Navegando por Palavras-chave "Integrinas"

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    Ação de inibidores recombinantes de Bauhinia sobre a linhagem celular de câncer de próstata
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2009-02-27) Diniz, Paula Malloy Mota [UNIFESP]; Oliva, Maria Luiza Vilela [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Prostate cancer occurs in Brazil with high rates of incidence and mortality. Invasion from the primary tumor and metastasis result in poorer prognosis. Diverse classes of protein play a role for the progression of metastasis. Tissue kallikreins, e.g., hK3 (PSA) and integrins are directly related to this neoplasia, as well as, in cell adhesion, differentiation and cellular proliferation processes. Compounds that interfere in these processes are targeted for investigation. In this work, using prostate cancer cellular line PC-3, the effects of two recombinant inhibitors of Bauhinia sp. seeds were studied, the Bauhinia bauhinioides kallikrein inhibitor (rBbKI) and the modified rBbKIm, in which the signal motif RGD, present in the inhibitor BrTI from B. rufa, was inserted. The rBbKI and rBbKIm has shown different effects on cell PC3 viability, being rBbKIm more efficient than rBbKI and inhibiting 70% of PC3 cell viability (50 μM, 72h), in all the conditions analyzed. The rBbKIm has interfered in the cell cycle of PC-3, increasing the number of cells in apoptosis and decreasing the number of cells in G2 face (mitosis). In the cell adhesion, rBbKIm (25 μM), containing the adhesion motif RGD, has inhibited approximately 30% of the PC-3 adhesion on fibronectin, in contrast to rBbKI that has caused 20% of cell adhesion. The confocal microscopy analysis has shown that rBbKI and rBbKIm interact with cell membrane. The results indicate that the inhibitors act by different mechanisms, which still to be established.
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    Acesso aberto (Open Access)
    Associação entre Timp1, β1-integrinas e CD63 ao longo da gênese do melanoma
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2010-11-24) Pinto, Mariana Toricelli [UNIFESP]; Jasiulionis, Miriam Galvonas [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Although malignant melanoma is the less frequently diagnosed skin cancer, it shows a poor prognosis due its chemoresistance and metastasis development. One of the adquired abilities of transformed cells is anoikis resistance and this property is closely related to metastasis formation. In our laboratory, we developed a model that allows us to study different steps of melanocyte malignant transformation. Melan-a melanocytes surviving after 1, 2, 3 and 4 deadhesion cycles showed modified morphology and independent PMA growth and have been named, 1C, 2C, 3C and 4C cells, respectively. Different melanoma cell lines were established after submitting 4C spheroids to limiting dilution. Previous results of our group showed increased expression of Timp1 along melanoma genesis and its correlation with anoikis resistance. However, the mechanism involved in this signaling is unknown. Published data demonstrated interaction between CD63, Timp1 and 1-integrins in human breast epithelial cells and its role in apoptosis. Furthermore, aberrant glycosylation in cell adhesion molecules such as integrins provides to cells the ability to survive under anchorage-independent conditions. The aim of this work was analyze the possible interaction among CD63, Timp1 and 1-integrins along melanocyte malignant transformation, possible aberrant N-glycosylation patterns of β1-integrins and their impact in anoikis resistance. Aberrant N-glycosylation patterns were observed in tumorigenic cells. We observed interaction between CD63 and Timp1 and between CD63 and 1-integrins in the melan-a-derived cells 4C, 4C11, and 4C11 +, and interaction between Timp1 and 1-integrins only in melanoma cell lines 4C11 - and 4C11 +. The presence of Timp1 in supernatant from 4C11+ conferred to melan-a cells anoikis resistance. The expression of 1-integrins in our study model is increased in aggressive melanoma lineage, 4C11+, as well as the expression of Mgat-V and aberrant N-glycosylation on cell surface. Moreover, the electrophoretic profile of  1-integrin suggests that melanoma metastatic 4C11+. Lineage present increased aberrant N-glycosylation in this molecule. Treatment of melanoma cells 4C11 + with the N-glycosylation inhibitor, swainsonine, resulted in reduced capacity of these cells to resist to anoikis. This seems to be the first study describing the interaction between Timp1, CD63 and 1-integrin in tumor cells and may contribute to a better understanding of how Timp1 regulates resistance to anoikis during the melanocyte malignant transformation.
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    Celulas B-1: expressao de integrinas e interacao com matriz extracelular e celulas de melanoma
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2003) Ribeiro, Carolina Hager [UNIFESP]
    As integrinas sao uma familia de glicoproteinas de membrana celular que atuam como ligantes para componentes da matriz extracelular e moleculas de membrana citoplasmatica, mediando, desse modo, interacoes celula-matriz e celula-celula. Atualmente existem 25 receptores do tipo integrina descritos, os quais sao formados por uma subunidade a nao-covalentemente associada a uma subunidade b. 0 sitio de reconhecimento para muitas das integrinas que se ligam a matriz e o tripeptideo Arg-GlyAsp (RGD). As celulas B-1 sao uma subpopulacao de linfocitos B localizada principalmente nas cavidades peritoneal e pleural. Essas celulas sao capazes de migrar da cavidade peritoneal para sitio inflamatorio nao-especifico. Recentemente observou-se que as celulas B-1 podem modular o crescimento e potencial metastatico de celulas de melanoma murino. Este trabalho visou investigar a expressao de subunidades de integrinas em celulas B-1 peritoneais de camundongos normais da linhagem A/J. Interacoes in vitro entre essas celulas e as proteinas de matriz fibronectina (FN), laminina (LN) e colageno tipo 1 (COL), assim como o efeito inibitorio do peptideo RGD sobre a adesao das celulas B-1 a matriz, tambem foram examinados. Adicionalmente, foi investigado o perfil de expressao de integrinas em celulas B-1 co-cultivadas com celulas de melanoma murino in vitro. A analise por citometria de fluxo revelou que as celulas B-1 expressam as subunidades a6, am e b1, e em niveis baixos as subunidades a5, av e b3. Ensaios de adesao demonstraram que essas celulas sao capazes de aderir a FN, LN e COL, embora nao apresentem aumento da expressao de integrinas ou alteracoes no padrao de adesao a matriz sob estimulo com PMA ou LPS. A adesao das celulas a matriz nao foi inibida pelo tratamento com RGD. 0 contato entre celulas B-1 e celulas de melanoma murino in vitro resultou em aumento da expressao, por aquelas, das subunidades a5, av e b1 e diminuicao da expressao de as. Alem disso, foi observado que os linfocitos B-1 de animais inoculados intraperitonealmente com celulas de melanoma apresentam maior capacidade de adesao a laminina e ao colageno. Estes resultados...(au)
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    Acesso aberto (Open Access)
    Crataeva Tapia Bark Lectin (Cratabl), um quimioatraente para células endoteliais, promove a angiogênese in vitro e a cicatrização de feridas em camundongos
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2018-07-26) Batista, Fabricio Pereira [UNIFESP]; Oliva, Maria Luiza Vilela [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/5832778223847349; http://lattes.cnpq.br/8144892136697792; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    A formação de novos vasos sanguíneos, processo conhecido como angiogênese, é uma das etapas limitantes para o sucesso no tratamento de doenças isquêmicas. Há inúmeros esforços para caracterização de novos agentes capazes de estimular a neovascularização seletivamente. Crataeva tapia bark lectin (CrataBL), um quimioatraente para células endoteliais, mediante estimulação na produção de condroitim sulfato e heparam sulfato em células endoteliais de veia umbilical humana (HUVEC), promoveu a ativação de Integrina β3, FGFR e VEGFR2, receptores correlacionados a uma resposta próangiogênica, bem como suas vias de transdução de sinal: FAK, p38MAPK e Erk. Ao promover a ativação de FAK e p38, CrataBL promoveu um rearranjo no citoesqueleto, estimulando a motilidade e a adesão celular específica ao colágeno I, sem afetar a adesão ao colágeno IV, fibronectina ou laminina. Ao ativar a sinalização de Erk, CrataBL promoveu a proliferação celular. A promoção dessas etapas da cascata de angiogênese, levou a indução do fenótipo angiogênico em modelo in vitro, promovendo a formação de estruturas do tipo capilar em cultura. Em contraste, além de CrataBL inibir a atividade de metaloproteases de matriz, também reduziu as expressões dos receptores B1 de bradicinina e receptor 4 ativado por proteases (PAR4), que estão correlacionados à inibição da neovascularização e promoção da inflamação. Em adição a sua atuação positiva na angiogênese, CrataBL reduziu o tempo de cicatrização e promoveu aumento no número de estruturas foliculares nas áreas lesionais produzidas na região dorso cervical de camundongos C57BL/6. Em conjunto, esses resultados permitiram concluir que CrataBLé um agente próangiogênico e cicatrizante.
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    Acesso aberto (Open Access)
    Homologia, paralogia e função da DGF-1, uma família gênica específica de Trypanosoma cruzi
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2009-08-26) Kawashita, Silvia Yukie [UNIFESP]; Briones, Marcelo Ribeiro da Silva [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Surface adhesion proteins are essential for Trypanosoma cruzi invasion of mammalian cells. Here we show that Dispersed Gene Family-1 (DGF-1) members, previously identified as nuclear repeated sequences present in several chromosomes and comprising the third largest T. cruzi-specific gene family, have conserved adhesin motifs including four segments with significant similarity to human beta 7 integrin. Flow cytometry and biotinylation assays with anti-DGF-1 antibodies indicated that, as expected, DGF-1 members are expressed on the trypomastigote surface. The DGF-1 genealogy, inferred using T. cruzi Genome Project data and network phylogeny algorithms, suggests that this gene family is separated in at least three groups with differential distribution of functional domains. To identify which members of this gene family are expressed we used a combined approach of RT-PCR and codon usage profiles, showing that expressed members have a very biased codon usage favoring GC whereas non-expressed members have a homogeneous distribution. Shannon information entropy was used to measure sequence variability and revealed four major high entropy segments in the extracellular domain of DGF-1 overlapping with important putative functional modules of the predicted proteins. Testing for natural selection, however, indicated that these high entropy segments were not under positive selection, which contradicts the notion that positive selection is the cause of high variability in specific domains of a protein relative to other less variable regions in the same molecule. We hypothesize that members of the DGF-1 family are associated with the ability of T. cruzi to bind extracellular matrix proteins, such as fibronectin and laminin, and speculate on mechanisms that would be generating the localized diversity in these molecules in the absence of selection.
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    Moléculas de adesão celular na progressão e disseminação do adenocarcinoma colorretal: análise da expressão dos genes itgav, itga3, itga5, itgb5 e itga6 e das proteínas das integrinas
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2012) Denadai, Marcos Vinicius Araujo [UNIFESP]; Matos, Delcio [UNIFESP]
    BASES DA PESQUISA: Ha uma crescente evidencia demonstrando que algumas integrinas se associam com receptores especificos, o que permitiria a ativacao de vias de sinalizacao necessarias para a ocorrencia da invasao tumoral. OBJETIVO: Avaliar a associacao entre a expressao de genes selecionados da familia das integrinas com o grau de diferenciacao celular, estadiamento TNM, tipo histologico e outras variaveis possivelmente, relacionadas com a progressao e a disseminacao tumoral do adenocarcinoma colorretal (CCR). METODOS: cento e catorze pacientes (63 homens e 51 mulheres), que receberam tratamento para CCR entre 2006 e 2009, entre os quais 25 (21,9%) eram TNM I, 39 (34,2%) TNM II, 34 (29,8%) TNM III, e 16 (14,0%), TNM IV. Quanto ao grau, 91 classificados como (79,8%) G II, 14 (12,2%) G III e apenas 9 (7,8%) G I. A media das idades foi de 54,5 anos, com 58 pacientes com idade maior ou igual a 60 anos. A analise por PCR ARRAY e por metodo tissue microarray (TMA) mostraram respectivamente, a expressao de genes e proteinas de integrina. Genes selecionados neste estudo: ITGAV, ITGA3, ITGA5, ITGB5, ITGA6. RESULTADOS: em relacao ao estadiamento TNM, verificou-se aumento da expressao de ITGB5 e ITGA3 para os TNM III / IV, em relacao ao TNM I / II, resultados validados pela expressao proteica pelo metodo de TMA. Quanto ao grau de diferenciacao celular, aumento da expressao de ITGB5 para GIII versus GI / GII, mas nao verificada pelo TMA. Idade: evidenciado menor expressao de ITGA5 e aumento da expressao pelo TMA no grupo maior ou igual a 60 anos. Tipo histologico: Maior expressao de ITGA 5 em carcinomas mucinosos, validados por TMA. Tambem encontrada aumento de expressao de ITGAV ao analisar invasao neural positiva versus negativa e maior expressao de ITGA6 em invasao venosa presente, ambos resultados validados pelo TMA. Todos esses resultados apresentaram na analise estatistica um p <0,05. CONCLUSAO: O aumento da expressao de ITGA6 e ITGAV relaciona-se com a invasao venosa e a infiltracao neural respectivamente, enquanto que aumento da expressao de ITGB5 e ITGA3 esta associada com os estadiamentos que possuem metastase linfonodal ou a distancia: TNM III e IV. Tambem foi evidenciado que o aumento da expressao do gene ITGA5 se correlaciona com neoplasias malignas colorretal tipo mucinosas
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    Acesso aberto (Open Access)
    Papel da integrina LFA-1 e do receptor de quimiocina CX3CR1 na diferenciação e ativação de linfócitos T CD8+ durante a infecção experimental pelo Trypanosoma cruzi
    (Universidade Federal de São Paulo, 2022-05-31) Cariste, Leonardo Moro [UNIFESP]; Vasconcelos, Jose Ronnie Carvalho de [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/2376141137368343; http://lattes.cnpq.br/8165078453183993; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Os linfócitos T CD8+ são cruciais no controle de infecções por patógenos intracelulares como Trypanosoma cruzi. As moléculas de quimiocinas e integrinas são essenciais para a migração dos linfócitos T. No entanto, são escassos o papel dessas moléculas durante a infecção pelo T. cruzi. Os receptores de quimiocinas CX3CR1 e CXCR3 são moléculas altamente expressas na superfície dos linfócitos T CD8+ durante a infecção por patógenos intracelulares, como T. cruzi, e são importantes na ativação e diferenciação dessas células. A integrina LFA-1 também possui papel na ativação e diferenciação dos linfócitos em células de memória, uma vez que é extremamente importante no estabelecimento do contato dos linfócitos com as células apresentadoras de antígenos. Portanto nosso objetivo foi analisar as moléculas CX3CR1, CXCR3 e LFA-1 no controle da infecção, ativação, migração e diferenciação dos linfócitos T CD8. Nossos resultados demonstram que o bloqueio do CXCR3 e/ou LFA-1 levou a um aumento na carga parasitária sanguínea e tecidual além de tornar os camundongos da linhagem C57BL/6 suscetíveis à infecção pelo T. cruzi. Além disso, o bloqueio da integrina LFA-1 diminui a função efetora, citotoxicidade e migração das células T CD8+ quando comparados ao grupo infectado. Essa diminuição da função efetora também foi observada em camundongos da linhagem OT-I quando infectados com a cepa Y-OVA e tratados com anti-LFA-1. Ainda, observamos que o bloqueio do LFA-1 altera o fenótipo das células T CD8+, uma vez que os animais infectados têm um fenótipo de células T efetoras, já os tratados com LFA-1 se assemelham ao fenótipo de células naive. Também observamos que receptor de quimiocina CX3CR1 é altamente expresso nas células T CD8, porém sua ausência não comprometeu a sobrevivência e secreção de IFN- pelas células T CD8. Em conjunto, nossos dados demonstram que o LFA-1 e CXCR3 tem um papel crítico na imunidade protetora dos animais, além disso o LFA-1 exerce um papel extremamente importante nas células T CD8 auxiliando na sua migração, diferenciação e execução da sua função efetora, permitindo assim novos estudos para vacinas direcionais, com o intuito do aumento da proteção e resposta celular.
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    Purificacao, caracterizacao estrutural e funcional de uma lectina de bauhinia forficata
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2012) Silva, Mariana Cristina Cabral [UNIFESP]
    Uma nova lectina, BfL, foi purificada de sementes de Bauhinia forficata por fracionamento com sulfato de amonio, cromatografias de troca ionica em DEAESephadex, afinidades em Sepharose-4B e quitina, e exclusao molecular em Superdex 75. A homogeneidade da preparacao foi avaliada pela cromatografia de fase reversa, utilizando o sistema HPLC. A massa molecular determinada pelo LC/ESI-MS e de 27.850 Da. BfL e uma glicoproteina com conteudo de carboidrato de 6,24%. Fetuina, asialofetuina, tiroglobulina e azocaseina inibiram a atividade hemaglutinante de BfL, enquanto carboidratos nao. A atividade hemaglutinante de BfL e termo-estavel (em 100ºC por 30 min), pH dependente (a maior atividade foi obtida em pH 6,0) e nao e dependente de ions. A estrutura primaria de BfL mostra similaridade com outras lectinas do genero Bauhinia. Desconvolucao do espectro de dicroismo circular (DC) indicou a presenca de estruturas helices-α e β. BfL prolonga o tempo de coagulacao, provavelmente por interagir com o fator XIa. BfL tambem inibe a agregacao plaquetaria induzida por ADP e adrenalina, sendo a unica lectina de Bauhinia isolada que mostra propriedades anticoagulantes e antiagregantes plaquetaria. BfL inibiu a viabilidade das celulas de cancer de mama humano da linhagem MCF-7, determinado pelo metodo do MTT, mas foi ineficaz na linhagem MDA-MB 231. BfL inibiu a adesao das celulas da linhagem MCF-7 a laminina, colageno tipo I e fibronectina. Analise de imunodeteccao (oWestern blottingo) mostrou uma diminuicao significativa da expressao das integrinas α6 e β1 e aumento de expressao da integrina α5. Morte celular de MCF-7 ocorreu apos 24 e 48 h na presenca de BfL (5 μM), como analizado pelo citometro de fluxo utilizando marcacao dupla de anexina V-FITC/PI, corroborando com o aumento da expressao da proteina pro-apoptotica Bax. BfL acarreta parada do ciclo celular na fase G2/M, com diminuicao da expressao das proteinas reguladoras pRb e p21, e fragmentacao do DNA nuclear, pela tecnica do TUNEL. Estes resultados sugerem que BfL pode ser empregada para os estudos de modelos de trombose e cancer
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    Relacao entre a expressao dos genes e proteinas SPARC, SPP1, FN1, ITGA5 e ITGAV da matriz extracelular com os parametros clinicos e histologicos de progressao e disseminacao tumoral no carcinoma colorretal
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2012) Viana, Luciano de Souza [UNIFESP]
    Objetivo: Avaliar a relacao entre as expressoes dos genes da matriz extracelular (MEC) SPARC, SPP1, FN1, ITGA5 e ITGAV com os parametros clinicos e histologicos de progressao e disseminacao neoplasica no carcinoma colorretal (CCR). Metodos: Estudo retrospectivo incluindo 114 doentes com CCR, com tumor primario operado no Hospital de Cancer de Barretos, São Paulo, Brasil, no periodo de agosto de 2006 a julho de 2009. Sessenta e tres doentes eram homens (55,3%), 51 eram mulheres (44,7%), a mediana da idade foi 60 anos (minimo de 24 e maximo de 83 anos). Vinte e cinco (21,9%) doentes apresentaram estadiamento TNM I, 39 (34,2%) TNM II, 34 (29,8%) TNM III e 16 (14,0%) TNM IV. As amostras tumorais analisadas foram do tumor primario. As expressoes dos genes foram realizadas por PCR quantitativo em tempo real (RT-PCR) e as expressoes proteicas dos marcadores da MEC (SPARC, SPP1, FN1, ITGA5 e ITGAV) e marcadores p53, bcl-2, Ki-67, EGFR e VEGF foram obtidas por imuno-histoquimica (IHC) por microsseries de tecidos (TMA). Os niveis de expressoes dos genes de interesse foram analisados comparativamente apos agrupamento dos doentes conforme covariaveis estudadas. A imunoexpressao foi atraves do oquick scoreo (Q) (Q = P x I), onde P representa a porcentagem de celulas coradas e I corresponde a intensidade dessa coloracao nas celulas positivas. As correlacoes das expressoes dos marcadores da MEC e epiteliais foram realizados pelo coeficiente Spearman (r). Resultados: O teste de RT-PCR evidenciou hiperexpressao do gene ITGAV nos tumores com invasao perineural quando comparados com tumores sem invasao perineural (p=0,028); hiperexpressao dos genes SPARC e ITGA5 nos tumores mucinosos quando comparados com tumores adenocarcinoma SOE (p=0,007; p=0,026, respectivamente); hiperexpressao do gene ITGA5 nos tumores com alto grau de diferenciacao celular (p=0,005); hipoexpressao dos genes SPP1 (p=0,04), FN1 (p=0,022) e ITGA5 (p=0,016) nos doentes com idade ≥60 anos, quando comparados com doentes com <60 anos. Os resultados das expressoes imuno-histoquimicas dos marcadores ITGA5 e ITGAV obtiveram concordancia com os resultados obtidos pela tecnica RT-PCR, exceto entre a expressao do marcador ITGA5 e o grau de diferenciacao celular no TMA. As imunoexpressoes dos marcadores SPARC, SPP1 e FN1 nao reproduziram aqueles obtidos no RT-PCR. O coeficiente Spearman demonstrou correlacao direta e forte entre ITGAV e EGFR (p<0,001); correlacao fraca e inversa entre SPARC e VEGF (p=0,036), correlacao fraca e inversa entre ITGA5 e Ki-67 (p=0,028) e ITGA5 e p53 (p=0,040). Conclusoes: A hiperexpressao do gene ITGAV correlacionou-se com maior risco de invasao perineural, sugerindo possivel papel do ITGAV como marcador de progressao e disseminacao do CCR. As expressoes dos genes SPARC, SPP1, FN1 e ITGA5 nao apresentaram relacao com os parametros estudados de progressao e disseminacao do CCR. A hiperexpressao genetica e proteica do marcador ITGA5 favoreceu o desenvolvimento do fenotipo adenocarcinoma mucinoso. A forte correlacao de expressao imuno-histoquimica observada entre os marcadores ITGAV e EGFR sugeri interacao entre essas duas vias de sinalizacao celular. O marcador SPARC teve possivel acao antiangiogenica e o marcador ITGA5 parece ter efeito antiproliferativo