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    Caracterização dos Mecanismos de Resistência a Cefalosporina de Quarta Geração e a Ertapenem em Enterobacter cloacae subespécie cloacae Isolados em Hemoculturas
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2008-03-26) Cayô, Rodrigo [UNIFESP]; Pignatari, Antonio Carlos Campos [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Background: The overproduction of AmpC in Enterobacter spp. can contribute to resistance phenotype to fourth-generation cephalosporins and to carbapenens. The mechanisms of resistance to cefepime and ertapenem were studied among 11 E. cloacae subespecie cloacae clinical isolates from blood cultures isolated at Sao Paulo Hospital. Methods: Susceptibility testing by disk diffusion and agar dilution techniques was performed according to CLSI. Analysis of outer membrane protein (OMP) was performed by SDS-PAGE. The genetic relatedness was evaluated by PFGE and the dendogram was obtained by Bionumerics program. The isolates were also tested against cefepime, ertapenem, imipenem and meropenem with and without of PAƒÀN (25 ƒÊg/ml) and reserpine (20 ƒÊg/ml), an efflux pump inhibitors by agar dilution. Genes for ESƒÀLs, carbapenemases and plamidial AmpCs were screened by PCR and confirmed by sequencing. The expression level of ampC, ompC and ompF genes was measured by real time PCR (qRT-PCR). Results: All isolates were resistant to cephalosporins, aztreonam, ƒÀ-lactamases association inhibitors, tetraciclin, ciprofloxacin and amikacin, by disk diffusion. All isolates showed high resistant phenotype to cefotaxime (MIC50, > 256 ƒÊg/mL), ceftazidime (MIC50, 256 ƒÊg/mL), and cefepime (MIC50, 256 ƒÊg/mL) but they were susceptible to imipenem (MIC50, 0.25 ƒÊg/mL) and meropenem (MIC50, 0.25 ƒÊg/mL). Seven isolates showed ertapenem MICs of 4 ƒÊg/ml, while other three isolates showed MICs of 8 ƒÊg/ml and one isolate showed MIC of 2 ƒÊg/ml. Four clusters were founded by the Bionumerics program. The PCR results showed amplification for blaTEM and blaCTX-M. Hyperexpression of ampC was detected in all isolates by qRT-PCR. Only one sample showed a decreased in the OmpC expression. The loss of an OMP of 43 kDa was observed for all isolates in the SDS-PAGE technicque compared to the susceptible control. No significant reduction for â-lactam’s MICs was observed in the presence of PAâN. Conclusions: The results showed that the hyperproduction of AmpC coupled with ESBL production were responsible for the high resistant rates to cefepime. The hyperproduction of AmpC coupled with the loss of an OMP of 43 kDa is likely to be responsible for the reduced susceptibility to ertapenem in the E. cloacae subespecie cloacae isolates, which seems not to be associated with efflux systems.
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    Caracterização epidemiológica, clínica e microbiológica das infecções da corrente sanguínea de unidades de terapia intensiva adulto de um hospital terciário de ensino da cidade de São Paulo
    (Universidade Federal de São Paulo, 2024-11-06) Santos, Paulo Henrique Dantas dos [UNIFESP]; Medeiros, Eduardo Alexandrino Servolo de [UNIFESP]; Chagas Neto, Thomás Cardoso [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/0657127828327101; http://lattes.cnpq.br/9548262587954222; http://lattes.cnpq.br/7071042329034394
    Introdução: A infecção da corrente sanguínea (ICS) está associada a alta morbidade e mortalidade em todo o mundo. Os termos bacteremia e ICS são frequentemente usados como sinônimos e geralmente se referem ao isolamento de um microrganismo a partir de uma hemocultura obtida de um paciente com sinais clínicos de infecção. Essas infecções são frequentemente classificadas como primárias (sem foco identificado) ou secundárias quando associadas à confirmação clínica ou microbiológica da infecção em um sítio definido. Atualmente, o aumento da incidência de microrganismos resistentes a diversos antimicrobianos, principalmente em unidades de terapia intensiva (UTI), resulta em difícil tratamento destas infecções e na escolha do tratamento adequado, seja empírico ou direcionado. Objetivos: 1. Identificar os microrganismos isolados e o perfil de sensibilidade das hemoculturas coletadas dos pacientes com ICS de unidades de terapia intensiva; 2. Avaliar as taxas de contaminação das hemoculturas; 3. Avaliar a adesão ao protocolo institucional de antibioticoterapia empírica e direcionada. 4. Determinar o impacto das ICS na mortalidade. Métodos: Foi realizado um estudo tipo coorte histórico com os dados clínicos e laboratoriais dos pacientes com hemoculturas coletadas e definidas como ICS primaria ou secundária, laboratorialmente confirmadas, em duas UTIs adulto do Hospital São Paulo – Hospital Universitário da Unifesp durante o período de 48 meses, janeiro de 2018 a dezembro de 2021. Foi produzido um banco de dados com as informações sociodemográficas, clínicas e laboratoriais obtidos através do prontuário eletrônico do paciente (PEP) e da base de dados do serviço de controle de infecção hospitalar (SCIH) e do laboratório de microbiologia. O estudo foi aprovado pelo Comitê Ética – Plataforma Brasil – CAAE: 12251219.2.000.5505. Resultados: Foram identificadas 3.429 hemoculturas coletadas, destas 78% (N= 2.677/3.429) tiveram o resultado negativo e 22% (N= 752/3.429) positivas. Destas, 64% (N= 486/752) foram consideradas como agentes contaminantes como Staphylococcus coagulasenegativa (N= 484/486) e Corynebacterium amycolatum (N=02/486). A taxa de contaminação das hemoculturas teve maior frequência no ano de 2020 nas UTIs do estudo. Foi observado a prevalência de ICS por um único microrganismo (N=166/186): Klebsiella pneumoniae (N=55/186), seguido por Acinetobacter baumannii (29/186), Staphylococcus coagulasenegativa (N=28/186), Staphylococcus aureus (N=25/186), Enterococcus spp (N=19/186) e Candida spp (N=12/186). O período de positividade das hemoculturas dos principais agentes etiológicos foi inferior a 24 horas na maior parte dos casos. A sensibilidade aos principais antimicrobianos foi avaliada, assim como a concentração inibitória mínima (CIM): Klebsiella pneumoniae e Acinetobacter baumannii apresentaram alta resistência aos carbapenêmicos e a polimixina B. Todos os pacientes com diagnóstico de ICS receberam antibioticoterapia empírica. A mortalidade atribuída antes da adequação terapêutica foi de 19% (N=35/186). O meropenem (N=124/186), seguido da vancomicina (N=112/186), polimixina B (N=63/186), amicacina (N=42/186) e fluconazol (N=23/186), foram os principais antimicrobianos empíricos utilizados em monoterapia e em combinações terapêuticas. Do total de pacientes, apenas 47% (N=87/186) apresentaram sensibilidade aos antimicrobianos utilizados na terapia empírica, destes 14% (N=12/87) morreram e 42% (N=78/186) apresentaram resistência a pelo menos um antimicrobiano utilizado, destes 26% (N=20/78) morreram. Cinco por cento (N=10/186) dos isolados das ICS não foram submetidos a testes de sensibilidade e 6% (N=11/186) dos pacientes receberam antimicrobianos não indicados para o tratamento do agente etiológico, destes 27% (N=3/11) morreram. Dos pacientes que receberam terapia direcionada (N=151/186), 30% receberam monoterapia, sendo que 86% (N=30/35) continuaram o tratamento com ao menos um antimicrobiano utilizado na terapia empírica e 14% (N=5/35) tiveram alteração do antimicrobiano baseado na identificação do agente etiológico e na sua sensibilidade aos antimicrobianos, nenhum paciente morreu durante o período da terapia direcionada. Conclusão: Os Gramnegativos, especialmente Klebsiella pneumoniae resistentes aos carbapenêmicos, foram os principais microrganismos identificados nas ICS durante o período do estudo e a mortalidade relacionada a este agente foi maior do que nas infecções por outros Gramnegativos e Grampositivos O ambiente de alta resistência dificulta a assertividade da antibioticoterapia impactando diretamente na resistência aos antimicrobianos preconizados para a terapia empírica e direcionada institucionalmente. Medidas de controle, prevenção e a educação continuada dos multiprofissionais da assistência ao paciente, devem ser desenvolvidas e aplicadas.
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    Caracterização fenotípica e molecular de Pseudomonas aeruginosa resistentes a carbapenêmicos e produtoras de Metalobeta- lactamase, isoladas em hemoculturas de crianças e adolescentes com câncer
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2008-01-30) Fernandes, Thaís Ávila [UNIFESP]; Pignatari, Antonio Carlos Campos [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Pseudomonas aeruginosa is an important opportunist pathogen, particularly for oncologic and neutropenic hospitalized patients. One of the main characterisitic of this bacteria is the development of multiple antibiotic resistance, including the carbapenems. The first metallo-beta-lactamase (MBL) encoding the gene blaSPM-1 reported in the literature was isolated in the year 2000 from a patient admitted to the Instituto de Oncologia Pediatrica (IOP/GRAAC - UNIFESP). Objective: To evalute the prevalence of P. aeruginosa carbapenem resistant and MBL producers isolated from bloodstream samples collected from patients admitted to the IOP in the period 2000- 2005; to describe the dissemination of these enzymes by molecular typing and clinical/epidemiological data. Methods: 56 P. aeruginosa isolates from 49 patients were tested against 10 different antibiotics by disc diffusion. The isolates resistant to carbapenems were tested by disc-approximation method and submitted to PCR reaction for detection of MBLs genes. The isolates producers of blaSPM-1 were molecular typed by PFGE. The clinical and epidemiological data were obtained from the patiens charts. Results: From 2000 to 2005, 32 out of 56 P. aeruginosa isolates were classified as carbepenem reistant by disc diffusion. Eighteen out of 32 (56,2%) isolates carried blaSPM-1 and revealed the same molecular typing profile. We did not detected other MBL blaIMP-1, blaVIM-1 and blaVIM-2. The antibiotic therapy was considered adequate in only 17,7% of the patients with P. aeruginosa bacteremia encoding the gene blaSPM-1. We observed a higher letality rate, in the period of 30 days after bacteremia, in these patients compared with the letality of patients with P. aeruginosa bacteremia resistant to carbapenems but not carring MBL. Conclusion: We detected the presence of a P. aeruginosa clone resistant to carbapenems and carrying the gene blaSPM-1 that persisted in blood stream isolates of patients admitted to the IOP from 2000 to 2005. A high letality rate and inadequacy of initial antibiotic treatment was observed justifying a strict epidemiologic surveillance and re-evalutation of antibiotic treatment protocol.
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    Caracterização microbiológica e epidemiologia molecular de Enterococcus spp. isolados de infecções da corrente sanguínea de pacientes do Projeto SCOPE Brasil
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2015-05-25) Chagas Neto, Thomas Cardoso das [UNIFESP]; Pignatari, Antonio Carlos Campos [UNIFESP]; Rodrigues, Mirian Silva do Carmo [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/2846417844297257; http://lattes.cnpq.br/9461346610553865; http://lattes.cnpq.br/0657127828327101; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Introdução: Infecções de corrente sanguínea (ICS) por Enterococcus spp., especialmente quando relacionadas com isolados resistentes à vancomicina, apresentam altas taxas de morbidade e terapia antimicrobiana limitada. Objetivos: Caracterizar o perfil epidemiológico e molecular de Enterococcus spp. isolados de hemoculturas de pacientes com ICS participantes do programa SCOPE Brasil. Material e Métodos: Entre junho de 2007 e dezembro de 2011, 144 cepas de Enterococcus spp. foram isoladas a partir do primeiro episódio de ICS hospitalar de pacientes de 12 centros médicos de quatro regiões brasileiras. Todas as 144 amostras foram re-identificadas pelo sistema automatizado Phoenix® e a identificação final das espécies foi confirmada por espectrometria de massa por ionização e dessorção a laser - assistida por matriz - matrix associated laser desorption-ionization - time of flight (MALDI-TOF MS) (Bruker Microflex, Vitek MS® BMX) e reação da polimerase em cadeia (PCR) (oligonucleotídeos, ddlE.faecalis, ddlE.faecium). Além disso, os isolados foram submetidos a testes de sensibilidade aos antimicrobianos pelo sistema Phoenix® e para aqueles que apresentaram resistência à vancomicina, foram submetidos ao Etest® para confirmação das CIMs de daptomicina, linezolida, teicoplanina e vancomicina. O mecanismo de resistência a vancomicina foi confirmado por PCR para os genes vanA e vanB e a tipagem por gel de eletroforese em campo pulsado - pulsed field gel electrophoresis (PFGE) foram feitas para os isolados resistentes à vancomicina. A tipagem pela técnica de sequenciamento de múltiplos loci - multilocus sequence typing MLST foi realizada para 22 isolados selecionados com base nos perfis de PFGE. Avaliou-se a aplicabilidade da técnica de MALDI-TOF MS para tipagem de Enterococcuss spp. comparando os dendrogramas do tipo UHCA e UPGMA com o algoritimo de Ward. Resultados: A espécie mais prevalente foi o E. faecalis com 110 isolados, seguidos por E. faecium com 33 isolados e apenas um E. durans. Todos os 35 isolados resistentes à vancomicina apresentaram o gene vanA, dos quais 15 da espécies E. faecalis (EFSRV) e 20 da E. faecium (EFMRV). De acordo com a PFGE foram encontrados dois padrões (B e C), que prevalecem entre EFSRV entre EFMRV foi observado um maior polimorfismo e três grupos, sendo padrão A, o predominante. MLST evidenciou em E. faecalis os STs 9; 103; 525 e 526. Enquanto em E. faecium STs encontrados foram 18, 412, 478 e 896. Conclusões: E. faecalis foi a espécie mais prevalente. Neoplasias foram as doenças de base mais encontradas. ST526 foi o mais encontrado entre os EFSRV e o ST412 o mais prevalente entre os EFMRV. A tipagem com os espectros produzidos no Microflex LT® e analisados no BioNumerics 7.5 apresentou uma boa concordância com o MLST para E. faecalis, quando utilizado o algoritmo de Ward desconsiderando a intensidade dos espectros. Mesmo utilizando Ward para E. faecium não houve boa correlação com o MLST.
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    Caracterização molecular de Pseudomonas aeruginosa resistentes a carbapenêmicos e produtoras de metalo-β-lactamase isoladas em hemoculturas de crianças e adolescentes com câncer
    (Sociedade Brasileira de Medicina Tropical - SBMT, 2010-08-01) Fernandes, Thaís Ávila [UNIFESP]; Pereira, Carlos Alberto Pires [UNIFESP]; Petrilli, Antonio Sergio [UNIFESP]; Pignatari, Antonio Carlos Campos [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    INTRODUCTION: The objective of this study was to evaluate the prevalence and dissemination of carbapenem-resistant and metallo-β-lactamase-producing Pseudomonas aeruginosa isolated from blood-stream samples (2000-2005) that were collected from patients admitted to the Institute of Pediatric Oncology, UNIFESP (IOP-GRAACC). METHODS AND RESULTS: Fifty-six P. aeruginosa samples were isolated from 49 patients. Thirty-two of these samples were classified as carbapenem-resistant using the disc diffusion method and were subjected to the PCR reaction in order to detect MBL genes. Eighteen of these 32 isolates showed the blaSPM-1 gene. Eight samples selected in different years over the study period presented the same genetic profile according to pulsed-field gel electrophoresis. The antimicrobial therapy was considered adequate for only 23.5% of the patients with bacteremia due to P. aeruginosa carrying the blaSPM-1 gene, and a high lethality rate of 70.6% was observed during the 30-day period after bacteremia and an inadequate initial antibiotic regimen. CONCLUSIONS: We detected the presence of a clone of carbapenem-resistant P. aeruginosa carrying blaSPM-1 that persisted in blood culture samples over a six-year period at the institution, with high lethality, thus justifying rigorous epidemiological surveillance and a rearrangement of the antimicrobial therapy regimens at the institution.
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    Oligella urethralis isolada em hemocultura de paciente internada no complexo HSP/UNIFESP
    (Sociedade Brasileira de Patologia ClínicaSociedade Brasileira de PatologiaSociedade Brasileira de Citopatologia, 2009-02-01) Raimundo, Luis Gustavo [UNIFESP]; Dinato, Leandro [UNIFESP]; Pinto, Fernando Pereira [UNIFESP]; Machado, Antonia Maria De Oliveira [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    First time isolation of Oligella urethralis in two samples of peripheral blood detected by continuous metabolism monitoring methodology (Bactec 61650 system) and identified by the automatized Phoenix 61650 system (BD System) in patient with retro-peritoneal lymphoma with metastasis in the central nervous system at São Paulo hospital of Federal University of São Paulo (HSP/UNIFESP).
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    Perfil de consumo de antibacterianos e correlação com multirresistência de bactérias isoladas em unidades críticas de um hospital de ensino de São Paulo
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2021) Rattes, Alysson Leandro Ribeiro [UNIFESP]; Burattini, Marcelo Nascimento [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo
    The evolution of multi resistance bacteria, resulting from selection pressure related to the inappropriate use of antibiotics, remains an alarming issue. OBJECTIVES: To analyze temporal trends in antibiotic consumption and its correlation with the development of antimicrobial resistance in first bacterial isolates of blood cultures from ten consecutive years. METHODS: observational, retrospective, single-center study carried out in a Brazilian tertiary university hospital. The correlation of temporal trends of antibiotic use (DDD/100 patient-day) with the rate of resistant isolates from selected bacteria first blood cultures were analyzed over ten years. RESULTS Cephalosporins were the most used class of antibiotics and presented the highest resistance profiles, with ceftriaxone being the most used antibiotic. However, there were different patterns of time trends relating the use of antibiotics and the development of bacterial resistance. There was an increase in resistance to A. baumannii (amikacin, ceftazidime, imipenem and piperacillin-tazobactam) and K. pneumoniae (cephalosporins, carbapenems, piperacillin-tazobactam, polymyxin, Tigecycline). K. pneumoniae showed a significant positive correlation between consumption and resistance for imipenem, meropenem, piperacillintazobactam, polymyxin, tigecycline and A. baumannii with ampicillin-sulbactam. CONCLUSION: There were significant correlations between antibiotic use and development of resistance, but with different evolution patterns related to the different bacteria and antibiotics analyzed which may imply different genetic mechanisms involved for Acinetobacter baumannii and Klebsiella pneumoniae.
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    Prevalência e caracterização molecular de staphylococcus coagulase negativo isolados de infecção de corrente sanguínea do projeto Scope Brasil
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2015-04-16) Souza, Alinne Guimaraes de [UNIFESP]; Pignatari, Antonio Carlos Campos [UNIFESP]; Silva, Rodrigo Cayô da [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/5699739668358897; http://lattes.cnpq.br/9461346610553865; http://lattes.cnpq.br/4627668944256960; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Staphylococcus coagulase negativo (SCoN) têm emergido como um dos patógenos predominantes nas infecções relacionadas à assistência à saúde (IRAS). O significado clínico de outras espécies não-S. epidermidis tem sido reconhecido nos últimos anos. Os objetivos do presente estudo foram comparar diferentes metodologias na identificação dos isolados de SCoN provenientes de infecção de corrente sanguínea (ICS) obtidos nos 14 centros médicos participantes do Projeto SCOPE Brasil, avaliar a frequência das diferentes espécies de SCoN como causadores de ICS, analisar as características epidemiológicas desses micro-organismos, bem como a frequência dos genes mecA e icaAB. Um total de 280 isolados de SCoN provenientes de ICS foram inicialmente identificados pelo sistema automatizado Phoenix® e, em seguida, pelas técnicas de MALDI-TOF MS e PCR multiplex. Para os resultados discrepantes entre as metodologias testadas, o sequenciamento do gene rpoB foi utilizado. As principais espécies de SCoN isoladas de ICS no Projeto SCOPE Brasil foram: S. epidermidis (51,8%), S. haemolyticus (21,8%), S. hominis (13,2%) e S. capitis (6,5%). A concordância das principais espécies de SCoN entre a PCR multiplex e o MALDI-TOF MS foi de 99,6%. Embora haja divergência de identificação em alguns isolados de SCoN pelo método automatizado em relação aos outros dois métodos, o resultado do coeficiente de concordância kappa foi considerado satisfatório (K=0,691). 89,0% dos isolados de SCoN apresentaram o gene mecA e 35,0% apresentaram o gene icaAB. Em 68,2% dos episódios de ICS a fonte foi considerada primária, sendo associada principalmente à presença de cateter venoso central (CVC). O uso de CVC foi considerado o principal fator de risco para a aquisição de ICS por SCoN (82,1%), seguido de ventilação mecânica (37,9%) e cateter vesical (35,0%). As principais patologias de base foram: doenças neurológicas (17,9%), neoplasias (16,8%) e doenças pulmonares (15,0%). 60,5% dos pacientes estavam internados em unidades de terapia intensiva e a taxa de mortalidade geral foi de 27.6%. Concluímos que a técnica de MALDI-TOF MS demonstrou ser uma metodologia confiável e rápida, capaz de diferenciar as diferentes espécies de SCoN; o sistema automatizado Phoenix® mostrou uma baixa concordância na identificação dos isolados de SCoN, quando comparado ao MALDI-TOF MS; a PCR multiplex embora identifique as oito principais espécies de SCoN apresenta um espectro de identificação limitado, quando comparado ao MALDI-TOF MS; S. epidermidis, S. haemolyticus, S. hominis e S. capitis foram as espécies mais frequentes isoladas em ICS nos centros médicos participantes do Projeto SCOPE Brasil; e uma alta frequência de gene mecA foi verificada entre os isolados de S. epidermidis, S. haemolyticus, S. hominis e S. capitis.
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    Testes moleculares in-house para detecção de bactérias e genes de resistência aos antimicrobianos direto de frascos de hemoculturas
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2017-03-14) Quiles, Milene Goncalves [UNIFESP]; Pignatari, Antonio Carlos Campos [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/9461346610553865; http://lattes.cnpq.br/3344199283268794; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    ABSTRACT Bloodstream infections (BSI) are important causes of morbidity and mortality. Recent studies described rates higher than 500,000 BSI episodes per year with more than 79,000 deaths annually. Molecular methods become increasingly frequent in clinical laboratories. The implantation of these methods in laboratory routine allows great sensitivity and speed in the results, collaborating for the therapeutic conduct of these infections. In order to validate the combined use of MALDI-TOF MS and in-house real-time PCR techniques for the rapid diagnosis of BSIs, we developed three studies: Study 1: This is a overview of commercial molecular tests and platforms available for the diagnosis of BSI, as well the clinical impact described when using these new technologies. Study 2: The purpose of this study was to validate a molecular protocol to identify bacteria and resistance genes in 166 positive blood cultures from 139 patients admitted to three different hospitals and to compare the results with those obtained from routine phenotypic methods. There was overall agreement for genius identification in 95.4% and at species level in 81.8% of the samples. In Enterobacteriaceae, the detection of carbapenem-resistance was concordant in 95.5% and cephalosporins (ESBL profile) in 87.5%. Among non-fermentative rods, there was agreement in 80% in the detection of carbapenem-resistance. For Gram positive, the methods agreed on 100% for the detection of vancomycin-resistance in enterococci and 77.1% for methicillin-resistance in staphylococci. Study 3: This study aimed to determine the intra-laboratory time required to identify pathogens and resistance genes in 113 episodes of ICS which molecular results were conclusive, as well as the evaluation of the antimicrobial adequacy in these episodes after the immediate communication of the results to phisycians from three participating centers. The mean untecipation time for results was 35 hours from traditional blood culture. Antimicrobial therapeutic modification occurred in 25 episodes, in which 16 were escalate and 10 de-escalate agents. In these cases, the antibiotics were adequate in 22 and inadequate in 3 which molecular results were discordants of the phenotypic. The major modifications occurred in Gram negative microorganisms, with the prescription of carbapenems in six episodes and polymyxin B in three. Conclusion: The molecular protocol proved to be in good agreement with conventional routine tests. In addition, the protocol provided a rapid result, considerably anticipating the time to antimicrobial therapeutic adequacy of the BSIs episodes.