Navegando por Palavras-chave "Keratan sulfate"

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    Caracterização de glicosaminoglicanos urinários de pacientes portadores de mucopolissacaridose do tipo IV A
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2006) Coulson-Thomas, Vivien Jane [UNIFESP]; Toma, Leny [UNIFESP]
    A Mucopolissacaridose do tipo IVA (MPS IVA) é uma doença genética do tecido conjuntivo, que envolve mutações no gene N-acetil galactosamina-6-sulfato sulfatase. Esta enzima participa da degradação seqüencial do condroitim sulfato (CS) e queratam sulfato (KS), removendo sulfato da N-acetilgalactosamina-6-sulfato e galactose–6-sulfato do terminal não redutor destes GAGs. Quando esta enzima está ausente, os órgãos acumulam produtos de digestão incompleta destes GAGs, levando a um aumento na excreção de tais compostos na urina. Neste estudo nós analisamos KS e CS purificados de urina doada por pacientes portadores de MPS IVA e de indivíduos normais. GAGs totais foram extraídos da urina de indivíduos normais e pacientes utilizando uma resina de troca iônica . O KS foi isolado, incubando GAGs totais com extrato bruto de enzimas da F. heparinum, que digere todos os GAGs, com exceção do KS. Os produtos menores remanescentes foram separados do composto intacto por cromatografia de gel filtração sequenciais, Sephadex G-25 (PD10) e Sephadex G-10. KS foi detectado através de eletroforese em poliacrilamida e confirmado com queratanases específicas. Na tentativa de separar KS e CS, mantendo a integridade de ambos, os GAGs totais foram submetidos a cromatografia em Sephadex G-50 para fracionamento de acordo com a massa molecular. O perfil de eluição de CS foi detectado com reagente de carbazol que reage com ácido urônico, presente no CS e não no KS. Este foi detectado nas frações através de blotting com o anticorpo monoclonal específico para queratam sulfato. A maior parte do KS foi detectado na membrana de nitrocelulose, indicando um possível KS-ligado a peptídeo na urina. O mesmo procedimento de blotting foi realizado, e a membrana de nitrocelulose corado com reagente Ponceau, revelando a presença de proteína comigrando com o KS previamente detectado. Para confirmar o complexo KS-peptídeo GAGs totais foram submetidos a cromatografia hidrofóbica em coluna de Octyl-Sepharose, e eluídos com um gradiente linear de sulfato de amônio 2M e uma lavagem final com isopropanol50%. Uma população de KS foi retida na coluna, sendo eluído apenas com isopropanol 50%, devido à interação hidrofóbica do peptídeo com a resina. KS, CS e proteína foram detectados nessa população retida. Amostras de GAGs totais foram submetidos a uma reação química de β-eliminação, que remove açucares O-ligados a proteínas, e então aplicados a HPLC, em colunas de fase reversa, C4 Ultrasphere rotein and C18 Sephasil. Vários fragmentos protéicos ou peptídicos foram purificados nas colunas, que estão sendo sequenciados para análise estrutural..
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    Acesso aberto (Open Access)
    Collagens and proteoglycans of the corneal extracellular matrix
    (Associação Brasileira de Divulgação Científica, 2003-08-01) Michelacci, Yara Maria [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    The cornea is a curved and transparent structure that provides the initial focusing of a light image into the eye. It consists of a central stroma that constitutes 90% of the corneal depth, covered anteriorly with epithelium and posteriorly with endothelium. Its transparency is the result of the regular spacing of collagen fibers with remarkably uniform diameter and interfibrillar space. Corneal collagen is composed of heterotypic fibrils consisting of type I and type V collagen molecules. The cornea also contains unusually high amounts of type VI collagen, which form microfibrillar structures, FACIT collagens (XII and XIV), and other nonfibrillar collagens (XIII and XVIII). FACIT collagens and other molecules, such as leucine-rich repeat proteoglycans, play important roles in modifying the structure and function of collagen fibrils.Proteoglycans are macromolecules composed of a protein core with covalently linked glycosaminoglycan side chains. Four leucine-rich repeat proteoglycans are present in the extracellular matrix of corneal stroma: decorin, lumican, mimecan and keratocan. The first is a dermatan sulfate proteoglycan, and the other three are keratan sulfate proteoglycans. Experimental evidence indicates that the keratan sulfate proteoglycans are involved in the regulation of collagen fibril diameter, and dermatan sulfate proteoglycan participates in the control of interfibrillar spacing and in the lamellar adhesion properties of corneal collagens. Heparan sulfate proteoglycans are minor components of the cornea, and are synthesized mainly by epithelial cells. The effect of injuries on proteoglycan synthesis is discussed.
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    Urinary glycosaminoglycans in horse osteoarthritis. Effects of chondroitin sulfate and glucosamine
    (Elsevier B.V., 2012-08-01) Baccarin, Raquel Yvonne Arantes; Machado, Thais S. L.; Lopes-Moraes, Ana P.; Vieira, Fabiana A. C. [UNIFESP]; Michelacci, Yara M. [UNIFESP]; Universidade de São Paulo (USP); Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Our objectives were to characterize the urinary excretion of glycosaminoglycans (GAGs) in horse osteoarthritis, and to investigate the effects of chondroitin sulfate (CS) and glucosamine (GlcN) upon the disease. Urinary GAGs were measured in 47 athletic horses, 20 healthy and 27 with osteoarthritis. the effects of CS and GlcN were investigated in mild osteoarthritis. in comparison to normal, urinary GAGs were increased in osteoarthritis, including mild osteoarthritis affecting only one joint. Treatment with CS + GlcN led to a long lasting increase in the urinary CS and keratan sulfate (KS), and significant improvement in flexion test of tarsocrural and metacarpophalangeal joints was observed. in conclusion, urinary CS and KS seems to reflect the turnover rates of cartilage matrix proteoglycans, and the measurement of these compounds could provide objective means of evaluating and monitoring joint diseases. (C) 2011 Elsevier B.V. All rights reserved.