Navegando por Palavras-chave "Inibidores de Proteases"

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    Ação de BbKI e peptídeos relacionados à sua estrutura em fungos e bactérias patogênicas
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2003) De Caroli, Fernanda Peruzzo [UNIFESP]; Oliva, Maria Luiza Vilela [UNIFESP]
    BbKI, inibidor de calicreina plasmatica humana de Bauhinia bauhinioides, apos extracao com solucao de NaCl 0,15M, foi purificado por fracionamento por sulfato de amonio, cromatografia de afinidade em coluna Con A Sepharose 4B (nao adsorvido), cromatografia de troca ionica DEAE-Sephadex A-50, HiTrap Q (sistema FPLC) e cromatografia de afinidade em coluna de tripsina-Sepharose. A analise da homogeneidade foi realizada em cromatografia de fase reversa em coluna C1$ (sistema HPLC), com gradiente de acetonitrila em 0,1 por cento de TFA. A sequecia N-terminal, de 25 residuos de aminoacidos, do BbKI apresentou a mesma sequencia primaria da proteina descrita anteriormente por Mendes,1998. Na determinacao do segmento N-terminal do BbKI, apos cromatografia de afinidade em coluna de tripsina-Sepharose, pode-se verificar e que a Arg na posicao 63 e o residuo de aminoacido da posicao P1 do sitio reativo. Eletroforese em gel de SDS-poliacrilamida do inibidor mostra uma cadeia polipeptidica unica de massa molecular em torno de 20 kDa que nao apresenta mudancas apos reducao com 2-mercaptoetanol. A dimerizacao do BbKI foi confirmada por filtracao em gel em coluna Superdex 200 (sistema FPLC). A estrutura secundaria do BbK, por espectro (CD) apresentou 44 por cento de a-helice, 29 por cento de b-folha, 7 por cento de b-volta e 18 por cento de desordenada. O espectro tambem indicou a formacao de pontes dissulfeto. A inibicao de tripsina por BbKI ocorreu na razao molar 1:1 (enzima/inibidor)e confirmada pela curva de inibicao ajustada por um programa de comutador usando os valores experimentais indicados. A constante de dissociacao foi calculada como _20 nM. A atividade inibitoria tambem foi determinada para calicreina plasmatica humana (Ki = 4,7 nM) e a estequiometria da reacao foi de 2:1 (enzima/inibidor). A cidade inibitoria foi determinada para calicreina pancreatica de porco (Ki = 0,2 mM). Elastase pancreatica de porco nao foi afetada pelo inibidor. A acao inibitoria de BbKI sobre HuPK foi confirmada por radioimunoensaio. BbKI inibiu 69 por cento da atividade da HuPK na hidrolise do substrato natural o cininogenio humano de alta massa molecular. BbKI tambem inibiu a fracao enzimatica S-68 de Paracoccidioidoides brasiliensis sobre o cininogenio...(au)
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    Ação dos inibidores isolados de plantas brasileiras na síndrome da isquemia e repercussão
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2005) Santomauro-Vaz, Eugenio Miguel [UNIFESP]; Oliva, Maria Luiza Vilela [UNIFESP]
    Os inibidores tipo Kunitz de origem vegetal são proteínas de massa molecular aproximada de 20 kDa encontradas em leguminosas. Inibidores isolados de Bauhinia de várias espécies foram caracterizados. Alguns destesinibidores distinguem-se de outros inibidores tipo Kunitz por não possuírem pontes dissulfeto (Oliveira et al., 2001; Oliva et al., 2001). Das sementes de Bauhinia bauhinioides foram isolados dois inibidores, o BbKI e o BbCI. BbKI inibe tripsina (Kapp=2,Ox10-8M), quimotripsina (Kapp=2,6x10-8M), calicreína plasmática humana (Kapp=2,4x10-9 M), calicreína plasmática porcina (Kapp=2,Ox10-7M), calicreína plasmática de rato (Kiapp=5,2x10-9M) e plasmina (Kiapp=3,3x10-8. BbCl inibe a cruzipaína (Kapp=1,3x10-9M) e a cruzaína (Kapp=0,3x10-9M), catepsina L, (Kiapp=0,2x10-9M), elastase humana (Kiapp=5,3x10-9M), catepsina G(Kiapp=1 ,6x10-7M) e elastase pancreática porcina (Kiapp=4,Ox10-8M). não inibe catepsina B (CB), a papaína, a bromelaina e a ficina bem como tripsina, quimotripsina e enzimas da coagulação (Mendes, 1998; Oliveira et al. , 2001; Oliveira, 2004). Tecidos submetidos à isquemia podem sofrer lesões funcionais e morfológicas que aumentam durante a fase de reperfusão. Neste estudo, os !feitos dos inibidores de peptidases BbKI e BbCI e da aprotinina, um clássico libidor de peptidases, foram investigados em ratos submetidos a isquemia e reperfusão dos membros posteriores, avaliando-se o óxido nítrico local (no músculo isquêmico) e a distância (pulmão,cérebro e coração). Os animais tratados com BbKI apresentaram um aumento de 26,59 por cento no oxido nítrico no...(au).
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    Ação dos peptídeos sintéticos baseados nos sítios reativos dos inibidores de proteases isolados das sementes de Bauhinia bauhinioides em modelos biológicos
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2003) Cagliari, Cristina Iacovelo [UNIFESP]; Oliva, Maria Luiza Vilela [UNIFESP]
    Os inibidores de BbKI (inibidor de calicreina) e BbCI (inibidor de elastase), extraidos das sementes de 8. bauhinioides diferem da estrutura inibitoria da familia Kunitz pela ausencia de pontes dissulfeto. Neste trabalho nos examinamos algumas propriedades estruturais que podem estar envolvidas na especificidade inibitoria como instrumentos uteis para determinar os componentes que interferem na atividade da enzima. Os peptideos estruturalmente relacionados ao sitio reativo do BbKI (RPGLPVRFESPLRINIIKE-NH2), foram sintetizados por fase solida e ensaio em serinoproteases. Os peptideos RPGLPVRFESPLRINIIKE-NH2, RPGLPVRFESPL-NH2 RPPGLPVRFSPLR-NH2 e GLPVRFES-NH2 relacionados ao inibidor BbKI mostraram ser eficientes para a inibicao da calicreina tissular. A interacao desses peptideos com a enzima e forte e reversivel. Os valores de 150 calculados baseando-se na concentracao do peptideo que inibe 50 por cento da atividade enzimatica, sao 0,54 gM, 0,87 iuM 0,37 mM e 0.5 mM respectivamente. O ultimo efeito inibitorio e observado em periodos de incubacao acima de 120min. Nenhum dos peptideos estudados interfere na atividade da trombina, fator Xa e tripsina, embora a proteina nativa do BbKI e um potente inibidor de tripsina. A similaridade com a bradicinina foi confirmada pelo reconhecimento do anticorpo. A reatividade do LAIAIITESFFL-NH2 derivado do sitio reativo de BbCI com as enzimas PPE e HNE e demais proteases foram tambem estudadas. Os resultados mostram que o peptideo inibe as atividades da plasmina e HuPK com I50 4 M e 3,5 M respectivamente. A substituicao P1 (Ala) pelo residuo positivo (His) resultou em um diminuicao da reatividade com HuPK e com a plasmina enquanto que o residuo negativo (Asp) bloqueia a interacao com a plasmina com a HuPK. Os peptideos LAIAIITESFFL-NH2 e LAIHIITESFFL-NH2 tambem inibem a atividade da PPE e HNE, embora a proteina nativa do BbKI e um potente inibidor destas enzimas
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    Caracterizacao de proteases, inibidores de proteases e uma proteina de reserva (cratilina) de sementes de Cratylia mollis
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 1998) Paiva, Patricia Maria Guedes [UNIFESP]
    Uma atividade endopeptidasica (Cm-endopepbdase), uma atividade aminopeptidasica (Cm-aminopeptidase), isoinibidores de tripsina (CmTIl e CmTI2) e uma proteina tipo vicilina (cratilina) foram isoladas e parcialmente caracterizadas de sementes de Cratylia moiiis. Cm-endopepbdase hidrolisa Bz-Arg-p-Nan e Ac-Phe-Arg-p-Nan, e termosenslvel, seu pH otimo de acao situa-se entre 7,5 e 8,0 e massa molecular estimada e 80.000. Eletroforese em gel de poliacrilamida, em presenca de DTT, revelou uma banda de massa molecular 45.000. Em cromatografia de fase reversa, em coluna de C-18, Cm-endopepddase apresentou um tempo de retencao de 24 minutos. A atividade em presenca de agentes quelantes, inibidores e reagentes grupos -SH indica que a enzima e uma serinoproteinase que pode depender de metal e talvez tenha um grupo SH importante para a sua estrutura. A hidrolise de Bz-Arg-p-Nan foi estudada em presenca de metais e foi apenas parcialmente inibida por ions de zinco. A preparacao de Cm-endopepbdase apresentou atividade proteolitica sobre caserna e hidrolisou a ligacao Phe-Ser da bradicinina, Lys-bradicinina e Met-Lys-bradicinina; TPCK inibiu parcialmente a hidroiise de bradicinina. Cm-amjnopepddase hidrolisa preferencialmente Leu-b-Na e, semelhante a endopeptidase, e termosensivel, o pH otimo de acao situa-se na faixa de pH alcalino, e ocorre com massas moleculares de 80.000 e 45.000, na ausencia e na presenca de agente redutor, respectivamente. A cromatografia de fase reversa en coluna de C-18 revelou que a enzima e mais hidrofobica que Cm-endopepbdase, sendo eluida aos 30 minutos. A atividade aminopeptidasica foi parcialmente inibida por bestatina e puromicina e foi sensivel a metais, sendo totalmente abolida em presenca de zinco e parcialmente inibida com calcio, cobalto, magnesio e manganes. CmTI isolado por diferentes procedimentos, inclusive cromatografia em tripsina-Sepharose, e estavel na faixa de pH de 2,0 a 10,0 e em diferentes temperaturas. Da cromatografla de gel filtracao foi isolado o dimero do inibidor, com massa molecular 21.000. A eletroforese em gel de poliacrilamida revelou que o monomero tem massa molecular 11.000. Da cromatografia de fase reversa foram isoladas duas formas do inibidor e cujas estruturas primarias apresentaram alta homologia entre si mesmas e com inibidores da familia Bowman-Birk. Em relacao a sitios reativos, os isoinibidores diferem apenas quanto ao segundo sitio...(au)
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    Desenvolvimento de novos inibidores para a timet oligopeptidase e neurolisina
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2009) Dalio, Fernanda Montiel [UNIFESP]; Oliveira, Vitor Marcelo Silveira Bueno Brandão de [UNIFESP]
    O objetivo do presente trabalho foi o desenvolvimento de inibidores para as oligopeptidases timet oligopeptidase (TOP, EC 3.4.24.15) e neurolisina (NEL; EC 3.4.24.16). Esses inibidores tiveram como base um inibidor ja desenvolvido e descrito denominado JA-2 (N-[1-(R, S)-carboxi-3-fenilpropil]-Ala-Aib-Tyr-p-aminobenzoato ou CFP-Ala-Aib-Tyr-PABA). Analogos desse inibidor foram sintetizados contendo residuos de acido aspartico ou arginina na tentativa de explorar uma importante diferenca mapeada na comparacao das estruturas critalograficas da TOP e NEL: na TOP um residuo carregado negativamente (Glu469) esta em posicao de interagir com os residuos P1´ou P2´do substrato enquanto na NEL nessa posicao correspondente encontra-se um residuo carregado positivamente (Arg470). A importancia dessa diferenca entre TOP e NEL foi inicialmente comprovada atraves do estudo cinetico com substratos e enzimas contendo mutacoes sitio-dirigidas (TOP E469R e NEL R470E) e que posteriormente foram importantes tambem na caracterizacao dos inibidores analogos do JA-2 sintetizados. Em relacao ao JA-2 o CFP-Ala-Arg-Tyr-PABA apresentou maior afinidade e seletividade para a timet oligopeptidase e poderia substituir o JA-2 nas dosagens da atividade TOP-simile em extratos de celulas ou tecidos. Os analogos CFP-Asp-Ala-Tyr-PABA e o CFP-Ala-Tyr-Asp-PABA apresentaram maior seletividade e constantes de inibicao sub-micromolar para a NEL e se combinados com substratos seletivos podem tambem ser usados para a dosagem dessa peptidase, que hoje e feita utilizando-se como inibidor o dipeptideo Pro-Ile que tem baixa afinidade Ki~1mM e uma solubilidade em agua tambem baixa o que torna os ensaios pouco precisos e reprodutiveis. Inibidores especificos sao ferramentas importantes para o estudo da funcao de uma enzima. No caso da TOP estudos com JA-2 foram importantes para se concluir que a TOP participa da degradacao de peptideos gerados pela degradacao de proteinas no citosol modulando os peptideos que podem ser apresentados pelo MHC classe I. Porem, como o JA-2 tambem inibe a NEL fica a duvida da participacao ou nao dessa peptidase nesse sistema. A maior seletividade do CFP-Ala-Arg-Tyr-PABA (30 vezes), evita a inibicao conjunta da NEL. Os resultados obtidos com os inibidores, principalmente os compostos contendo Asp/Arg em P1´ comprovaram as predicoes baseadas nas estruturas cristalograficas e sao muito promissores para a continuidade do desenvolvimento planejado
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    Acesso aberto (Open Access)
    Desenvolvimento de um ambiente virtual de bioinformática capaz de analisar sequências do vírus da hepatite C, identificar genótipo, subtipo e mutações associadas à resistência de inibidores de protease.
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2013) Pereira, Anderson Alvarenga [UNIFESP]; Mello, Isabel Maria Vicente Guedes de Carvalho [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/7267507565320007; http://lattes.cnpq.br/2529547420081379; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    O uso de antivirais de acao direta para o virus da Hepatite C tem mostrado que os Inibidores de Protease sao uma estrategia eficaz para o tratamento de pacientes portadores de virus do genotipo 1. Uma ferramenta de bioInformática capaz de identificar o genotipo, subtipo e mutacoes associadas a resistencia a esta classe de antivirais e de extrema importancia para a melhor administracao destes antivirais e monitoramento dos pacientes que possuem indicacao deste tipo tratamento. Este trabalho tem como objetivo o desenvolvimento de um ambiente virtual de bioInformática, propondo inferir, em larga escala, o genotipo e subtipo viral e se este virus e portador de mutacoes associadas a resistencia de Inibidores de Protease. A identificacao dos genotipos e subtipos e feita atraves de similaridade com um banco de referencia, utilizando a ferramenta BLAST. A busca da presenca de mutacoes associadas com resistencia no genoma viral e feita atraves do alinhamento entre a sequencia a ser analisada com a sequencia de referencia H77 do Virus da Hepatite C. Apresenta-se, ainda um pipeline de submissao de dados com interface amigavel onde e possivel submeter dados binarios (cromatogramas) e textos (fasta). O resultado final e um laudo de resistencia genotipica para os Inibidores de Protease contendo o genotipo e subtipo viral e a presenca ou ausencia de mutacoes associadas com a resistencia aos inibidores de protease e com seus niveis de resistencia determinados
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    Determinação da sequência primária do inibidor glicosilado das sementes de Bauhinia rufa
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2003) Sumikawa, Joana Tomomi [UNIFESP]; Oliva, Maria Luiza Vilela [UNIFESP]
    Objetivo principal: Isolar e caracterizar a glicoproteina que apresenta atividade inibitoria de elastase detectada no extrato das sementes de Bauhinia rufa. Metodos: O inibidor foi purificado por precipitacao por acetona (80 por cento v/v), cromatografia de afinidade Con A Sepharose, cromatografia de troca ionica (HiTrap Q e ResourceTM Q em sistema FPLC), cromatografia de filtracao em gel SuperdexTm 200 (sistema FPLC) e cromatografia de fase reversa em coluna C1$ (sistema HPLC). gBrEl foi analisado por SDS PAGE para analise da massa molecular e deteccao de carboidratos. Resultados: pela analise eletroforetica o inibidor com atividade anti elastasica apresentou-se como uma cadeia unica com uma massa molecular aproximadamente de 20 kDa e pela coloracao com reagente de Schiff confirmou a presenca de carboidratos na estrutura da proteina. gBrEl inibe elastase pancreatica de porco e nao inibe elastase de neutrofilo humana, calicreina plasmatica humana, calicreina pancreatica de porco e tripsina. Atraves da analise por sequenciamento, a proteina e composta por 143 residuos de aminoacidos e o sitio de glicosilacao foi detectado em Asn 38 apresenta Mr. 1170 por espectrometria de massa. Discussao: A metedologia empregada para a purificacao do inibidor de elastase obteve rendimento de 21 e purificacao de cerca de 306 vezes. A constante de inibicao da elastase e de 6,18.10-8 M e a estequiometria de reacao e 1:2. Atraves da analise de similariedade (FASTA program) gBrEl apresenta-se muito similar aos inibidores da familia Kunitz de plantas e pela comparacao conservativa do sitio reativo, o...(au)
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    EcTI, um inibidor de protease de planta, diminui a adesao e a invasao celular in vitro atraves da inibicao da via de sinalizacao Src-FAK
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2011) Paula, Claudia Alessandra Andrade de [UNIFESP]
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    Efeito de inibidor de peptidases de origem vegetal em modelos experimentais de trombose e diabetes
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2009) Vilela-Brito, Marlon [UNIFESP]
    Isolada das sementes de Bauhinina bauhinioides, a proteina BbKI inibe a calicreina plasmatica e e um agonista do receptor B2, pois contrai a musculatura lisa, mobiliza Ca2+ e induz a liberacao de NO. No presente estudo, o efeito do BbKI foi investigado em modelos experimentais in vivo de trombose e diabetes. A massa do trombo venoso induzido por estase diminuiu 65% em relacao a dos grupos pre-tratados com HEPES 7,5 mM, pH 7,4 ou NaCl 0,15 M. BbKI nao provocou sangramento nos animais. No modelo experimental de diabetes tipo 1, o grupo diabetico tratado com BbKI por via subcutanea apresentou reducao significativa nos niveis da glicose serica, em relacao aos grupos diabeticos nao tratados. No grupo de animais com hiperglicemia de 350 a 425 mg/dL, a reducao foi de 64% e 36% da glicemia inicial, apos 4 e 24 horas, respectivamente enquanto que em animais com hiperglicemia acima de 425 e inferior a 480 mg/dL a reducao observada foi de 40% e 21%, apos 5 e 24 horas, respectivamente. Os ratos tratados com insulina (6,6 UI/kg ou 2,2 mg/kg) tiveram um decrescimo rapido e acentuado da glicemia, de 90 minutos a 2 horas apos o tratamento, levando-os ao estado hipoglicemico. Por outro lado, apos 24 horas do tratamento com insulina, a glicemia foi equivalente a inicial. A massa do trombo induzido por estase venosa, apos 24 horas do tratamento BbKI, nao foi significativamente diferente do grupo controle nao diabetico. Em conclusao, os efeitos observados pela acao do BbKI podem ser consequencia dos efeitos da inibicao de calicreina plasmatica e de agonista do receptor B2
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    Estudo de estrutura e função de inibidores de proteases presentes em artrópodes hematófagos, vetores de doenças
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2006) Tanaka, Aparecida Sadae [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
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    Estudo estrutural e funcional de um inibidor de serinoprotease do tipo Pacifastina presente no barbeiro Triatoma infestans
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2008) De Marco, Renato [UNIFESP]; Tanaka, Aparecida Sadae [UNIFESP]
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    Estudos funcionais do rBbKI modificado: ação em enzimas proteolíticas e desenvolvimento do Callosobruchus maculatus
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2005) Brito, Marlon Vilela de [UNIFESP]; Oliva, Maria Luiza Vilela [UNIFESP]
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    Acesso aberto (Open Access)
    Expressao genica da IL-28b em pacientes com hepatite c cronica no pre-tratamento e na semana quatro
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2013) Azevedo, Rafael Gonçalves [UNIFESP]; Komninakis, Shirley Vasconcelos [UNIFESP]; Diaz, Ricardo Sobhie [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/0846508761438062; http://lattes.cnpq.br/6529080329230878; http://lattes.cnpq.br/3041445714517730
    Introdução: os SNPs rs12979860 e rs8099917 no gene IL-28B estao associados a cura espontanea na infeccao aguda pelo HCV e a resposta virologica sustentada (RVS) ou a falha virologica apos tratamento padrao da hepatite C cronica atraves da administracao de PEG-IFN/RBV. Estes SNPs possuem influencia na expressao da IL-28B. Objetivos: correlacionar a expressao genica da IL-28B com os SNPs rs12979860 e rs8099917, a RVR e as diferentes caracteristicas dos pacientes monoinfectados cronicamente pelo HCV. Metodologia: 30 pacientes foram avaliados antes do inicio da terapia e na quarta semana de tratamento padrao. Todos tinham idade igual ou superior a 18 anos, eram infectados cronicamente pelo virus da hepatite C, nao possuiam infeccao pelos virus da imunodefiCiência humana ou outras hepatites virais e estavam com indicacao para iniciar tratamento. PBMCs foram obtidas e o RNA total foi isolado pelo kit RNeasy Mini (Qiagen, USA). A transcricao reversa do RNA mensageiro foi feita com o kit High Capacity RNA-to-cDNA (Applied Biosystems, USA) e a quantificacao relativa da IL-28B foi realizada utilizando o kit TaqMan Gene Expression Assays (Applied Biosystems, USA). Regioes que compreendem os SNPs rs12979860 e rs8099917 foram amplificadas pela PCR seguindo os protocolos publicados por Grebely et al. em 2010 e Moreira et al. em 2012, respectivamente. A genotipagem foi realizada pelo sequenciamento genetico. As sequencias foram editadas no programa Sequencher 5.0.1 e as analises estatisticas foram realizadas no programa SPSS 21. A quantificacao relativa da IL28B foi avaliada no programa DataAssist 3.01 (Applied Biosystems, USA) utilizando o metodo 2 Delta-Delta Ct (2-ΔΔCt) descrito por Livak et al. em 2001. Todos os pacientes participantes do nosso estudo leram e assinaram o termo de consentimento livre esclarecido, tomando Ciência e autorizando a utilizacao dessas amostras. Alem disso, nosso trabalho tambem foi aprovado pelo Comite de Etica em Pesquisa da Universidade Federal de São Paulo/Hospital São Paulo (CEP numero 1705/10).Resultado: a taxa de RVR foi de 60%. os alelos rs12979860 CT/TT foram associados a presenca de fibrose em grau avancado (p=0,002; Teste Qui-quadrado) alelos rs8099917 TT foram significativamente associados a descendencia caucasiana (p=0,037; Teste Qui-quadrado) e rs12979860 CT;TT/rs8099917 TG;GG foram fortemente associados a presenca de fibrose em grau avancado (p=0,005; Teste Qui-quadrado). Antes do inicio da terapia, os pacientes com os genotipos virais 2 ou 3 tiveram o gene IL-28B 1,18 vezes mais expresso do que aqueles com 1 ou 4 (p=0,011; Teste t pareado; IC, 95%). Na expressao genica, o periodo pretratamento foi 1,84 vezes maior nos individuos com os alelos rs12979860 CC/rs8099917 TT em relacao aqueles com os alelos rs12979860 CT;TT/rs8099917 TG;GG (p=0,015; Teste t; IC, 95%). Na quarta semana de tratamento a diferenca significativamente maior (1,67 vezes) na expressao da IL-28B nos individuos com os alelos rs12979860 CC/rs8099917 TT versus rs12979860 CT;TT/rs8099917 TG;GG (p=0,046; Teste t pareado; IC, 95%).Discussao: o grande diferencial do nosso trabalho foi estudar a relacao entre a expressao do gene Il28B e a quarta semana de tratamento. Nosso estudo mostrou que sua expressao e maior no grupo de pacientes que possuem os alelos rs12979860 CC e rs8099917 TT juntos do que no grupo que possuem os alelos rs12979860 CT/TT e rs8099917 TG/GG, tanto antes do inicio da terapia como na quarta semana de tratamento.Conclusao: verificamos que os melhores preditores de RVR acontecem quando os genotipos rs12979860, rs8099917 e os niveis de expressao do gene IL-28B ocorrem concomitantemente.
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    Indicadores antropométricos em crianças com aids em uso de terapêutica com inibidores de protease
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2001) Soraggi Neto, Caetano [UNIFESP]; Fisberg, Mauro [UNIFESP]
    Foram analisadas indices antropometricos e suas relacoes durante 6 meses antes e 6 meses depois, apos o inicio de terapeutica antiretroviral com inibidores de protease, em 120 criancas com AIDS, entre 2 anos e 14 anos de idade. Foram coletados dados de peso, altura, indice de massa corporal, durante o periodo pre inibidor de protease (6 meses) e apos o inicio da terapeutica com o inibidor de protease (6 meses) e analisado se houve alteracoes nestes indices nos dois periodos. Analises laboratoriais de contagem de linfocitos CD4+, carga viral do FHV, hemograma, albumina serica e triglicerides sericos tambem foram feitos. Apos coletas dos dados, foram analisados 3 grupos que recebiam terapeuticas no periodo pre inibidor: gamaglobulina E.V.(GA); azt/ddi/gamaglobuhna E.V. (ZD); azt/3tc/gamaglobulina E.V. (Z3) e analisados as variacoes dos indices antropometricos e aspectos laboratoriais, no decorrer do tempo apos a Introdução do inibidor de protease. A analise foi feita como um todo e dividida nos tres grupos em ambos os periodos. Apos a analise, foi notada que a Introdução da terapeutica com o inibidor de protease, nao causou alteracoes significativas entre os grupos em estudo em ambos os periodos
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    Inibidor de calicreína plasmática humana isolado de Bauhinia bauhinioides: interação com peptídeos sintéticos e substratos fluorogênicos relacionados à sequência do sítio reativo
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2001) Santomauro-Vaz, Eugenio Miguel [UNIFESP]; Oliva, Maria Luiza Vilela [UNIFESP]
    Mendes descreveu em 1998, um inibidor de serinoprotease tipo Kunitz, isolado de sementes de Bauhinia (BbKI). A massa molecular, calculada a partir da sequencia primaria e 18034 (composicao elementar C813 H1273 N218 0240 S1 e pl 6,9). O inibidor mostrou alta homologia com outros inibidores tipo Kunitz de plantas, exceto pela ausencia de pontes disulfeto. BbKI apresenta um unico residuo cisteina na porcao C-terminal (residuo 154). A Arg foi definida como o aminoacido em P1, e, tem importante participacao na inibicao de tripsina por um mecanismo de slowtight binding com estequiometria de reacao de 1 :1. BbKI inibe tripsina (K; 0,6 qM), calicreina plasmatica (K; 0,35 rIM), plasmina (K; 33,1 rIM), e pouco efetivo na inibicao de quimotripsina (K; 3900 rIM), mostrou-se o melhor inibidor de calicreina plasmatica isolado de sementes de Bauhinia. Por esse motivo foi denominado: B. bauhinioides Kallikrein Inhibitor (BbKI). Para investigar a relacao entre estrutura primaria e seletividade inibitoria, foram realizados estudos comparativos entre parametros cineticos de hidrolise por calicreina plasmatica humana e outras serinoproteases, utilizando peptideos sinteticos e substratos peptidicos de fluorescencia apagada baseados no sitio reativo do inibidor. O peptideo sintetico (RPGLPVRFESPLRINIIKE) contendo 19 aminoacidos do sitio reativo do inibidor, inibiu a hidrolise por calicreina plasmatica do substrato_(au)
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    Mecanismo de ação do inibidor de protease de Bauhinia ssp e
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2007) Sumikawa, Joana Tomomi [UNIFESP]; Oliva, Maria Luiza Vilela [UNIFESP]
    O objetivo do trabalho foi investigar o mecanismo de ação dos inibidores de proteases e de compostos derivados da estrutura primária destes inibidores para dar subsídios ao desenvolvimento de produtos pesticidas não agressivos ao meio ambiente e que possam ser aplicados à planta e à semente, de modo a protegê-las contra o ataque de organismos predadores, particularmente os bruquídeos. São objetivos específicos: 1. Isolar o inibidor de tripsina (BrTI) das sementes de Bauhinia rufa e estudar a influência do inibidor e de peptídeos derivados no desenvolvimento do bruquídeo, Callosobruchus maculatus e comparar a ação com a de outros inibidores de proteases; 2. Investigar o mecanismo de ação da proteína e dos peptídeos isolando os compostos afetados pela ação do inibidor e dos peptídeos derivados, que prejudicam o desenvolvimento larval; 3. Investigar a localização dos compostos que apresentarem atividade inseticida na larva de C. maculatus por microscopia confocal 4. Analisar o ciclo celular das células do trato digestório das larvas de C. maculatus alimentadas com o peptídeo tóxico por citometria de fluxo..
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    Purificação e caracterização de uma lectina e de um inibidor de serinoproteinase, de sementes de Swartzia pickellii Killip
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 1994) Cavalcanti, Maria do Socorro de Mendonca [UNIFESP]; Sampaio, Cláudio Augusto Machado [UNIFESP]
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    Purificacao e comparacao de inibidores de proteinases de sementes de stryphnodendron adstringens e stryphnodendron obovatum
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 1988) Fontoura, Beatriz Marina Avila [UNIFESP]
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    Purificação, clonagem, expressão e caracterização molecular de inibidores de serinoproteases presentes em Triatoma infestans, vetor da doença de Chagas
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2001) Campos, Ivan Torres Nicolau de [UNIFESP]; Tanaka, Aparecida Sadae [UNIFESP]
    Animais hematofagos possuem necessidade vital em manter o sangue de seus hospedeiros fluido, tanto na aquisicao como no armazenamento e diGestão do produto alimentar. Para tal, esses animais desenvolveram ao longo de seus processos evolutivos mecanismos para interferir na hemostasia dos seus hospedeiros. Neste trabalho foi purificado um inibidor de trombina (infestina) presente no estomago do barbeiro Triatoma infestans. A infestina apresentou massa molecular de aproximadamente 13 kDa, em SDS-PAGE, inibindo trombina e tripsina com Ki de 43 pM e 2 nM, respectivamente. A sequencia de aminoacidos da regiao N-terminal e de um peptideo interno permitiram a classificacao da infestina como um inibidor de serinoproteases da familia tipo-Kazal. Baseado em estudos anteriores e na sequencia de aminoacidos da proteina nativa, foi possivel clonar o gene da infestina. Curiosamente o gene da infestina traduziu para uma proteina composta por 4 dominios do tipo-Kazal, mas a proteina purificada correspondeu apenas aos dois primeiros dominios. Realizou-se a clonagem e expressao em leveduras S. cerevisiae do gene obtido (infestina 1-4) bem como as variantes correspondentes aos dois primeiros dominios (infestina 1-2) e aos dois ultimos (infestina 3-4). As infestinas recombinantes foram purificadas e caracterizadas, apresentando atividades inibitorias distintas. A r-infestina 1-2 apresentou atividades inibitorias similares a infestina nativa, inibindo trombina e tripsina com K de 25 pM e 3 nM, respectivamente. A r-infestina 1-4 inibiu trombina (0,8 nM), tripsina (5 nM), fator Xa (60 nM), plasmina (1 nM) e fator XIla (78 pM). A infestina 3-4 inibiu tripsina (2 nM), plasmina (0,37 nM), fator Xa(17 nM) e fator XIla (45 pM)
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    Sequencia completa dos aminoacidos do inibidor de tripsina e quimotripsina de sementes de vigna unguiculata (L. ) Walp
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 1985) Morhy, Lauro [UNIFESP]