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    Adesão Celular e Expressão de Glicosaminoglicanos e Proteoglicanos, alfa-5 beta-1 integrina, fibronectina e receptor de estrógeno em cultura de células endoteliais de cordão umbilical humano
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2003) Dominato, Juliana Augusta Albieri [UNIFESP]; Dietrich, Carl Peter von [UNIFESP]
    A linhagem ECV304 foi estabelecida a partir da cultura primaria de celulas do cordao umbilical humano (HUVEC). Existem divergencias na literatura sobre a forma que levou a sua imortalizacao. Alguns autores afirmam que essa celula foi contaminada por uma linhagem celular de carcinoma de bexiga humano (T24/83), devido a presenca de fragmentos de DNA identicos entre as 2 linhagens. Outros trabalhos afirmam que as celulas ECV304 sao fruto de uma transformacao espontanea e rara, sofrida pelas celulas HUVEC. Frente as divergencias encontradas, o presente trabalho tem como objetivo o estudo comparativo da linhagem ECV304 com a linhagem de RAEC obtida de aorta de coelho (clone CIPs), objeto de trabalhos anteriores em nosso laboratorio, em relacao a: 1) expressao de glicosaminoglicanos (GAGs) e proteoglicanos (PGs); 2) expressao de hialuronam (HA); 3) expressao de integrinas; 4) presenca de marcadores caracteristicos para celulas endoteliais, como vimentina e receptor de estrogeno; 5) caracteristicas de adesao das celulas ECV304 utilizando como substrato, fibronectina e laminina, em diferentes concentracoes e, em diferentes tempos. As celulas ECV304 sintetizam, depositam na matriz extracelular (MEC) e superficie celular, e secretam para o meio de cultura heparam sulfato (HS) e condroitim sulfato (CS). Nao foi detectado dermatam sulfato (DS) nessas celulas. Resultados semelhantes foram obtidos para a linhagem de aorta de coelh4o. No entanto, o perfil de expressao desses compostos e distinto entre as 2 linhagens. CS corresponde a 60 por cento do total de GAGs na fracao celular e 45 por cento no meio condicionado da linhagem ECV304, contrastando com a linhagem RAEC onde CS corresponde, a 10 por cento e 20 por cento, respectivamente. Ambas linhagens sintetizam HA, e cerca de 80 por cento do total esta depositado na fracao celular. Celulas endoteliais expressam sindecam-4. A linhagem ECV304 expressa esse tipo de proteoglicano, como ja descrito para RAEC e outras celulas endoteliais de diferentes origens. 0 conteudo de a5(31 e distinto entre as 2 linhagens. A expressao da integrina e cerca de 2 vezes maior na linhagem ECV304. No entanto, nao existem diferencas na proporcao das subunidades, ou seja, al corresponde a cerca de 65 por cento nas 2 linhagens. Por outro lado, a linhagem RAEC sintetiza cerca de 4 vezes mais fibronectina do que ECV304. A adesao a moleculas da MEC mostrou que as celulas ECV304 apresentam maior afinidade pela fibronectina e menor para laminina quando comparada com a linhagem RAEC. Esses dados estao de acordo com dados do teor de integrinas. 0 conteudo de compostos que interagem com glicosaminoglicanos esta diminuido na MEC da linhagem ECV304 quando comparado com RAEC, seja por estudos de microscopia confocal como por ensaios de ligacao. Os resultados tambem mostram que as celulas ECV304 sao positivas para marcadores de celulas endoteliais, evidenciado pelo uso de anticorpos especificos para vimentina e receptores de estrogenio. 0 conjunto de dados indica que a linhagem ECV304 e de origem endotelial
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    Alterações da expressão de genes de matriz extracelular e da familia TGFB nas lesões do manguito rotator
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2019-03-29) Figueiredo, Eduardo Antonio De [UNIFESP]; Cohen, Moises [UNIFESP]; Ejnisman, Benno; http://lattes.cnpq.br/1124807952912223; http://lattes.cnpq.br/6174355233304675; http://lattes.cnpq.br/2837820077224310; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Introduction: Lack of synthesis of extracellular matrix compounds may contribute to degeneration of the tendons. Objective: we aimed to evaluate the expression of extracellular matrix and TGFB family members in ruptured and non-ruptured tendons of the rotator cuff, as well as the effect of clinical factors on gene expression in tendon samples, and the relationship between histological findings and altered gene expression. Methods: Injured and non-injured supraspinatus tendon samples and subscapular non-injured tendon samples were collected from 38 patients with rotator cuff tears. Noninjured supraspinatus tendons were obtained from eight controls. Specimens were used for histological evaluation, quantification of collagen fibers, and mRNA and protein expression analyses. Results: Increased COL1A1, COL1A2, COL3A1, COL5A1, FN1, TNC, and TGFBR1 mRNA expression was observed in the tear samples (p < 0.05). Duration of symptoms was correlated with the levels of collagen type I/III fibers (p = 0.032; p = 0.0447) and FN1 immunostaining (p = 0.031; p = 0.417). Smoking was associated with increased frequency of microcysts, myxoid degeneration, and COL5A1, FN1, TNC, and TGFB1 mRNA expression (p < 0.05). FN1 immunostaining was correlated with the number of years of smoking (p=0.048; p=0.384). Lower levels of collagen type I/III fibers were detected in samples with fissures (p=0.046). High frequency of microcysts was associated with increased COL5A1, FN1, and TNC expression (p < 0.05, for all comparisons). Neovascularization was associated with reduced FN1 (p=0.035) and TGFBR1 expression (p=0.034). Conclusion: Our findings show differential expression of matrix extracellular genes and TGFB family members in the degeneration process involved in rotator cuff tears. These molecular alterations are influenced by clinical factors.
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    Acesso aberto (Open Access)
    Análise de expressões gênicas da matriz metaloproteinase 3 e 10 no tecido endometrial antes e após embolização arterial de miomas uterinos
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2019-06-11) Chazan, Franco Loeb [UNIFESP]; Motta, Eduardo Leme Alves Da [UNIFESP]; Gomes, Mariano Tamura Vieira [UNIFESP]; Castro, Rodrigo de Aquino [UNIFESP]; Bonetti, Tatiana [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/6319329004052486; http://lattes.cnpq.br/6590913930590292; http://lattes.cnpq.br/4844851515888706; http://lattes.cnpq.br/7384818983129643; http://lattes.cnpq.br/7424808199551656; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Introduction: Uterine Artery Embolization (UAE), also referred in the medical literature as Uterine Fibroid Embolization (UFE), is a well established therapeutic method for uterine fibroids. However, since there are some concerns about the endometrial integrity after this procedure, there have been several reports questioning this treatment for patients Who suffer from infertility or desire a future pregnancy. These studies believe that UAE could trigger modifications on the molecular biology of the endometrium, such as the gene expression of metalloproteinases during the luteal phase of the menstrual cycle, which analysis needs further investigation. Material and Methods: Twenty women with uterine fibroids undertreatment in the gynecology office of the University of Sao Paulo werere cruited for UAE. Researchers requested magnetic resonance imaging (MRI) and obtained uterine tissue samples from all patients. Two samples were collected from each patient, both between the 20th and the 24th Day of their menstrual cycle, one before the uterine artery embolization and another six months after the procedure. It was performed the extraction of the ribonucleicacid (RNA), the synthesis of the complementary DNA (cDNA) and the real time polymerase chain reaction. The comparative Cq method, also known as 2-ΔΔCT, was used for data analysis, used to calculate the relative quantities (RQ) of gene expression between the samples. Values of p<0.05 were considered statistically significant. Results: Comparing the samples collected before and after the embolization, it was observed a reduction of 9.52 times in the MMP3 expression (p:0,007) and 2,59 times in the MMP10 expression (p:0,22). Conclusions: It was observed a statistically significant reduction of MMP3 gene expression after embolization. No statistically significant variation of MMP 10 gene expression was demonstrated in this study.
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    Analise dos glicosaminoglicanos em tumores colorretais
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2006) Marolla, Ana Paula Cleto [UNIFESP]
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    Avaliacao das caracteristicas biologicas e biomecanicas da matriz descelularizada de glande humana
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2012) Egydio, Fernanda de Mattos [UNIFESP]
    Objetivo: Avaliar a integracao de celulas-tronco mesenquimais nao autologas a matrizes descelularizadas de glande humana apos observar se o processo de descelularizacao da glande altera suas caracteristicas biologicas e biomecanicas. Metodos: Amostras de matrizes de glande de penis de doadores de tecidos para transplante foram submetidas a um processo de descelularizacao utilizando solucao de Triton X-100 a 1% com hidroxido de amonio a 0,1% a 4°C, para remocao dos fosfolipidios da membrana plasmatica. Fragmentos da glande descelularizada foram fixados por imersao em formol tamponado a 10% e embebidos em parafina. Foram realizados cortes de 5μm, corados com Hematoxilina-Eosina (HE), e analisados para comprovar a completa acelularidade da matriz descelularizada. A matriz extracelular da glande foi avaliada apos o processo de descelularizacao, analisando a preservacao das fibras colagenas (colageno tipo I) e do arcabouco das fibras musculares, pela coloracao de Tricromico de Masson, e do colageno tipo III e das fibras elasticas, pela coloracao de Verhoff-Van Gieson. As matrizes foram cortadas sob camara de fluxo laminar em fragmentos medindo 0,25 cm2 para semeadura de celulas-tronco mesenquimais, e 0,75 cm2 para realizacao dos testes biomecanicos. Os testes de citotoxicidade foram realizados para detectar o potencial de producao de efeitos letais as celulas 3T3. Utilizouse o teste por contato direto em que uma determinada quantidade do material e colocada diretamente sobre uma monocamada subconfluente de fibroblastos de derme de camundongo 3T3, previamente semeadas em placas de 96 pocos, na densidade de 1x103 celulas por poco e recobertas por meio de cultura. Para a avaliacao da biocompatibilidade das matrizes descelularizadas de glande foram realizados os seguintes testes: Atividade Metabolica da Mitocondria, Atividade Lisossomal, e quantificacao do material genetico. Antes de iniciar os testes, as placas de 96 pocos foram incubadas durante 24 horas com meio de cultura DMEM suplementado a 1% de SBF. Foram realizados testes de biocompatibilidade para avaliacao das interacoes citotoxicas e nao citotoxicas das matrizes com as celulas 3T3 nos intervalos de tempo de 24, 48 e 72 horas. As matrizes de glande foram semeadas com celulas-tronco mesenquimais obtidas de ratos Wistar, e mantidas em cultura durante 7, 14 e 28 dias. Apos os periodos de cultivo as matrizes de glande semeadas foram avaliadas em relacao a integracao e viabilidade das celulas-tronco mesenquimais as matrizes de glande. Testes biomecanicos no tecido nativo, matriz descelularizada e celularizada com celulastronco mesenquimais foram realizados para a caracterizacao de suas propriedades biomecanicas. Resultados: Houve a preservacao da arquitetura tecidual da matriz de glande descelularizada, assim como a manutencao de suas propriedades biologicas e biomecanicas. As analises das matrizes de glande semeadas com celulas-tronco mesenquimais da medula ossea de ratos revelaram a integracao destas celulas as matrizes, e sua viabilidade oin vitroo por duas semanas. Conclusao: Matrizes extracelulares obtidas de glande de cadaveres humanos foram capazes de manter suas propriedades biologicas e biomecanicas, e quando semeadas com celulas-tronco mesenquimais obtidas da medula ossea de ratos mantiveram sua vitalidade oin vitroo durante 14 dias
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    Avaliação de alterações da matriz extracelular em cultura de células após laserterapia
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2013) Almeida, Maria Carolina Leal [UNIFESP]; Pinhal, Maria Aparecida da Silva [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/7511274763693292; http://lattes.cnpq.br/1167343681921648
    A pele corresponde ao orgao de maior exposicao a radiacao por diferentes tipos de luz. Alguns estudos demonstram o efeito de terapias de luz laser de baixa intensidade em determinadas afeccoes da pele como manchas, processos inflamatorios e em diferentes tipos de tumores. O laser de baixa potencia tem sido utilizado na pratica clinica ha aproximadamente 20 anos. A laserterapia quando utilizada em tecidos e celulas provoca efeitos fotoquimicos, fotofisicos e/ou fotobiologicos, sem a producao de calor, estimulando a proliferacao celular, ativacao de linfocitos e mastocitos, promove aumento na geracao ATP entre outros efeitos. Poucos artigos relacionam a laserterapia com as alteracoes de componentes da matriz extracelular em cultura celulares. Portanto, o presente estudo tem por objetivo investigar as possiveis alteracoes de componentes da matriz extracelular em celulas HaCaT (queratinocitos humanos) e A431 (carcinoma epidermoide humano), que representam dois tipos distintos de linhagens celulares da pele. Dentre os componentes da matriz extracelular foram analisados glicosaminoglicanos sulfatados (GAG), acido hialuronico, enzimas que participam da degradacao de heparam sulfato (heparanase) e enzimas envolvidas na degradacao e biossintese de acido hialuronico (hialuronidases e acido hialuronico sintases), respectivamente. As alteracoes dos componentes da matriz extracelular foram avaliados comparando-se celulas submetidas ao tratamento com laserterapia de baixa potencia e celulas nao tratadas (controle). A viabilidade celular de celulas HaCaT e A431 tambem foi avaliada. Os GAG sulfatados foram analisados por marcacao metabolica utilizando sulfato radioativo, degradacao enzimatica e eletroforese. O acido hialuronico foi quantificado por metodo de ELISA indireto. Ensaios de PCR em tempo real foram realizados para analise da expressao das enzimas HAS (acido hialuronico sintases) HYAL (Hialuronidases) e HPSE-1 (Heparanase). Os resultados obtidos no demonstraram diminuicao significativa na viabilidade celular em ambas as linhagens (HaCaT e A431), apos laserterapia. Houve alteracao no perfil de GAG apos tratamento com luz no comprimento de onda associado (470 e 660 nm), sendo que as celulas HaCaT apresentaram aumento significativo de heparam sulfato e condroitim sulfato. O acido hialuronico aumentou na fracao celular, apos laserterapia em celulas HaCaT, enquanto, nao foi observado alteracao nas celulas A431. A analise por qPCR demonstrou diminuicao da expressao em celulas HaCaT e das celulas A431. Os resultados obtidos em nosso estudo demonstraram que o tratamento com laserterapia de baixa intensidade altera componentes da matriz extracelular e tais alteracoes diferem com relacao ao tipo celular (celulas nao neoplasicas ou celulas de carcinoma epidermoide humano), e o comprimento de onda
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    Avaliacao morfologica de fibrocondrocitos em cultura e deteccao bioquimica dos proteoglicanos sintetizados
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 1996) Figueiredo, Cristina Adelaide [UNIFESP]
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    Biologia vascular: síntese e remodelamento de moléculas da matriz extracelular e de superfície de células endoteliais em artéria carótida de camundongos ApoE-/-.
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2021) Russo, Thatiane Amaral [UNIFESP]; Regatieri, Juliana Luporini Dreyfuss [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo
    The endothelium is composed of a monolayer of cells and their basemant membrane, which line the inside of the blood vessels and are responsible for maintaining vascular homeostasis. Under physiological conditions, it maintains vascular tone, laminar blood flow, coagulation process, cell proliferation and migration and control of the inflammatory response. Endothelial cells (ECs) respond to mechanical forces such as cell stretching and shear stress, influencing cellular behavior such as: morphology, migration, adhesion and angiogenesis, where many extracellular matrix (ECM) and cell surface components play a fundamental role. Endothelial dysfunction can cause cardiovascular diseases, such as hypertension, thrombosis and atherosclerosis, and these diseases can be modulated by the mechanical forces applied to the artery wall. This study aimed to investigate the remodeling of ECM and molecules associated with this remodeling in ECs submitted in vitro to two mechanical stimuli, cell stretching and shear stress, both in physiological and pathological conditions. After the stimuli, tests of cell behavior (adhesion, cell migration and formation of capillary structures), analysis of the biosynthesis of glycosaminoglycans by incorporating 35S, immunofluorescence, qPCR and qPCR array were performed. Both mechanical forces induced changes the ECs morphology, cell adhesion, migration and formation of capillary structures in culture were modulated positively in physiological conditions and negatively in pathological situations. The pathological mechanical forces applied to ECs induced a higher gene expression of syndecan-4, perlecan, versican, decorin, fibronectin, collagen III α1, connexin-43, VEGFA, TGF-β1 and TGF-β3. In addition, in vivo assays with ApoE-/- deficient mice were used as an animal model to study ECM remodeling in atherosclerotic disease. For this purpose the carotids of ApoE-/- mice were analyzed by high resolution ultrasound, demonstrating that there was an increase in the internal diameter and internal thickness (IMT) of these vessels, characterizing an artery dysfunction. Then these carotids were removed and subjected to analysis of gene expression by qPCR and qPCR array, immunofluorescence and histopathology. It was possible to observe a higher gene expression and a higher fluorescence intensity of syndecan-4, perlecan, versican and connexin-43 in carotids of ApoE-/- mice when compared to wild type control mice. The results of the qPCR array demonstrated higher expression of adhesion molecules, laminins and integrins and genes related to ECM proteolysis in carotids of ApoE-/- mice when compared to wild type control mice. This study helps to understand the remodeling and associated molecules of the ECM in in vitro and in vivo models of cardiovascular diseases, and how the endothelium can be affected by the mechanical forces of cell stretching and shear stress.
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    Celulas B-1: expressao de integrinas e interacao com matriz extracelular e celulas de melanoma
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2003) Ribeiro, Carolina Hager [UNIFESP]
    As integrinas sao uma familia de glicoproteinas de membrana celular que atuam como ligantes para componentes da matriz extracelular e moleculas de membrana citoplasmatica, mediando, desse modo, interacoes celula-matriz e celula-celula. Atualmente existem 25 receptores do tipo integrina descritos, os quais sao formados por uma subunidade a nao-covalentemente associada a uma subunidade b. 0 sitio de reconhecimento para muitas das integrinas que se ligam a matriz e o tripeptideo Arg-GlyAsp (RGD). As celulas B-1 sao uma subpopulacao de linfocitos B localizada principalmente nas cavidades peritoneal e pleural. Essas celulas sao capazes de migrar da cavidade peritoneal para sitio inflamatorio nao-especifico. Recentemente observou-se que as celulas B-1 podem modular o crescimento e potencial metastatico de celulas de melanoma murino. Este trabalho visou investigar a expressao de subunidades de integrinas em celulas B-1 peritoneais de camundongos normais da linhagem A/J. Interacoes in vitro entre essas celulas e as proteinas de matriz fibronectina (FN), laminina (LN) e colageno tipo 1 (COL), assim como o efeito inibitorio do peptideo RGD sobre a adesao das celulas B-1 a matriz, tambem foram examinados. Adicionalmente, foi investigado o perfil de expressao de integrinas em celulas B-1 co-cultivadas com celulas de melanoma murino in vitro. A analise por citometria de fluxo revelou que as celulas B-1 expressam as subunidades a6, am e b1, e em niveis baixos as subunidades a5, av e b3. Ensaios de adesao demonstraram que essas celulas sao capazes de aderir a FN, LN e COL, embora nao apresentem aumento da expressao de integrinas ou alteracoes no padrao de adesao a matriz sob estimulo com PMA ou LPS. A adesao das celulas a matriz nao foi inibida pelo tratamento com RGD. 0 contato entre celulas B-1 e celulas de melanoma murino in vitro resultou em aumento da expressao, por aquelas, das subunidades a5, av e b1 e diminuicao da expressao de as. Alem disso, foi observado que os linfocitos B-1 de animais inoculados intraperitonealmente com celulas de melanoma apresentam maior capacidade de adesao a laminina e ao colageno. Estes resultados...(au)
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    Acesso aberto (Open Access)
    Correlation between the immunohistochemical expressions of MMP-1, MMP-7 and VEGF and prognostic factors in colorectal adenocarcinoma
    (Sociedade Brasileira para o Desenvolvimento da Pesquisa em Cirurgia, 2009-08-01) Gomes, Edmundo Guilherme De Almeida; Jucá, Mário Jorge; Menezes, Hunaldo Lima De; Nunes, Benício Luiz Bulhões Barros Paula; Costa, Henrique; Lima, Flávio De Oliveira; Matos, Delcio [UNIFESP]; Federal University of Alagoas School of Medicine; Hospital Arthur Ramos General Surgery Unit; Hospital Santa Casa de Maceio Coloproctology Unit; University of Alagoas; Hospital Santa Casa de Avare Pathology Unit; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    PURPOSE: To analyze the expression of metalloproteinase-1, metalloproteinase-7 and vascular endothelial growth factor (VEGF) in colorectal adenocarcinoma, and to correlate these with the clinical-pathological prognostic factors. METHODS: Tumor tissue from 82 patients was fixed in formalin and embedded in paraffin blocks. These samples were analyzed by means of the streptavidin-biotin immunohistochemical method, using the tissue microarray technique. Marker positivity was evaluated using categorical scores that determined cutoff percentages of stained tumor cells. Protein tissue expression was correlated with the variables of degree of cell differentiation, staging, disease-free interval, recurrence, survival and specific mortality. The Fisher exact and Kaplan-Meier tests were used to assess associations between the markers and the study variables. The log-rank and Wilcoxon tests were used to assess the significance of differences between curves of disease-free interval and survival. RESULTS: All tumors were positive for metalloproteinase-1; 50 (61%) were positive and 32 (39%) were negative for metalloproteinase-7; and 60 (74.1%) were positive and 21 (25.9%) were negative for VEGF. Correlation of marker expression, both in groups and individually, did not show statistical significance in relation to the degree of cell differentiation, staging, disease-free interval, survival or specific mortality. Recurrence showed a statistically significant correlation with positive expression of the three markers, when analyzed as a group (p = 0.038). CONCLUSION: The associated expression of metalloproteinase-1, metalloproteinase-7 and VEGF in colorectal adenocarcinoma is related to the incidence of disease recurrence.
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    Desenvolvimento de ensaio para determinação sérica de laminina e avaliação do seu valor prognóstico em cânceres humanos
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 1990) Monteiro, Gladys Schechter [UNIFESP]
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    Acesso aberto (Open Access)
    Desenvolvimento e avaliação de scaffold oriundo de tendão descelularizado
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2021) Santos, Alex De Lima [UNIFESP]; Faloppa, Flavio [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo
    Introduction: The use of scaffolds has considerably advanced in recent years, mainly in soft tissue injuries with large damage to the original tissue. In a way to optimize the tissue-scaffold integration, the research of decellularized scaffold is growing. Objective: This paper aimed to produce and evaluate decellularized tendon scaffolds from biomechanical, microscopic, macroscopic, and in vivo perspectives in rabbits. Methods: Thirty-six tendons from adult New Zealand rabbits were used: 11 were used as controls, and 25 were decellularized (Scaffold). The groups were subjected to histological, biomechanical, and macroscopic analyses, and the scaffold was submitted to an additional in vivo evaluation. In this evaluation, we have used eight additional rabbits in the experimental model of a bilateral rotator cuff tear and insertion of the scaffold on one side and the contralateral used as a control. Results: The scaffold showed alteration in the architecture; we have noted it with the increment of intra/inter-fascicular distance, and no change in the parallelism of ECM. And a substantial loss of nuclear material, we have established it in the reduction and disorganization of remaining nuclear material. In the biomechanical analysis, no significant differences were found after analysing the ultimate tensile load, stiffness, and elongation at the ultimate tensile load. During the in vivo evaluation was noted progressive cell infiltration in the scaffold. Conclusion: The evaluated decellularization protocol made a tendon scaffold, maintained the most important biomechanical characteristics, and permitted progressive tissue integration, when it was used in an augmentation function.
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    Diferencas segmentares na matriz exta-celular da uretra esponjosa humana evidenciadas pela composicao de glicosaminoglicanos e colageno
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2001) Silva, Eloisio Alexsandro da [UNIFESP]
    Ainda que a uretra esponjosa tenha uma macro-estrutura uniforme, evidencias clinicas sugerem que diferencas moleculares estruturais possam existir ao longo da uretra esponjosa humana. A uretra esponjosa tem uma origem vascular e suas celulas podem expressar diferentes fenotipos, e a matriz extra-celular que elas sintetizam deveria refletir estas diferencas. Glicosaminoglicanos (GAGs) sao componentes da matriz extracelular e tem um papel fundamental na fisiologia normal e patologica de varios tecidos. Embora a concentracao total de colageno da uretra foi determinada, nos enfatizamos o estudo dos GAGs devido a ausencia de dados na literatura Amostras de uretra masculina foram obtidas de 15 cadaveres frescos, macroscopicamente normais com uma idade media de 25,4 anos. A uretra foi dividida em segmentos (glandar, peniano, e bulbar), que foram analizados separadamente. A concentracao total de GAG foi avaliada por um ensaio para acido hexuronico e expressa como p.g de acido hexuronico por mg de tecido seco, enquanto as proporcoes de GAGs sulfatados foram determinadas por eletroforese em gel de agarose. A concentracao de acido hialuronico foi determinada por cromatografia de troca ionica, e o colageno tecidual total foi estimado como seu conteudo em hidroxiprolina. A concentracao total de GAG foi heterogenea ao longo da uretra esponjosa (p < 0,001), e a media dos valores para a uretra glandar, peniana, e bulbar foram respectivamente 2,53 n 0,42, 2,11 n 0,47 e 1,47 n 0,4. O GAG predominante na uretra foi o acido hialuronico e a sua concentracao mais alta foi encontrada na uretra glandar (50,1 por cento n 3,7). O GAG sulfatado predominante na uretra masculina foi o dermatan sulfato, seguido pelo condroitin sulfato e heparan sulfato. A concentracao...(au)
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    Efeito da terapia estrogenica nos glicosaminoglicanos do parametrio, da cupula vaginal e da fascia peri-uretral de mulheres na pos-menopausa com prolapso uterino
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2007) Nunes, Jussara Maria Valentim Cavalcante [UNIFESP]
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    Estudo comparativo da expressão de glicosaminoglicanos, fibronectina e adesão celular em culturas de fibroblastos gengivais normais e de pacientes com fibromatose gengival hereditária. Efeito da Ciclosporina A
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2003) Dreyfuss, Juliana Luporini [UNIFESP]; Nader, Helena Bonciani [UNIFESP]
    Fibromatose gengival hereditaria (FGH) e fibromatose gengival induzida por ciclosporina sao hiperplasias caracterizadas por um aumento volumetrico da' gengiva. Doenca de origem fibrotica progressiva, benigna e nao-hemorragica, que pode envolver tanto a maxila quanto a mandibula (Tipton, 1997). Alguns estudos demonstram a sintese aumentada de componentes da matriz extracelular tais como fibronectina e colagenos (Shirasuna et al.,1988). Os glicosaminoglicanos (GAGs) constituem um dos principais componentes do tecido conjuntivo gengival. No', presente estudo, foi analisada a expressao dos glicosaminoglicanos por fibroblastos em cultura de pacientes portadores de FGH (membros da mesma familia), bem como fibroblastos de gengiva normal (GIM). Como o tratamento com a ciclosporina,' droga imunossupressora, induz fibromatose gengival, fibroblastos gengivais normais foram tratados em cultura com 200ng/mL de ciclosporina A (GNc) para avaliacao do padrao de expressao dos GAGs. Os glicosaminoglicanos sulfatados foram analisados na 4a e na 8' passagem, nos diferentes compartimentos celulares: meio de cultura, superficie celular e fracao celular (celula+matriz extracelular) atraves da marcacao metabolica com (35S]-sulfato de sodio (l50gCilmL) e posterior analise por eletroforese em gel de agarose. Os tipos de dissacarideos formados pela acao das enzimas condroitinases AC e ABC foram tambem determinados. O acido hialuronico' (AH) foi dosado atraves do metodo fluorimetrico ELISA-like. O dermatam sulfato' (DS), condroitim sulfato (CS), heparam sulfato (HS) e AH estao presentes em todos os compartimentos celulares em todos os fibroblastos estudados. Nao obstante, as, quantidades relativas e absolutas variam de acordo com o compartimento. Alem disso, os fibroblastos FGH e GNc demonstraram um padrao de distribuicao dos GAGs sulfatados diferente quando comparados a GN. Ocorre uma expressiva diminuicao da sintese de GAGs sulfatados, e um aumento de ate 6 vezes na sintesea(au)
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    Estudo da correlacao da expressao genica e proteica das metaloproteinases com os parametros clinicos e achados anatomopatologicos no cancer colo-retal
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2012) Silva, Sandra Regina Morini [UNIFESP]
    Objetivo: Analise da expressao genica e proteica das metaloproteinases 1, 2, 9, 11 e 16 e sua correlacao com dados clinicos e anatomo-patologicos do adenocarcinoma colo-retal. Metodos: Estudo retrospectivo de 114 pacientes com adenocarcinoma colo-retal tratados cirurgicamente, no periodo de 2006 a 2008 no Hospital de Cancer de Barretos. A avaliacao da expressao genica foi feita por RTPCR; e proteica por estudo imuno-histoquimico. A analise da expressao genica foi classificada em genes super-expressos e pouco expressos (fold change de de aproximadamente 2, p< 0,05) . A positividade dos marcadores no estudo imuno-histoquimico foi realizada atraves da analise semi-quantitativa. A leitura das laminas de TMA (Tissue Microarray) foi feita por 2 patologistas de forma independente. Resultados: As expressoes genicas validadas pelo estudo imuno-histoquimico foram as MMP-1 (p= 0,001 e fold change de 1,57) e MMP-2 (p= 0,01 e fold change de u1,84) quando correlacionadas com os tipos histologicos mucinoso e adenocarcinoma SOE , as MMP-9 (p= 0,01 e fold change de 1,13) e MMP-16 (p= 0,03 e fold change de 1,61) quando comparadas com os tipos histologicos viloso e adenocarcinoma SOE; a MMP-11 apresentou significancia estatistica em relacao ao genero masculino (p=0,04 e fold change de 1,65). Conclusao: As MMPs 1, 2, 9, 11 e 16 apresentaram expressao genica e proteica com significancia estatistica em pelo menos uma das variaveis clinico-patologica estudadas. Sendo assim, concluimos que essas MMPs apresentam potencial como fator prognostico do adenocarcinoma colo-retal
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    Estudo da laminina serica e de sua deposicao no figado de ratos com fibrose hepatica induzida por tetracloreto de carbono
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2000) Neves, Lindalva Batista [UNIFESP]
    Laminina serica tem sido correlacionada com hipertensao portal e capilarizacao dos sinusoides nas hepatopatias cronicas. Entretanto, pouco se conhece sobre sua dinamica nas doencas hepaticas. Neste trabalho, objetivou-se estudar niveis sericos e deposicao de laminina no tecido hepatico, correlaciona-la com graus de fibrose hepatica e hipertensao portal experimentalmente induzidas. 59 Ratos albinos Wistar foram mantidos como controles ou tratados com solucao 8 por cento de CCl4. Entre a 6 a e 16 a semana de experimento, 16 controles e 33 tratados COM CCl4 foram sacrificados, submetidos a cateterizacao da veia porta, medida da pressao portal em coluna liquida e coleta de sangue da veia porta, veia supra-hepatica e veia femoral. Dez ratos (quatro controles e seis tratados) foram submetidos a coleta de sangue da aorta abdominal, veia porta e veia supra-hepatica. Fragmentos de figado foram fixados em glutaraldeido 2 por cento para microscopia eletronica, congelados em nitrogenio liquido para imunohistoquimica e fixados em formol para microscopia optica. A fibrose hepatica foi classificada como fibrose perivenular, fibrose septal completa, incompleta e cirrose. Determinacao da concentracao de laminina circulante foi realizada pela tecnica de ensaio imunoenzimatico com anticorpo desenvolvido a partir de laminina isolada de tumor Engelbreth-Holm-Swarm, purificado em coluna de afinidade. O anticorpo foi tambem utilizado para imunohistoquimica, com anticorpo secundario biotinilado (titulacao 1/500). A microscopia eletronica mostrou alteracoes estruturais na fibrose septal e principalmente na cirrose, com substancia amorfa eletrondensa depositada no espaco de Disse e desaparecimento das fenestracoes sinusoidais. A pressao portal correlacionou-se com grau de fibrose hepatica (r = O,82; P < O,OO1; n=45) e seus niveis nos grupos fibrose septal (1O,8 + 1,2 cmH2O) e cirrose (l3,6 + 3,1 CmH2O) foram estatisticamente superiores aos grupos controle (7,9 + 1,5 cmH2O) e flbrose perivenular (9,1 + O,8 cmH2O). A concentracao de laminina no sangue periferico do grupo cirrose (40,0 + 18,7 mg/dL) foi significantemente superior aos grupos controle (l3,8 + 12,1 mg/dL), fibrose perivenular (l9,l + 15,5 mg/dL) e fibrose septal (22,2 + 27,0 mg/dL). A laminina circulante correlacionou-se com grau de flbrose hepatica (r O,59; P < O,01; n= 49) e em menor grau com a pressao portal (r = O,29; P O,05; n=45). Houve correlacao estatisticamente significante entre as ...(au)
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    Expressão dos glicosaminoglicanos e proteoglicanos na matriz extracelular da cérvice uterina da rata albina prenhe após injeção local de hialuronidase
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2012) Souza, Guilherme Negrão de [UNIFESP]; Camano, Luiz [UNIFESP]
    Objetivo: Avaliar a expressao dos glicosaminoglicanos (GAGs) e proteoglicanos (PGs) na matriz extracelular (MEC) da cervice uterina da rata albina prenhe, apos injecao local de hialuronidase. Metodologia: Dez ratas prenhes foram distribuidas aleatoriamente em dois grupos, numericamente iguais. O grupo controle (Gc) foi constituido pelas ratas que receberam 1 mL de agua destilada, dose unica, no 18º dia da prenhez, sob anestesia, ministrado na cervice uterina. No grupo experimental (Gexp), os animais receberam, sob as mesmas condicoes do Gc, 0,02 mL de hialuronidase, diluido em 0,98 ml de agua destilada (total de 1ml). No 20º dia de prenhez, seis horas apos marcacao in vivo de [35SO4] de sulfato radioativo, as ratas foram sacrificadas por inalacao de monoxido de carbono e submetidas a disseccao, preparando-se a cervice uterina para caracterizacao e quantificacao dos GAGs recemsintetizados, condroitim sulfato (CS), dermatam sulfato (DS) e heparam sulfato (HS), extraidos apos proteolise e determinados e caracterizados, apos eletroforese em gel de agarose, por densitometria optica, antes e apos degradacao enzimatica com enzimas especificas. Foram avaliadas tambem a expressao qualitativa do acido hialuronico (AH) por histoquimica e sua quantificacao por ensaio tipo sanduiche em placa de ELISA. A analise estatistica de todas as informacoes coletadas nesta pesquisa foi inicialmente feita de forma descritiva. Para as variaveis de natureza quantitativa (numerica) foram calculadas mediana, valor minimo, valor maximo e confeccionados graficos do tipo diagrama de dispersao unidimensional. A analise inferencial, empregada com o intuito de comparar os valores da quantidade dos GAGs entre os grupos, foi o Teste t-Student para amostras independentes, com o nivel de significancia α igual a 5%. Tambem, nesse estudo, diferentes PGs foram avaliados por imunofluorescencia com anticorpos. Resultados: O comportamento da sintese destas moleculas ocorreu de forma similar e a degradacao enzimatica confirmou a presenca de CS/DS e HS na composicao das amostras estudadas; houve diminuicao significante na quantidade total dos GAGs sulfatados e do AH no Gexp se comparado ao Gc. Na histoquimica, ha dispersao na distribuicao do AH no Gexp. Paralelamente, observou-se no Gexp menor expressao (imunofluorescencia) de diversos PGs como o decorim, biglicam, sindecam e CD44 Conclusoes: O tratamento com hialuronidase (Gexp) promove queda significativa da concentracao dos GAGs sulfatados na cervice uterina de ratas albinas prenhes. Tanto a expressao qualitativa (por histoquimica) quanto a quantitativa (dosagem fluorometrica) do AH tambem se mostraram reduzidas no Gexp. O conjunto dos resultados permite inferir que as alteracoes desses compostos na cervice uterina no Gexp, comparado ao Gc, promovem modificacoes locais semelhantes ao processo de maturacao cervical fisiologica, fatores primordiais ao desencadeamento da parturicao