Navegando por Palavras-chave "Glycosphingolipids"
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- ItemAcesso aberto (Open Access)Análises de glicoesfingolipídeos em diferentes espécies do fungo patogênico do gênero Aspergillus(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2018-06-28) Rodrigues, Karolina Marques [UNIFESP]; Takahashi, Helio Kiyoshi [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/8090231917635170; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)incidence of serious fungal infections has increased in the last decade, mainly due to the increase in the number of immunocompromised patients, representing a serious cause of morbidity and mortality in this population. Recent works show that fungi are vulnerable to inhibitors of sphingolipid biosynthesis, which led us to study the structures of fungal glycosphingolipids, in order to obtain relevant information on the biosynthesis and functional roles of these molecules and to propose new potential targets for antifungal treatment. Glycosylinositol phosphorilceramides (GIPCs), inositolphosphoryl ceramides (IPCs), and monohexosyl ceramides (CMHs) from A. fumigatus, A. flavus, A. niger and A. nidulans, filamentous fungi causing aspergillosis, were extracted, purified and characterized using methods chromatography, biochemistry and mass spectrometry. By mass spectrometry using electrospray ionization (EISMS) in positive mode, two major peaks corresponding to CMHs of 754 m/z and 756 m/z were identified for all species analyzed. By collisioninduced dissociation (CID), m/z fragments of m/z: 736, 574, 556 and 276 were identified for CMH 754 m/z. Similarly for CMH m/z 756 fragments of m/z 738, 576, 558 and 276. The fragmentation pattern for both CMHs corresponds respectively to [M+H1H2O]+, [M+H1H2OHex]+, [M+H2H2OHex]+, [M+H2H2Oacyl]+, the fragments associated with ceramidecontaining CMH, with structures not described in mammalian CMH, d19:2/h18:1 and d19:2/18:0, respectively. Glucosylceramide and galactosylceramide were characterized by high resolution thin layer chromatography (HPTLC). It was possible to identify 2 different species of IPCs [M+H]+, 926 m/z, and 954 m/z, presenting 282 m/z and 310 m/z fragments for sphingosine t18:0 and t20:0, respectively. The presence of inositol was confirmed using 241 m/z precursor ion mass spectrometry, referring to the inositol phosphate group of these structures. For the characterization of the GIPCs in the different Aspergillus species, we used collision induced dissociation (DIC) in tandem MS with eletrotron ionization (ESI), in positive mode [M+H]+. In this way we were able to detect the 1088 m/z and 1116 m/z ions corresponding to GIPCs with 1 hexose; 1250 m/z and 1278 m/z, GIPCs with 2 hexoses; 1412 m/z and 1440 m/z, corresponding to GIPCs containing 3 hexoses. The GIPCs present A. fumigatus, A. flavus and A. niger were derived from the IPC 926 m/z (containing ceramide 666 m/z) and the IPC 954 m/z (containing ceramid 694 m/z), on the other hand, the A. nidulans GIPCs are derived only from the IPC 926 m/z. The presence of galactofuranose residues in GIPCs was confirmed using the monoclonal antibody MEST1 which recognizes terminal residues of galactofuranose. By immunostaining the HPTLC plates with MEST1 the A. fumigatus, A. flavus and A. niger GIPCs, which had a component recognized by mAb MEST1, have the same chromatographic migration as GIPC called Pb1 of Paracoccidioides brasiliensis. As for A. nidulans, only small reactivity with mAb MEST1 was detected. These results indicate that in the four species studied, both CMHs, IPCs and GIPCs have structures not expressed in mammals, indicating that these molecules as well as the specific enzymes involved in the metabolism of these sphingolipids can be considered as targets for antifungal treatment .
- ItemSomente MetadadadosEstudos imunoquímicos, estruturais e funcionais de glicoconjugados de tripanosamatideos e fungos(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2003) Straus, Anita Hilda [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
- ItemSomente MetadadadosGligoesfingolipídeos de formas amastigotas de Leismania(leishmania) amazonensis.Estrutura e papel na interação leishmania-macrófago(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2002) Tanaka, Améria Kaori [UNIFESP]; Takahashi, Anita Hilda Straus [UNIFESP]Objetivo: Analisar o papel dos glicoesfingolipideos (GSLs) de formas amastigotas de Leishmania (Leishmania) amazonenses isolando e caracterizando esses glicoconjugados reativos com os anticorpos monoclonais (MOAbS) ST-3, ST-4 e ST-5 e determinando a especificidade fina desses anticorpos, a importancia do residuo terminal de a-D-galactose na infectividade em cultura de macrofagos, a cinetica de expressao desses antigenos no parasita e possiveis lectinas/receptores do macrofago para essas moleculas. Metodos: As formas amastigotas foram isoladas de patas de hamsters infectados com L. (L.) amazonenses e os GSLs extraidos e purificados por combinacoes de: cromatografia em coluna de Florisil e de troca fonica em DEAE-Sephadex; cromatografia liquida de alta resolucao; e cromatografia preparativa em camada delgada de alta resolucao. Para analise da especificidade dos anticorpos, foram realizados radioimunoensaios de fase solida, no qual os anticorpos foram pre-incubados com diferentes glicosideos e ensaiados em placas de 96-pocos adsorvidas com a Banda 1 (menor antigeno glicoesfingolipidico de amastigotas de L. (L.) amazonenses reconhecido pelos MoAbs ST-3, ST-4 e ST-5). O efeito desses glicosideos na adesao e infectividade de macrofagos por formas amastigotas foi tambem avaliado pre- incubando-se os macrofagos com os glicosideos antes da infeccao pelo parasita. A expressao de antigenos glicolipidicos foi analisada por imunofluorescencia indireta em monocamada de macrofagos murinos infectados e durante diferenciacao celular do parasita em cultura. A identificacao de possiveis receptores para GSLs de formas amastigotas foi realizado em Western Blot de preparacoes de macrofagos murinos incubados com micelas contendo os GSLs...(au)
- ItemSomente MetadadadosGlycolipid Sensing and Innate Immunity in Paracoccidioidomycosis(Springer, 2014-10-01) Batista, Vanessa G.; Toledo, Marcos S. [UNIFESP]; Straus, Anita H. [UNIFESP]; Mendes-Giannini, Maria J. S.; Duarte, Alberto J. S.; Takahashi, Helio K. [UNIFESP]; Benard, Gil; Universidade de São Paulo (USP); Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP); UNESPDistinct glycolipid profiles are described in microorganisms, which have been shown to modulate the innate immune system. We tested the hypothesis that glycosphingolipids from Paracoccidioides brasiliensis have immunomodulatory properties on monocytes and dendritic cells of two groups of healthy individuals, one cured of paracoccidioidomycosis in the past (CUR-I) and the other nonexposed to P. brasiliensis (HNE-I). Two classes of glycosphingolipids purified from yeast cells were evaluated: a neutral glycosphingolipid, monohexosylceramide (CMH), and acidic glycosylinositolphosphorylceramides (GIPCs). Both glycosphingolipids affected the functioning of innate immunity cells, interfering with the antigen presenting process: P. brasiliensis yeast cells phagocytosis, IL-10 secretion, and costimulatory molecules and recognition receptors expression by monocytes were altered, while dendritic cell antigen presentation to autologous T cells was markedly down-modulated as shown by reduced T-cell proliferative responses. the mechanisms by which CMH and GIPCs exert their effects differ since the target cells did not always respond similarly to the challenge with the glycosphingolipids. Moreover, CUR-I and HNE-I presented different responses to the glycosphingolipids. Differences not only in the glycosphingolipid structure (such as the polar head group or the ceramide moiety), but also in the innate immunity properties of CUR-I and HNE-I, may underlie these differences and contribute to individual's susceptibility or resistance to develop paracoccidioidomycosis.
- ItemAcesso aberto (Open Access)Membrane microdomain components of Histoplasma capsulatum yeast forms, and their role in alveolar macrophage infectivity(Elsevier B.V., 2012-03-01) Tagliari, Loriane [UNIFESP]; Toledo, Marcos Sergio de [UNIFESP]; Lacerda, Tanil G [UNIFESP]; Suzuki, Erika [UNIFESP]; Straus, Anita Hilda [UNIFESP]; Takahashi, Helio Kiyoshi [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)Analysis of membrane lipids of Histoplasma capsulatum showed that similar to 40% of fungal ergosterol is present in membrane microdomain fractions resistant to treatment with non-ionic detergent at 4 degrees C. Specific proteins were also enriched in these fractions, particularly Pma1p a yeast microdomain protein marker (a plasma membrane proton ATPase), a 30 kDa laminin-binding protein, and a 50 kDa protein recognized by anti-alpha 5-integrin antibody. To better understand the role of ergosterol-dependent microdomains in fungal biology and pathogenicity, H. capsulatum yeast forms were treated with a sterol chelator, methyl-beta-cyclodextrin (m beta CD). Removal of ergosterol by m beta CD incubation led to disorganization of ergosterol-enriched microdomains containing Pma1p and the 30 kDa protein, resulting in displacement of these proteins from detergent-insoluble to -soluble fractions in sucrose density gradient ultracentrifugation. m beta CD treatment did not displace/remove the 50 kDa alpha 5-integrin-like protein nor had effect on the organization of glycosphingolipids present in the detergent-resistant fractions. Ergosterol-enriched membrane microdomains were also shown to be important for infectivity of alveolar macrophages; after treatment of yeasts with m beta CD, macrophage infectivity was reduced by 45%. These findings suggest the existence of two populations of detergent-resistant membrane microdomains in H. capsulatum yeast forms: (i) ergosterol-independent microdomains rich in integrin-like proteins and glycosphingolipids, possibly involved in signal transduction; (ii) ergosterol-enriched microdomains containing Pma1p and the 30 kDa laminin-binding protein; ergosterol and/or the 30 kDa protein may be involved in macrophage infectivity. (C) 2011 Elsevier B.V. All rights reserved.
- ItemAcesso aberto (Open Access)Papel dos (glico)esfingolipídeos e proteofosfoglicanos de Leishmania (Leishmania) amazonensis na infecção de macrófagos. Caracterização de novos antígenos e isolamento de microdomínios de membranas resistentes a detergente não-iônico(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2006-12-31) Tanaka, Améria Kaori [UNIFESP]; Straus, Anita Hilda [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)As leishmanioses constituem um importante problema de saúde pública no Brasil, em razão da incidência da doença associada à alta taxa de morbidade. Devido ao fato da Leishmania ser um parasita intracelular no hospedeiro vertebrado, estudos de moléculas do parasita, que atuam na interação do parasita com a célula do hospedeiro vertebrado, são de alta importância para uma melhor compreensão dos mecanismos de invasão e sobrevivência do parasita. Seguindo este racional, nesta tese foram identificados, purificados e caracterizados os proteofosfoglicanos secretados por formas promastigotas (pPPG) e amastigotas (aPPG) de L. (L.) amazonensis, respectivamente de meios de cultura e de macrófagos infectados com esses parasitas. A purificação dos PPGs foi realizada por combinações de cromatografias em DEAE-Sephadex, Octyl-Sepharose e Bio-Gel A- 0.5 e ultracentrifugações. Por "Western blotting" e radioimunoensaio em fase sólida utilizando diferentes anticorpos monoclonais (mAbs), observou-se que o pPPG apresenta alto peso molecular, contem cadeias fosfoglicanas e é reconhecido por mAbs anti-glicoesfingolipídeos (GSLs) ST-3 e ST-5, e mAb anti-lipofosfoglicano (LPG) VST-1. Em estudos imunohistoquímicos de cortes de lesão de hamsters infectados com L. (L.) amazonensis, observou-se a presença de material reativo com os mAbs ST-3, ST-4 e ST-5 na superfície do parasita e em torno do vacúolo parasitóforo. Após delipidação de cortes da lesão (processo em que são extraídos os glicolipídeos), a reatividade com os mAbs limitou-se a algumas regiões do vacúolo, sugerindo a possível localização dos aPPGs na célula infectada. O aPPG apresentou padrão de migração eletroforética similar ao pPPG, e foi reconhecido pelos mAbs ST-3, ST-4 e ST-5, mas não pelo mAb VST-1. A análise da composição monossacarídica dos PPGs de L. (L.) amazonensis por cromatografia gasosa acoplada a espectrometria de massa mostrou que o pPPG é composto por manose:galactose:glucose, na proporção molar de 1:1,2:1,7. Por outro lado, o aPPG apresenta em sua estrutura manose:galactose:glucose na proporção de 1:2:9. Em experimentos paralelos foram avaliados os níveis de produção de óxido nítrico e do fator de necrose tumoral por macrófagos peritoneais de camundongos BALB/c expostos a diferentes estímulos com antígenos parasitários de L. (L.) amazonensis. Observamos que LPG, pPPG e GSLs per se não estimularam os macrófagos na produção de NO. Por outro lado o aPPG per se mostrou-se capaz de estimular a produção de NO. LPGs e pPPGs foram capazes de estimular a produção de óxido nítrico quando incubados na presença de interferon gama. Por outro lado, GSLs e interferon gama não foram capazes de estimular a produção de NO em macrófagos. Nenhum dos antígenos de Leishmania utilizados estimulou a produção de fator de necrose tumoral. O perfil glicolipídico de amastigotas axênicos de L. (L.) amazonensis em comparação com o de amastigota isolado de lesão foi analisado por HPTLC, tendo sido verificadas diferenças significativas no padrão cromatográfico dos glicolipídeos. Os glicolipídeos de formas axênicas não são reconhecidos por mAbs anti-GSLs. A organização dos glico(esfingo)lipídeos e glicoinositolfosfolipídeos (GIPLs) de formas amastigotas e promastigotas de L. (L.) amazonensis foi analisada. Para isso, membranas resistentes ao detergente não-iônico Triton X-100 foram isoladas a 4ºC. Em formas amastigotas foi verificado que os GSLs, esfingomielina e esteróis estão predominantemente localizados em frações de membranas resistentes ao tratamento com Triton X-100. Em formas promastigotas foi verificado que inositol fosforilceramida, GIPLs e esteróis estão localizados preferencialmente nas membranas de baixa densidade insolúveis em detergente nãoiônico a 4ºC. Em um outro conjunto de experimentos foi analisado o efeito de inibidor de síntese de esfingolipídeo, Aureobadisina A (AbA), em formas promastigotas e amastigotas de L. (L.) amazonensis. Em formas promastigotas foi observado que a AbA inibe o crescimento dos parasitas, entretanto esse efeito é reversível. Em ensaios de infectividade in vivo observou-se que camundongos BALB/c infectados com parasitas tratados com AbA apresentavam um desenvolvimento tardio das lesões em relação aos infectados com parasitas sem tratamento. Por outro lado, em culturas axênicas de amastigotas isoladas de lesão foi observado que a AbA é tóxica aos parasitas. Após a adição da AbA em cultura de macrófagos infectados com formas amastigotas, verificou-se uma diminuição significativa da infecção de macrófagos. Todos estes resultados sugerem que os glicoconjugados de L. (L.) amazonensis analisados nesta tese podem atuar na interação entre o parasita e o hospedeiro, exercendo papéis importantes na sobrevivência e progressão da leishmaniose.
- ItemSomente MetadadadosReatividade de anticorpos para glicoesfingolipidios em doenças do sistema nervoso, reumáticas, e na infecção pelo HIV(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 1996) Zeballos, Roberto Sebastian [UNIFESP]
- ItemSomente MetadadadosRole of Host Glycosphingolipids on Paracoccidioides brasiliensis Adhesion(Springer, 2011-05-01) Ywazaki, Cristina Y. [UNIFESP]; Maza, Paloma K. [UNIFESP]; Suzuki, Erika [UNIFESP]; Takahashi, Helio K. [UNIFESP]; Straus, Anita H. [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)Binding of yeast forms to human lung fibroblast cultures was analyzed, aiming to better understand the initial steps of Paracoccidioides brasiliensis infection in humans. A significant P. brasiliensis adhesion was observed either to fibroblasts or to their Triton X-100 insoluble fraction, which contains extracellular matrix and membrane microdomains enriched in glycosphingolipids. Since human lung fibroblasts express at cell-surface gangliosides, such as GM1, GM2, and GM3, the role of these glycosphingolipids on P. brasiliensis adhesion was analyzed by different procedures. Anti-GM3 monoclonal antibody or cholera toxin subunit B (which binds specifically to GM1) reduced significantly fungal adhesion to fibroblast cells, by 35% and 33%, respectively. Direct binding of GM1 to yeast forms of P. brasiliensis was confirmed using cholera toxin subunit B conjugated to AlexaFluor(A (R))488. It was also demonstrated that P. brasiliensis binds to polystyrene plates coated with galactosylceramide, lactosylceramide, trihexosylceramide, GD3, GM1, GM3, and GD1a, suggesting that glycosphingolipids presenting residues of beta-galactose or neuraminic acid at non-reducing end may act as adhesion molecules for P. brasiliensis. Conversely, no binding was detected when plates were adsorbed with glycosphingolipids that contain terminal residue of beta-N-acetylgalactosamine, such as globoside (Gb4), GM2, and asialo-GM2. in human fibroblast (WI-38 cells), GM3 and GM1 are associated with membrane rafts, which remain insoluble after treatment with Triton X-100 at 4A degrees C. Taken together, these results strongly suggest that lung fibroblast gangliosides, GM3 and GM1, are involved in binding and/or infection by P. brasiliensis.