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    Estudo da expressao do proteoglicano de heparam sulfato(Sindecam-4) por celulas endoteliais bloqueadas em G1 por PMA
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2002) Escudero, Andreia Eduarte [UNIFESP]
    Tem sido descrito que as celulas apresentam mudancas na expressao de proteoglicanos (PGs) e glicosaminoglicanos (GAGs) quando estimuladas a proliferar. Com o objetivo de estudar os efeitos do PMA e de fatores de crescimento sobre a expressao do proteoglicano de heparam sulfato (sindecam-4) e sobre a proliferacao celular, utilizamos uma linhagem de celula endotelial derivada de aorta de coelho que sintetiza o proteoglicano de heparam sulfato, sindecam-4 (90 por cento do total de GAG). Celulas quiescentes expostas a SFB, FGF-2, EGF, PD-ECGF e/ou PMA. A proliferacao celular foi medida pela incorporacao de [3 H]-timidina e a sintese de PG e GAG foi analisada pela incorporacao de [35S]-sulfato, seguida por eletroforese em gel de agarose. A incorporacao de [3H]-timidina mostrou que o PMA tem um efeito inibitorio sobre a proliferacao celular, bloqueando o inicio da sintese de DNA pelas celulas. O periodo compreendido entre 2 e 4 horas parece ser fundamental para o efeito do PMA no ciclo celular. Atraves da imunocitoquimica, verificamos que o PMA mantem a expressao das ciclinas de G1 em niveis baixos, podendo o tratamento simultaneo de PMA e SFB levar a um aumento dessa expressao. . Em relacao a sintese de PG e GAG, foi observado que o PMA estimula a sintese do sindecam-4 secretado para o meio, porem inibe a sintese do extrato celular. Experimentos de pulse-chase mostraram que o PMA estimula a descamacao do sindecam4 (77 por cento) em relacao as culturas quiescentes na fase Gl. Os fatores de crescimento, sozinhos ou em associacao, causaram um aumento na sintese do sindecam-4 secretado para'o meio, mas nao alteraram significativamente, a sintese do sindecam-4 do extrato celular. O inibidor de metaloproteinase de matriz (MMP), orto-fenantrolina, inibiu a secrecao estimulada por FGF-2, EGF e PD-ECGF, sozinhos ou em associacao, mas nao inibiu a secrecao estimulada por PMA, sugerindo que este nao esteja estimulando a secrecao de MMP. Outros dados mostram que o efeito do PMA na sintese do sindecam-4 ...(au)
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    Vias de sinalização redox envolvidas na diferenciação de monócitos humanos a macrófagos
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2003) Debbas, Victor [UNIFESP]; Monteiro, Hugo Pequeno [UNIFESP]
    O processo de diferenciacao de celulas hematopoieticas consiste de varios eventos. A participacao de citocinas e essencial para que cada celula, proveniente de uma mesma matriz, se diferencie ate seu estagio final. Os monocitos sao capazes de se diferenciarem a macrofagos atraves de estimulos que promovem modificacoes moleculares, definindo as alteracoes funcionais e morfologicas. Estudos previos demonstraram que alteracoes no status redox intracelular com predominancia de uma condicao oxidante, sao fundamentais para que a diferenciacao ocorra. Sabe-se tambem que algumas das proteinas quinases que participam do l processo,JNK,ERKe Pyk2,sao sensiveis a estas alteracoes dostatusredoxl intracelular. Celulas da linhagem monocitica humana (THP1) foram utilizadas como modelo para a caracterizacao das vias de sinalizacao envolvidas) na diferenciacao de monocitos a macrofagos.Como indutor da diferenciacao foi utilizado o PMA, um ester de forbol, capaz de ativar a PKC e gerar estresse oxidativo endogeno. Para analisarmos a influencia da alteracao do ambiente redox intracelular, submetemos as celulas a um pre-tratamento com moduladores positivos e negativos da sintese de glutationa (NAC e BSO, respectivamente) seguido do estimulo com PMAa(au)