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    Análise do valor nutricional, do teor de proteínas e composição de aminoácidos da dieta de gestantes vegetarianas
    (Universidade Federal de São Paulo, 2023-01-17) Souza, Pietra Oliveira Gualberto de [UNIFESP]; Martins, Paula Andrea [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/1364300323959453; http://lattes.cnpq.br/6998119144265775; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Introdução: A posição da American Dietetic Association (ADA) em relação a dietas vegetarianas é que, se adequadamente planejadas, são apropriadas para todos os indivíduos em todas as fases do ciclo da vida, incluindo gravidez e lactação. Dietas vegetarianas possuem proteínas e aminoácidos adequados se alimentos ricos nestes nutrientes estiverem incluídos na alimentação, como as leguminosas, por exemplo. Objetivo: Tendo em vista a falta de estudos que analisam a ingestão e qualidade proteica em dietas de gestantes vegetarianas estritas e ovolactovegetarianas, o presente estudo visa avaliar a quantidade de energia, classificação proteica e o perfil de aminoácidos consumido deste grupo específico, a partir de inquérito alimentar. Métodos: O recrutamento de voluntárias foi realizado através de redes sociais e a coleta de dados foi feita de maneira virtual, através de registros alimentares, os quais foram avaliados observando a quantidade de energia, proteína e o perfil de aminoácidos. Resultados: As gestantes vegetarianas estritas avaliadas tiveram resultados de ingestão proteica e calórica com menor variabilidade e com distribuição de valores maiores do que as ovolactovegetarianas. O perfil de aminoácido também foi melhor quando comparado ao outro grupo. A lisina foi o aminoácido limitante nos dois grupos, ficando abaixo de 100% no grupo ovolactovegetariano, assim como a metionina e cisteína. Conclusão: No padrão alimentar vegetariano é essencial uma alimentação variada, com quantidades ajustadas e com os grupos de fonte proteica vegetal para atingir as recomendações de proteínas e aminoácidos, tendo atenção principalmente à lisina. São necessários mais estudos sobre a composição e digestibilidade de aminoácidos.
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    Acesso aberto (Open Access)
    Analysis of proteins from membrane and soluble fractions of Giardia duodenalis trophozoites of two Brazilian axenic strains
    (Instituto de Medicina Tropical, 2002-10-01) Guimarães, Semíramis; Sogayar, Maria Inês T. Leme; Franco, Marcello Fabiano de [UNIFESP]; Universidade Estadual Paulista (UNESP); Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    In the present study, we have analyzed by sodium docecyl sulphate - polyacrilamide gel electrophoresis (SDS-PAGE), immunoblotting and Concanavalin A blotting (Con A blotting) proteins of membrane fractions and soluble fractions obtained from Giardia duodenalis trophozoites of two axenic strains isolated in Brazil from a symptomatic (BTU-11) and an asymptomatic patient (BTU-10), as compared to the reference strain Portland 1. Both Brazilian strains showed a complex and homogeneous electrophoretic pattern of proteins, but some differences could be observed. Several glycoproteins were detected, particularly the proteins of 81, 72, 59 kDa and the protein of 62 kDa in the membrane proteins and cytosol, respectively. Many antigenic components were revealed by anti-Giardia rabbit IgG antibodies in the immunoblotting analysis. Among these components, the membrane protein of 32 kDa and the cytosol protein of 30 kDa could be related to giardin, as previously demonstrated.
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    Apoptosis- and cell cycle-related genes methylation profile in myeloproliferative neoplasms
    (Taylor & francis ltd, 2016) Tognon, Raquel; Nunes, Natalia S.; Ambrosio, Luciana; Souto, Elizabeth Xisto; Perobelli, Leila; Simoes, Belinda Pinto; Lima Souza, Mariana Cristina [UNIFESP]; Chauffaille, Maria de Lourdes [UNIFESP]; de Castro, Fabiola Attie
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    Acesso aberto (Open Access)
    Avaliação do estado metabólico e nutricional de indivíduos vegetarianos e onívoros
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2010-03-31) Slywitch, Eric [UNIFESP]; Nóbrega, Fernando José de [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Objetivo: avaliar, comparativamente, o estado nutricional de indivíduos vegetarianos e onívoros, com relação ao estado nutricional de proteínas, vitamina B12, ácido fólico, homocisteína e metabólico pela avaliação da glicemia, insulinemia, perfil inflamatório e de lípides séricos. Métodos: estudo prospectivo, transversal com 59 indivíduos do sexo feminino fora de período de gestação ou amamentação, eutróficas, entre 20 e 50 anos de idade, com tempo de dieta superior a um ano, sem uso de suplementos nem consumo de cigarro ou bebidas alcoólicas e com prática equivalente de atividade física e função tireoideana e hepática normais. Os indivíduos foram divididos conforme o consumo de carne ou não, sendo o grupo vegetariano chamado de grupo “sem carne” (SC) e o onívoro de grupo “com carne” (CC). Foram avaliadas as medidas corporais pelo IMC e bioimpedância. Os seguintes parâmetros laboratoriais foram avaliados: hemograma, ferritina, transferrina, PCR-US, vitamina B12, ácido fólico, homocisteína, glicemia, insulinemia, perfil lipídico, uréia e creatinina, proteína total e frações. Resultados: Foram avaliadas 25 mulheres do grupo CC e 34 SC. O grupo foi homogêneo com relação à idade (p=0,731), IMC (p=0,80) e valor percentual de massa gorda e magra (p=0,693 e p= 0,83; respectivamente). O grupo SC apresentou menores níveis de HOMA-IR (p=0,0048) e HOMA-Beta (p=0,040), além de redução no nível de colesterol total de cerca de 10,4% (p=0,039), mas sem diferenças nos índices de Castelli 1 e 2 (p = 0,619 e p = 0,587; respectivamente). Não houve diferenças nos níveis de hemoglobina (p= 0,13), creatinina (p = 0,113), PCR-US (p =0,754), triglicérides (p = 0,592), ferritina (p=0,221), transferrina (p=0,342), albumina (p=0,137), linfócitos totais (p=0,127), vitamina B12 (p=0,971), ácido fólico (p=1) e homocisteína (p=0,062). Os níveis de uréia dosados foram normais, porém mais elevados no grupo CC (p=0,002). Ambos os grupos apresentaram, sem diferenças estatísticas, valores normal baixo de VCM, HCM, CHCH e ferritina, com RDW normal alto. Conclusões: indivíduos que não utilizam carne têm maior sensibilidade à insulina, níveis mais baixos de colesterol e não têm maior risco de deficiência protéica do que o grupo que a utiliza. Os níveis de uréia mais elevados demonstram maior ingestão protéica do grupo CC, mas sem repercussões clínicas aparentes. Não houve diferença na prevalência de deficiência de ferro, vitamina B12 e ácido fólico, mas os dados sugerem que ambos os grupos têm níveis de ferro e vitamina B12 em limites mínimos da normalidade, sendo indicada a correção medicamentosa.
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    Avaliação do papel do nível plasmático de citocinas e de alguns polimorfismos dos genes de citocinas no risco de tromboembolismo venoso
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2009-11-25) Matos, Marinez Farana [UNIFESP]; Morelli, Vania Maris [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    thromboembolism (VTE). However, clinical studies are few and show controversial results regarding the role of cytokines, acute-phase proteins and polymorphisms of cytokine genes on the risk of VTE. Objectives: the aims of this case-control study were to (1) investigate the association between the risk of VTE and plasma levels of IL-1beta, IL-6, IL-8, MCP-1 and acute-phase proteins; (2) evaluate the effect of some demographic and clinical variables as well as polymorphisms on the risk of VTE and whether these variables could influence cytokines levels; (3) investigate a possible correlation between levels of cytokines, acute-phase proteins and markers of blood coagulation and fibrinolysis in patients with VTE. Patients and methods: 122 patients (96 women, 79%) with a first objectively confirmed episode of VTE and a median age of 39.5 years were included. Exclusion criteria were malignancy, autoimmune diseases, antiphospholipid syndrome, chronic renal or liver disease and arterial thrombosis. Patients were seen at least 1 month after the discontinuation of the anticoagulant treatment and > 7 months after the event of VTE. Control group was comprised of 131 healthy subjects (105 women, 80%), with median age of 38 years. The following polymorphism were investigated: IL-1 beta -511CT, IL-1 beta -31TC, IL-6 -174GC, IL-8 -251 AT and MCP-1 -2518AG Results: gender, age and body mass index (BMI) were significantly associated with cytokine and acute-phase proteins levels. Elevated levels (> 90th percentile of controls) of IL-6 [Odds ratio (OR) = 3.64; 95% confidence interval (CI) 1.82 – 7.30] and IL-8 (OR = 2.42; 95%CI 1.15 – 5. 08) had a significant impact on the risk of VTE that remained after adjustment for sex, age, BMI and C-reactive protein. No correlation was found between the time since the event of VTE and levels of IL-6 (r = 0.064; P = 0.485) and IL-8 (r = 0.070; P = 0.442). There was a positive correlation between IL-8 and prothrombin fragment 1 + 2 levels (r = 0.203; P = 0.025). Median levels of d-dimer were significantly higher among patients with detectable levels of IL-1 beta (P < 0.0001). Except for the polymorphism IL-1 beta -31TC in controls, none of the polymorphisms were able to influence cytokine levels. Furthermore no polymorphism influenced thrombosis risk. Conclusion: elevated levels of IL-6 and IL-8 had a significant impact on the risk of VTE in a relatively young population of patients. No association was found between the time since the event and the level of these cytokines, which could suggest that inflammation is not only a consequence of the thrombosis. The relationship between IL-8 and IL-1 beta with markers of blood coagulation and fibrinolysis might indicate a possible procoagulant role of these cytokine in patients with VTE.
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    Acesso aberto (Open Access)
    Can breast tumors affect the oxidative status of the surrounding environment? A comparative analysis among cancerous breast, mammary adjacent tissue, and plasma
    (Hindawi ltd, 2016) Panis, C.; Victorino, V. J.; Herrera, A. C. S. A.; Cecchini, A. L.; Simao, A. N. C.; Tomita, L. Y. [UNIFESP]; Cecchini, R.
    In this paper, we investigated the oxidative profile of breast tumors in comparison with their normal adjacent breast tissue. Our study indicates that breast tumors present enhanced oxidative/nitrosative stress, with concomitant augmented antioxidant capacity when compared to the adjacent normal breast. These data indicate that breast cancers may be responsible for the induction of a prooxidant environment in the mammary gland, in association with enhanced TNF-alpha and nitric oxide.
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    Acesso aberto (Open Access)
    Caracterização bioquímica das vesículas extracelulares isoladas das cepas Y e Yuyu do Trypanosoma Cruzi
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2017-03-09) Ribeiro, Kleber Silva [UNIFESP]; Torrecilhas, Ana Claudia Trocoli [UNIFESP]; Iwai, Leo Kei [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/9890151030133485; Lattes http://lattes.cnpq.br/7344293560367809; http://lattes.cnpq.br/5448560665978232; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Abstract The Trypanosoma cruzi, the etiologic agent of Chagas disease, releases EVs containing a wide range of surface glycoconjugates of the parasite. Extracellular vesicles (EVs) are particles released by different cell types and pathogens, under physiological and pathological conditions, containing proteins, lipids and nucleic acids. In the present work, we purified, isolated and compared EVs from Y strain (DTU Tc II) and YuYu strain (DTU Tc I) of T.cruzi, that belonging to different discrete typing units (DTU) and having a different degree of virulence. Initially, scanning electron microscopy (SEM) was performed to visualize the trypomastigote form of T.cruzi releasing the EVs from the plasma membrane and visually the trypomastigotes of the YuYu strain released more particles. The characterization of EVs about size and concentration was done using the nanoparticle tracking analysis (NTA) technology. Don't had significant difference when compared the mean size (150nm) of the EVs, but the concentration of particles in the YuYu strain sample was higher than in the Y strain sample, confirming the SEM analysis. Qualitative analysis by immunoblotting showed that EVs from both strains express transialidase (TS) and cruzipain, but the expression is higher in EVs from YuYu strain. By LC-MS/MS, the major glycoconjugates belonging to T. cruzi multigenic families, such as TS, Mucins, mucin-associated surface proteins (MASP), GP63 surface proteins, among others, were detected in EVs of both strains, but it was possible to identify more different proteins in EVs from YuYu strain than in EVs from Y strain. Phospholipid (PL) analysis by Thin Layer Chromatography (TLC), GC-MS and MALDI-TOF suggests the presence in EVs of PL such as phosphatidylcholine (PC), phosphatidylethanolamine (PE), phosphatidylinositol (PI) and phosphatidylserine (PS). The YuYu strain, which is more virulent, releases more EVs containing more proteins and expressing more of the glycoconjugates in common with EVs from Y strain. This difference may be important in parasite infectivity, since the EVs have a function of intercellular communication at distance and direct contact and may be involved in different mechanisms during parasite-host interaction such as cellular invasion, immunomodulation and evasion of the host immune system.
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    Acesso aberto (Open Access)
    Caracterização do fenótipo celular e proteico seminal de homens obesos
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2018-02-06) Carvalho, Renata Cristina De [UNIFESP]; Fraietta, Renato [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/1545035937368744; http://lattes.cnpq.br/2678949812673271; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Objetivo: Avaliar o fenótipo celular e proteico do sêmen de homens obesos. Os objetivos específicos foram: (i) comparar os níveis seminais de proteínas envolvidas em funções biológicas como inflamação, apoptose e resposta aos estresses térmico e oxidativo entre homens eutróficos e obesos, para verificar sua potencialidade como biomarcadoras de disfunções relacionadas ao potencial fértil de homens obesos, e (ii) avaliar e comparar as características seminais e funcionais espermáticas desses homens. Métodos: Este estudo observacional transversal realizou-se pela inclusão de 48 voluntários homens, com idade entre 20 e 50 anos, distribuídos em Eutróficos (n = 19) e Obesos (n = 29) por meio da avaliação de sua porcentagem de gordura corpórea (Bioimpedância) de acordo com os valores de corte para a idade. O Índice de Massa Corpórea (IMC) foi utilizado como comparativo entre as técnicas de diagnóstico da obesidade. Cada participante coletou uma amostra seminal por masturbação estando em um período de abstinência ejaculatória de 2 a 5 dias. Após a liquefação da amostra, a mesma foi dividida em três alíquotas: uma para realização de análise seminal convencional (OMS 2010), outra para avaliação funcional dos espermatozoides (atividade mitocondrial, integridade acrossomal e fragmentação do DNA espermático) e a terceira fração foi submetida à centrifugação objetivando a obtenção de plasma seminal livre de componentes celulares. Após aquisição do plasma seminal, o mesmo foi utilizado para quantificação do total de proteínas em cada amostra e assim, um volume correspondente a 50 μg de proteínas foi utilizado para verificar os níveis seminais das proteínas HSPB1, S100A9, APOA1, HSP90 e GPX3 pelo método de Western blotting. Resultados: Houve diferença estatística na comparação entre os métodos de diagnóstico da obesidade (Bioimpedância x IMC), onde 7 voluntários foram diferentemente classificados entre as técnicas. O grupo obesidade apresentou menor concentração e contagem total de espermatozoides quando comparado ao grupo eutrófico. Além disso, os obesos apresentaram menor porcentagem de espermatozoides com acrossoma íntegro e com mitocôndrias ativas, já os eutróficos apresentaram alta atividade mitocondrial em seus espermatozoides. A expressão das proteínas analisadas entre os grupos não apresentou diferença estatística, portanto as mesmas não foram validadas como biomarcadoras de disfunções relacionadas ao potencial fértil de homens obesos, contudo, foram encontradas importantes correlações entre a expressão proteica de cada grupo com as variáveis seminais e características físicas dos participantes. Conclusão: O excesso de tecido adiposo, ou seja, a obesidade, interfere negativamente na qualidade seminal e funcional dos espermatozoides. Por outro lado, a obesidade não altera os níveis seminais de proteínas envolvidas em funções biológicas observadas nesses homens, como inflamação, apoptose e resposta aos estresses térmico e oxidativo. Apesar disso, essas proteínas apresentam importantes correlações com as características seminais e com a função dos espermatozoides.
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    Acesso aberto (Open Access)
    Concentração de proteínas no humor aquoso de pacientes com glaucoma primário de ângulo aberto em tratamento clínico
    (Conselho Brasileiro de Oftalmologia, 2007-03-01) Prata, Tiago dos Santos [UNIFESP]; Navajas, Eduardo Vitor [UNIFESP]; Melo Junior, Luiz Alberto Soares [UNIFESP]; Martins, João Roberto Maciel [UNIFESP]; Nader, Helena Bonciani [UNIFESP]; Belfort, Rubens Junior [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    PURPOSE: To compare total protein concentration in the aqueous humor of primary open-angle glaucoma and non-glaucomatous patients. METHODS: Aqueous humor samples were obtained from 22 patients just before trabeculectomy for clinically uncontrolled primary open angle glaucoma (POAG group). Aqueous humor (0.1 mL) was aspirated by inserting a 26-gauge needle into the anterior chamber. The same procedure was performed in 22 non-glaucomatous patients just before cataract surgery (control group). Immediately after collection, the aqueous humor was stored at -20°C. Aqueous humor total protein concentration was determined using a colorimetric assay. RESULTS: The geometric mean of total protein concentration of the aqueous humor samples was 32 mg/dL (range: 8-137 mg/dL) in the primary open angle glaucoma group and 16 mg/dL (range: 2-85 mg/dL) in the control group. The ratio of the protein concentration between the two groups was 2.0 (95% confidence interval: 1.3 to 3.2; p=0.003). CONCLUSIONS: The total protein concentration in primary open-angle glaucoma aqueous humor was approximately two times higher than that in non-glaucomatous subjects.
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    Distribuição de componentes de Trypanosoma cruzi e de proteínas miofibrilares do músculo cardíaco em Calomys callosus cronicamente infectados e imunossuprimidos
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2003) Taniwaki, Noemi Nosomi [UNIFESP]; Mortara, Renato Arruda [UNIFESP]
    Um modelo experimental de reativação da doença de Chagas crônica com um agente imunossupressor foi desenvolvido a fim de se obter informações sobre do ciclo de vida intracelular do Trypanosoma cruzi e o arranjo das miofíbrilas cardíacas, com o propósito de entender melhor o processo de reativação que ocorre no homem. Calomys caffosus cronicamente infectados com as cepas Y e CL de T. cruzi sofreram reagudização quando tratados com ciclofosfamida, um agente imunossupressor. Cortes de 5 - 8 mm de parafina foram processados para microscopia confocal de imunofluorescência. Anticorpos monoclonais (AcM) produzidos contra as formas do T. cruzi foram usados com base em reatividades previamente descritas: AcM 2C2, reage com um epitopo carboidrato em Ssp-4, uma glicoproteína majoritária da superfície dos amastigotas, enquanto AcM 1 D9, 2137, 3139, 4139 identificam epitopos sobre Ssp-4 diferentes do AcM 2C2. Amostras foram coradas com DAPI para visualizar o cinetoplasto e o núcleo dos parasitas. AcM 2C2 apresentou um padrão de fluorescência homogeneamente distribuído sobre a superfície dos amastigotas; AcM 4139 e 3139 apresentaram a mesma distribuição observada em 2C2. Marcação muito fraca e negativa foi observada com AcM 1 D9 e 2137, respectivamente. AcM 3132, que reage com um epitopo nãocarboidrato de formas flageladas e AcM 4135 que também detecta um epitopo nãocarboidrato, revelou a bolsa flagelar em amastigotas alongados e a membrana plasmática dos parasitas que estavam sofrendo divisão. Para observação das proteínas miofibrilares, a técnica de recuperação antigênica foi utilizada nos cortes de parafina. Os cortes foram submetidos a tripla marcação; 1. AcM para visualizar as diferentes proteínas miofibrilares (miosina, actina, desmina, tropomiosina, troponina T, titina e a-actinina) do músculo cardíaco; 2. Soro chagásico humano para marcar a suprefície dos parasitas; 3. DAPI (para marcar DNA) que coram o núcleo das células e cinetoplasto e núcleo dos parasitas. Em paralelo, culturas primárias de cardiomiócitos de Calomys caflosus recémnascidos foram desenvolvidas para obtenção de informações adicionais sobre o arranjo ou desarranjo das miofibrilas durante a proliferação do T cruzi nestas células. Tanto amostras in vivo como in vitro apresentaram regiões com perda de estriação transversal, acúmulo de. marcação e desarranjo das miofibrilas. Ao E microscópio eletrônico de transmissão também foram observados desarranjos das ...(au).
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    Eluição passiva de proteínas de géis de poliacrilamida e caracterização por MALDI-ToF
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2007) Thomé, Carolina Hassibe [UNIFESP]; Greene, Lewis Joel [UNIFESP]
    O dogma central da biologia molecular preconizava que um gene codificava apenas uma proteina, mas agora compreendemos que modificacoes pos-transcripcionais e modificacoes pos-traducionais (MPTs) como splicing de RNA e de proteinas, proteolise limitada, ubiquitinacao, glicosilacao, entre outras, permitem que familias de proteinas similares mas nao identicas, sejam obtidas a partir de um unico gene. As modificacoes pos-traducionais sao processos que alteram as propriedades de uma proteina principalmente por adicao seletiva de grupos ou clivagem da cadeia polipeptidica, modulando a sua atividade e suas interacoes. A identificacao da proteina e caracterizacao da modificacao e o local na cadeia polipeptidica podem fornecer informacoes importantes para o entendimento da sua regulacao e funcao em um processo celular. Estudos em nosso laboratorio atraves da analise por peptide mass fingerprint (PMF) mostraram que 30 a 40 por cento das proteinas diferencialmente expressas por celulas dendriticas imaturas e maturas e por diferentes estagios de melanoma humano estao presentes em multiplas formas eletroforeticas com diferentes pontos isoeletricos (PI) e/ou massas moleculares, resultado de alteracoes quimicas ou enzimaticas nessas proteinas. Considerando as estrategias Top down e Botlon up decidimos por Top down. Nos estudamos um metodo de extracao de proteinas intactas de geis de poliacrilamida unidimensionais de 0,125 a 15 J.1g de proteinas e entre 13 ate 66 kDa. Demonstramos que eluicao passiva nao modifica a massa molecular da proteina. E esta metodologia sera utilizada em geis 2D para identificar e caracterizar as MPTs das proteinas relevantes nos processos celulares atraves da analise por espectrometria de massas MALDI-ToF
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    Acesso aberto (Open Access)
    Estudo das alterações moleculares no plasma seminal associadas ao tabagismo
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2018-12-11) Antoniassi, Mariana Pereira [UNIFESP]; Bertolla, Ricardo Pimenta [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/8479803539567479; http://lattes.cnpq.br/0783506316934214; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Objective: The composition of seminal plasma may reflect significant testicular changes caused by smoking. Thus, the analysis of the protein composition of the seminal plasma becomes a resource to evaluate these alterations. Therefore, the objetive of this study was to evaluate seminal plasma proteins in smokers related to inflammation, inflammasome complex and heatshock proteins. Methods: This study was divided into three studies. In study 1, seminal samples from 59 controls and 39 smokers were used. After semen collection and liquefaction, an aliquot was used for the seminal analysis and the remaining volume was centrifuged for seminal plasma separation. Seminal plasma was then used to evaluate the seminal levels of the proteins suggested, by Western blotting: S100A9 for the smoking group and SCGB2A1 for the control group. In study 2, seminal samples from 37 control patients and 41 smokers were used. After semen collection and liquefaction, an aliquot was used for the seminal analysis and the remaining volume was centrifuged for seminal plasma separation. Seminal plasma was then utilized to evaluate the seminal levels of the inflammasome complex proteins by Western blotting (ASC, NLRP3, Pannexin1, P2X7) and cytokines by ELISA (Caspase1, IL18 and IL1β). In study 3, seminal samples from 30 control patients and 31 smokers were used. After semen collection and liquefaction, an aliquot was used for the seminal analysis and the remaining volume was centrifuged for seminal plasma separation. Seminal plasma was then utilized to evaluate the expression of heat shock proteins (HSP) by the Multiplex assay. Results: In study 1, seminal levels of S100A9 and SCGB2A1 proteins was increased in the smoking group. In study 2, seminal levels of ASC protein and IL18 cytokine was increased in the smoking group. The NLRP3, Pannexin1, P2X7 proteins, as well as the Caspase1 and IL1β cytokines did not differ between the groups. In study 3, the smoking group showed a decrease in the seminal levels of HSP 90 alpha. Conclusion: The seminal plasma proteins of smokers reflect the inflammatory profile present in these patients.
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    Acesso aberto (Open Access)
    Estudo das vias proteômicas do plasma seminal e dos espermatozoides associadas à infertilidade masculina
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2018-05-08) Lopes, Paula Intasqui [UNIFESP]; Bertolla, Ricardo Pimenta [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/8479803539567479; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Objetivo: A composição proteica do plasma seminal e dos espermatozoides é essencial para a sua função correta e, consequentemente, para a fertilidade. Assim, estudos proteômicos vêm sendo realizados a fim de entender os mecanismos pós-genômicos subjacentes e de identificar as proteínas alteradas na infertilidade masculina. Portanto, o objetivo deste estudo foi avaliar proteínas de plasma seminal e de espermatozoides e sua associação com alterações funcionais dos espermatozoides e com a infertilidade masculina primária ou secundária. Métodos: Este trabalho foi subdividido em dois estudos. No estudo 1, amostras seminais de 197 homens normozoospérmicos foram utilizadas. Após a coleta e liquefação do sêmen, uma alíquota foi utilizada para a análise seminal, outra para a avaliação da integridade funcional dos espermatozoides e o volume remanescente foi centrifugado para a separação do plasma seminal. Este foi então utilizado para a avaliação dos níveis seminais dos biomarcadores sugeridos: (i) de alterações na atividade mitocondrial dos espermatozoides – GSTM3, (ii) de defeitos no acrossoma dos espermatozoides – PLTP e (iii) de integridade do DNA dos espermatozoides – CRISPLD1, CRISPLD2 e RARRES1. No estudo 2, sete homens com fertilidade comprovada (n=7), nove homens com infertilidade primária (n=9) e sete homens com infertilidade secundária (n=7) foram incluídos. Após a coleta e liquefação do sêmen, uma alíquota foi utilizada para a análise seminal e o volume remanescente foi congelado a –80 °C. No momento da análise proteômica, a amostra foi descongelada e centrifugada para separação dos espermatozoides. Após a extração das proteínas dos espermatozoides, essas foram utilizadas para a análise proteômica shotgun por 1D-LC-MS/MS. As proteínas diferencialmente expressas foram utilizadas para análise de redes de interação proteína-proteína. As proteínas centrais nessas redes, envolvidas com funções biológicas alteradas em ambos os grupos de homens inférteis (BAG6, HSPA2 e SPA17), assim como as proteínas específicas de testículos (HIST1H2BA e SPA17) foram validadas nas amostras de espermatozoides. Nos dois estudos, os biomarcadores foram avaliados por Western blotting. No estudo 2, as proteínas foram também analisadas por imunocitoquímica utilizando microscopia confocal. Resultados: No estudo 1, o nível seminal da proteína GSTM3 estava aumentado em amostras com baixa atividade mitocondrial dos espermatozoides. Por outro lado, o nível das proteínas CRISPLD2 e RARRES1 estava diminuído no plasma seminal de homens com alta fragmentação de DNA dos espermatozoides. As proteínas PLTP e CRISPLD1 não variaram entre os grupos estudados. No estudo 2, um total de 1.305 proteínas de espermatozoides foram identificadas, sendo 102 diminuídas e 15 aumentadas em ambos os grupos de infertilidade. As proteínas diminuídas estavam relacionadas, principalmente, a modificações pós-traducionais e dobramento de proteínas. A proteína BAG6 demonstrou-se significativamente diminuída em homens inférteis, enquanto a proteína HIST1H2BA estava aumentada nesses pacientes. Os níveis das proteínas HSPA2 e SPA17 não diferiram entre os grupos. Na análise por imunocitoquímica, nenhuma diferença quanto à localização dessas proteínas nos espermatozoides foi observada. Conclusão: As proteínas do plasma seminal e dos espermatozoides refletem alterações funcionais dos espermatozoides e a infertilidade masculina.
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    Acesso aberto (Open Access)
    Fortifying pork liver mixture: Evaluation of protein quality and iron bioavailability - Part 2
    (Pontifícia Universidade Católica Campinas, 2017) Srebernich, Silvana Mariana; Gonçalves, Gisele Mara Silva; Domene, Semíramis Martins Álvares [UNIFESP]
    Objective To evaluate the protein quality and iron bioavailability of a fortifying mixture based on pork liver. Methods Determinations of protein efficiency ratio, net protein utilization, true digestibility and hemoglobin regeneration efficiency by depletion and repletion were performed. In the depletion phase, the animals (male Wistar rats) received an iron-free AIN-93G diet and in the repletion phase they received the following diets: standard AIN-93G diet, fortifying mixture and standard diet containing heptahydrated ferrous sulfate for comparison. Results For standard AIN-93G diet and fortifying mixture the results were 3.75 and 4.04 for protein efficiency ratio and 3.53 and 3.63 for net protein retention, showing that the presence of pork liver in the diet promoted an increase in protein efficiency ratio and net protein retention (not statistically significant). True digestibility results obtained with the fortifying mixture (97.16%) were higher than those obtained with the standard AIN-93G diet (casein), but without significant difference. The hemoglobin regeneration efficiency values obtained for standard AIN-93G diet, fortifying mixture and standard diet containing heptahydrated ferrous sulfate were 50.69, 31.96 and 29.96%, respectively, showing a statistically significant difference between the control (standard AIN-93G diet) and test (fortifying mixture and standard diet containing heptahydrated ferrous sulfate) samples, but not between the test samples. Conclusion The fortifying mixture showed a high protein efficiency ratio value of 4.04 and a high relative biological value (108%) and it can be added to soups, creams and meats in day-care centers for the prevention of iron-deficiency in children of school age.
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    Immobilization of biomolecules on nanostructured films for biosensing
    (Elsevier B.V., 2010-02-15) Siqueira, Jose R.; Caseli, Luciano [UNIFESP]; Crespilho, Frank N.; Zucolotto, Valtencir; Oliveira, Osvaldo N.; Universidade de São Paulo (USP); Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP); Universidade Federal do ABC (UFABC)
    This paper brings an overview of the use of nanostructured films in several types of biosensors, with emphasis on the advantageous control of molecular architecture which is typical of the layer-by-layer (LbL) and Langmuir-Blodgett films. Following introductory sections on film fabrication and detection methods, we concentrate on the immobilization of biomolecules on these nanostructured films used in units for biosensing. Important contributions in the literature in biosensors based on electrochemical and optical measurements are highlighted. Furthermore, a discussion is presented on how the concept of electronic tongues has been extended to biosensing, which resulted in increased sensitivity and selectivity. the integration of sensing units with micro-electronics is commented upon, especially in the context of using field-effect transistors (FETs) for biosensing. Examples of LbL and LB films containing proteins, lipids, metallic nanoparticles and carbon nanotubes, which are used for detecting a variety of analytes, will be provided. the prospects for clinical diagnosis with such biosensors are also assessed. Throughout the review, emphasis is placed on the importance of control of molecular architecture, particularly with synergistic combination of organic and inorganic materials. for example, nanostructured films containing capped gold nanoparticles or carbon nanotubes exhibited enhanced performance in biosensing. It is hoped that this survey may assist researchers in choosing materials, molecular architectures, and detection principles, which may be tailored for specific applications. (C) 2009 Elsevier B.V. All rights reserved.
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    Acesso aberto (Open Access)
    Investigação celular e molecular sobre as condições de agravo na fertilidade do homem
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2019-12-11) Belardin, Larissa Berloffa [UNIFESP]; Bertolla, Ricardo Pimenta [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/8479803539567479; http://lattes.cnpq.br/4341099347238414; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Objective: To evaluate whether the extracellular environment and its interaction with sperm are related to the two main described causes of alteration in male fertile potential, namely varicocele and sperm DNA fragmentation. Methods: This thesis was divided into 2 chapters, where the first one aims to identify molecular changes in the extracellular environment of men with varicocele. This chapter has been divided into 2 articles. In article I it was verified: (i) the effect of varicocele; and (ii) effect of varicocelectomy on the levels of cysteine rich secretory protein 3 (CRISP-3) in seminal plasma by western blotting. In article II, the expression of microRNAs present in seminal plasma extracellular vesicles in men with varicocele, and before and after varicocelectomy was evaluated using microarray. The second chapter sought to better understand whether the extracellular environment and its interaction with sperm reflect the sperm DNA fragmentation status. The first article evaluated, using a Multiplex assay, the expression of proteins from the Matrix metalloproteinases (MMPs) family and their inhibitors named Tissue inhibitors of metalloproteinases (TIMPs) in seminal plasma of men with high and low sperm DNA fragmentation. The second article verified the presence of Epididymal sperm-binding protein 1 (ELSPBP1) in seminal plasma samples and sperm with high and low DNA fragmentation by western blotting and identified its location in the sperm by immunocytochemistry and verified if this protein is capable of separating sperm with high levels of DNA fragmentation from the healthy population, using immunomagnetic cell separation. Results: Regarding the study of varicocele (chapter I), in article I it was found that men with varicocele have higher CRISP-3 seminal levels when compared to controls. CRISP-3 levels decreased after varicocelectomy. In Article II, it was observed that there are microRNAs present in seminal plasma extracellular vesicles that reflect the pathogenic process of varicocele before varicocelectomy. While other microRNAs are involved in fertility protective processes. In Chapter II, which studied the pathology of sperm DNA fragmentation, in article I, lower levels of seminal plasma MMP-2, MMP-7, TIMP-1, TIMP-2 and TIMP-4 were observed in high when compared to the low sperm DNA fragmentation group. In logistic regression analysis, proteins MMP-2, MMP-7 and TIMP-4 classified the samples as low and high DNA fragmentation. With respect to article II, the protein ELSPBP1 is more expressed in sperm from samples with higher levels of sperm DNA fragmentation when compared to samples with lower levels of DNA fragmentation. This protein, in human sperm is preferentially located in the region of the head and was efficient to separate sperm with higher levels of DNA fragmentation from the health population. Conclusion: The extracellular environment and its interaction with sperm are related to varicocele and sperm DNA fragmentation.
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    Acesso aberto (Open Access)
    Peptídeos e proteínas em formulações farmacêuticas orais: estratégias utilizadas para viabilizar a administração e melhora da biodisponibilidade
    (Universidade Federal de São Paulo, 2022-02-04) Gonçalves, Cristine [UNIFESP]; Andréo Filho, Newton [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/4715398927727906; http://lattes.cnpq.br/3114220675089046
    Os peptídeos e proteínas são macromoléculas que apresentam funções de extrema importância nos mais variados processos biológicos, podendo possuir atividades terapêuticas de grande interesse para o tratamento de diversas doenças, graças à sua alta especificidade e atividade em baixas concentrações. No entanto, sabe-se que essas moléculas apresentam características intrínsecas que dificultam sua viabilidade na clínica. Muitas dessas moléculas já são amplamente utilizadas pela via parenteral, ocasionando desconforto e falta de praticidade aos pacientes que necessitam desses ativos no tratamento de doenças crônicas. Tendo isso em vista, torna-se necessário o desenvolvimento ao redor de formulações que permitam a veiculação de peptídeos e proteínas pela via oral, que é mais comumente aceita pelos pacientes. Essa revisão bibliográfica, traz um levantamento de diversas estratégias utilizadas para a obtenção dessas formulações, como por exemplo, sistemas poliméricos e lipídicos, sistemas bioadesivos e revestimentos entéricos, entre outros. A revisão também conta com diversos exemplos práticos de aplicações já realizadas com esse objetivo extraídos a partir de artigos obtidos em bases de dados. Foi possível concluir que, apesar de ser um tema de grande relevância, ainda falta muita pesquisa a ser realizada nessa área, além da necessidade de mais ensaios clínicos que comprovem não somente à eficácia dessas técnicas, como também, a segurança do paciente. Também foi possível observar que a aplicação de combinações dessas estratégias, visando uma maior permeação e biodisponibilidade dessas moléculas, tem se mostrado uma abordagem muito promissora no desenvolvimento dessas formulações.
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    Somente Metadadados
    Polarization Modulation Reflection-Absorption Spectroscopy applied in ultrathin films of algal biomacromolecules may explain the mechanism associated to the removal of pollutant metals
    (Elsevier Science Bv, 2017) de Brito, Audrey K. [UNIFESP]; Nordi, Cristina S. F. [UNIFESP]; Caseli, Luciano [UNIFESP]
    The current work investigates the action of extracts of exopolysaccharides and proteins (EPS) from the microalgae Cryptomonas tetrapirenoidosa immobilized on Langmuir-Blodgett films (LB) of the lipid dioctadecyldimethylammonium bromide (DODAB). The main objective of this paper was to evaluate the changes provided in the structure of the lipid-algal biomolecules composite film by Polarization Modulation Infrared Reflection-Absorption Spectroscopy (PM-IRRAS) when these supramolecular structures are immersed in solutions with metallic ions of environmental interest. EPS was incorporated at DODAB monolayer as analyzed with surface pressure-area isotherms, PM-IRRAS and Brewster Angle Microscopy. The mixed films were transferred to solid supports as LB films and amide bands related to proteins present in the extract were analyzed since they are highly sensitive to molecular conformation. The films were put in contact with selected ions of environmental interest, such as lead, cooper, iron, and mercury, and changes in the protein structure were investigated with PM-IRRAS. The results showed a specific interaction of each ion with the LB films, which may be promising for building biosensors with specificity for metallic ions. (C) 2017 Elsevier B.V. All rights reserved.
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    Acesso aberto (Open Access)
    Produção e caracterização de leptina e TcPTP1 recombinantes, proteínas ligadas ao metabolismo, sinalização celular e inflamação
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2010-08-25) Gallo, Gloria [UNIFESP]; Pesquero, João Bosco [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Leptin is predominantly secreted by adipocytes and plays an important role in the regulation of the energetic metabolism of mammals. Because of this, leptin is strongly involved in the regulation of obesity. After ligation, dimerization and activation of its specific receptor in the hypothalamus, leptin activates JAK kinases that phosphorylate STAT transcription factors, which in turn up-regulate energetic expenditure and lead to the inhibition of hunger. Leptin signalling is downregulated by a phosphotyrosine phosphatase named PTP1B. The aim of this work is the cloning, expression and purification of recombinant human leptin in E. coli. After induction, recombinant leptin was produced in E.coli BL21(DE3) in an insoluble form, purified by nickel-afinity chromatography, refolded using serial dialysis and concentrated up to 3mg/ml. Injection of this recombinant protein in ob/ob mice, which are devoid of leptin, leads a reduction of body weight by 8% and a reduction of food intake by 50%, thus confirming the biological activity of the protein. In order to enrich this study, we produced a targeted mutation of this recombinant leptin (called mutein) wich act as an antagonist. In other hand, Additionaly to this work, we also cloned, expressed, purified and biochemically characterized a phosphotyrosine phosphatase from Trypanosoma cruzi termed TcPTP1, which is homologous to mammalian PTP1B. TcPTP1 is an interesting medical target because of its potential influence in the regulation of cell signalling in T.cruzi. The production and biochemical characterization of TcPTP1 is the basis for functional and structural studies that can lead to the design of new inhibitors of this enzyme, which seems to be vital for the parasite.