Navegando por Palavras-chave "Iodeto peroxidase"

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    A 5'-deiodação da tiroxina por células cório-deciduais humanas em cultura primária: desenvolvimento metodológico e o efeito da privação de iodotironinas
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 1986) Hidal, Jairo Tabacow [UNIFESP]; Maciel, Rui Monteiro de Barros [UNIFESP]
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    Avaliação funcional de mutações no gene da tireoperoxidase identificadas em pacientes com hipotireoidismo congenito por disormonogênese
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2016-08-30) Silva, Marlon Messias da Conceicao [UNIFESP]; Rubió, Ileana Gabriela Sánchez de [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/3231635049279767; http://lattes.cnpq.br/6113565001524368; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Congenital hypothyroidism (CH) is the most common cause of mental retardation that can be prevented with early treatment, with frequency of 1/2500 birth. CH can be caused by defects in the development of thyroid (dysgenesis) or by defects in the thyroid hormone synthesis (dyshormonogenesis). The most frequent mutations associated with the dyshormonogenesis are located in the thyroid peroxidase gene (TPO). These mutations can promote the substitution, deletion or addition of amino acids resulting in the reduction of enzymatic activity by structural changes of the protein and/or impair localization in the thyrocyte. The objective of this project was to carry out the functional study of the TPO mutations p.Gly319Glu, p. Ala909Thr; Ala911fs*49, p.Gln660Glu and p.Cys296Alafs* 21 previously identified in Brazilian patients with congenital hypothyroidism due to dyshormonogenesis with partial iodine organification defect or fetal goiter. In the functional analysis the plasmid containing the wild TPO gene was used and the mutations were introduced by site directed mutagenesis. The proteins were expressed in mammalian cells HEK 293 transiently transfected using lipofectamine and cotransfected with pmaxGFP to determine the technical efficiency. After 72 hours of transfections, it was evaluated the enzymatic activity of TPO using the Amplex Red kit (Invitrogen, Carlsbad, CA USA), the size of the expressed proteins by western blot and cellular localization by immunofluorescence microscopy, always comparing the results of the mutants TPO with the wild-type. Enzymatic analysis showed reduced extracellular activity of all mutants TPO compared to wild type (p <0.05). It was observed that mutations p.Gly319Glu, p.Gln660Glu p. Ala909Thr;Ala911fs*49, e p.Cys296Alafs*21 promoted a reduction of activity of 35,3%, 38,7%, 44,30% and 49,2% of the wild type TPO, respectively. The western blot experiments showed that the proteins p.Gly319Glu and p.Gln660Glu have similar molecular size to the wild type, 103 kDa protein, the TPO p.Ala909Thr;Ala911fs*49 approximately 108 kDa due to the incorporation of 49 amino acids and the TPO p.Cys296Alafs*21 has 35 kDa, confirming to be a truncated protein in the exon 8. The Immunofluorescence results showed that all mutated TPO were expressed in HEK293 cells however, with the exception of p.Gln660Glu, all mutated TPO showed lower membrana immunostaining as compared to the wild type. We conclude therefore that the TPO alterations caused by the studied mutations reduce the catalytic capacity of the enzyme and/or its correct localization in the plasma membrane. These data may explain the CH due to thyroid hormone synthesis defect observed in the patients with these mutations. Furthermore, the intermediate enzymatic activity of TPO and the reduce presence of mutants TPO (p.Gly319Glu and p.Gln660Glu, p.Ala909Thr;Ala911fs*49) in the plasma membrane is in agreement with the less severe HC phenotype of the patients confirmed by the partial iodine organification defect. More studies are needed to understand the presence of fetal goiter in patients with p.Cys296Alafs*21 that may be associated to a very severe defect in thyroid hormone synthesis.
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    Desiodases de iodotironinas: relevância para a homeostase do hormônio tiroideano e tecido adiposo marrom
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2006) Christoffolete, Marcelo Augusto [UNIFESP]; Bianco, Antonio Carlos [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    As três desiodases de iodotironina catalizam a iniciação (D1, D2) e o término (D3) dos efeitos dos hormônios tireoideanos nos vertebrados. Enquanto D1 e D3 são proteínas de meia-vida longa localizadas na membrana plasmática, a D2 é uma proteína residente do retículo endoplasmático com meia-vida de apenas 20 min. Nesta série de estudos, foram investigados: (1) os efeitos causados pela combinação da disrupção do gene da D2 (Dio2-/-) com a deficiência familiar de D1 (camundongos C3H) na homeostase do hormônio tiroideano e apesar da múltipla deficiência de D1 e D2, animais C3H-D2KO apresentam T3 sérico na faixa eutiroidea, sugerindo mecanismos compensatórios, que promovem (i) aumento de aproximadamente 2 vezes nos níveis de T4 sérico, comparando com camundongos da linhagem C57/BL6 (C57) e, (ii) aumento da atividade de D1 hepática e renal, 8,4 e 2,0 vezes, respectivamente, em comparação com animais C3H. E ainda, este mecanismo compensatório não depende de aumento da atividade da glândula tiróide ou diminuição do “clearance” de T3 mediado pela D3; (2) o papel da D2 no sistema de retroalimentação negativa do TSH mediado pelo T4 na pituitária, o qual se revelou fundamental neste sistema e que, apesar de sofrer degradação induzida pelo substrato como em qualquer outro tecido que expressa D2, a alta taxa de síntese da enzima assegura atividade e, conseqüentemente, produção constante de T3, mesmo na vigência de doses de T4 muito acima do fisiológico; (3) a importância da geração de T3 adaptativa mediada pela D2 para a resposta termogênica do BAT, a qual não está limitada a mediar a responsividade à catecolaminas, mas também promover lipogênese no tecido, essencial para fornecer substrato para oxidação mitocondrial e, conseqüentemente, desacoplamento e geração de calor; (4) o papel da D2 na conversão da célula pré-adiposa marrom em célula madura, que confirmou in vitro a importância da D2 para a capacidade termogênica deste tipo celular e seu papel chave no recrutamento do programa de diferenciação, o qual, na ausência de D2, apresenta um déficit de ~25%.
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    Expressão da desiodase do tipo III no hipocampo de animais com epilepsia
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2012) Nassif, Renata Jorge [UNIFESP]; Scorza, Fulvio Alexandre [UNIFESP]
    Existe uma alta densidade nos cerebros de ratos, tanto no desenvolvimento como no estagio adulto, de receptores de a 3,5,3Æ-triiodotironina (T3), sugerindo uma intensa interacao dos hormonios tireoidianos (HT) e o sistema nervoso central (SNC). Recentes estudos demonstram que perturbacoes tireoidianas comprometem a integridade de tecidos cerebrais, como hipocampo e cortex parietal, influenciando no comportamento e processo de aprendizado e memoria. Falhas nos niveis deste hormonio estao relacionadas com defeitos na regulacao bioquimica, metabolica, estrutural e genetica no SNC de ratos adultos. As desiodases do tipo I (D1), do tipo II (D2) constituem um grupo de proteinas que agem ativando o pro-hormonio T4 em sua forma biologicamente ativa, T3. Em contraste a desiodase tipo III (D3), previne a ativacao do T4, convertendo este em T3 reverso, (T3r), e T3 em T2, que sao consideradas formas inativas do hormonio. Esta enzima e pouca expressa em tecidos pos-natal, porem diversas pesquisas observaram o aumento da sua expressao em pacientes criticamente doentes, principalmente em tecidos com lesao hipoxico-isquemica. A epilepsia e a desordem neurologica grave mais comum, tendo no Brasil incidencia na ordem de 18.6/1000 habitantes, sendo o lobo temporal o mais epileptogenico dos lobos cerebrais, confirmando dados de que a epilepsia do lobo temporal (ELT) e a mais comum entre os casos de epilepsias, principalmente nos adultos. A formacao hipocampal e a estrutura mais danificada na ELT, exibindo uma perda neuronal seletiva resultando na esclerose hipocampal. Embora o mecanismo exato para o aparecimento dessas lesoes neuronais ainda nao esteja exatamente esclarecido, sabe-se que a hipoxia e a isquemia cerebral estao sendo associadas ao desenvolvimento de crises epilepticas, ou ate mesmo, possuem um papel crucial na auto-regulacao da interrupcao dessas crises. Com isso, podemos dizer que a hipoxia parece estar envolvida no inicio ou no termino das crises epilepticas, porem nao e claro o seu papel nessa patologia. A D3 possui sua expressao e atividade aumentada pela hipoxia, levando estes tecidos ao um estado hipotireoideo, reduzindo a taxa do metabolismo e a demanda de energia. A hipoxia nos tecidos do SNC envolvidos na epilepsia, tais como o hipocampo, pode apresentar aumento da atividade e expressao da D3. Seguindo esse raciocinio e interessante relacionar as consequencias da epilepsia e uma reducao local da atividade do HT nesta patologia. A pesquisa utilizou o modelo da Pilocarpina para induzir epilepsia nos animais. A atividade da D3 foi quantificada atraves dos metodos de Imunohistoquimica (IHC) e Western Blot (WB), no estagio agudo e cronico deste modelo. Os resultados observados foi o aumento da concentracao da D3, comparada com os animais do grupo controle, pelo metodo de WB. Reforcando este dado, o metodo de IHC revelou intensas marcacoes nas regioes hipocampais: CA3, CA1, Giro Denteado e Hilo nas fases aguda e cronica do modelo da pilocarpina, regioes estas envolvidas na esclerose hipocampal. Para confirmarmos o envolvimento da hipoxia no aumento da expressao da D3, quantificamos a concentracao de Neuroglobina (Ngb). A Ngb exerce uma funcao importante na manutencao do oxigenio intracelular, proporcionando integridade neuronal e protecao durante as condicoes de hipoxia e isquemia. Como resultado, foi verificado o aumento da concentracao da Ngb em todo cerebro dos animais, porem houve um aumento da expressao nas regioes afetadas pela esclerose hipocampal, nos grupos Agudo e Cronico. Podemos sugerir, dentre os resultados achados, que ha uma menor taxa metabolica em tecidos hipoxicos, observados nas consequencias epilepticas, podem ser um efeito neuroprotetor, reduzindo o HT local atraves do aumento da expressao de D3
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    Limolipin, um repressor transcricional que promove esteatose hepática
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2017-10-26) Fernandes, Gustavo Werpel [UNIFESP]; Bianco, Antonio Carlos [UNIFESP]; Ribeiro, Miriam Oliveira; http://lattes.cnpq.br/7069953370349465; http://lattes.cnpq.br/3164827775137971; http://lattes.cnpq.br/9002769050037329; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Liver-specific disruption of the type 2 deiodinase gene (Alb-D2KO), that encodes the key enzyme that activates thyroid hormone, results in resistance to diet-induced obesity and to liver steatosis in mice. Here we report that this is caused by ~60% reduction in liver zinc finger protein-125 (Zfp125) expression. Zfp125 is a Foxo1-inducible transcriptional repressor that causes lipid accumulation in AML12 mouse hepatic cell line and liver steatosis in mice by reducing hepatocyte secretion of triglycerides and cholesterol. It acts by repressing 18 genes involved in lipoprotein structure, lipid binding and transport. There is a functional Zfp125-binding element located in the ApoE promoter, also present in 16 other lipid-related genes repressed by Zfp125. Liposome-mediated Zfp125 expression in liver causes steatosis and a ~3-fold increase in circulating VLDL+LDL-cholesterol. While liver-specific knockdown of Zfp125 in control mice causes a “Alb-D2KO-like” metabolic phenotype, liver-specific normalization of Zfp125 expression in Alb-D2KO mice rescues the metabolic phenotype, restoring normal susceptibility to diet-induced obesity, liver steatosis and hypercholesterolemia. These findings explain how a brief perinatal hepatic surge in local thyroid hormone activation affects the Foxo1-Zfp125 pathway and modulate susceptibility to obesity, liver steatosis and hypercholesterolemia later in life.