Navegando por Palavras-chave "Peptides"

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    Absence of oxytocin in the central nervous system of the snake Bothrops jararaca
    (Springer, 2006-11-01) Lazari, Maria de Fatima Magalhaes [UNIFESP]; Alponti, Rafaela Fadoni; Freitas, Thalma Ariani; Breno, Maria Cristina; Conceição, Isaltino Marcelo da; Silveira, Paulo Flavio; Inst Butantan; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    We used four complementary techniques to investigate the presence of oxytocin peptide in the hypophysis and brain of the snake Bothrops jararaca. A high-pressure liquid chromatographic analysis failed to show oxytocin in extracts of hypophysial and brain tissues but provided estimative values of the amounts of vasotocin (12 ng/mg hypophysis and 0.5 ng/mg brain) and mesotocin (500 pg/mg hypophysis and 8 pg/mg brain). Western blots with a polyclonal anti-oxytocin antibody failed to detect oxytocin in both tissues but detected compounds with higher molecular weight than oxytocin, as well as a relatively weak cross-reactivity with mesotocin. the reverse transcription-polymerase chain reaction analysis failed to detect the expression of oxytocin gene transcript, but detected a transcript related to the mesotocin-neurophysin precursor in both tissues. Immunohistochemistry with the same anti-oxytocin antibody detected strong staining in the neurohypophysis and in few fibers in the inner zone of the median eminence, which was not abolished by pre-adsorption of this antibody with oxytocin, vasopressin, vasotocin or mesotocin and might not be attributed to oxytocin. in conclusion, our data demonstrate the absence of oxytocin in the central nervous system of the snake B. jararaca and underline the pitfalls that can result from the use of a single technique to investigate the presence of peptides in tissues.
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    Análise do dimorfismo sexual em venenos da aranha acanthoscurria juruenicola por peptidômica quantitativa
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2018-06-28) Almeida, Erika Sayuri Nishiduka Costa De [UNIFESP]; Tashima, Alexandre Keiji [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/3395922547042342; http://lattes.cnpq.br/9963736748632144; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Os aracnídeos estão entre os grupos de maior sucesso evolutivo da história do planeta, e um dos fatores de maior importância para isso é a produção de um veneno farmacologicamente complexo, composto por uma coleção de proteínas e peptídeos biologicamente ativos e altamente específicos. Apesar dos peptídeos constituírem grande parte da composição dos venenos, estudos peptidômicos ainda são escassos, consequentemente as identidades e atividades biológicas de muitos desses peptídeos permanecem desconhecidas. Além disso, em diversas espécies de aranhas é observado dimorfismo sexual, o que pode ocasionar diferenças nas composições de venenos de machos e fêmeas. O objetivo deste trabalho foi caracterizar e comparar quantitativamente o perfil peptídico do veneno de espécimes machos e fêmeas da aranha Acanthoscurria juruenicola. Peptídeos nativos foram fracionados por extração em fase sólida e analisados por espectrometria de massas, assim como seus fragmentos gerados pela digestão isolada por 5 enzimas distintas (tripsina, quimotripsina, termolisina, GluC e Aspn). Os dados espectrais foram submetidos a análise de novo, busca em banco de dados de transcriptoma de glândula e sobreposição das clivagens utilizando ferramentas de bioinformática. Dentre 11 sequências maduras de toxinas completamente mapeadas, 8 eram novos peptídeos ricos em cisteínas, apresentando entre 3 a 5 ligações dissulfeto. Buscas em bancos de sequências de A. geniculata e Araneae resultaram em mais 24 proteínas homólogas identificadas. Observamos dimorfismo sexual no veneno: a concentração total de toxinas nos venenos das fêmeas foi aproximadamente 5 vezes superior à dos machos e apresentaram peptídeos com significativa expressão diferencial. Uma das toxinas de maior expressão em fêmeas, a U2TRTXAj1b, de massa molecular 4,9 kDa e 3 ligações dissulfeto, foi fracionada por cromatografia de filtração em gel. Essa toxina apresentou atividade citotóxica contra aproximadamente 44% das células de melanoma da linhagem A375 em ensaios de MTT em concentração de 3,8 μM. Esses resultados podem evidenciar diferenças em toxicidade e comportamento biológico de acordo com o gênero do animal, além de embasar a potencial aplicação biotecnológica desses peptídeos na área farmacológica.
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    Acesso aberto (Open Access)
    Analogues containing the paramagnetic amino acid TOAC as substrates for angiotensin 1-converting enzyme
    (Elsevier B.V., 2007-05-29) Teixeira, Luis Gustavo de Deus [UNIFESP]; Bersanetti, Patricia Alessandra [UNIFESP]; Schreier, Shirley; Carmona, Adriana Karaoglanovic [UNIFESP]; Nakaie, Clovis Ryuichi [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP); Universidade de São Paulo (USP)
    The angiotensin I-converting enzyme (ACE) converts the decapeptide angiotensin I (Ang I) into angiotensin II by releasing the C-terminal dipeptide. A novel approach combining enzymatic and electron paramagnetic resonance (EPR) studies was developed to determine the enzyme effect on Ang I containing the paramagnetic 2,2,6,6-tetramethylpiperidine-1-oxyl-4-amino-4-carboxylic acid (TOAC) at positions 1, 3, 8, and 9. Biological assays indicated that TOAC(1)-Ang I maintained partly the Ang I activity, and that only this derivative and the TOAC(3)-Ang I were cleaved by ACE. Quenching of Tyr(4) fluorescence by TOAC decreased with increasing distance between both residues, suggesting an overall partially extended structure. However, the local bend known to be imposed by the substituted diglycine TOAC is probably responsible for steric hindrance, not allowing the analogues containing TOAC at positions 8 and 9 to act as substrates. in some cases, although substrates and products differ by only two residues, the difference between their EPR spectral lineshapes allows monitoring the enzymatic reaction as a function of time. (c) 2007 Federation of European Biochemical Societies. Published by Elsevier B.V. All rights reserved.
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    Acesso aberto (Open Access)
    Avaliação do potencial antitumoral de peptídeos baseados em sequências hipervariáveis de imunoglobulinas: atividade antitumoral e mecanismo de ação in vitro e in vivo do peptídeo c36 derivado do vl cdr1 (l1), sobre o melanoma murino b16f10-nex2
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2015-02-28) Figueiredo, Carlos Rogerio de [UNIFESP]; Travassos, Luiz Rodolpho Raja Gabaglia [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/3300376974424875; http://lattes.cnpq.br/2505044831925211; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    O melanoma maligno é um tipo letal de câncer de pele amplamente resistente às terapias convencionais. Recentemente anticorpos monoclonais (mAbs) tem sido utilizados, principalmente os que reconhecem receptores imunoregulatórios. Peptídeos sintéticos, por outro lado, têm sido utilizados principalmente para induzir uma resposta imunospecífica contra o tumor ou para atuar diretamente sobre as células cancerígenas. Peptídeos sintéticos curtos, correspondentes a sequências de regiões determinantes de complementaridade (CDRs) de diferentes famílias de imunoglobulinas, foram descritos pelo nosso grupo em colaboração com a Universidade de Parma, Italia, demonstrando atividades antimicrobianas, antivirais e antitumorais, independente da especificidade do anticorpo monoclonal (mAb) de origem. Em nosso trabalho, avaliamos a atividade antitumoral in vivo e in vitro de peptídeos sintéticos derivados de CDRs comuns a diferentes imunoglobulinas contra linhagens de células tumorais humanas e murinas, com especial ênfase no modelo de melanoma B16F10-Nex2. O estudo teve como objetivo a descoberta de novas sequências peptídicas com atividades antitumorais promissoras para a terapia do câncer. Quatro peptídeos de CDR de cadeias leves e pesadas (C36-L1, HA9-H2, 1-H2 e MG16-H2) de diferentes anticorpos apresentaram atividade citotóxica contra o melanoma murino e um painel de linhagens de células tumorais humanas in vitro. Além disso, estes peptídeos exerceram importante atividade anti-metastática utilizando-se o modelo singeneico de melanoma murino. Outros peptídeos (D07-H3, MN20v1, MS2-H3) também foram protetores contra melanoma metastático, apesar de não apresentarem citotoxicidade significante contra as células tumorais in vitro. Neste caso, sugerimos que estes peptídeos agem como adjuvantes imunológicos in vivo. Os peptídeos que foram protetores in vivo também induziram a produção de 10 óxido nítrico em macrófagos de medula óssea, mostrando que as células da imunidade inata também podem ser moduladas por peptídeos derivados de CDRs. O peptídeo C36L1 foi escolhido entre as 17 sequências triadas para a avaliação de sua eficácia e mecanismo de ação in vitro e in vivo contra o melanoma. C36L1 é um peptídeo de 17 aminoácidos facilmente absorvido pelas células de melanoma e que atua nos microtúbulos, casuando a sua despolimerização, stress do retículo endoplasmático e apoptose intrínseca. Em concentrações subletais, o peptídeo C36L1 inibiu a migração, invasão e proliferação das células de melanoma com parada na fase G2/M do ciclo celular, regulando a sinalização do eixo PI3K/Akt mediante a regulação de Rho-GTPases e PTEN. A administração peritumoral do peptídeo em modelo de melanoma subcutâneo retarda o crescimento tumoral. Já a administração intraperitoneal induziu uma proteção antitumoral significante e dependente do sistema imune em modelo singeneico de melanoma metastático. Células dendríticas (DCs) estimuladas com C36L1 foram igualmente eficazes na proteção contra o melanoma metastático. Durante o tratamento sistêmico, o peptídeo C36L1 induziu ativação de DCs, além de um aumento no recrutamento de células imunoefetoras no microambiente tumoral metastático, associado à uma significante diminuição da disponibilidade de células T-regulatórias nos órgãos linfóides. Em conclusão, o presente trabalho mostra uma triagem que viabiliza a utilização de imunoglobulinas para o delineamento de sequências conservadas de CDRs dotadas de propriedades antitumorais específicas com potencial para seu desenvolvimento como drogas antitumorais. Entre estas sequências, foi demonstrado que o peptídeo C36 VL CDR1 é um candidato promissor à classe de compostos que interagem com os microtúbulos, podendo desencadear apoptose em 11 células tumorais e indução de uma resposta imune efetora mediante a ativação de DCs, com conseqüente inibição do crescimento do melanoma metastático.
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    Restrito
    Bioactive peptides in human milk: a systematic review
    (Universidade Federal de São Paulo, 2023-04-25) Laurito, Taís Fontellas [UNIFESP]; Tashima, Alexandre Keiji [UNIFESP]; Tomita, Luciana Yuki [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/4118529511504082; http://lattes.cnpq.br/3395922547042342; http://lattes.cnpq.br/8349145426746162
    Objectives: Identify peptides and biological activity in human milk (HM). Methodology: A systematic review was conducted in the MEDLINE, LILACS, Cochrane, Embase) and from the gray literature (Google Scholar) (CRD42020202505). until August 2020. The keywords were “human milk”, “breast milk", “breast feeding”, “mothers milk”, “lactation”, “infant milk”, “lactation”, “bioactive peptides'' and “peptides''. Two independent researchers carried out searches in the databases, selections, extractions in blind. In case of disagreement, the third author checked the eligibility criteria. The inclusion criteria were: original article, written in English, Portuguese or Spanish, which utilized human-derived milk peptide, and tested its bioactivity through in vivo or in vitro assays. Results: A total of 1519 articles were located from databases and 30 were included from references of included articles. In the end, 37 articles were included. The most common peptide activities found in HM were antimicrobial, ACE, antioxidant, immunomodulatory, opioid activities and growth regulation. The majority of studies assessed peptides from β-caseins and lactoferrin. The methodological advances were important to find a higher number of peptides, especially after the development of soft ionization methods of macromolecules applied to mass spectrometry. Conclusion: Many peptides and its bioactivities were identified in human milk. Importance of breast feeding including those bioactive peptides properties can contribute to stimulating women and society to encourage a friendly environment for breastfeeding.
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    Acesso aberto (Open Access)
    Caracterização de marcadores de virulência em Paracoccidioides brasiliensis
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2009-06-24) Kioshima, Érika Seki [UNIFESP]; Lopes, Jose Daniel [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Paracoccidioidomycosis (PCM) is a human systemic granulomatous disease, prevalent in South America, caused by a thermodimorphic fungus, Paracoccidioides brasiliensis. This fungus presents complex antigenic structure and some of these components have been related with its pathogenicity, of which little is known. The virulence recovery of isolates by passage in vivo was performed in our laboratory. Attenuated and virulent Pb18 isolates were analyzed from various angles to confirm this change. The results of the survival curve, the number of CFUs and histology, showed clear differences in pathogenicity pattern of these isolates. Other features were also evaluated as morphology, growth curve and cell ultrastructure. Analysis of differential gene expression profile showed positive regulation genes related to metabolisms of proteins, lipids and amino acids. Some molecules, previously described as putative virulence factors, were positive regulated, among which calmodulin, kex-like protein and Hsp70. However, the number of defined virulence factors for dimorphic fungal pathogens, up to now, is relatively small. Several techniques have unsuccessfully been employed to characterize these elusive antigenic structures. Using phage display methodology, three peptide-displaying phages that bound preferentially to virulent isolates of P. brasiliensis were selected. By binding assay, p04 phage distinguished predefined degrees of virulence of isolates. Using confocal microscopy, the homologue synthetic peptide (pep04), labeled with 6-FAM, was internalized by only virulent isolate yeast cells. Sequential optical section imaging indicated that the labeling was within the intracellular milieu and frequently close or overlapping DAPI staining. These results showed that both, phage p04 and pep04, can be considered as biomarkers of virulence in PCM since both bound to virulent P. brasiliensis. To evaluate the consequences of interactions between the biomarkers and fungal cells, in vitro and in vivo experiments were performed. The latter demonstrated that p04 phage was sufficient to prevent the implantation of the fungus in the lungs and its migration to spleen and liver. In addition, this phage reduced colony-forming units in the lungs of mice infected with P. brasiliensis as compared to controls. In vitro experiments showed that pep04 exhibited fungicidal activity only against virulent P. brasiliensis, leaving unaltered the growth of the attenuated isolate. Therefore, these biomarkers may be useful tools for prognosis in PCM and may be possibly used in the routine clinical practice as therapeutic drug adjuvants.
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    Acesso aberto (Open Access)
    A diversidade estrutural de peptídeos potenciadores da bradicinina da Bothrops jararaca (Bj-BPPs) proporciona ações sinérgicas no sistema cardiovascular
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2010-03-31) Morais, Kátia Luciano Pereira [UNIFESP]; Camargo, Antonio Carlos Martins de [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Our laboratory has shown that one gene codes for the protein precursor that yields the natriuretic peptide type C (CNP) after having been processed, along with a variety of proline-rich peptides, known as bradykinin-potentiating peptides or BPPs. Showing little differences, this precursor is expressed in the venom gland and the neuroendocrine region of the Bothrops jararaca brain. All processing products have in common that they act on the cardiovascular system, lowering arterial blood pressure and heart frequency. This intriguing fact led us to question whether the different peptides display similar mechanisms of action. Surprisingly, the present study showed that the answer is negative, although we cannot, at the present time, explain in full detail how each peptide acts in the complex mechanism, responsible for vascular tonus and cardiac frequency. Historically, the demonstration that the Bradykinin-Potentiating Peptides from Bothrops jararaca (Bj-BPPs) were natural inhibitors of the angiotensin converting enzyme (ACE) had a wide medical impact. In fact, this inhibition seemed to fully explain the strong anti-hypertensive action of these peptides, therefore being employed as structural models for the development of a site-directed inhibitor, Captopril, a drug used worldwide for the treatment of systemic human arterial hypertension. Recent experimental evidences, however, suggest that the anti-hypertensive activity of the Bj-BPPs is not due exclusively to the inhibition of the ACE. Our group demonstrated that the antihypertensive action of Bj-BPP-10c, for instance, is due to the activation of L-arginine generation, which is essential for NO production, a potent vasodilator. Moreover, it also regulates the arterial baroreflex and intracellular calcium signaling, which contribute to NO production in endothelial and neuronal cells. In the present work we studied the mechanism of action of other Bj-BPPs found in the above mentioned precursor. We showed that the mechanism of action of Bj-BPP-5a involves bradykinin B2 receptor, the muscarinic receptor, subtype M1, and NO production. Bj-BPP-11e probably acts on a membrane receptor, thereby explaining its effects on cardiovascular parameters. The mechanism of action of Bj-BPP-12b might be explained by Bk potentiation and/or by ACE inhibition and Bj- BPP-13a action on by muscarinic receptor subtype M3 and the ASS. Interestingly, Bj-BPP-9a, which was the model molecule for the synthesis of Captopril, seems to act predominantly as a classic ACE inhibitor. Beside the pharmacological interest, our work also revealed, for the first time, that snake toxins also employ the well-known strategy in hormone-peptide generation, that is, they use the processing of a polyprotein to generate peptides which display a synergistic action.
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    Efeito Antitrombótico Do Inibidor Quimérico De Calicreína E De Peptídeos Estruturalmente Relacionados Em Modelo De Trombose Arterial Em Camundongos
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2018-08-30) Medina, Andre Fernando [UNIFESP]; Oliva, Maria Luiza Vilela [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Thrombotic Disorders Are The Most Common Causes Of Morbidity And Mortality In The World. Several Evidences Suggest That Factor Xii, Factor Xi And Pre-Kallikrein Are Majority Targets To Extrinsic Pathway Proteases, Such As Thrombin And Factor Xa; Since They Have Reduced Or No Side Effects, As Bleeding. The Characterization And Purification Of Plant Protein Inhibitors Present A New Approach To The Understanding And Development Of New Drugs, Considering That It Has A Better Specific Target With Less Side Effects. The Chimeric Form Of The Recombinant Bauhinia Bauhinioides Kallikrein Inhibitor (Rbbkim) Contains The Integrin Recognition Rgd/ Ge Motif From Bauhinia Rufa Trypsin Inhibitor (Brti). This Work Aims To Evaluate The Effect Of The Rbbkim Inhibitor And Two Synthetic Peptides In The Experimental Model Of Arterial Thrombosis: The Fragment Comprising The Rgd Sequence And Its Retro-Inverso With D-Amino Acids. For Cloning Of Rbbkim, The Inhibitor Gene Was Inserted Into The Pet28a Vector, Expressed In E. Coli Bl21
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    Effects of the angiotensin II Ala-scan analogs in erythrocytic cycle of Plasmodium falciparum (in vitro) and Plasmodium gallinaceum (ex vivo)
    (Elsevier B.V., 2015-06-01) Silva, Adriana Farias; Silva, Leandro de Souza; Alves, Flavio Lopes [UNIFESP]; TorossianTorres, Marcelo Der; SaPinheiro, Ana Acacia de; Miranda, Antonio; LaraCapurro, Margareth; Oliveira, Vani Xavier; Universidade Federal do ABC (UFABC); Universidade Federal do Rio de Janeiro (UFRJ); Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP); Universidade de São Paulo (USP)
    The anti-plasmodium activity of angiotensin II and its analogs have been described in different plasmodium species. Here we synthesized angiotensin II Ala-scan analogs to verify peptide-parasite invasion preservation with residue replacements. the analogs were synthesized by 9-fluorenylmethoxycarbonyl (Fmoc) and tert-butyloxycarbonyl (t-Boc) solid phase methods, purified by liquid chromatography and characterized by mass spectrometry. the results obtained in Plasmodium falciparum assays indicated that all analogs presented some influence in parasite invasion, except [Ala(4)]-Ang II (18% of anti-plasmodium activity) that was not statistically different from control. Although [Ala(8)]-Ang II presented a lower biological activity (20%), it was statistically different from control. the most relevant finding was that [Ala(5)]-Ang II preserved activity (45%) relative to Ang II (47%). in the results of Plasmodium gallinaceum assays all analogs were not statistically different from control, except [Ala(6)]-Ang II, which was able to reduce the parasitemia about 49%. This approach provides insight for understanding the importance of each amino acid on the native Ang II sequence and provides a new direction for the design of potential chemotherapeutic agents without pressor activity. (C) 2015 Elsevier Inc. All rights reserved.
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    Acesso aberto (Open Access)
    Estratégias sintéticas e aplicações de peptídeos modificados
    (Universidade Federal de São Paulo, 2024-06-04) Moraes, Gabriel Mantovani de [UNIFESP]; Aguilar, Andrea Maria [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/4430268731547354
    Os estudos sobre tratamento de doenças buscam inserir novas opções de medicamentos e aprimorar seus métodos de preparação, possibilitando o desenvolvimento de novos fármacos. Os peptídeos são moléculas de origem tanto natural quanto sintética que possuem diversas funções no organismo humano e apresentam um alto potencial para aplicações farmacológicas, como moléculas terapêuticas e aplicações tecnológicas como drug delivery e biossenssores para células cancerosas, em que sua preparação possui diversos métodos consolidados, como a síntese de peptídeo em fase sólida. Este método é eficiente para a preparação de peptídeos com longas cadeias de aminoácidos e funcionalizações. Seu funcionamento se baseia na fixação do peptídeo em um suporte polimérico que facilita a adição e eliminação de reagentes, quando comparado à síntese de peptídeo em solução. Apesar de serem moléculas com alto desempenho, as propriedades dos peptídeos dificultam sua aplicação, pois são moléculas facilmente degradadas por enzimas e pelo sistema linfático. As propriedades químicas dos peptídeos dependem da composição de seus aminoácidos, em conjunto com a presença de cadeias lipídicas, poliméricas, cíclicas, glicosídicas, entre outras, em sua estrutura. A lipidação é uma modificação altamente explorada como uma das alternativas para aumentar o tempo de vida-útil dos peptídeos no organismo, promovendo maior interação do peptídeo com proteínas, podendo ser aplicado no desenvolvimento de novas vacinas replicando a estrutura de um patógeno e estimulando a produção de anticorpos pelo sistema imunológico. Neste contexto, o desenvolvimento de estratégias sintéticas que otimizem as propriedades dos peptídeos como fármacos é de extrema relevância para novos tratamentos de doenças, sendo realizadas diversas pesquisas sobre possíveis modificações nas cadeias peptídicas com o objetivo de promover maior estabilidade e biocompatibilidade, mantendo ou aumentando o desempenho destas moléculas, assim como novas metodologias que visem aumentar a eficiência utilizando solventes e reagentes mais sustentáveis.
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    The Importance of Ring Size and Position for the Antiplasmodial Activity of Angiotensin II Restricted Analogs
    (Springer, 2014-09-01) Torres, Marcelo Der Torossian; Silva, Adriana Farias; Alves, Flavio Lopes [UNIFESP]; Capurro, Margareth Lara [UNIFESP]; Miranda, Antonio [UNIFESP]; Oliveira Junior, Vani Xavier; Universidade Federal do ABC (UFABC); Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Malaria is caused by the protozoa Plasmodium and is responsible for approximately one million deaths annually. the antimalarial effects of angiotensin II and its analogs against Plasmodium gallinaceum and falciparum have recently been reported. Here, 12 angiotensin II restricted analogs that contain i - (i + 2), i - (i + 3) and i - (i + 4) lactam bridges were synthesized to analyze their effect on antiplasmodial activity. To accomplish this, peptides containing two amino acid residues (aspartic or glutamic acids and lysine or ornithine), were synthesized by the t-Boc solid phase method, purified by liquid chromatography, and characterized by mass spectrometry, and conformational studies were performed by circular dichroism. the results indicate that some of the analogs had anti-plasmodium activity similar to angiotensin II (88 % activity). Among those, eight compounds exhibited high activity (> 70 %), measured by fluorescence microscopy. the analogs with smaller lactam rings and an aspartic acid residue as the bridgehead element had lower levels of lytic activity. the results obtained with the new restricted analogs showed that the insertion position (near the N-terminus), the ring size, and the number of residues between the rings are as important as the components of lactam bridge, regardless of their chirality. the circular dichroism studies suggest that the active analogs, and native angiotensin II, adopt a beta-fold conformation in different solutions. in conclusion, this approach provides insight for understanding the effects of restricting the ring size and position on the bioactivity of angiotensin II and provides a new direction for the design of potential chemotherapeutic agents.
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    Neurolysin Knockout Mice Generation and Initial Phenotype Characterization
    (Amer Soc Biochemistry Molecular Biology Inc, 2014-05-30) Cavalcanti, Diogo M. L. P.; Castro, Leandro M. [UNIFESP]; Rosa Neto, José Cesar [UNIFESP]; Seelaender, Marilia; Neves, Rodrigo X.; Oliveira, Vitor [UNIFESP]; Forti, Fabio L.; Iwai, Leo K.; Gozzo, Fabio C.; Todiras, Mihail; Schadock, Ines; Barros, Carlos C.; Bader, Michael [UNIFESP]; Ferro, Emer Suavinho [UNIFESP]; Universidade de São Paulo (USP); Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP); Butantan Inst; Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP); Max Delbruck Ctr Mol Med; Univ Fed Pelotas
    The oligopeptidase neurolysin (EC 3.4.24.16; Nln) was first identified in rat brain synaptic membranes and shown to ubiquitously participate in the catabolism of bioactive peptides such as neurotensin and bradykinin. Recently, it was suggested that Nln reduction could improve insulin sensitivity. Here, we have shown that Nln KO mice have increased glucose tolerance, insulin sensitivity, and gluconeogenesis. KO mice have increased liver mRNA for several genes related to gluconeogenesis. Isotopic label semiquantitative peptidomic analysis suggests an increase in specific intracellular peptides in gastrocnemius and epididymal adipose tissue, which likely is involved with the increased glucose tolerance and insulin sensitivity in the KO mice. These results suggest the exciting new possibility that Nln is a key enzyme for energy metabolism and could be a novel therapeutic target to improve glucose uptake and insulin sensitivity.
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    Acesso aberto (Open Access)
    Oxintomodulina e obesidade
    (Pontifícia Universidade Católica de Campinas, 2009-10-01) Pimentel, Gustavo Duarte [UNIFESP]; Mota, João Felipe [UNIFESP]; Oyama, Lila Missae [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Since the discovery of leptin, great advances occurred in the characterization of hypothalamic mechanisms involved in the control of food intake and oxyntomodulin is currently recognized as a homeostasis energy regulator. This review discusses the most important interrelationships between the hormone oxyntomodulin and appetite, energy homeostasis and aspects of its role in nutritional biochemistry and physiology. Oxyntomodulin is an anorexigenic peptide produced by the L cells of the small intestine. Recent studies have shown that long-term use of oxyntomodulin in rats leads to reduced food intake and weight gain. Studies in humans have demonstrated that its administration reduces food intake by 25%. Therefore, oxyntomodulin represents a potent anti-obesity therapy. However, its mechanism of action is unknown. Current evidence suggests that it acts via the peptide receptor similar to glucagon 1. Moreover, the literature shows that together with the adoption of healthy habits and lifestyle changes, oxyntomodulin can reduce weight gain.
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    Acesso aberto (Open Access)
    Peptideos derivados da gp43 de Paracoccidioides brasiliensis inibem a fagocitose
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2008) Konno, Adriana Yumi de Camargo [UNIFESP]; Lopes, Jose Daniel [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Paracoccidioidomicose (PCM) é uma doença granulomatosa sistêmica causada pelo fungo dimórfico térmico Paracoccidioides brasiliensis. O principal antígeno desse fungo é uma glicoproteína de 43-KDa. Gp43 possui diferentes funções: participa do mecanismo de evasão durante a instalação da infecção primária e estimula formação de granuloma in vitro, apresentando epítopos reconhecidos por células T que induzem resposta protetora contra o P. brasiliensis. Aqui, investigamos quais epítopos da gp43 poderiam diminuir a função fagocítica de macrófagos e a reação inflamatória correspondente. Diferentes peptídeos da gp43 foram adicionados a culturas de macrófagos derivados de medula óssea. Posteriormente, foram desafiados com zymosan e os índices fagocíticos foram determinados. A expressão dos peptídeos na superfície da molécula foi determinada por análises gráficas usando o módulo Protean; DNAstar Inc. Dois peptídeos que diminuíram índices fagocíticos e estavam expressos na superfície da gp43, P4 e P23, foram selecionados para ensaios posteriores. Mostramos que ambos, P4 e P23 inibiram a liberação de NO por macrófagos estimulados com zymosan enquanto aumentaram liberação de H2O2. A liberação de TNF-α no sobrenadante de cultura de testes fagocíticos in vitro também foi inibida na presença dos peptídeos. Ensaios in vivo com Mycobacterium bovis - bacillus Calmette-Guérin (BCG) demonstraram que estes peptídeos também apresentaram propriedades antiinflamatórias não-específicas a PCM.
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    Acesso aberto (Open Access)
    Peptídeos e proteínas em formulações farmacêuticas orais: estratégias utilizadas para viabilizar a administração e melhora da biodisponibilidade
    (Universidade Federal de São Paulo, 2022-02-04) Gonçalves, Cristine [UNIFESP]; Andréo Filho, Newton [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/4715398927727906; http://lattes.cnpq.br/3114220675089046
    Os peptídeos e proteínas são macromoléculas que apresentam funções de extrema importância nos mais variados processos biológicos, podendo possuir atividades terapêuticas de grande interesse para o tratamento de diversas doenças, graças à sua alta especificidade e atividade em baixas concentrações. No entanto, sabe-se que essas moléculas apresentam características intrínsecas que dificultam sua viabilidade na clínica. Muitas dessas moléculas já são amplamente utilizadas pela via parenteral, ocasionando desconforto e falta de praticidade aos pacientes que necessitam desses ativos no tratamento de doenças crônicas. Tendo isso em vista, torna-se necessário o desenvolvimento ao redor de formulações que permitam a veiculação de peptídeos e proteínas pela via oral, que é mais comumente aceita pelos pacientes. Essa revisão bibliográfica, traz um levantamento de diversas estratégias utilizadas para a obtenção dessas formulações, como por exemplo, sistemas poliméricos e lipídicos, sistemas bioadesivos e revestimentos entéricos, entre outros. A revisão também conta com diversos exemplos práticos de aplicações já realizadas com esse objetivo extraídos a partir de artigos obtidos em bases de dados. Foi possível concluir que, apesar de ser um tema de grande relevância, ainda falta muita pesquisa a ser realizada nessa área, além da necessidade de mais ensaios clínicos que comprovem não somente à eficácia dessas técnicas, como também, a segurança do paciente. Também foi possível observar que a aplicação de combinações dessas estratégias, visando uma maior permeação e biodisponibilidade dessas moléculas, tem se mostrado uma abordagem muito promissora no desenvolvimento dessas formulações.
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    Peptides from Paracoccidioides brasiliensis GP43 inhibit macrophage functions and inflammatory response
    (Elsevier B.V., 2009-01-01) Konno, Adriana Y. C. [UNIFESP]; Maricato, Juliana Terzi [UNIFESP]; Konno, Fabiana T. C. [UNIFESP]; Mariano, Mario [UNIFESP]; Lopes, Jose Daniel [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Paracoccidioidomycosis (PCM) is a systemic granulomatous disease caused by Paracoccidioides brasiliensis (Pb), a thermal dimorphic fungus. Its major antigen is a 43-kDa glycoprotein. Gp43 embodies different functions: it participates in evasion mechanisms during the installation of primary infection, stimulates granuloma-like formation in vitro and presents T-cell epitopes that induce protective response against the fungus. Here, we investigated epitopes from gp43 inhibitory of both, macrophage functions and inflammatory reaction. Different gp43 peptides, spanning the entire sequence of the molecule, were added to cultures of bone marrow-derived macrophages. After challenge with zymosan or Pb cells, phagocytic indexes were measured. Peptides expressed on the molecule surface were determined by graphic analysis using the Protean module; DNAstar Inc. Two peptides which decreased phagocytic index and were expressed at the surface of the molecule, P4 and P23, were selected for further studies. It was shown that both inhibited the release of NO by zymosan stimulated macrophages while enhanced release of H2O2. the release of TNF-alpha in culture supernatants from in vitro phagocytic tests showed different response depending of P4 concentration (data not shown). in vivo assays with Mycobacterium bovis - bacillus Calmette-Guerin (BCG) or Pb cells demonstrated that these peptides presented non-specific and specific anti-inflammatory properties. (c) 2008 Elsevier Masson SAS. All rights reserved.
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    Acesso aberto (Open Access)
    Relação estrutura vs. atividade de peptídeos análogos BPP-10c sobre os parâmetros cardiovasculares de ratos espontaneamente hipertensos
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2010-12-02) Paschoal, Juliana Fontes Beltran [UNIFESP]; Camargo, Antonio Carlos Martins de [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Estudos realizados em nosso laboratório têm mostrado que as ações do BPP-10c (
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    Síntese e estudos biológicos conformacionais e enzimáticos de análogos da angiotensina I contendo marcador de spin toac
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2007) Teixeira, Luis Gustavo de Deus [UNIFESP]; Nakaie, Clovis Ryuichi [UNIFESP]
    Este trabalho iniciou um estudo conjugado abrangendo o enzimático com o de ressonância paramagnética eletrônica (RPE) de substratos peptídicos marcados paramagneticamente. A enzima conversora de angiotensina I (ECA, EC 3.4.15.1), uma dipeptidil carboxipeptidase cuja função principal é a de clivar o dipeptídeo C-terminal da angiotensina I (AI, DRVYIHPFHL) para produzir o octapeptídeo vasoconstritor angiotensina II (AII) foi selecionada para uma investigação de quatro análogos da AI contendo o marcador de spin TOAC (ácido 2,2,6,6-tetramethylpiperidine-1-oxyl-4-amino¬4-carboxylic) em suas posições 1, 3, 8 e 9. Inicialmente, os ensaios biológicos em íleo de cobaia e útero de rata indicaram que somente TOACI-AI manteve parcialmente a atividade da AI. Espectros de dicroísmo circular (CD) revelaram que uma maior parcela dos peptídeos possuem conformações mais estendidas que a do análogo TOAC1-AI assemelha¬-se muito ao do substrato nativo AI, concordante, portanto com os dados de atividade biológica acima mencionada. O estudo enzimático com a ECA indicou que somente o TOAC1-AI e o TOAC3-AI se mostraram susceptíveis à clivagem com esta enzima, sugerindo que a perda desta habilidade no caso dos análogos TOAC8-AI e TOAC9-AI é devido à inserção do resíduo não-natural (TOAC) nas duas posições do sítio de clivagem da seqüência do substrato. Comparativamente ao valor de 15.5 μM-1.min-1 do kcat/Km da AI, este importante parâmetro cinético que reflete o grau de eficiência catalítica da enzima, os análogos TOAC1-AI e TOAC3-AI apresentaram valores de 9.2 e 3.2 µM-1.min-l, respectivamente. Por outro lado, o estudo de fluorescência demonstrou que quanto maior a distância entre o resíduo fluorescente Tyr destes peptídeos e o do grupamento supressor TOAC, maior a intensidade da fluorescência do análogo marcado. Este efeito foi observado para todos os análogos, reforçando as conclusões advindas por estudos de CD, que indicavam estruturas, no geral, estendidas. Dados iniciais de RPE destes análogos indicaram que os seus valores de tempo de correlação rotacional (tc) estão de acordo com o tamanho molecular destes compostos, observando-se uma maior mobilidade nos derivados TOAC1-AI e TOAC9-AI (tc de cerca de 2-3 x lO-1OS) contra 7 a 8 x 1O-1Os para TOAC3-AI e TOAC8-AI. Por último e em caráter inovador, comprovou-se que a hidrólise enzimática pode também ser seguida, em alguns casos, pela RPE, através do acompanhamento da variação de um parâmetro específico desta espectroscopia. Esta aplicação inovadora foi comprovada, acompanhando-se a hidrólise do análogo TOAC3 AI pela ECA, liberando o produto TOAC3-AII.
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    Síntese e estudos enzimáticos e conformacionais de análogos da angiotensina I e da bradicinina contendo marcador de Spin Toc
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2011) Teixeira, Luis Gustavo de Deus [UNIFESP]; Nakaie, Clovis Ryuichi [UNIFESP]
    O presente projeto procurou investigar os peptideos vasoativos angiotensina I (AI) e bradicinina (BK) como substratos da enzima conversora da angiotensina I (ECA), lancando-se mao da marcacao dos mesmos com um derivado de aminoacido paramagnetico e supressor de fluorescencia. O composto ciclico 2,2,6,6-tetrametilpiperidina-1-oxil-4-amino-4-carboxilico (TOAC) foi o escolhido e analogos da AI e BK marcados nas posicoes 0, 1, 3, 5, 8, 9 e 10 e 0, 3, 7 e 9, respectivamente foram sintetizados. Em termos farmacologicos, apenas os derivados de ambos os peptideos marcados nas extremidades aminicas ainda mantiveram parcialmente as atividades contrateis em utero de rata e ileo isolado de cobaia. Quanto as suas propriedades de substrato frente a ECA, os derivados que continham o TOAC mais afastados das ligacoes suceptiveis a hidrolise (posicoes 8-9 para a AI e 7-8 e 5-6 para a BK) foram os que mantiveram ainda propriedades de substratos para esta enzima. Com o objetivo de encontrar correlacoes entre as estruturas destes derivados peptidicos e suas atividades farmacologicas e tambem de substrato enzimatico, as espectroscopias de RPE (Ressonancia Paramagnetica Eletronica), viavel em funcao da presenca do TOAC, CD (Circular Dichroism) e fluorescencia foram aplicadas para a avaliacao conformacional dos mesmos, variando-se tanto o pH do meio quanto a porcentagem de TFE em solucao. No aspecto geral, praticamente todos os peptideos estudados apresentaram conformacoes estendidas, mas com algumas diferencas especificas entre si. A adicao dos solventes estruturantes teve efeitos diferenciados nestes analogos e de mais importante, se observou caracteristicas conformacionais similares entre alguns analogos e seus peptideos nativos (AI e BK), sendo estes, os que se mostraram mais ativos farmacologicamente e tambem em termos de propriedades de substrato frente a ECA. A parte final desta tese envolveu a tentativa de monitorar o processo da hidrolise enzimatica dos substratos, via RPE, fluorescencia e CD. Este enfoque, de carater inovador, apresentou dados cineticos, principalmente via as tres espectroscopias acima referidas, que permitiram distinguir caracteristicas de catalise especificas para alguns substratos. Esta constatacao deixa em aberto a perspectivas de que, em conjugacao com outras estrategias experimentais a serem ainda propostas, podem facilitar um melhor entendimento do complexo mecanismo de acao catalitica da ECA. Alem disso, o projeto permite tambem antever aplicacoes para outras enzimas, nao necessariamente envolvidas nos sistemas renina-angiotensina ou cinina-calicreina envolvidos no presente trabalho
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    Síntese, estudos físico-químicos e algumas aplicações biotecnológicas de benzidrilamino-resinas com diferentes características estruturais
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2003) Silva, Elias Horacio da [UNIFESP]; Nakaie, Clovis Ryuichi [UNIFESP]