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    Ação de agentes antitrombóticos na síntese e estrutura do heparam sulfato e caracterização do receptor em células endoteliais
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 1996) Pinhal, Maria Aparecida da Silva [UNIFESP]; Nader, Helena Bonciani [UNIFESP]
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    Acao de drogas anti-angiogenicas na neovascularizacao de coroide
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2009) Regatieri, Caio Vinicius Saito [UNIFESP]
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    Acesso aberto (Open Access)
    Ação dos esteroides ovarianos sobre a quantidade dos glicosaminoglicanos sulfatados e do ácido hialurônico nas mamas de ratas ovariectomizadas
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2016-11-17) Torres, Sueli Maria Preda dos Santos [UNIFESP]; Simoes, Manuel de Jesus [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/5987164343458678; http://lattes.cnpq.br/2539410198240163; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    The extracellular matrix (ECM) act an essential role in the function of mammary epithelial cells and glycosaminoglycans have long been attracting clinical interest in all areas of medicine for their important role in cell recognition, migration, cell proliferation and differentiation. OBJECTIVE: Evaluate the morphology and the concentration of glycosaminoglycans in the breast of female rats treated with estrogen and/or progesterone. MATERIAL AND METHODS: Sixty female rats were divided into six groups with 10 animals each: G1 (5 months) and GII (18 months) in the proestrus phase were treated with vehicle; the other animals were ovariectomized, and immediately after were treated with vehicle (GC) or with hormones ? (GE) treated with oestradiol benzoate (37.6 mg/animal); (GP) ? treated with medroxyprogesterone acetate (11.28 mg/animal) and (GEP) ? treated with oestradiol benzoate (37.6 mg/animal), more medroxyprogesterone acetate (11.28 mg/animal). In the GE group, the oestradiol was administered subcutaneously for seven days; in the GP group, the progestogen was administered subcutaneously for 23 dats; in the GEP group, the oestradiol was administered once a day in the first seven days and the progestogen throughout the next 23 days, subcutaneously. Twenty four hours after the last administration of hormones, the animals were euthanized, and the first pairs of inguinal breasts were removed, part of them being fixated in formaldehyde at 10% (morphological evaluation) and the other part submerged in acetone (evaluation of the glycosaminoglycans). The material destined to the morphology was included in paraffin, and the cuts were stained by hematoxylin-eosin. The material destined to the biochemistry was processed to the electrophoresis in agarose gel to sulfated GAGs analysis, and the hyaluronic acid was analyzed with a Elisa-Like fluorimetric method. The statistical analysis was made by the analysis of variance (ANOVA) followed by the Bonferroni test (p<0.05). RESULTS: The breasts of the groups with ovaries (GI and GII) as well as the ovariectomized control group (GC) have shown to be atrophic, wherein we observed typical alveoli with secretion in the lumen in the groups (GE) and (GEP); yet in the animals treated with progestogen (GP), we noticed alveoli formed basically by cells that occupied almost all the alveolar light. In relation to the data of the sulfated glycosaminoglycans we noticed higher concentration in the oophorectomized group (GC) due to high concentration of dermatan sulfate (GC = GE > GP = GEP > GII = GI; p<0.05). And in relation to the hyaluronic acid we found higher concentration in the animals of five months (GI > GII, GC, GE, GEP > GP; p<0.005).CONCLUSION: Oestradiol and progesterone had a trophic effect in the breast parenchyma. However, the administration of oestradiol beforehand changes the action of progesterone in the rat?s mammary tissue.
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    Acesso aberto (Open Access)
    Alterações histoquímicas das glicosaminoglicanas na cérvice uterina no final da prenhez da rata albina após ministração local de hialuronidase
    (Federação Brasileira das Sociedades de Ginecologia e Obstetrícia, 2008-07-01) Lopes, Viviane Almeida de Alcântara [UNIFESP]; Luz, Mônica Regina Lourenço [UNIFESP]; Souza, Guilherme Negrão de [UNIFESP]; Fernandes Júnior, João Antão [UNIFESP]; Simões, Manuel de Jesus [UNIFESP]; Camano, Luiz [UNIFESP]; Souza, Eduardo de [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    PURPOSE: to study the histochemical changes related to the uterine cervix glycosaminoglycan of the albino female rat, after local ministration of hyaluronidases at the end of pregnancy. METHODS: ten female rats with positive pregnancy tests were randomly distributed in two numerically equal groups. The control group (Cg) was built up with rats that received a single dose of 1 mL of distilled water in the uterine cervix, under anesthesia, at the 18th pregnancy day. In the experimental group (Exg), the rats received 0.02 mL of hyaluronidase, diluted in 0.98 mL of distilled water (1 mL as a total), under the same conditions as the Cg. At the 20th pregnancy day, the rats were anesthetized once again and submitted to dissection, and the cervix prepared for histochemical study with alcian blue dye and its blockades (pH=0.5, pH=2.5, methylation and saponification). RESULTS: strongly positive reaction in the lamina propria (+3) has been seen in the Cg, and negative reaction in the Exg, with pH=0.5 alcian blue staining. With pH=2.5, staining has also been strongly positive (+4) in the Cg, and weakly positive (+1) in the Exg slide. After methylation, both groups have shown negative reaction, with pH=2.5 alcian blue staining. The lamina propria staining became negative after methylation in both groups, followed by saponification and enzymatic digestion on slide. CONCLUSIONS: there is clear predominance of sulphated glycosaminoglycans in the Cg as compared to the Exg and a small amount of identified carboxylated glycosaminoglycans in the Exg. The changes evidenced in the extracellular matrix have suggested that the hyaluronidase injected in the uterine cervix has promoted biochemical changes compatible with cervix maturation.
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    Alterações no conteúdo e na estrutura dos glicosaminoglicanos ácidos em tecidos e na urina de pacientes portadores de neoplasias
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 1994) Jeronimo, Selma Maria Bezerra [UNIFESP]; Nader, Helena Bonciani [UNIFESP]
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    Analise histomorfologica e caracterizacao dos glicosaminoglicanos da crista de galos (Gallus gallus) tratados com estrogenio, progestogenio ou testosterona
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2003) Fieri, Walcir Jose [UNIFESP]
    Foi avaliado neste estudo, sob o ponto de vista histomorfologico e histoquimico, os efeitos do tratamento com propionato de testosterona, estrogenios conjugados equinos ou acetato de medroxiprogesterona, sobre a crista de galos. Os animais foram distribuidos, aleatoriamente, em cinco grupos: GI - grupo sham - falsamente castrado, recebeu 0,5 ml/ave de oleo de milho; Gil - grupo controle, recebeu 0,5 ml/ave oleo de milho, apos a castracao; GIII - animais castrados que receberam 0,75 mg/ave de propionato de testosterona; GIV - Animais que receberam, apos a castracao, 2,0 mg/ave de estrogenios conjugados equinos e GV - animais castrados que receberam, 1,0 mg/ave de acetato de medroxiprogesterona. Todas as substancias foram administradas por via intramuscular, 14 dias apos a castracao, em 8 doses em dias alternados. No dia seguinte, apos o tratamento, as aves foram fotografadas para estudo da morfologia das cristas, e em seguida, sacrificadas e as cristas removidas. Desse modo, parte do material colhido foi mergulhado em formol a 10 por cento para estudo histologico e histoquimico ao microscopio de luz e, o restante, mergulhado em acetona para deteccao e determinacao dos glicosaminoglicanos. Os resultados mostraram que o propionato de testosterona apresentou efeito trofico sobre a crista, tanto nos aspectos morfologicos, estimulando seu desenvolvimento, quanto no aumento da concentracao de acido hialuronico, porem, mostrou efeito inibidor sobre a sintese de glicosaminoglicanos sulfatados. 0 dermatam sulfato e o condroitim sulfato tambem foram detectados, sendo o acido hialuronico, o glicosaminoglicano predominante, ao passo que quanto ao condroitim sulfato, apenas tracos foram encontrados. Os estrogenios conjugados equinos e o acetato de medroxiprogesterona nao alteraram os niveis de glicosaminoglicanos na crista de galo
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    Análise histomorfológica e caracterização dos glicosaminoglicanos do útero de ratas tratadas com estrogênio, progestagênio e raloxifeno
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2001) Simões, Manuel de Jesus [UNIFESP]
    Procurou-se avaliar, neste estudo, sob o ponto de vista histomorfomologico e bioquimico, os efeitos do tratamento com estrogenios conjugados equinos (CEE), isolados ou associados ao acetato de medroxiprogesterona (AMP), e do raloxifeno (RAL) sobre o endometrio de ratas adultas ooforectomizadas. Estudaram-se ratas adultas que, 60 dias apos serem castradas, foram distribuidas aleatoriamente, em cinco grupos: Grupo I - castrado; Grupo II tratadas com CEE (50 gg/kg, por dia); Grupo III - tratadas com AMP (0,2 mg/kg, por dia); Grupo IV - tratadas com CEE (50 gg/kg, por dia) + AMP (0,2 mg/kg, por dia); Grupo V - tratadas com RAL (3 mg/kg, por dia). A administracao dos farmacos foi feita por gavagem, sempre no periodo da manha, durante 28 dias consecutivos. Apos esse periodo os animais foram sacrificados e retiraram-se os uteros, os quais foram mergulhados em formol a 10 por cento. Em seguida, seccionaram-se os corpos uterinos, sendo a porcao media processada para estudo histologico e determinacao do indice de proliferacao nuclear (PCNA) dos epitelios superficial e glandular, em microscopia de luz; o restante do material foi processado para deteccao e determinacao bioquimica dos glicosaminoglicanos. Os resultados mostraram que os EEC isolados apresentaram efeito trofico sobre o endometrio e aumento significante do PCNA; a associacao de AMP inibiu, em parte, estes efeitos proliferativos. Ja nos grupos tratados com AMP ou RAL notamos atrofia endometrial e baixos indices de PCNA. Entretanto, no grupo que recebeu RAL identificamos a presenca de eosinofilos no estroma endometrial, o que sugere haver ligeira acao estrogenica. Os glicosaminoglicanos sulfatados (em especial o dermatam sulfato) apresentaram-se em niveis mais elevados nos animais tratados com EEC isolados ou associados ao AMP. Os indices de heparam sulfato mostraram-se baixos nos uteros dos animais tratados com AMP isoladamente ou associado aos EEC. A dosagem de acido hialuronico nao apresentou alteracoes entre os varios grupos de estudo. O raloxifeno nao alterou os niveis de glicosaminoglicanos no utero de ratas
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    Análise histomorfológica e caracterização dos glicosaminoglicanos no colo uterino de ratas durante o ciclo estral
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2002) Cubas, Jairo Jose Matozinho [UNIFESP]; Simões, Manuel de Jesus [UNIFESP]
    Procurou-se avaliar neste estudo, sob o ponto de vista histomorfometrico e bioquimico, a presenca de glicosaminoglicanos sulfatados durante o ciclo estral de ratas virgens adultas, assim como o indice de proliferacao celular epitelial na juncao escamo-colunar do colo uterino, visando a estabelecer uma possivel relacao entre os dados obtidos. Estudaram-se 40 ratas, identificadas quanto a fase do ciclo estral atraves da colpocitologia e classificadas em quatro grupos: Grupo I - proestro; Grupo II estro; Grupo III - metaestro e Grupo IV - diestro. Apos retirados os colos uterinos, seguiram-se os protocolos de fixacao em formol a 10 por cento, desidratacao, diafanizacao e impregnacao em parafina para obtencao de cortes histologicos e, em seguida, coloracao pela Hematoxilina - eosina. Algumas laminas foram coradas pelo Alcian-blue e azul de toluidina, e outras foram submetidas a reacao imunohistoquimica para o PCNA. Cinco colos uterinos de cada grupo foram submetidos a extracao de glicosaminoglicanos e analise por eletroforese em gel de agarose. Notou-se significante aumento de marcacao para o PCNA na fase diestro e um aumento de dermatam sulfato no estro. Identificou-se ainda a presenca de heparam sulfato e ausencia de condroitim sulfato. A analise dos resultados possibilitou concluir que ocorrem variacoes dos glicosaminoglicanos presentes no colo uterino de ratas durante as diversas fases do ciclo estral, o pico de proliferacao celular (nos epitelios cervicais) e hormonio-dependentes. Com relacao ao acido hialuronico nao foram encontradas diferencas significantes entre os varios grupos estudados
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    Analise ultra-estrutural da lamina propria gengival de ratos diabeticos induzidos com estreptozotocina
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2004) Mezadri, Marcia Ghisi [UNIFESP]
    Objetivo: Estudar os efeitos da diabete melito experimental na variacao ultra-estrutural de alguns componentes da lamina propria gengival de ratos. Material e Metodos: Foram utilizados ratos machos, adultos, divididos em dois grupos: Grupo I:Controle - Os animais deste grupo, nao receberam nenhum tipo de droga ou veiculo. Grupo li: Diabetico - os animais receberam injecao de Estreptozotocina (Sigma®), na dose unica de 60 mg/Kg de peso, via intraperitonial, diluida em 0,3 ml de solucao de tampao citrato 0,1 M. As glicemias foram mensuradas, utilizando-se aparelho Advantage (Roche®) com sangue de veia da cauda dos animais. Foram considerados diabeticos os ratos cujos valores de glicemia foram iguais ou superiores a 250 mg/dL. Fragmentos de gengiva da regiao lingual de molares inferiores foram processados para analise em microscopia eletronica de transmissao (Luft, 1961; Harven, 1967). A localizacao e identificacao ultra-estrutural dos glicosaminoglicanos foram estudadas utilizando o corante azul de cuprolinico e enzimas Condroitinase-ABC e Concroitinase-AC (van Kuppevelt et ai., 1984). A analise dos cortes ultrafinos e suas eletromicrografias foram realizadas em Microscopio Eletronico de Transmissao da marca Carl Zeiss modelo EM-900, sob tensao de 80 kV. Resultados: Os animais do grupo diabetico apresentaram fibroblastos aparentemente ativos, com organelas evidenciando a sintese e secrecao de constituintes da matriz. Estes parecem estar mais ativos na sintese de elementos da substancia amorfa, o que explicaria, o aumento de espacos claros entre as celulas, provavelmente preenchidos por glicosaminoglicanos ou acumulo de liquido. A distribuicao de precipitados cuprolinico-positivos mostrou-se diminuida e mais dispersa nos animais diabeticos. Os resultados das gengivas que sofreram a acao enzimatica mostraram que ocorre uma variacao qualitativa e quantitativa na concentracao de glicosaminoglicanos em animais diabeticos havendo uma perda estatisticamente significativa na quantidade de glicosaminoglicanos e que o maior percentual de perda ocorreu na concentracao de Condroitim Sulfato. Conclusoes: Parece-nos licito, frente a esses resultados, concluir que a diabete melito experimental atua, de maneira efetiva, na variacao qualitativa e quantitativa nos constituintes da lamina propria gengival
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    Aspectos histoquimicos e quantitativos do acido hialuronico da lamina propria gengival de diabeticos
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2005) Sanches, Marcelo Jose [UNIFESP]
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    Atividade de heparam sulfato N-sulfotransferase em soro humano normal
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2000) Santos, Isabel Anunciacao Neves dos [UNIFESP]
    Heparam sulfato e heparina sao polissacarideos complexos compostos de unidades alternadas de D-glucosamina e acido uronico, alguns dos quais sulfatados. A Introdução do grupamento sulfato e catalizada por varias sulfotransferases, localizadas no Golgi e que transferem sulfato a partir do PAPS (3'-fosfoadenosina-5'fosfosulfato) a aceptores especificos. A biossintese do heparam sulfato/heparina e um processo complexo, envolvendo polimerizacao e modificacoes concomitantes, incluindo sulfatacao da cadeia. A primeira modificacao compreende a N-desacetilacao seguida de N-sulfatacao das unidades de N-acetii-D-glucosamina. Durante a biossintese dos proteoglicanos, as cadeias de glicosaminoglicanos (GAGs) sao formadas pela adicao sequencial dos respectivos monossacarideos aos precursores, e sulfatacao das cadeias nascentes ou ja totalmente elongadas. A N-desacetilase/N-sulfotransferase e uma enzima que apresenta duas atividades cataliticas diferentes. Esta remove o grupo N-acetil das moleculas de D-glucosamina nos residuos de heparam sulfato e heparina e transfere o sulfato do PAPS ao grupo amino dos residuos de D-glucosamina. O presente estudo descreve a transferencia de [35S]-sulfato a partir de PAP[35S] a diferentes substratos, naturais ou modificados, catalizada por sulfotransferase soluvel presente no soro humano normal denominada de heparam sulfato N-sulfotransferase (HSNST). Foram utilizados como aceptores exogenos diferentes substratos, tais como, heparam sulfato e heparina naturais e modificados quimicamente e heparam sulfato com diferentes graus de dessulfatacao. Neste estudo, estabelecemos um metodo para detectar a atividade de HSNST em soro humano e identificamos a posicao da incorporacao de [35S]-sulfato apos diGestão com enzimas de Flavobacterium heparinum. Os resultados mostraram que o heparam sulfato dessulfatado por 30 minutos e o melhor aceptor. Os dissacarideos N-sulfatados (AU-GicNS e AU-GlcNS,6S) foram os principais produtos formados por todos os heparam sulfatos analisados. Surpreendentemente, quando utilizamos heparam sulfato natural, sem nenhum grau de dessulfatacao, observamos incorporacao de sulfato no polimero, embora em menor proporcao quando comparado com os substratos dessuifatados. Esses resultados sugerem que a enzima do soro apresenta ambas atividades, N-desacetilase e N-suifotransferase. Heparinas quimicamente modificadas nao se mostraram ser tao bons substratos quanto os heparam sulfatos para...(au)
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    Atuação do LT na dinâmica de reparação da matriz óssea
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2010) Merli, Luiz Antonio de Souza [UNIFESP]; Faloppa, Flávio [UNIFESP]
    Introdução: A reparação óssea é um processo fisiológico que envolve as fases de inflamação, reparação e remodelação. A aplicação do Laser Terapêutico tem o efeito de bioestimulação do reparo tecidual. Objetivos: O presente trabalho busca estudar a ação do laser terapêutico sobre a reparação da matriz óssea avaliando a organização do tecido ósseo neoformado analisando as alterações na composição celular, bem como dos componentes da matriz extracelular. Material e Métodos: Foram utilizados 60 fêmures de 30 ratos machos da linhagem Wistar com aproximadamente 350 a 450g que foram submetidos a perfuração óssea de 2mm de diâmetro e submetidos ou não a aplicação de laser InGaAlP de 660 mm. Os animais foram eutanazidos nos períodos de 4, 8 e 14 dias constituindo 6 grupos Laser Terapêutico (LT) e controle (CTR). As alterações na organização do tecido neoformado bem como a avaliação histomorfométrica, foram realizadas pelos métodos de coloração de hematoxilina e eosina, alcian blue e PAS. Os glicosaminoglicanos do tecido ósseo foram extraídos e caracterizados por eletroforese em gel de agarose. A quantificação do ácido hialurônico dos grupos LT e CTR 4, 8 e 14 dias foi pelo fluorimétrico não-competitivo “Elisa-like”. Componentes da matriz óssea tais como proteoglicanos (biglicam e decorin), proteínas ósseas não-colágenas (DMP-1, BSP, OPN, osteocalcina e osteonectina) bem como o ácido hialurônico foram avaliados por imunohistoquímica. Conclusões: O Laser Terapêutico foi capaz de aumentar a área neoformada no processo de reparo ósseo, quando comparado ao grupo CTR. A organização da matriz óssea celular foi antecipada no grupo LT em relação ao grupo CTR. Os proteoglicanos, glicosaminoglicanos e proteínas ósseas não-colagéno tem a suas expressões aumentadas no grupo LT, quando comparado ao grupo CTR.
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    Acesso aberto (Open Access)
    Avaliação audiológica em pacientes com mucopolissacaridose: estudo da ocorrência, tipo e grau de perda auditiva
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2011-01-26) Silveira, Marcela Rosana Maia da [UNIFESP]; Azevedo, Marisa Frasson de [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Purpose: the mucopolysaccharidosis are a group of diseases caused by a deficiency in the lysosomal enzymes involved in the metabolism of mucopolysaccharides. Inherited metabolic diseases are caused by inborn errors of metabolism that lead to lack of proper functioning of certain enzymes. Hearing loss is a frequent manifestation in patients with mucopolysaccharidosis. The progressive nature of the hearing loss program requires audiologic, with periodic evaluations of the hearing. General objective: check the occurrence of hearing loss, characterizing its type and grade in patients with mucopolysaccharidosis. Specific objectives: aimed at verifying the possibility to evaluate patients with MPS and establish more effective procedures for hearing assessment in relation to age and type of MPS. Method: We evaluated 60 (sixty) patients, between 2 and 23 years, 25 females and 35 males with a diagnosis of different types of MPS, conducted by geneticist. Selected patients underwent audiometric assessment . The procedure for obtaining auditory thresholds were chosen according to the chronological age of the patient and also considering their position to understand / respond to the procedure. Results: Of the 60 patients studied, 53 (88.3%) completed the diagnostic audiology. Of these, 51 (96.2%) had hearing loss being the most conductive 25 (47.2%). There was no difference between the hearing thresholds by air and bone conduction thresholds logoaudiometric between the ears. There was a higher incidence of female patients in types I, III and IV of MPS and males in the types II and VI. Regarding the procedures used, pure tone audiometry was performed in patients over the types of MPS IV and VI. Type II patients performed more visual reinforcement audiometry. Sensorineural hearing loss occurred in patients with MPS type I, II and III. Type III patients had worse hearing thresholds obtained by bone and increased occurrence of type A tympanometric curves with the presence of acoustic reflex. Type IV patients showed a predominance of normal audiograms, with hearing thresholds better than others and increased occurrence of type A tympanometric curves. The type I showed more mixed hearing loss. There was a higher incidence of conductive hearing loss in type II, IV and VI of MPS with a higher incidence of tympanometric curves of type B and C in the absence of acoustic reflex. Conclusions: the audiological evaluation can be performed in 88,3% of the population; there was hearing loss in 96.2% of patients with MPS, with a predominantly conductive hearing loss of mild and moderately severe; was occurrence of sensorineural hearing loss in patients with MPS type I, II and III.
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    A avaliação da adesão, migração e proliferação da linhagem celular CHO=K1 frente a mutante CHO-745 deficiente na biossíntese de glicosaminoglicanos sulfatados: amostra que a integrina alfa-5beta-1 e um proteoglicano envolvido na migração celular
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2002) Franco, Celia Regina Cavichiolo [UNIFESP]; Dietrich, Carl Peter Von [UNIFESP]
    Na presente tese examinamos o papel dos proteoglicanos e glicosaminoglicanos na divisao celular: adesao e proliferacao de celulas em cultura CHO (chinese hamster ovary) e sua mutante CHO-745 que e deficiente na sintese de glicosaminoglicanos devido a falta da enzima xilosiltransferase. Usando diferentes quantidades de celulas (selvagem e mutante) pouca adesao pode ser observada na presenca de laminina e colageno tipo I. Entretanto quando fibronectina e vitronectina foram usadas como substratos houve um aumento de adesao dos dois tipos celulares. Somente a CHO selvagem mostrou adesao em funcao do tempo sobre colageno tipo IV. Estes resultados sugerem que as duas linhagens celulares possuem diferentes propriedades de adesao. Ensaios de adesao usando colageno tipo IV com celulas CHO cultivadas na presenca de xilosideo ou clorato, mostraram reducao nos niveis de adesao, confirmando a importancia dos glicosaminoglicanos neste fenomeno. Varias evidencias experimentais sugerem que os proteoglicanos de hepara sulfato estao envolvidos na adesao celular como moduladores positivos da proliferaca celular e como composto chave no processo de divisao celular. Ensaios de proliferacao e ciclo celular demonstraram que uma diminuicao das quantidades do proteoglicano nao inibem a proliferacao da mutante CHO-745 quando comparadas com a celula selvagem pois os dois tipos celulares entram na fase S ao redor das 8 horas. A inteiracoes celulas-matriz estao implicadas em uma grande variedade d funcoes. Estas inteiracoes sao principalmente mediadas por integrinas que sa receptores da superficie celular e estao aparentemente envolvidas em adesao, migracao e diferenciacao. Por exemplo, a asj3, integrina esta envolvida na migracao e adesao da celulas sobre fibronectina. Tambem neste estudo, usando marcacao radioativa com sulfato e imunoprecipitacao...(au)
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    Avaliacao das alteracoes quantitativas e qualitativas de proteoglicanos e glicosaminoglicanos em tecido mamario normal nas fases folicular e lutea do ciclo menstrual
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2010) Santos Junior, Jose Arimatea [UNIFESP]
    CONTEXTO E OBJETIVOS: O efeito dos esteroides sexuais sobre os componentes da matriz extracelular do tecido mamario feminino permanece tema ainda mal compreendido. O conhecimento das funcoes de componentes da matriz como os proteoglicanos e glicosaminoglicanos pode trazer explicacoes importantes sobre as alteracoes funcionais benignas da mama, em particular a mastalgia.Temos, por objetivo, estudar as alteracoes quantitativas e qualitativas de proteoglicanos e glicosaminoglicanos em tecido mamario normal nas fases folicular e lutea do ciclo menstrual. METODOS: Selecionaram-se 28 pacientes eumenorreicas que apresentaram nodulo mamario benigno, divididos em dois grupos. O grupo A composto por 15 pacientes na fase folicular e o grupo B contendo 13 pacientes, na fase lutea do ciclo menstrual. Os tecidos mamarios adjacentes aos nodulos, foram submetidos a uma combinacao de tecnicas de analise bioquimica, alem da imunofluorescencia , para avaliacao dos tipos e concentracoes de proteoglicanos e glicosaminoglicanos em diferentes condicoes hormonais. RESULTADOS: Quanto aos tipos, o decorim foi o proteoglicano encontrado nas duas fases do ciclo, enquanto que o dermatam sulfato e o heparam sulfato foram os glicosaminoglicanos encontrados tambem nas duas fases. A concentracao de proteoglicanos foi maior (estatisticamente significante p< 0,01) na fase lutea quando comparada com a fase folicular. Nao houve diferenca estatisticamente significante entre as concentracoes de glicosaminoglicanos na fase folicular em relacao a fase lutea . Por imunofluorescencia, demonstrou-se que o decorim esta localizado preferencialmente no estroma intra-lobular. CONCLUSOES: A concentracao de proteoglicanos variou durante o ciclo menstrual, sendo maior na fase lutea do ciclo menstrual, o que demonstra a influencia dos esteroides sexuais sobre a sintese dessas macromoleculas. O decorim foi o proteoglicano encontrado no tecido mamario normal, principalmente no estroma intra-lobular.A concentracao dos glicosaminoglicanos variou ao longo do ciclo, porem sem significancia estatistica.dermatam e heparam sulfato foram os glicosaminoglicanos encontrados no tecido mamario normal
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    Acesso aberto (Open Access)
    Avaliação de alterações da matriz extracelular em cultura de células após laserterapia
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2013) Almeida, Maria Carolina Leal [UNIFESP]; Pinhal, Maria Aparecida da Silva [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/7511274763693292; http://lattes.cnpq.br/1167343681921648
    A pele corresponde ao orgao de maior exposicao a radiacao por diferentes tipos de luz. Alguns estudos demonstram o efeito de terapias de luz laser de baixa intensidade em determinadas afeccoes da pele como manchas, processos inflamatorios e em diferentes tipos de tumores. O laser de baixa potencia tem sido utilizado na pratica clinica ha aproximadamente 20 anos. A laserterapia quando utilizada em tecidos e celulas provoca efeitos fotoquimicos, fotofisicos e/ou fotobiologicos, sem a producao de calor, estimulando a proliferacao celular, ativacao de linfocitos e mastocitos, promove aumento na geracao ATP entre outros efeitos. Poucos artigos relacionam a laserterapia com as alteracoes de componentes da matriz extracelular em cultura celulares. Portanto, o presente estudo tem por objetivo investigar as possiveis alteracoes de componentes da matriz extracelular em celulas HaCaT (queratinocitos humanos) e A431 (carcinoma epidermoide humano), que representam dois tipos distintos de linhagens celulares da pele. Dentre os componentes da matriz extracelular foram analisados glicosaminoglicanos sulfatados (GAG), acido hialuronico, enzimas que participam da degradacao de heparam sulfato (heparanase) e enzimas envolvidas na degradacao e biossintese de acido hialuronico (hialuronidases e acido hialuronico sintases), respectivamente. As alteracoes dos componentes da matriz extracelular foram avaliados comparando-se celulas submetidas ao tratamento com laserterapia de baixa potencia e celulas nao tratadas (controle). A viabilidade celular de celulas HaCaT e A431 tambem foi avaliada. Os GAG sulfatados foram analisados por marcacao metabolica utilizando sulfato radioativo, degradacao enzimatica e eletroforese. O acido hialuronico foi quantificado por metodo de ELISA indireto. Ensaios de PCR em tempo real foram realizados para analise da expressao das enzimas HAS (acido hialuronico sintases) HYAL (Hialuronidases) e HPSE-1 (Heparanase). Os resultados obtidos no demonstraram diminuicao significativa na viabilidade celular em ambas as linhagens (HaCaT e A431), apos laserterapia. Houve alteracao no perfil de GAG apos tratamento com luz no comprimento de onda associado (470 e 660 nm), sendo que as celulas HaCaT apresentaram aumento significativo de heparam sulfato e condroitim sulfato. O acido hialuronico aumentou na fracao celular, apos laserterapia em celulas HaCaT, enquanto, nao foi observado alteracao nas celulas A431. A analise por qPCR demonstrou diminuicao da expressao em celulas HaCaT e das celulas A431. Os resultados obtidos em nosso estudo demonstraram que o tratamento com laserterapia de baixa intensidade altera componentes da matriz extracelular e tais alteracoes diferem com relacao ao tipo celular (celulas nao neoplasicas ou celulas de carcinoma epidermoide humano), e o comprimento de onda
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    Acesso aberto (Open Access)
    Avaliação de glicosaminoglicanos e proteínas de matriz extracelular em queratinócitos submetidos ao estresse oxidativo e ao choque hiperosmótico.
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2013) Leme Júnior, Luiz Eugênio Garcez [UNIFESP]; Justo, Giselle Zenker [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/9147445236159161; http://lattes.cnpq.br/0632935026262183; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    A pele e o maior orgao do corpo, atuando como uma barreira contra a radiacao e patogenos, mantendo a temperatura corporal, prevenindo contra desidratacao e funcionando como orgao sensorial. Os glicosaminoglicanos (GAGs) tem importantes funcoes nas celulas da pele, tais como a participacao no controle da proliferacao e divisao celular, comunicacao e adesao celular e modulacao das respostas celulares aos estimulos externos. O estresse oxidativo e o choque hiperosmotico sao os tipos de estresses que mais afetam os queratinocitos da pele. Este trabalho avaliou os efeitos do estresse oxidativo, induzido pelo peroxido de hidrogenio (H2O2) e do choque hiperosmotico, induzido pelo sorbitol, sobre o perfil de GAGs e sobre a expressao genica e/ou proteica de sindecans e enzimas associadas ao metabolismo dessas moleculas em queratinocitos humanos da linhagem HaCaT. Proteoglicanos (PGs) foram metabolicamente marcados com [35S]-sulfato apos exposicao das celulas a 1,2 (IC25) e 2,0 mM (IC50) de H2O2 por 4 h (estresse oxidativo) e 0,4 (IC25) e 1,0 M (IC50) de sorbitol por 2 h (choque hiperosmotico). A seguir, os GAGs foram identificados pela diGestão com enzimas especificas. Os resultados demonstraram que celulas HaCaT sintetizam e secretam heparam sulfato (HS), acido hialuronico (AH) e um hibrido de condroitim sulfato e dermatam sulfato (CS/DS). O estresse oxidativo induzido por 2,0 mM de H2O2 (IC50) causou um aumento significativo na sintese de GAGs sulfatados ao mesmo tempo que provocou uma diminuicao na sintese e secrecao de AH. O tratamento com 1,2 mM de H2O2 (IC25) diminuiu a sintese e secrecao de AH, sem causar alteracoes no perfil de GAGs sulfatados. O choque hiperosmotico induzido pelo tratamento com sorbitol nas concentracoes de 0,4 M (IC25) e 1,0 M (IC50) provocou diminuicao na sintese e secrecao de GAGs sulfatados e aumento na concentracao de AH. Os niveis de expressao de genes relacionados ao metabolismo de proteoglicanos de HS (HPSE1, SDC1 e SDC4), genes relacionados ao metabolismo do AH (HAS2, HAS3, HYAL1 e HYAL2) e genes codificantes de gelatinases e seus inibidores (MMP2, MMP9, TIMP1, TIMP2 e RECK), analisados por qPCR, diminuiram significativamente tanto apos o estresse oxidativo como apos o choque hiperosmotico nas duas concentracoes estudadas. Uma diminuicao na expressao de HYAL3 foi observada em celulas expostas ao estresse oxidativo causado pela concentracao de H2O2 referente ao IC50. O gene HAS1 nao e expresso em celulas HaCaT. As concentracoes das proteinas HYAL1 e HYAL2, avaliadas por western blotting, aumentaram significativamente apos exposicao ao H2O2 e ao sorbitol nas concentracoes equivalentes aos valores de IC50. Esse aumento nas concentracoes de HYAL1 e HYAL2, juntamente com a degradacao quimica causada pelo H2O2, pode explicar a diminuicao observada nos niveis de AH apos o estresse oxidativo. A atividade da proteina HPSE1 nao variou nos tratamentos estudados, sugerindo que outros fatores contribuem para os niveis reduzidos de HS induzidos pelo choque hiperosmotico
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    Acesso aberto (Open Access)
    Avaliação do microambiente tumoral em cultura de células leucêmicas e sua modulação pela violaceína.
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2013) Palladino, Marcelly Valle [UNIFESP]; Justo, Giselle Zenker [UNIFESP]; Pinhal, Maria Aparecida da Silva [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/7511274763693292; http://lattes.cnpq.br/9147445236159161; http://lattes.cnpq.br/0828096610832474; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    O cancer e a principal causa de morte no mundo. Estima-se que, em 2020, o numero de novos casos anuais seja da ordem de 15 milhoes e cerca de 60% desses novos casos ocorrerao em paises em desenvolvimento, como o Brasil. Um importante fator associado a morbidade e mortalidade do cancer e a capacidade de invasao das celulas tumorais e a consequente formacao de metastases, processo que compreende uma sequencia de etapas envolvendo a coordenacao apropriada da invasao, adesao, motilidade e crescimento. PGs, GAGs, sao importantes constituintes do microambiente medular, sendo produzido pelas celulas hematopoeticas e estromais, nas leucemias, a interacao das celulas neoplasicas com componentes do microambiente medular influencia na agressividade e prognostico da doenca, pois essas moleculas permitem, regular as principais funcoes das celulas tumorais, afetando assim, o crescimento e progressao do cancer. Alem disso, o papel destas moleculas na patogenese das leucemias ainda e pouco conhecido, estimulando as pesquisas nesta area. Nos ultimos anos, a descoberta de compostos antitumorais promissores, isolados principalmente de microrganismos, e o crescente impacto de novas formulacoes de drogas conhecidas derivadas de produtos naturais na oncologia estimularam novamente o interesse pela busca por produtos naturais anticancer. Neste contexto destaca-se, a violaceina, um pigmento isolado da Chromobacterium violaceum, que apresenta diferentes atividades biologicas e potencial terapeutico em varias doencas. Nosso trabalho teve como objetivo principal estudar o microambiente tumoral em cultura de celulas leucemicas imortalizadas (HL60, K562 e Lucena1), bem como sua modulacao pelo agente natural violaceina. Avaliamos o perfil de GAGs sintetizados e secretados por celulas de LMA (HL60) e LMC (K562 e sua variante com fenotipo MDR u Lucena1) tratadas com violaceina. Tambem foram realizados estudos em relacao a expressao genica e proteica dos principais PGs envolvidos em cancer, bem como o efeito da violaceina sobre elas. Os efeitos da violaceina tambem foram avaliados em relacao a atividade da enzima heparanase, e sobre as enzimas envolvidas na sintese e degradacao do AH. Nossos resultados mostram uma nova avaliacao do potencial antileucemico da violaceina, e alem de ressaltar a importancia do GAGs e, consequentemente, PGs na patogenese das leucemias
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    Restrito
    Avaliação dos glicosaminoglicanos do tecido periuretral de pacientes com e sem prolapso genital
    (Assoc Medica Brasileira, 2008-03-01) Feldner Junior, Paulo Cezar [UNIFESP]; Kobayashi, Elsa Yoko [UNIFESP]; Sartori, Marair Gracio Ferreira [UNIFESP]; Nader, Helena Bonciani [UNIFESP]; Baracat, Edmund Chada [UNIFESP]; Girao, Mandel Joao Batista Castello [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    OBJECTIVE, To characterize and quantify periurethral tissue sulphated glycosaminoglycans (GAGS) in women with and without pelvic organ prolapse.STUDY DESIGN. Periurethral tissue was obtained from 35 women who underwent surgery for pelvic organ prolapse, for stress urinary incontinence, or for other gynecological benign conditions. Patients were submitted to a clinical history, physical and urodynamic examination and were divided in two groups according to genital prolapse, the standard blopsy with 1.0 x 1.0 cm was taken from periurethral tissue during surgery and assessed by biochemical methods. the GAGs were obtained by proteolysis and precipitated by trichloroacetic acid. the relative concentration of sulfated GAGs was determined by densitometry of toluidine blue stained gel using a spectrophotometer with a 525 nm wavelength, Data were compared using analysis of variance (ANOVA).RESULTS in the two groups dermatan sulphate (DS) was the predominant glycosaminoglycan (85%), followed by chondroitin sulphate (CS) and heparan sulphate (HS). Women with pelvic organ prolapse had significantly more total GAGs, DS and HS, Differences in CS were not observed.CONCLUSIONS. This study showed altered biochemical characteristics in the extracellular matrix of periurethral tissue and also accumulation of GAGs, DS and CS, in women with pelvic organ prolapse.