Navegando por Palavras-chave "Protease Inhibitors"
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- ItemSomente MetadadadosAção dos inibidores isolados de plantas brasileiras na síndrome da isquemia e repercussão(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2005) Santomauro-Vaz, Eugenio Miguel [UNIFESP]; Oliva, Maria Luiza Vilela [UNIFESP]Os inibidores tipo Kunitz de origem vegetal são proteínas de massa molecular aproximada de 20 kDa encontradas em leguminosas. Inibidores isolados de Bauhinia de várias espécies foram caracterizados. Alguns destesinibidores distinguem-se de outros inibidores tipo Kunitz por não possuírem pontes dissulfeto (Oliveira et al., 2001; Oliva et al., 2001). Das sementes de Bauhinia bauhinioides foram isolados dois inibidores, o BbKI e o BbCI. BbKI inibe tripsina (Kapp=2,Ox10-8M), quimotripsina (Kapp=2,6x10-8M), calicreína plasmática humana (Kapp=2,4x10-9 M), calicreína plasmática porcina (Kapp=2,Ox10-7M), calicreína plasmática de rato (Kiapp=5,2x10-9M) e plasmina (Kiapp=3,3x10-8. BbCl inibe a cruzipaína (Kapp=1,3x10-9M) e a cruzaína (Kapp=0,3x10-9M), catepsina L, (Kiapp=0,2x10-9M), elastase humana (Kiapp=5,3x10-9M), catepsina G(Kiapp=1 ,6x10-7M) e elastase pancreática porcina (Kiapp=4,Ox10-8M). não inibe catepsina B (CB), a papaína, a bromelaina e a ficina bem como tripsina, quimotripsina e enzimas da coagulação (Mendes, 1998; Oliveira et al. , 2001; Oliveira, 2004). Tecidos submetidos à isquemia podem sofrer lesões funcionais e morfológicas que aumentam durante a fase de reperfusão. Neste estudo, os !feitos dos inibidores de peptidases BbKI e BbCI e da aprotinina, um clássico libidor de peptidases, foram investigados em ratos submetidos a isquemia e reperfusão dos membros posteriores, avaliando-se o óxido nítrico local (no músculo isquêmico) e a distância (pulmão,cérebro e coração). Os animais tratados com BbKI apresentaram um aumento de 26,59 por cento no oxido nítrico no...(au).
- ItemSomente MetadadadosDesenvolvimento de novos materiais dentários: efeito do peptídeo autopolimerizante P11-4 e do trimetafosfato de sódio na degradação do colágeno I e na formação de Hidroxiapatita(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2020-09-24) Carvalho, Rafael Guzella De [UNIFESP]; Tersariol, Ivarne Luis Dos Santos [UNIFESP]; Universidade Federal de São PauloObjectives: This study investigated the influence of peptide P11-4 (Ace-QQRFEWEFEQQ-NH2) and sodium trimetaphosphate (STMP) on the rate of calcium phosphate crystal growth, its anti-proteolytic action against the enzymatic degradation of type I collagen, the binding mechanism of P11-4 and STMP to collagen fibrils, and the potential mechanism to induce collagen stabilization. It was also evaluated the cell viability and the gene expression of different major genes involved in mineralization in odontoblast-like cells exposed to different concentrations of P11-4 and STMP. Methods: P11-4 interaction with calcium was analyzed by intrinsic fluorescence analysis. Crystalline particles formation was monitored by light-scattering detectors to estimate pH variation and radial size of the crystalline particles as a function of reaction time (pH 7.4, 25 ºC) in the presence of P11-4 or STMP in supersaturated calcium phosphate solution (Ca/P=1.67). Images were obtained under the atomic force microscopy (AFM) to measure the particle size in the presence of P11-4 or STMP and to measure the width of collagen fibrils in the presence of P11-4. The interaction of P11-4 and collagen I was analyzed by surface plasmon resonance (SPR). The binding mechanism of P11-4 and STMP to collagen fibrils were assessed with intrinsic fluorescence analysis and circular dichroism spectrometry (CD) respectively. Immortalized rat odontoblast cells (MDPC-23) were cultured. Cell viability was assessed by Trypan Blue staining and MTT assay. The changes in gene expression balance induced by P11-4 and STMP were assessed by qRT-PCR assays. Three-point bending test was used to obtain the elastic modulus of fully demineralized dentin beams before and after immersion in STMP solutions. We also performed assays of bond strength to microtensile, nanoinfiltration and in situ zymography to assess the effects of P11-4 on stabilizing the structure of dentine carie-affected. Data was statistically analyzed (α=0.05). Results: Intrinsic fluorescence analysis, dynamical light scattering with pH monitoring and AFM showed P11-4 induces hydroxyapatite (HAP) crystal nucleation process improving the structural match among HAP crystallite aggregates. STMP greatly increased the rate of crystal growth, significantly increasing the average radial crystal size. AFM corroborated the significant increase of STPM treated crystal size. SPR and AFM indicated that P11-4 binds to collagen type I fibers, increasing their width from 214 ± 4 nm to 308 ± 5 nm (P < 0.0001). The CD and intrinsic xvii fluorescence analysis showed the peptide sequence Ace-KGHRGFSGL-NH2 is the binding site of P11-4 and STMP in type I collagen. CD analysis demonstrated changes in the conformational stability after STMP binding to type I collagen. Mineralized collagen I fibrils exhibited less collagenase degradation with lower STMP concentration. P11-4 also increased the resistance of collagen type I fibers against the proteolytic activity of collagenases. We verified from the analysis of the elastic module for the treated substrate STMP and the analysis of nanoinfiltration, bond strength to microtensile and in situ zymography of the caries-affected dentin treated with P11-4 that these biomaterials stabilize the extracellular dentinal matrix. P11-4 and STMP had no significance influence in the cell viability of MDPC-23 cells and only P11-4 had significant influence in gene expression of these cells. Conclusion: The present study observed that P11-4 and STMP induces the nucleation of hydroxyapatite, interacts with collagen type I and increased resistance of collagen against the proteolytic activity of collagenases, improving the mechanical properties of the extracellular dentin matrix.
- ItemSomente MetadadadosDeterminação da sequência primária do inibidor glicosilado das sementes de Bauhinia rufa(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2003) Sumikawa, Joana Tomomi [UNIFESP]; Oliva, Maria Luiza Vilela [UNIFESP]Objetivo principal: Isolar e caracterizar a glicoproteina que apresenta atividade inibitoria de elastase detectada no extrato das sementes de Bauhinia rufa. Metodos: O inibidor foi purificado por precipitacao por acetona (80 por cento v/v), cromatografia de afinidade Con A Sepharose, cromatografia de troca ionica (HiTrap Q e ResourceTM Q em sistema FPLC), cromatografia de filtracao em gel SuperdexTm 200 (sistema FPLC) e cromatografia de fase reversa em coluna C1$ (sistema HPLC). gBrEl foi analisado por SDS PAGE para analise da massa molecular e deteccao de carboidratos. Resultados: pela analise eletroforetica o inibidor com atividade anti elastasica apresentou-se como uma cadeia unica com uma massa molecular aproximadamente de 20 kDa e pela coloracao com reagente de Schiff confirmou a presenca de carboidratos na estrutura da proteina. gBrEl inibe elastase pancreatica de porco e nao inibe elastase de neutrofilo humana, calicreina plasmatica humana, calicreina pancreatica de porco e tripsina. Atraves da analise por sequenciamento, a proteina e composta por 143 residuos de aminoacidos e o sitio de glicosilacao foi detectado em Asn 38 apresenta Mr. 1170 por espectrometria de massa. Discussao: A metedologia empregada para a purificacao do inibidor de elastase obteve rendimento de 21 e purificacao de cerca de 306 vezes. A constante de inibicao da elastase e de 6,18.10-8 M e a estequiometria de reacao e 1:2. Atraves da analise de similariedade (FASTA program) gBrEl apresenta-se muito similar aos inibidores da familia Kunitz de plantas e pela comparacao conservativa do sitio reativo, o...(au)
- ItemSomente MetadadadosEstudo de estrutura e função de inibidores de proteases presentes em artrópodes hematófagos, vetores de doenças(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2006) Tanaka, Aparecida Sadae [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
- ItemSomente MetadadadosExpressão heteróloga e avaliação in vitro da atividade de proteínas recombinantes de Haementeria vizottoi sobre os mecanismos de coagulação sanguínea, com foco em aplicação biotecnológica(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2020-03-05) Linhares, Debora Do Carmo [UNIFESP]; Tavassi, Ana Marisa Chudzinski [UNIFESP]; Universidade Federal de São PauloSalivary secretions from hematophagous animals have been an important source of proteins with biotechnological potential, since there are a number of protein inhibitors that can be isolated and used to modulate the action of enzymes of interest. Many of these inhibitors have evolved to specifically disable key proteases from their hosts, leading to delayed blood coagulation (anticoagulants) and minor immune response, providing the hematophagous with the conditions for successful feeding. Based on transcriptomics of salivary glands of the leech Haementeria vizottoi, were identified sequences of three genes whose predicted proteins have signatures of potential biological activity as protease inhibitors. The aim of this prospective study was to clone, express and characterize these three H. vizottoi derived proteins, namely: Hviz 1276 (hemerythrin-like), Hviz 78 (antistasin-like) and Hviz 340 (cystatinlike). Due to their structural characteristics, antistin and cystatin-like proteins were expressed in P. pastoris (Komagataella pastoris) and hemerythrin-like protein was expressed in E. coli. The proteins of interest were recovered from the supernatant medium or cell extract, and purified by molecular exclusion chromatography and / or affinity chromatography with different resins. To determine their effects on the coagulation cascade, activated thromboplastin time (aPTT) and prothrombin time (PT) were determined using diagnostic kits. Depending on the result, they were also evaluated for the potential to inhibit specific proteases such as FXa, thrombin, elastase, kallikrein, papain and cathepsin L. Hviz 1276 did not demonstrate the expected biological activity and its study was discontinued. The application of partially purified Hviz 78, in the order of 1 µmol/L, was enough to extend the intrinsic-initiated coagulation time by more than 700%. It is still necessary to work on the refinement of purification of this protein and to perform new function tests, since no specific inhibitory activity against any of the proteases tested was identified. The most promising results were obtained with Hviz 340, purified and identified as inhibitor of cysteine proteases papain and cathepsin L, for the latter with ki=7.9 nmol/L. This activity represents new opportunities to evaluate the potential of Hviz 340 as a modulator of cellular activity related to the immune response, possibly anti-inflammatory, since cathepsins are critical for antigen processing and presentation.
- ItemSomente MetadadadosIndicadores antropométricos em crianças com aids em uso de terapêutica com inibidores de protease(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2001) Soraggi Neto, Caetano [UNIFESP]; Fisberg, Mauro [UNIFESP]Foram analisadas indices antropometricos e suas relacoes durante 6 meses antes e 6 meses depois, apos o inicio de terapeutica antiretroviral com inibidores de protease, em 120 criancas com AIDS, entre 2 anos e 14 anos de idade. Foram coletados dados de peso, altura, indice de massa corporal, durante o periodo pre inibidor de protease (6 meses) e apos o inicio da terapeutica com o inibidor de protease (6 meses) e analisado se houve alteracoes nestes indices nos dois periodos. Analises laboratoriais de contagem de linfocitos CD4+, carga viral do FHV, hemograma, albumina serica e triglicerides sericos tambem foram feitos. Apos coletas dos dados, foram analisados 3 grupos que recebiam terapeuticas no periodo pre inibidor: gamaglobulina E.V.(GA); azt/ddi/gamaglobuhna E.V. (ZD); azt/3tc/gamaglobulina E.V. (Z3) e analisados as variacoes dos indices antropometricos e aspectos laboratoriais, no decorrer do tempo apos a Introdução do inibidor de protease. A analise foi feita como um todo e dividida nos tres grupos em ambos os periodos. Apos a analise, foi notada que a Introdução da terapeutica com o inibidor de protease, nao causou alteracoes significativas entre os grupos em estudo em ambos os periodos
- ItemSomente MetadadadosInibidor de calicreína plasmática humana isolado de Bauhinia bauhinioides: interação com peptídeos sintéticos e substratos fluorogênicos relacionados à sequência do sítio reativo(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2001) Santomauro-Vaz, Eugenio Miguel [UNIFESP]; Oliva, Maria Luiza Vilela [UNIFESP]Mendes descreveu em 1998, um inibidor de serinoprotease tipo Kunitz, isolado de sementes de Bauhinia (BbKI). A massa molecular, calculada a partir da sequencia primaria e 18034 (composicao elementar C813 H1273 N218 0240 S1 e pl 6,9). O inibidor mostrou alta homologia com outros inibidores tipo Kunitz de plantas, exceto pela ausencia de pontes disulfeto. BbKI apresenta um unico residuo cisteina na porcao C-terminal (residuo 154). A Arg foi definida como o aminoacido em P1, e, tem importante participacao na inibicao de tripsina por um mecanismo de slowtight binding com estequiometria de reacao de 1 :1. BbKI inibe tripsina (K; 0,6 qM), calicreina plasmatica (K; 0,35 rIM), plasmina (K; 33,1 rIM), e pouco efetivo na inibicao de quimotripsina (K; 3900 rIM), mostrou-se o melhor inibidor de calicreina plasmatica isolado de sementes de Bauhinia. Por esse motivo foi denominado: B. bauhinioides Kallikrein Inhibitor (BbKI). Para investigar a relacao entre estrutura primaria e seletividade inibitoria, foram realizados estudos comparativos entre parametros cineticos de hidrolise por calicreina plasmatica humana e outras serinoproteases, utilizando peptideos sinteticos e substratos peptidicos de fluorescencia apagada baseados no sitio reativo do inibidor. O peptideo sintetico (RPGLPVRFESPLRINIIKE) contendo 19 aminoacidos do sitio reativo do inibidor, inibiu a hidrolise por calicreina plasmatica do substrato_(au)
- ItemSomente MetadadadosMecanismo de ação do inibidor de protease de Bauhinia ssp e(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2007) Sumikawa, Joana Tomomi [UNIFESP]; Oliva, Maria Luiza Vilela [UNIFESP]O objetivo do trabalho foi investigar o mecanismo de ação dos inibidores de proteases e de compostos derivados da estrutura primária destes inibidores para dar subsídios ao desenvolvimento de produtos pesticidas não agressivos ao meio ambiente e que possam ser aplicados à planta e à semente, de modo a protegê-las contra o ataque de organismos predadores, particularmente os bruquídeos. São objetivos específicos: 1. Isolar o inibidor de tripsina (BrTI) das sementes de Bauhinia rufa e estudar a influência do inibidor e de peptídeos derivados no desenvolvimento do bruquídeo, Callosobruchus maculatus e comparar a ação com a de outros inibidores de proteases; 2. Investigar o mecanismo de ação da proteína e dos peptídeos isolando os compostos afetados pela ação do inibidor e dos peptídeos derivados, que prejudicam o desenvolvimento larval; 3. Investigar a localização dos compostos que apresentarem atividade inseticida na larva de C. maculatus por microscopia confocal 4. Analisar o ciclo celular das células do trato digestório das larvas de C. maculatus alimentadas com o peptídeo tóxico por citometria de fluxo..
- ItemSomente MetadadadosSíntese de inibidores de proteases: arilamidas derivadas de L-Cisteína e S-Nitrosotióis derivados(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2020-04-07) Serralbo, Aline Silveira [UNIFESP]; Reis, Adriana Karla Cardoso Amorim [UNIFESP]; Universidade Federal de São PauloProteases are enzymes that cleave peptide bonds of different substrates, participating in multiple metabolic reactions in living beings. Some viruses like HIV relies on proteases for their reproductive cycle. The cleavage of certain essential proteins allows the activation of its ideal conformation and the replication of new virions. HIV-1 protease and renin are homologous aspartyl proteases that play important pathophysiological roles in the progression of AIDS and hypertension, respectively. In this context, these proteases are the main pharmacological targets for the drug design in the therapy of patients living with HIV/AIDS who might also have hypertension as an adverse effect of antiretroviral therapy. Structural and functional characteristics common between HIV-1 protease and renin led us to design new aryl amides, applying molecular simplification of the antiretroviral agent nelfinavir. Hence, the main goal of this work was to synthesize potential dual inhibitors for both proteases (renin and HIV-1 protease). In this context, the synthesis of two series of L-cysteine-derived arylamides using more sustainable methodologies were the aims of our study. The synthetic methodologies that used the coupling reagent CDI in neat conditions proved to be efficient and clean, with yields varying between 50% and 90%. Furthermore, S-nitrosothiols derived from arylamides were obtained in yields of approximately 95%, remaining stable in DMSO solution at -10°C. In vitro experiments were carried out with papain (cysteine-protease), β-trypsin (serine-protease) and pepsin (aspartic-protease), to evaluate the selectivity of these compounds facing the family of aspartyl-proteases. In general, the results obtained for the enzymatic assays revealed that the series 1 compounds protected with the trityl group showed low inhibition rates for all proteases. When unprotected, these compounds showed lower IC50 values, mainly for pepsin (between 0.67±0.04 and 3.98±0.06 µM), hence evidencing the importance of removing the protective group for the optimization of inhibitory activity. The S-nitrosothiols of the same series were noteworthy with IC50 values between 0.004±0.001 µM and 0.006±0.001 µM for pepsin. For arylamides of the second series, the results showed that the compounds are effective in inhibiting pepsin (IC50 between 0.19±0.02 µM and 1.00±0.05 µM) and trypsin (IC50 between 19.00±0.30 µM and 240±5.00 µM), but not papain. These preliminary trials illustrated the potential for inhibition of the synthesized compounds against the different types of proteases used.