship between HS fine structure and growth factor signaling to date is the possible involvement of 6-Osulfation in the activation of FGF signaling. High levels of chondroitin-4,6-O-sulfotransferase expression was found only in HCT116 cells, whose CS structure contained GalNAc,4,6-sulfate, present on tetrasaccharides and disulfated disaccharides. The participation of the oversulfated structure on CS has been shown to promote tumoral cell motility. Whether these structural data obtained in this work correlate to the mentioned biological functions, remains to be elucidated.
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    Estudo dos pequenos proteoglicanos ricos em leucina em glândulas harderianas de camundongos fêmeas com hiperprolactinemia induzida pela metoclopramida
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2020-12-10) Araujo, Ariadne Stavare Leal [UNIFESP]; Simoes, Manuel De Jesus [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo
    Introdution: The small proteoglycans rich in leucine are bioactive components of the extracellular matrix associated with collagen fibrillogenesis, cell growth, apoptosis, tissue remodeling, and are involved in inflammatory processes. Your study can provide information about changes in the functioning of the harderian glands. Objective: To evaluate the gene and protein expression of small proteoglycans rich in leucine. Material and Methods: the 40 female mice were divided into 20 / group: control group: received 0.2 mL of saline solution (vehicle) and the experimental group: received 200 µg / day of metoclopramide dissolved in the vehicle. After 50 consecutive days of treatment, 10 females (control group) and 10 females (experimental group) were euthanized (in the proestrus phase), the rest were placed for mating and continued receiving the treatments corresponding to each group until the 5th - 6th day post-coitus when they were euthanized. At the end of the experiments, 4 groups were formed: not pregnant (control and experiment) and pregnant (control and experiment). The harderian glands were removed and processed for immunohistochemistry and gene expression using the RT-qPCR technique. The results were submitted to the statistical t Student test. Results: The immunohistochemistry data: there was a significant decrease in decorum, lumicam and fibromodulin in the non-pregnant and experimental pregnant group compared to the control group. The gene expression data: 1) there was a significant increase in decorin and lumican and a significant decrease in biglycan and fibromodulin in the non-pregnant group compared to the control group, and 2) there was a significant increase in decorin and biglicam and a significant decrease in fibromodulin in the experimental pregnant group compared to the control group. Conclusion: The data revealed that the state of hyperprolactinemia alters the gene and protein expression of small proteoglycans rich in leucine.
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    Acesso aberto (Open Access)
    Expressão da proteína Ras em células endoteliais é dependente de S indecam-4.
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2009-07-29) Cavalheiro, Renan Pelluzzi [UNIFESP]; Nader, Helena Bonciani [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Heparan sulfate (HS) plays an important role in cell behavior due to its ability to interact with a variety of molecules modulating growth factors and enzymes. HS participates in cellular signaling, and the activation of downstream pathways is related to the phosphorylation of cytosolic proteins leading to gene regulation. Previous studies show that syndecan-4 (Syn4), a heparan sulfate proteoglycan, modulates cell adhesion and is involved in the regulation of cell cycle. Thus the aim of the present work was to promote Syn4 knock down on endothelial cells using small hairpin RNA (shRNA) in order to gather information on its effect on cell behavior. For comparison, shRNA-Syn4-EC cells were simultaneously investigated with wild type endothelial cells (EC), as well as endothelial cells that overexpress ras oncogene (EJ-ras-EC) and a control that was transfected with the empty plasmideo (mock EC). The different cells were evaluated regarding the expression of Ras protein (Ras), b1-integrin (b1), fibronectin (FN), biglycan (Big), vascular endothelial growth factor (VEGF), von Willebrand factor (vWF), besides the core protein for syndecan-4 (Syn4) by flow cytometry and confocal microscopy. Clones were selected through sqPCR for Syn4 and [35S]-sulfate incorporation into heparan sulfate (HS) and chondroitin sulfate (CS) chains. Regardless of the transfection, the expression of vWF, an endothelial cell marker, was maintained in all cells, confirming their endothelial origin. The expression of syndecan-4 and incorporation of [35S]- sulfate varied among the different clones of shRNA-Syn4-EC up to 80%. The knockdown of Syn4 lead to significant reduction in the expression of Ras, b-1 integrin and FN, when compared to wild type cells as well as EJ-ras-EC. The overexpression of Ras leads to an overexpression of Syn4 and a decrease in VEGF expression and cellular localization of b-1 integrin. Furthermore, shRNASyn4- EC shows weak adhesion to the substrate, indicating that the lack of Syn4 altered cell-cell and cell-matrix interactions. The combined results clearly show that Syn4 plays an important role in cellular biology.
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    Expressão de epimerase de dermatam sulfato em linhagens de câncer de mama
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2019-05-30) Xavier, Everton Galvao [UNIFESP]; Toma, Leny [UNIFESP]; Pinhal, Maria Aparecida Silva; http://lattes.cnpq.br/7511274763693292; http://lattes.cnpq.br/3669434753963813; http://lattes.cnpq.br/9368844129427591; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Breast cancer is one of the most incident cancers in the world population, especially in the female population. Estimates show that more than 1.7 million new cases are registered each year and 522,000 are killed. By the year 2050, more than 3.2 million new cases of this pathology are expected to be registered. Proteoglycans are macromolecules that contain a protein core, to which glycosaminoglycan chains (GAGs) are attached covalently. Dermatan sulfate (DS) is a GAG produced by the epimerization of glucuronic acid from chondroitin sulfate to iduronic acid (IduA) by the enzyme epimerase (epiDS). Several studies have shown that proteoglycans containing DS play an important role in tumorigenic processes. This is mainly due to the flexibility that the presence of IduA confers to the polysaccharide chain, allowing specific interactions with proteins, such as growth factors, among other molecule. Studies also show that EpiDS-1 is highly expressed in many tumors, especially esophageal squamous cell carcinoma. The aim of this study was to analyze the expression of epiDS in cell lines that characterize different types of breast cancer MCF-7 (Luminal A), MDA-MB-231 (Triple Negative) and SKBR-3 (HER2). The gene expression of the enzyme was performed by qPCR and the protein content was analyzed by flow cytometry and immunofluorescence. Cell viability was investigated by MTT assay and GAG profile analyzed by radioactive sulfate labeling and electrophoresis. Our results showed that the SKBR-3 cell line presented a pattern of increased cell viability compared to MCF-7 and MDA-MB231cells. Furthermore, SKBR-3 cells presented higher gene expression of the epiDS enzyme and higher 35S-DS content. Curiously, Immunofluorescence assays with specific epimerase (epiDS) antibodies demonstrated greater labeling in the MCF-7 cell line compared to the other cells. We observed that SKBR-3 cells presented epiDS preferably in the form of vesicles and in the perinuclear compartment, suggesting a location in the Golgi Complex, contrasting with the cytoplasm localization in MCF-7 and MDA-MB231 cells. In these cells, the cytoplasm location of the EpiDS enzyme probably compromised the formation of DS chains, but the core protein was able to be detected by the decorin antibody. Golgispecific labeling confirmed the localization of EpiDS in SKBR-3 cells at the Golgi Complex, evidencing that the location was determinant for the synthesis of dermatan sulfate in this lineage, and possibly the dermatan sulfate plays a decisive role in the cellular viability observed.
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    Acesso aberto (Open Access)
    Farmacocinética da associação de glucosamina e sulfato de condroitina em humanos sadios do sexo masculino
    (Sociedade Brasileira de Ortopedia e Traumatologia, 2005-01-01) Toffoletto, Odaly; Tavares, Agostinho [UNIFESP]; Casarini, Dulce Elena [UNIFESP]; Redublo, Beata Marie [UNIFESP]; Ribeiro, Artur Beltrame [UNIFESP]; Fundação Oswaldo Ramos Hospital do Rim e Hipertensão; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Osteoarthrosis is a chronic joint disease that, once patent, leads to a progressive functional disability. As proteochondroitin sulfates are the major contents of the cartilage, it is expected that the ingestion of glucosamine and chondroitin might improve the biological status of that tissue. As we could not find any studies on the pharmacokinetic profile of this association by oral administration route in human beings, the objective of this study was to evaluate it by using the association of glucosamine sulfate (GS) and chondroitin sulfate (CS) given to two groups of twelve healthy male volunteers (group I: one capsule containing 500 mg of GS and 400 mg of CS; group II: four capsules with the same content). Blood samples were collected at pre-determined time intervals up to 48 hours post-dosing. GS and CS were measured in plasma by the DMMB (1,9,dimethyl-dimethilene blue) method. Maximum concentration was achieved within 2 hours (average ± SE; 0.893±0.093 µg/ml, group I; and 2.222±0.313 µg/ml, group II). Areas under curve up to 48 hours were 10.803±0.965 µg-hr/ml and 38.776±2.981 µg-hr/ml for groups I and II, respectively. Both groups showed a second peak after 18 hours, indicating an enterohepatic flow. Our results indicate that this association is absorbed through the oral route by a saturable mechanism, which can enable its use in clinical treatments.
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    Influência dos glicosaminoglicanos na citotoxidade de peptídeos catiônicos da família dos mastoparanos
    (Universidade Federal de São Paulo, 2021-08-30) Muniz Seif, Elias Jorge [UNIFESP]; Arcísio Miranda, Manoel; http://lattes.cnpq.br/2680038286691388; http://lattes.cnpq.br/8706280549429736; Universidade Federal de São Paulo - UNIFESP
    OBJETIVO: Mensurar a influência dos glicosaminoglicanos no potencial citotóxico dos peptídeos MPX, HR1 e MP1. METODOLOGIA: As células de CHO-K1 (ATCC CCL-61TM), tipo selvagem, e CHO-745 (ATCC CRL-2242TM) com produção reduzida de glicosaminoglicano foram cultivadas em meio F12 suplementado com 5% de soro fetal bovino e 1% de antibióticos (penicilina e estreptomicina).O brometo de 3-(4,5-dimetil-2- tiazolil)-2, 5-difenil-2H-tetrazólio (MTT) foi utilizado para determinar as concentrações de citotoxicidade média de cada peptídeo para o tratamento durante 24 horas. Na sequência, foi realizada citometria de fluxo para determinação da via de morte celular. A interação dos peptídeos com a membrana plasmática foi monitorada através sonda FPE (N-(Fluorescein-5-Thiocarbamoyl)-1,2-Dihexadecanoyl-sn-Glycero-3-Phosphoethanol-amine, riethyl-ammonium Salt). RESULTADO: Os experimentos de MTT e citometria de fluxo mostraram que os peptídeos foram potencialmente citotóxicos para as duas linhagens estudadas, sendo mais eficaz contra as células de linhagem CHO-K1. Para o experimento de MTT observou-se diferença de 13,77%, 24,73% e 11,79% para a viabilidade celular após tratamento com MPX, HR1 e MP1, respectivamente. Já a citometria de fluxo mostrou diferença de viabilidade celular de 28,52%, 20,34% e 18,40% após o tratamento com MPX, HR1 e MP1, respectivamente. Além disso, a necrose foi observada como a principal via de morte celular para todos os peptídeos nas duas linhagens celulares utilizadas nesse estudo. Os peptídeos foram capazes de se ligar na membrana de ambas as linhagens. Todavia, essa ligação foi maior na linhagem CHO-K1, sendo 58%, 48% e 11% maior para MPX, HR1 e MP1, respetivamente. CONCLUSÃO: Os peptídeos mastoparanos são potencialmente mais citotóxicos à linhagem CHO-K1 quando comparados a linhagem CHO-745, resultando em uma maior ligação de peptídeos em sua membrana. Essa pesquisa sugere que a ausência de glicosaminoglicanos é um fator protetivo contra atividade membranolítica desses peptídeos.
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    Interação entre cininogênios humano e proteoglicanos na superfície celular: efeito nos processos de sinalização e migração
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2017-02-22) Goncalves, Simone Pereira [UNIFESP]; Motta, Guacyara Da [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Objective: The General Objective Of The Present Study Is To Study The Relationship Between The Plasma Kallikrein-Kinin System And Tumor Progression, Associating The Presence Of Proteoglycans To The Process. Methods: To Identify The Enzymatic Activity Of Cho-745 Cells On Extracellular Hka (On The Surface Of Cultured Cells By Polyacrylamide Gel Electrophoresis In The Presence Of Sodium Dodecyl Sulfate And Immunodetection, To Study The Process Of Cell Death, Apoptosis And Necrosis Caused By H-Cinnogen And Hka On Cho-745 Cells In Culture By Assays Using Trypan Blue Dye And Annexin V Reagents, 7aad Respectively; (Wild-Type, Pgs) And Cho-745 (Mutant For Pg Production) In The Treatment With H-Kininogen, Hka And In The Presence Of The Peptides Hkh20 And Bk In The Absence Or Presence Of Kinase Inhibitors Captopril And Thiorphan; Characterize The Possible Signaling Pathways Involved In The Interaction Of H-Cininogen And Hka In Both Lineages Through The Flow Cytometry Technique. Results: The Hydrolysis Of Hka Was Studie
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    Acesso aberto (Open Access)
    Investigação da influência do zinco na participação do cininogênio humano de alta massa molecular em eventos celulares
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2015-10-28) Souza, Daianne Santos Paranhos de [UNIFESP]; Motta, Guacyara da [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/0050968690289066; http://lattes.cnpq.br/7070141646142377; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Objetivo: o objetivo geral do presente trabalho é estudar a influência do íon zinco na interação celular, mediada por proteoglicanos, do cininogênio de alta massa molecular íntegro (HK) ou livre de bradicinina (HKa). Métodos: identificar a atividade enzimática de células de diferentes linhagens epiteliais de tumor de ovário de hamster chinês sobre o cininogênio de alto peso molecular, de forma intracelular (através do lisado) ou extracelular (na superfície de células em cultura) através de eletroforese em gel de poliacrilamida na presença de dodecil sulfato de sódio e imunodetecção; estudar a influência do íon zinco na endocitose de cininogênio de alto peso molecular (através de microscopia confocal) e os efeitos do íon em eventos celulares como morte celular, apoptose e viabilidade em células em cultura, através de ensaios utilizando o corante Trypan Blue, anexina V e o reagente MTT, respectivamente. Resultados: ambas as linhagens liberam bradicinina a partir do cininogênio de alto peso molecular na superfície celular pela ação de serino- e cisteinoproteases. O cininogênio de alto peso molecular íntegro e cininogênio de alto peso molecular livre de cinina são internalizados pelas células epiteliais de tumor de ovário de hamster chinês selvagens, localizando-se em vesículas endocíticas ácidas, indicando a importância do proteoglicano de heparam sulfato como mediador. A hidrólise do cininogênio de alto peso molecular íntegro foi estudada através de frações de membrana e lisados, preparados a partir dessas linhagens celulares, onde observamos que: (1) enzimas de membrana e de lisado das duas linhagens hidrolisam o HK em locais diferentes; (2) a atividade cininogenásica é influenciada pelo pH na fração de lisado de ambas as linhagens; (3) atividade cininogenásica difere entre estas duas linhagens celulares sugerindo a influência de glicosaminoglicanos no processamento do cininogênio de alto peso molecular; (4) tanto a molécula de cininogênio de alto peso molecular quanto o íon zinco influenciam eventos fisiológicos como morte e viabilidade celular. Conclusão: nossos resultados mostram que o íon zinco na presença de PGs (CHO-K1) promove a endocitose do HK na sua forma íntegra com fraca hidrólise e este HK endocitado reduz a viabilidade celular provocando necrose, sendo que o zinco pode amenizar esse efeito.
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    Acesso aberto (Open Access)
    Investigação do processamento das proteínas do sistema calicreína-cinina plasmático na interação com células endoteliais
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2019-02-28) Assis, Mirian Coelho de [UNIFESP]; Motta, Guacyara da [UNIFESP]; Oliveira, Cleide de [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/4060773569354807; http://lattes.cnpq.br/0050968690289066; http://lattes.cnpq.br/7024315470446395; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Endothelial cells (ECs) correspond to the coating of both vessels the lymphatic vessels and constitute the inner layer of these glasses These cells are flattened epithelial and distributed in monolayer presenting great heterogeneity, since they differ in size, length and height, shape and number of stored vesicles, and this is related to the caliber of the blood vessel or a tissue (Aird, 2007; Dela-Paz et al., 2009). The endothelium is considered an endocrine organ capable of producing and secreting a variety of chemicals that control clotting, tonus and plasma levels of endogenous mediators and lipoproteins (Carvalho et al., 2005). However, it is also involved in a number of pathological conditions, such as atherosclerosis and cancer (Dela-Paz et al., 2009), and in diffuse intravascular coagulation the endothelium is the interface between inflammation and inappropriate activation of the coagulation system (Kato, 2014). The endothelium exerts several functions as regulation of the inflammatory response and inhibition of cell proliferation and migration. The release of substances such as vasodilators and vasoconstrictors conserve laminar blood flow, preserving the fluidity of the plasma membrane, creating mechanisms anticoagulants. Vasodilators such as nitric oxide, bradykinin and adenosine, in channels of K + dependent on ATP, its activation by vasodilators, associated with hyperpolarization of the membrane, the closure of the K + , act on the cells of the smooth muscle cells present in the tunica media of arterioles resulting in reduced blood flow resistance and decreased blood pressure. On the other hand vasoconstrictors include endothelin and angiotensin II which promote smooth muscle contraction and increase the (Baxter et al., 2006), and the effect of the antihypertensive effect on the blood pressure (Baxter et al. The functions exerted by the endothelium regulate cell-cell interactions and cell-matrix, the expression and presence of membrane-bound receptors being associated with numerous molecules including proteins, carrier particles of lipids, metabolites and hormones, and glycosaminoglycan sugars (Rajendran et al., 2013, Muller, 2013).
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    Acesso aberto (Open Access)
    Modo de ação de uma ramnana sulfatada em células endoteliais e musculares lisas: potencial uso na prevenção da disfunção endotelial
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2015-07-31) Nobre, Leonardo Thiago Duarte Barreto [UNIFESP]; Nader, Helena Bonciani [UNIFESP]; Lima, Marcelo Andrade de [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/2373620610058306; http://lattes.cnpq.br/7175631659428994; http://lattes.cnpq.br/2904787727374331; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    A disfunção endotelial pode causar aterosclerose, uma doença caracterizada pelo acúmulo de placas contendo lipídeos na camada subendotelial de vasos sanguíneos. O glicocálice endotelial mantém a homeostasia entre o sangue e as células endoteliais e alterações em sua estrutura podem causar doenças. Algas marinhas são fontes de polissacarídeos sulfatados que apresentam diversas propriedades farmacológicas, entre as quais se destacam atividades antioxidante, anti-inflamatória, anticoagulante e antitrombótica. O objetivo deste trabalho foi avaliar os efeitos de uma ramnana sulfatada (RS) obtida da alga Monostroma nitidum em células endoteliais e musculares lisas, bem como em anéis de aorta, assim como, descrever seu provável mecanismo de ação. Foi constatado que RS não afeta a viabilidade dessas células em 24 horas na concentração de até 100 ug/mL e é capaz de aumentar a marcação do glicocálice pela lectina WGA, observada em microscopia confocal, em ambas as linhagens celulares e também no anel de aorta de ratos. Há um aumento na síntese de ácido hialurônico por essas células tratadas com RS e esse ácido hialurônico apresenta alto peso molecular. Através da marcação metabólica com sulfato radioativo foi constatado que células tratadas com RS aumentaram a síntese de glicosaminoglicanos sulfatados com destaque para o heparam sulfato. Esse heparam sulfato teve sua estrutura analisada e foi observado que há um aumento na proporção de dissacarídeo trissulfatado, típico da estrutura de heparinas. Foi observado aumento na expressão das enzimas responsáveis pela síntese e modificação desses glicosaminoglicanos. Utilizando microscopia confocal e ensaio de FRET foi comprovado que RS se liga à fibronectina na matriz extracelular. RS ativa a sinalização celular através da via de FAK-Src-ERK, aumenta os níveis de cálcio intracelular e a produção de óxido nítrico. Por fim foi observado que RS também é capaz de inibir a angiogênese em ensaio de formação de estruturas capilares em matrigel e também no ensaio tridimensional de angiogênese em anel de aorta. Os resultados indicam que RS por aumentar e modificar estruturalmente o glicocálice nas células derivadas de aorta, estimular a síntese do heparam sulfato rico em dissacarídeo trisssulfatado (típico da estrutura de heparinas e com potente efeito antitrombótico), bem como de ácido hialurônico de alto peso molecular (com ação anti-aterogênica e antiangiogênica), aumentar a síntese de óxido nítrico e por si só inibir a angiogênese apresenta-se como um possível agente terapêutico para prevenir o desenvolvimento da aterosclerose e formação de trombos em função dos diversos efeitos benéficos nas células que podem impedir diferentes etapas desses processos patológicos.
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    Acesso aberto (Open Access)
    Proteoglicanos de heparan sulfato no cerebelo em desenvolvimento: expressão gênica, estrutura e funções
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2008-03-26) Araujo, Ana Paula Bérgamo [UNIFESP]; Porcionatto, Marimélia Aparecida [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Na ginástica rítmica preconiza-se que ginastas sejam mais leves e mais magras do que outras meninas da mesma idade, sendo que esta busca pelo perfil atlético adequado pode resultar em danos sérios para a saúde. A estreita relação entre imagem corporal e desempenho físico faz com que essas adolescentes sejam um grupo particularmente vulnerável a instalação de desordens alimentares, tendo em vista a ênfase dada ao controle de peso. Objetivo: Analisar a satisfação com o peso corporal em atletas da ginástica rítmica e a real necessidade dessa preocupação. Metodologia: Foram avaliadas 12 atletas de elite e 12 escolares com idade entre 13 e 15 ano s, todas com menarca. Foram realizadas medidas antropométricas (massa corporal, estatura e índice de massa corporal) e do consumo energético através do recordatório alimentar de 3 dias. Adicionalmente foi aplicado um questionário fechado sobre a satisfação com o peso atual. Resultados: Mostraram valores de massa corporal, bem como o IMC das ginastas abaixo dos referidos na literatura, a ingestão calórica valores abaixo dos preconizados pela RDA e o nível de satisfação corporal de 41,6%. Conclusão: Foram apresentados valores reduzidos, abaixo dos recomendados e a busca para a redução de peso alertaram que a problemática com relação à imagem corporal e seus possíveis distúrbios poderiam ser evitados, através de uma boa orientação profissional, prevenindo patologias, seqüelas emocionais e até mesmo um baixo rendimento esportivo.