Navegando por Palavras-chave "Paracoccidioides"

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    Acao da anfoterecina B e levamisole em camundongos albinos inoculados com paracoccidioides brasilienses
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 1981) Silva, Maria do Rosario Rodrigues [UNIFESP]
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    Análise da virulência de isolados de Paracoccidioides brasiliensis, contendo sequências conhecidas do gene PbGP43: produção e caracterização de isoformas recombinantes de gp43
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2004) Carvalho, Kátia Cândido [UNIFESP]; Puccia, Rosana [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
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    Anticorpos monoclonais contra proteina de 75kDa da superficie de Paracoccidioides brasiliensis inibem o crescimento e diminuem a doenca experimental pelo fungo
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2007) Xander, Patricia [UNIFESP]; Lopes, Jose Daniel [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Paracoccidioides brasiliensis e fungo termo-dimorfico responsavel pela paracoccidioidomicose (PCM), micose granulomatosa sistemica prevalente na America Latina. O fungo libera muitos antigenos, os quais podem encontrar-se transitoriamente ligados a superficie celular. Dois anticorpos monoclonais (mAbs) de diferentes isotipos especificos para proteina de 75 kDa foram produzidos e caracterizados. A proteina e secretada pelo P. brasiliensis e foi purificada e caracterizada. Usando os mAbs, a molecula foi purificada e in vitro apresentou atividade de fosfatase. Analises de microscopia confocal e citometria de fluxo demonstraram que ambos mAbs reconhecem a proteina na superficie do fungo, principalmente nas regioes de brotamento. Experimentos in vitro mostraram que o crescimento do P. brasiliensis foi inibido na presenca dos anticorpos. Alem disso, quando as celulas na fase de levedura do fungo foram opsonizadas com os mAbs levaram a aumento da fagocitose por macrofagos peritoneais murinos. Ensaios de imunizacao passiva com camundongos experimentalmente infectados com o P. brasiliensis tambem foram realizados. Os resultados mostraram que os animais tratados com os mAbs tiveram reducao na contagem das CFUs do pulmao, quando comparados aos animais controle, e a histopatologia mostrou diminuicao da inflamacao, ausencia de celulas fungicas e praticamente nao houve formacao de granulomas
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    Antigenos de Paracoccidioides brasiliensis e sua aplicacao no diagnostico sorologico da paracoccidioidomicose
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 1988) Unterkircher, Carmelinda Schmidt [UNIFESP]; Camargo, Zoilo Pires de [UNIFESP]
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    Artrite experimental induzida por Paracoccidioides brasiliensis em ratos
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2013) Loth, Eduardo Alexandre [UNIFESP]; Franco, Marcello Fabiano de [UNIFESP]; Puccia, Rosana [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/8787784443554068; http://lattes.cnpq.br/9599342606375611; http://lattes.cnpq.br/8406678784784513; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    O fungo Paracoccidiodes brasiliensis (Pb) e o agente etiologico da paracoccidioidomicose (PMC), uma das mais importantes micoses sistemicas na America Latina. A PCM e a oitava causa de morte entre as doencas infecciosas e parasitarias cronicas no Brasil e apresenta a maior taxa de morte entre as micoses sistemicas. A PCM e endemica no Brasil e infecta milhares de pessoas, principalmente nos estados do Sudeste e Sul do pais. A forma pulmonar e a principal manifestacao da doenca, porem nao raramente observa-se acometimento articular, levando os individuos a sofrimento e incapacidade fisica. Objetivo: A presente pesquisa teve como objetivo desenvolver um modelo experimental de artrite fungica com o Pb em joelhos de ratos Wistar. Material e metodos: Foram utilizados ratos Wistar machos, os quais foram inoculados com 50 μl de suspensao celular de leveduras de Paracoccidioides brasiliensis nas doses de 103, 104 ou 105. Os animais foram submetidos a eutanasia aos 15 ou 45 dias apos a data da inoculacao. A articulacao do joelho direito do membro posterior de cada animal foi analisada por meio de perimetria, microscopia de luz e raios-X e amostras de sangue foram coletadas para avaliar a expressao de anticorpos anti-Pb por ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay). Fragmentos dos orgaos abdominais foram processados para recuperacao de fungos viaveis por plaqueamento. Resultados: Os animais dos grupos submetidos a eutanasia aos 15 dias de experimento apresentaram sinais inflamatorios mais graves, maior titulacao de anticorpos anti-Pb e processo de artrite com preservacao da cartilagem articular. Os animais dos grupos com 45 dias de inoculacao desenvolveram artrite grave, com destruicao da cartilagem articular e necrose, porem sinais inflamatorios mais atenuados. Conclusoes: A metodologia utilizada foi capaz de causar artrite nos animais estudados. Aos 15 dias, observou-se processo de artrite marcado por sinovite intensa, e aos 45 dias, observou-se artrite grave. A dose de 105 celulas leveduriformes foi admitida como dose padrao para o desenvolvimento do modelo
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    Ativacao in vitro e in vitro do sistema complemento humano frente ao Paracoccidioides brasiliensis
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 1985) Munk, Martin Emilio [UNIFESP]
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    Avaliacao da gp43 de paracoccidioides brasilienses em testes intradermicos
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 1996) Saraiva, Ernesto Carlos de Oliveira [UNIFESP]
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    Avaliação do fosfoproteoma do fungo patogênico Paracoccidioides brasiliensis sob estresse oxidativo
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2014) Chaves, Alison Felipe Alencar [UNIFESP]; Batista, Wagner Luiz [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
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    Avaliação quantitativa do proteoma do fungo Paracoccidioides brasiliensis, isolado Pb18, com distintos graus de virulência
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2014) Castilho, Daniele Goncalves [UNIFESP]; Batista, Wagner Luiz [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Este trabalho avaliou de forma quantitativa a composicao proteica do fungo patogenico Paracoccidioides brasiliensis na fase de levedura. Esta analise foi realizada no isolado Pb18 com distintos perfis de infeccao em camundongo B10.A (Pb18 virulento e Pb18 atenuado). Alem disso, foi realizada a analise comparativa dos dados do proteoma de ambos os isolados para caracterizar possiveis fatores de virulencia em P. brasiliensis. Para tanto, o extrato proteico de celulas leveduriformes do isolado Pb18 atenuado (mantido por anos em cultura) e Pb18 virulento (recem-isolado de animal) foram digeridos com tripsina e, os peptideos resultantes foram marcados com formaldeido e D2-formaldeido e, apos a marcacao, as amostras foram analisadas por LC-MS/MS. Utilizando esta estrategia foi possivel identificar e quantificar 256 proteinas, sendo que 101 proteinas apresentaram expressao diferencial aumentada no isolado Pb18 virulento, e 129 proteinas no Pb18 atenuado. Entre as proteinas com expressao aumentada (> 6 vezes) no isolado Pb18 virulento estao a catalase peroxissomal (PADG_00324), a superoxido dismutase (PADG_07418), Cdc42 (PADG_05369), e a protease A vacuolar (PADG_00634). Todas as proteinas identificadas e quantificadas foram agrupadas de acordo com as suas categorias funcionais e, os resultados obtidos mostraram que o isolado Pb18 virulento apresenta uma reorganizacao global do metabolismo e aumento na expressao de proteinas que participam da resposta ao estresse. As diferencas quantitativas observadas foram confirmadas em analises de PCR em tempo real e atividades enzimaticas. Dessa forma, podemos sugerir que as proteinas identificadas neste trabalho contribuem para a virulencia de P. brasiliensis. Este e o primeiro trabalho que utiliza a estrategia de espectrometria de massas para identificar fatores de virulencia utilizando um mesmo isolado fungico com distintos graus de virulencia. Os achados apresentados neste trabalho poderao iniciar estudos para elucidar a relacao parasito-hospedeiro nesta importante micose sistemica
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    Características imunoquímicas de patogenicidade e moleculares de isolados "selvagens" de Paracoccidioides brasiliensis
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2001) Costa, Patricia Fagundes da [UNIFESP]; Camargo, Zoilo Pires de [UNIFESP]
    A paracoccidioidomicose (PCM) e uma micose profundade causada pelo fungo termo-dimorfico P. brasiliensis. O habitat natural do fungo ainda e desconhecido e acredita-se que viva saprofiticamente no solo. Estudos mostram sua presenca em visceras de morcegos, de tatus, em fezes de pinguim e no solo. Nao has estudos imunoquimicos, sorologicos, de patogenicidade e moleculares utilizando apenas isolados selvagens de P. brasiliensis. Este trabalho fornece estas informacoes atraves do estudo de 10 isolados. Confirmamos que esses isolados eram realmente de P. brasiliensis por, PCR usando o primer do gene da gp43 obtido do isolado B-339. Os exoantigenos obtidos a partir destes isolados foram testados em ensaios sorologicos tais como imunodifusao, ELISA e Western blot. Os isolados produtores de gp43 foram mais reativos. Por RAPD verificamos que esses isolados selvagens apresentam polimorfismo no DNA. Aspectos de virulencia dos isolados produtores e nao produtores de gp43 foram analisados por, UFC de orgaos de camundongos suscetiveis infectados' e, nao encontramos diferencas entre os dois grupos
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    Caracterização de epitopos contendo resíduos de alfa-galactopiranosil em Paracoccidioides e outros fungos patogênicos
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2019-08-29) Gegembauer, Gregory [UNIFESP]; Puccia, Rosana [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    The main focus of this work was to find αGal epitopes (terminal α-galactopisyl) in fungi of medical importance, considering that there is little information regarding the possible roles of these glycotopes in pathogenic fungal systems. Our project aimed at expanding the group’s reported observation that yeast cells from Paracoccidioides brasiliensis Pb18 reacted with anti-αGal antibodies from chagasic patients (Ch-anti-αGal) on the cell wall and inside intracellular vacuoles. Those results were obtained during the characterization of αGal epitopes in extracellular vesicles produced by P. brasiliensis Pb18 and Pb3 using Ch-antiαGal and anti-αGal IgGs isolated from paracoccidioidomycosis patients, as well MOA lectin specific to Galα1,3Gal disaccharide. Our present confocal microscopy results using Ch-anti-αGal antibodies suggested the presence of αGal epitopes in Pb18, Pb3, Pb01, Histoplasma capsulatum, Candida albicans, Cryptococcus capsulatum, and Aspergillus fumigatus. The reactivity was visualized inside vacuoles and on the cell wall of mother cells and buds, especially at bud scar and bud necks. C. neoformans yeasts were labeled only at the cell wall in our experimental conditions. Ch-anti-αGal antibodies were also localized in the filamentous phase of Pb18 and H. capsulatum, mostly in the hyphae cytoplasm. In A. fumigatus, label predominated at the phialides surface. During the Pb18 mycelium to yeast phase, Ch-antiαGal antibodies intensely labeled transition round structures, thus suggesting a role in yeast formation. Additionally, the presence of αGal epitopes in the studied fungal species was strongly suggested by the effect of α-galactosidase treatment, which evoked intense cell aggregation. Altogether these results suggest the presence of αGal epitopes in several pathogenic fungi, both in the yeast and mycelium phases. An extended in silico analysis using fungal data banks has shown the presence of potential αgalactosyltransferase genes in all fungal species analyzed in this study, in view of the sequence homology with α-galactosyltransferases (αGTs) well described in Schizosaccharomyces pombe. We used as templates the sequences of seven α1,2- and three α1,3-galactosiltransferases. There were similar sequences to α1,2-GT GMH4 and GMH5 (GT34 family), as well to OTGs α1,3-GT (GT8 family). The gene expression of related genes was analyzed between mycelium and yeast phases. The RT-PCR results suggest, in our conditions, that the Pb01 GMH5-like gene was more transcribed than that from Pb3 and Pb18 in both phases. The GMH-like genes were considerably more expressed during the yeast phase in all isolates than in the mycelium phase. These results suggest that there are potential αGT genes being expressed in P. brasiliensis and P. lutzii, however the mRNA accumulation varies with the isolate, cell phase and culture conditions. The overall data presented in this thesis are totally original in the field of pathogenic fungi and upgrade the knowledge about αGal epitopes, which can potentially have important roles in pathogenesis of mycosis, thus mirroring what happens in Chaga’s disease.
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    Caracterização de Paracoccidioides brasiliensis homólogo ao LON, que codifica uma proteína mitocondrial ATP-dependente
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2001) Barros, Tania Fraga [UNIFESP]; Puccia, Rosana [UNIFESP]
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    Caracterização de vesículas extracelulares exportadas pelo fungo
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2012) Vallejo, Milene Carmes [UNIFESP]; Puccia, Rosana [UNIFESP]
    Este trabalho resultou no estudo de vesículas extracelulares do fungo patogênico Paracoccidioides brasiliensis na fase de levedura. Estas estruturas foram caracterizadas nos isolados Pb3 e Pb18 que pertencem a grupos filogenéticos diferentes e provocam um perfil distinto de infecção em camundongos B10.A. Vesículas extracelulares de 20 a 200 nm transportam antígenos, como visto nas reações de immunoblot com soro de pacientes com paracoccidioidomicose. Um novo epitopo de α-galactosil foi identificado nas vesículas extracelulares, como também na parede celular e em vacúolos intracelulares P. brasiliensis. Proteínas do sobrenadante de cultura do isolado Pb18 foram separadas em frações de vesículas (ves) e livre de vesículas (ves-free), e analisadas por cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas (LC-MS/MS). Foram identificadas, com dois ou mais peptídeos, 205 proteínas de vesículas, contra 260 de ves-free incluindo 120 compartilhadas. A proporção de proteínas de vesículas e ves-free classificadas como secretadas foi aproximadamente 70%, a maioria utilizando o transporte por vias não convencionais. Analisamos proteínas das frações de vesículas de P. brasiliensis com ortólogos em vesículas de H. capsulatum, C. neoformans e S. cerevisiae. Foram identificadas 72 proteínas de vesículas de Pb18 (35%) com ortólogos em pelo menos duas das outras espécies analisadas. Entre elas, sequências que participam de processos metabólicos de carboidrato e proteína, atividade antioxidante, tradução, sinalização e transporte foram enriquecidos nas vesículas. Com esse trabalho, fornecemos uma comparação completa com outros proteomas de vesículas fúngicas e ampliamos a visão sobre proteomas extracelulares em fungos. Nossa análise lipidômica identificou 36 espécies de fosfolipídeos nas vesículas extracelulares dos isolados Pb3 e Pb18, incluindo fosfatidilcolina, fosfatidiletalonamina, ácido fosfatídico, fosfatidilserina, fosfatidilinositol e fosfatidilglicerol. O ácido graxo C18:1 predominou nas vesículas do Pb3, enquanto nas vesículas de Pb18 o C18:2 foi mais abundante. O esterol predominante nas vesículas de Pb3 e Pb18 foi o brassicasterol, seguido por ergostetol e lanosterol. Foram identificadas nas vesículas dos dois isolados 2 espécies de monohexosilceramidas. As preparações de vesículas de ambos os isolados foram capazes de estimular a produção de citocinas em macrófagos RAW264.7. A produção de TNF-α foi maior em células estimuladas com vesículas do Pb3, ao contrário da expressão de IL-10 que foi maior ao estímulo com vesículas de Pb18. Acreditamos que nosso trabalho adiciona dados ao entendimento futuro da biologia das vesículas extracelulares, incluindo sua biogênese e função na interação patógeno-hospedeiro.
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    Caracterizacao do mecanismo de acao e atividade anti-inflamatoria dos peptideos P4 e P23 derivados da gp43 de Paracoccidioides brasiliensis
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2012) Konno, Fabiana Toshie de Camargo [UNIFESP]
    Paracoccidioidomicose (PCM) e uma doenca granulomatosa sistemica causada pelo fungo dimorfico Paracoccidioides brasiliensis. O principal antigeno desse fungo e uma glicoproteina de 43-kDa denominada gp43. Peptideos da gp43 desempenham diferentes funcoes: peptideo P10 apresenta epitopo de celula T que induz resposta protetora contra o fungo enquanto que os peptideos P4 e P23 podem inibir funcoes de macrofagos e reacao inflamatoria, favorecendo a instalacao da infeccao. Aqui nos investigamos os mecanismos moduladores da resposta imune que estao envolvidos no efeito inibitorio dos peptideos P4 e P23 em macrofagos. Tambem avaliamos se P4 e P23 possuem efeito sistemico in vivo, bem como diferentes protocolos de administracao dos peptideos, visando melhorar os efeitos anti-inflamatorios. Mostramos que P4 e P23 tem efeito antiinflamatorio sistemico in vivo, ja que administracao intraperitoneal promoveu diminuicao no edema de patas em camundongos infectados com Paracoccidioides brasiliensis ou Mycobacterium bovis- bacilo Calmette-Guerin (BCG). Analises de PCRq, ELISA e citometria de fluxo sugerem que este efeito anti-inflamatorio e decorrente alteracoes na cinetica da producao de moduladores da imunidade inata como TNF-α, IL-6, IL-10 e TLR2. IL-10 parece ser produzida antecipadamente enquanto que IL-6 e TNF-α foram produzidos em momentos posteriores na presenca dos peptideos. Administracao de P4 e P23 em altas doses ou endovenosa resultou na antecipacao e manutencao do efeito antiinflamatorio dos peptideos. Mais ainda, o tratamento continuo com P4 e P23 foi suficiente para sustentar a atividade anti-inflamatoria durante o tratamento
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    Caracterização genotípica e análise da diversidade genética em agentes da paracoccidioidomicose
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2015-06-30) Roberto, Thiago Nunes [UNIFESP]; Camargo, Zoilo Pires de [UNIFESP]; Rodrigues, Anderson Messias [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/4150370898980718; http://lattes.cnpq.br/0632912481397728; http://lattes.cnpq.br/4906645347015121; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    A paracoccidioidomicose (PCM) é uma infecção fúngica sistêmica causada por fungos termo-dimórficos pertencentes ao gênero Paracoccidioides e com grande prevalência na América Latina. O agente etiológico da PCM é formado por um complexo de diferentes espécies crípticas que, por sua vez, dividem-se em duas espécies distintas: P. brasiliensis (com três espécies crípticas ? S1, PS2 e PS3) e P.lutzii. Contudo, estudos morfológicos de diferentes isolados revelaram que entre os diferentes grupos genéticos não há uma variação significativa no formato das células, ou seja, essa ferramenta não é suficiente para discriminar as espécies crípticas. Assim sendo, objetivamos genotipar e analisar a diversidade genética de diferentes isolados de Paracoccidioides spp. por meio de novas técnicas moleculares. Neste estudo, 165 isolados clínicos e ambientais oriundos de diferentes regiões geográficas foram genotipados por TUB1-RFLP. Após a padronização do experimento in vitro, observamos que dentre o total de cepas analisadas, 56% (92) obteve o perfil de restrição para a espécie críptica S1; 13% (22) obtiveram o perfil para a espécie PS2; 9% (14) apresentaram o perfil de digestão para a espécie PS3 e 22% (37) dos isolados foram genotipados como pertencentes à espécie P. lutzii. Além disso, os experimentos de AFLP in vitro revelaram variabilidade genética entre os mesmos isolados caracterizados por TUB1-RFLP, apesar disso, observamos uma correlação entre os diferentes grupos genéticos, isto é, diferentes clados foram formados e os isolados foram agrupados de acordo com as suas respectivas espécies filogenéticas (corroborando os resultados da genotipagem). Ainda, verificamos principalmente que a espécie S1 é a mais dispersa entre os países da América Latina; a espécie críptica PS3 é formada em sua maioria por isolados da Colômbia, contudo, há isolados provenintes do Brasil, Venezuela e Uruguai; e a espécie P. lutzii é econtrada, principalmente, na região centro-oeste do Brasil. Em geral, nosso estudo apresentou duas distintas ferramentas moleculares com capacidade de caracterizar os isolados de Paracoccidioides spp., que servirão de subsídios para novas pesquisas para o conhecimento da doença.
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    Caracterização imunológica e molecular do antígeno gp43 de Paracoccidioidews brasiliensis expresso em Pichia pastoris
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2007) Vallejo, Milene Carmes [UNIFESP]; Puccia, Rosana [UNIFESP]
    Este trabalho mostra uma caracterização imunodiagnóstica e molecular preliminar de 3 isoformas recombinantes de gp43, que é um antígeno majoritário de Paracoccidioides brasiliensis. As glicoproteínas recombinantes foram previamente expressas em sobrenadantes de Pichia pastoris, na forma solúvel e majoritária, pela Dra. Kátia C. Carvalho durante seu doutorado em nosso laboratório...(au).