Navegando por Palavras-chave "Microscopia confocal"
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- ItemAcesso aberto (Open Access)Avaliação da ceratoplastia lamelar anterior profunda em pacientes com ceratocone(Conselho Brasileiro de Oftalmologia, 2009-08-01) Macedo, Jarbas Pereira de [UNIFESP]; Forseto, Adriana dos Santos [UNIFESP]; Allemann, Norma [UNIFESP]; Sousa, Luciene Barbosa de; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP); Eye Clinic Day Hospital; Hospital Oftalmológico de SorocabaPURPOSE: To evaluate the efficacy, complications and confocal microscopy corneal features of deep anterior lamellar keratoplasty using the air dissection technique in keratoconus. METHODS: Seventeen eyes with advanced keratoconus were submitted to this technique. Postoperative visual acuity and complication rate were analyzed. The thicknesses of full cornea tissue, host bed and donor button were measured, donor-host interface was also evaluated using confocal microscopy. RESULTS: Best-spectacle corrected visual acuity was 0.5 or better in 50% of the eyes. Complications occurred in five of seventeen patients (29.41%). Confocal microscopy demonstrated in four eyes the presence of hiperreflective structures at the interface, suggesting deposits and striae. Average corneal pachymetry, donor button and host bed thicknesses were respectively 609.00 ± 77.55 µm, 516.55 ± 43.65 µm and 92.50 ± 60.10 µm. CONCLUSIONS: Although technically challenging with the risk of intraoperative Descemet's membrane perforation, deep anterior lamellar keratoplasty with air dissection technique presents as an option for keratoconus treatment. Confocal microscopy demonstrated to be a useful method not only for the pachymetry measurement but also for the evaluation of interface by observing the absence of opacities in most of the cases.
- ItemAcesso aberto (Open Access)Avaliação in vitro da segurança e permeação de formulação tópica contendo cafeína e bubbles estimuladas pelo ultrassom(Universidade Federal de São Paulo, 2019) Fiore, Carolina Andrea Leiva Dalsin [UNIFESP]; Lopes, Patrícia Santos [UNIFESP]; Silva, Vânia Rodrigues Leite e [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/0737387413540260; http://lattes.cnpq.br/7939687315116927; http://lattes.cnpq.br/6056142448848668O desenvolvimento tecnológico de sistemas de liberação com o objetivo de aumentar e controlar a entrega de substâncias ativas apresenta constante evolução. As bubbles são sistemas de liberação que contêm gás e possuem características interessantes de entrega. Um grande diferencial das bubbles com relação às demais nanopartículas já existentes é que o gás contido nelas pode proporcionar uma função de direcionamento e liberação controlados pelo ultrassom. Existem estudos demonstrando sua eficiência na entrega de fármacos e gases terapêuticos, mas são escassos os estudos discorrendo sobre a aplicação por via tópica ou com finalidade cosmética. A escolha criteriosa de todos os componentes de uma formulação incluindo suas concentrações adequadas é muito importante no desenvolvimento de uma preparação cosmética eficiente e segura e, para tal, os ensaios específicos são necessários e exigidos pela legislação. O objetivo deste trabalho foi avaliar a segurança da aplicação de cafeína e bubbles, isoladas e combinadas, estimuladas e não estimuladas pelo ultrassom, utilizando métodos in vitro. Com isso, foram realizados ensaios de viabilidade celular utilizando linhagens Balb/c 3T3 clone A31 e HaCat, fototoxicidade utilizando linhagens Balb/c 3T3 clone A31 e genotoxicidade utilizando linhagens CHO-K1, baseados nos protocolos correspondentes da OECD. A IC50 obtidas em culturas celulares de Balb 3T3 clone 31 e HaCat expostas a cafeína foi de 2,6 e 0,4 mg/mL respectivamente, e quando expostas às bubbles não apresentaram toxicidade nas concentrações testadas. Na avaliação da fototoxicidade, a cafeína e as bubbles não apresentaram PIF (Photo Irradiation Fator) maior que 1 (um), portanto, foram consideradas não fototóxicas. Em relação ao ensaio do micronúcleo in vitro na linhagem CHO-K1, a cafeína e as bubbles não foram potencialmente genotóxicos nas concentrações avaliadas. Os resultados foram considerados promissores e demonstram a segurança da aplicação da cafeína e das bubbles nas linhagens avaliadas, sendo um grande motivador para a continuidade dos estudos in vivo.
- ItemAcesso aberto (Open Access)Confocal fluorescence microscopy: a powerful tool in the study of Chagas' disease(Sociedade Brasileira de Medicina Tropical - SBMT, 2000-02-01) Mortara, Renato Arruda [UNIFESP]; Silva, Solange Da [UNIFESP]; Taniwaki, Noemi Nosomi [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP); Instituto Adolfo Lutz Seção de Microscopia EletrônicaConfocal scanning fluorescence microscopy has become widely used in cell biology and pathology. In conjunction with monoclonal antibodies it may turn out to be a powerful diagnostic tool that also enables detailed studies of tissue forms of Trypanosoma cruzi.
- ItemSomente MetadadadosEstudo morfológico da glândula submandibular de Gerbil (Meriones unguiculatus) e sua microvascularização: observações aos microscópios de luz e eletrônico de varredura(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 1999) Bazan, Emmanuel [UNIFESP]; Watanabe, Ii-sei [UNIFESP]
- ItemAcesso aberto (Open Access)Impression cytology and in vivo confocal microscopy in corneas with total limbal stem cell deficiency(Conselho Brasileiro de Oftalmologia, 2013-10-01) Araújo, Aline Lütz de [UNIFESP]; Ricardo, José Reinaldo da Silva [UNIFESP]; Sakai, Vivian Naomi [UNIFESP]; Barros, Jeison de Nadai [UNIFESP]; Gomes, José Álvaro Pereira [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)PURPOSES: To describe corneal changes seen on in vivo confocal microscopy in patients with total limbal stem cell deficiency and to correlate them with cytological findings. METHODS: A prospective case series including 13 eyes (8 patients) with total limbal deficiency was carried out. Stem cell deficiency was diagnosed clinically and by corneal impression cytology. Confocal images of the central cornea were taken with the Heidelberg Retina Tomograph II, Rostock Corneal Module (Heidelberg Engineering, Heidelberg, Germany). RESULTS: Impression cytology of the cornea revealed conjunctival epithelial cells and goblet cells in all cases. In vivo confocal microscopy showed disruption of normal layers of the corneal epithelium in all eyes. Confocal images showed cells with characteristics of conjunctival epithelium at the cornea in 76.9% of the total. These findings on confocal microscopy were compatible to limbal stem cell deficiency. Additionally, goblet cells, squamous metaplasia, inflammatory cells and dendritic cells were observed. The sub-basal nerve plexus was not identified in any of the corneas. Corneal neovessels were observed at the epithelium and stroma. All cases showed diffuse hyper-reflective images of the stroma corresponding to opacity of the tissue. CONCLUSIONS: Limbal stem cell deficiency had been confirmed by impression cytology in all cases, and 76.9% of the cases could also be diagnosed by in vivo confocal microscopy through the conjunctival epithelial cell visualization on the corneal surface. Frequent confocal microscopy findings were abnormal cells at the cornea (conjunctival epithelial, goblet and inflammatory cells), corneal neovessels and diffuse hyper-reflection of the stroma.
- ItemAcesso aberto (Open Access)Imunolocalização de (glico)lipídeos de amastigotas de Leishmania (Leishmania) amazonensis e em macrófagos infectados(Universidade Federal de São Paulo, 2023-10-30) Nascimento, Paloma Angelin [UNIFESP]; Straus, Anita Hilda [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/5581342220032436; http://lattes.cnpq.br/7420435798099223Visando melhor compreender o papel de glicoconjugados na patogenia da leishmaniose cutânea, foi avaliada por microscopia confocal a reatividade de anticorpos monoclonais (mAbs) em infecções de culturas de macrófagos derivados de medula óssea de camundongos BALB/c, com L. (L.) amazonensis. Foram avaliadas infecções com formas amastigotas isoladas de lesão de hamster e “amastigotas-like”, obtidas de culturas de promastigotas em meio acídico mantidas por 48h a 35˚C. As formas “amastigotas-like” mostraram ser altamente infectivas “in vitro” quando comparadas com as formas promastigotas. Por microscopia eletrônica de varredura verificou-se que a superfície dos amastigotas isolados de lesão apresentam alta densidade de corpos multivesiculares, como descrito para as formas “amastigota-like”, distinguindo-se da superfície de promastigotas, o que poderia contribuir para a maior infectividade dessas formas. Infecções de 4h foram avaliadas por imunofluorescência indireta, utilizando-se mAbs direcionados contra a porção glicana de compostos lipídicos, tais como: o lipofosfoglicano, reconhecido pelo mAb VST-1; glicosilinositolfosfolipídeos reconhecidos pelo mAb LST-2, ambos antígenos expressos preferencialmente em formas promastigotas; glicoesfingolipídeos expressos exclusivamente em formas amastigotas de L. (L.) amazonensis e reconhecidos pelos mAbs ST-3 e ST-5. Foi demonstrado que após a infecção forte marcação com o mAb VST-1 é detectada em macrófagos infectados com formas “amastigotas-like” e promastigotas, sugerindo que moléculas contendo o epítopo reconhecido por este mAb são liberadas/secretadas pelo parasita. Por outro lado, para os mAbs ST-3 e ST-5, a marcação é restrita à superfície dos amastigotas isolados de lesão. Os resultados dessa dissertação sugerem que essas três classes de glicoconjugados avaliadas, estão envolvidas em mecanismos distintos da modulação de macrófagos durante a infecção. Os resultados abrem novas perspectivas para a melhor compreensão do papel desses glicoconjugados na infecção pela L. (L.) amazonensis, poderá contribuir para o desenvolvimento de novas estratégias de controle da leishmaniose causada por esse parasita.
- ItemSomente MetadadadosMarcação de glicosamiglicanos para o estudo de interação célula-matriz(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2003) Boucas, Rodrigo Ippolito [UNIFESP]; Nader, Helena Bonciani [UNIFESP]Glicosaminoglicanos possuem um importante papel em diversos processos biologicos, devido sua interacao com um grande numero de moleculas celulares. Para analise da ligacao dos GAGs com diferentes tipos celulares, heparina (HEP), heparina de baixo peso molecular (LMWH), heparam sulfato (HS), condroitim 4-sulfato (C4S), condroitim 6-sulfato (C6S) e dermatam sulfato (DS) foram conjugados com biotina. A conjugacao com biotina permite estudar a interacao do GAG e sua distribuicao nas celulas atraves da revelacao por estreptavidina por marcadores como peroxidase, assim como componentes fluorescentes. A presenca de biotina em cada glicosaminoglicano (GAG) foi avaliada por mapeamento em UM. e detectada por ensaio de blotting. Diversos estudos foram realizados com estes GAGs biotinilados para determinar as alteracoes estruturais causadas pelo processo de biotinilacao. A ligacao destes polimeros biotinilados foi investigada em celulas endoteliais e musculares lisas de aorta de coelho em cultura. Nos ensaios de cinetica de ligacao, os GAGS biotinilados mostraram uma curva dose dependente. A intensidade da ligacao em ambas linhagens celulares foi variavel e de acordo com a seguinte sequencia: HEP> HS> LMWH> DS. Curiosamente, C4S e C6S nao exibiram ligacao em ambas linhagens celulares. Resultados similares foram observados em microscopia de fluorescencia mostrando a ligacao de todos estes GAGs biotinilados somente na matriz extracelular. Estes resultados sugerem que estes marcadores podem ser usados para o entendimento das interacoes celula-matriz
- ItemAcesso aberto (Open Access)Microscopia confocal in vivo no diagnóstico de ceratite fúngica: relato de caso(Conselho Brasileiro de Oftalmologia, 2006-06-01) Victor, Gustavo; Alves, Milton Ruiz; Nosé, Walton [UNIFESP]; Universidade de São Paulo (USP); Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP); Universidade Metropolitana de Santos Departamento de OftalmologiaThe authors describe a case of fungal keratitis that the in vivo confocal microscopy helped in the diagnosis and follow-up. Confocal microscopy was done in a patient's ulcer that did not improve with several topical medicines. Corneal scrapings were obtained and culture results were without conclusion. We observed hyphae and infectious collections on confocal microscopy. New corneal culture showed Fusarium sp ten days after confocal diagnosis.
- ItemAcesso aberto (Open Access)Microscopia confocal in vivo nos depósitos corneanos por amiodarona(Conselho Brasileiro de Oftalmologia, 2007-02-01) Victor, Gustavo; Alves, Milton Ruiz; Nosé, Walton [UNIFESP]; Universidade de São Paulo (USP); Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP); Universidade Metropolitana de SantosPURPOSE: To describe in vivo confocal microscopy findings in patients with different stages of amiodarone-induced keratopathy, and correlate biomicroscopy stages with confocal stages. METHODS: Twenty eyes of 10 patients (6 men and 4 women), who receive treatment with amiodarone were selected for the study with confocal microscopy (MC). RESULTS: The average age was 58 ± 6.2 years (50-66 years) and time of use of the drug was 6 ± 3.2 years (2-11 years). All patients have best correct visual acuity ³ 20/40. There were two patients in stage 1, 4 patients in stage 2 and 4 in stage 3 of induced keratopathy. All corneas presented brilliant intracellular inclusions with high reflectivity in the basal epithelium layer. Patients in stage 2 and 3 have all corneal layers affected. There are thinning and increase of tortuosity of corneal nerves in patients in stage 2 and 3. The endothelial count was 2,524 ± 150,3 cell/mm². CONCLUSION: The basal epithelium was most affected in any of the keratopathy stages. In stage 1 patients only the superficial and basal epithelium are affected, while patients in stages 2 and 3 have all corneal layers affected. With the advance of keratophaty the corneal nerves became thinner and tortuous.
- ItemAcesso aberto (Open Access)Utilização da microscopia confocal para determinação de superóxido mediante estímulo com luteolina em células endoteliais(Universidade Federal de São Paulo, 2019-11-01) Cruz, Yan Milen Coelho [UNIFESP]; Fernandes, Liliam [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/2515147908021339; http://lattes.cnpq.br/0855402909928836Introdução: O estresse oxidativo endotelial afeta todo o sistema circulatório, sendo marcado por diversos agentes reativos denominados espécies reativas de oxigênio. A luteolina é um flavonóide com efeito antioxidante, mas seus efeitos sobre as células endoteliais são pouco conhecidos. O presente trabalho utilizou a sonda dihidroetidina (DHE) em microscopia confocal para investigar a geração de superóxido (O2•-) em células endoteliais de ratos. Foram analisados os efeitos de luteolina isolada ou em associação à Angiotensina II (Ang II), um peptídeo hipertensor relacionado ao estresse oxidativo vascular. Métodos: Células endoteliais cultivadas da veia cava de rato foram previamente plaqueadas em lamínulas, pré-tratadas com a sonda fluorescente DHE [10 μM] por 30 minutos e expostas à luteolina [10, 20 e 50 μM] por 10 minutos, em presença ou ausência de Ang II [1μM]. Controles positivo e negativo foram feitos pelo tratamento das células com meio de cultura contendo alto nível de glicose (HG, 25 mM) ou tempol (300 μM), respectivamente. As células foram fixadas e as lamínulas foram analisadas em um microscópio confocal. Os comprimentos de onda utilizados foram 490 nm excitação e 590 nm emissão, e as configurações do sistema de aquisição de imagem se mantiveram padronizadas para todas as capturas. A intensidade da fluorescência foi quantificada célula a célula por densitometria, empregando-se ferramentas do software ImageJ para delimitação automática do contorno celular individualmente. Resultados: As imagens obtidas no microscópio confocal apresentaram alto grau de qualidade e foram analisadas com sucesso. A identificação do estresse oxidativo através da sonda DHE foi comprovada nas células incubadas com meio HG. Houve redução significativa da geração de O2•- após os tratamentos com luteolina 10 μM, 20 μM e 50 μM isolada e em associação com Ang II 1 μM em comparação às células não tratadas. (* P < .05) Conclusão: O ensaio de microscopia confocal mostrou que a luteolina reduz a geração de O2•- pelas células endoteliais em relação ao basal e na presença de Ang II. Esses resultados sugerem que o efeito antioxidante da luteolina no endotélio deve ser mais profundamente avaliado para melhor compreensão dos mecanismos de interação com Ang II. Esses dados também mostram consistência na metodologia empregada para utilização da sonda DHE como ferramenta para quantificação relativa de O2•- em culturas celulares.