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    Alterações funcionais e morfológicas da célula epitelial tubular no transplante renal e sua repercussão na função renal
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2004) Matos, Ana Cristina Carvalho de [UNIFESP]; Pacheco-Silva, Alvaro [UNIFESP]
    A nefropatia crônica do enxerto (NCE) é urna das principais causas de perda do enxerto após o primeiro ano do transplante. Estudo prévio demonstrou que altos níveis urinários de proteína transportadora do retinol (RBP) se associaram à NCE. Corn o objetivo de identificar em pacientes transplantados renais com função renal boa e estável, as características morfológicas que se correlacionam aos altos níveis de RBPu e potenciais marcadores laboratoriais e histológicos da função do enxerto renal a longo prazo, realizamos 74 biópsias protocolares em 50 transplantados renais assintomáticos após uma média de 1 19 dias do transplante (30-690 dias). A histopatologia foi avaliada pela Classificação de Banff-1997, com análise semi-quantitativa das alterações tubulares (atrofia, degeneração epitelial tubular e tubulite) e intersticiais (inflamação e fibrose), calculando-se os escores de lesão tubular, intersticial e total (0- I 5). As biópsias foram coradas com Picro Sirius (PS), observadas sob luz polarizada e a fibrose foi quantificada das imagens digitalizadas. Realizou-se imuno-histoquímica para vimentina (marcador mesenquimal ), -SMA (marcador de miofibroblastos) e citoceratina (marcador epitelial). A função tubular proximal foi avaliada pela medida da RBPu no momento da biópsia. A função renal foi avaliada por meio da creatinina (Cr) e do clearance de creatinina (CICr) calculado em diferentes tempos. A alteração da função renal foi calculada pela diferença do CICr atual e o da época da biópsia ou pela diferença do CICr atual e o da época da biópsia dividido pelo CICr da biópsia. Na maioria dos pacientes encontramos alterações tubulointersticiais leves, sendo que 30 por cento dos pacientes estavam livres qualquer lesão tubulintersticial. A média da fibrose estimada pelo PS estava dentro da faixa considerada normal. Encontramos a expressão tubular de vimentina e1n 60 por cento das amostras, principalmente em biópsias que apresentavam mais dano tubulointersticial (inflamação, fibrose e atrofia). A expressão de -SMA foi verificada somente no interstício, em biópsias que apresentavam mais atrofia, fibrose e depósito de colágeno intersticial. Encontramos 10 casos com achados histológicos compatíveis com NCE durante o acompanhamento, sendo que 2 pacientes evoluíram com perda do enxerto. Quarenta e dois por cento dos pacientes apresentavam disfunção tubular proximal no momento da biópsia. Os níveis elevados de RBPu não se associaram às alterações tubulointesticiais, aos marcadores imuno-histoquímicos e à fibrose estimada pelo PS. Na análise univariada das 50 amostras, a expressão intersticial de -SMA se associou à pior creatinina de 1 ano. Na análise multivariada das 50 amostras, a expressão intersticial de -SMA, o uso de tacrolimo e enxertos provenientes de doadores mais velhos estiveram associados independentemente a um menor clearance de creatinina na época da biópsia. Na análise univariada das 50 amostras, a RBPu maior que 1 mg/dl se associou à piora da função renal durante o período seguimento. Na análise multivariada das 50 amostras, os níveis elevados de RBPu se associaram à pior creatinina de 1 ano, à pior creatinina de 2 anos e à piora da função renal no seguimento. Na análise multivariada, o diagnóstico histológico de NCE se associou à pior creatinina de 1 ano e de 2 anos. A fibrose estimada quantitativamente (Picro Sirius/morfometria) não se associou à função renal a longo prazo. Na análise univariada, a expressão tubular de vimentina em biópsias realizadas após três meses ou mais do transplante associou-se `pior creatinina na época da biópsia, à pior creatinina de 1 ano e à pior creatinina de 2 anos. A expressão de vimentina não se associou com as alterações do clearance de creatinina no seguimento. Este trabalho evidencia que quando a disfunção tubular proximal, avaliada pela RBPu, é detectada precocemente, está associada a uma evolução desfavorável da função renal do enxerto a médio prazo. Essa disfunção tubular detectada precocemente não está acompanhada de alterações morfológicas/imuno-histoquímicas da região tubulointersticial, sugerindo tratar-se de uma lesão de caráter funcional e potencialmente reversível.
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    Avaliação do risco de síndrome da apneia obstrutiva do sono em portadores de Doenla Hepática Gordurosa não alcoólica
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2019-07-16) Grillo, Penelope Michele [UNIFESP]; Parise, Edison Roberto [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Objective: Patients with obstructive sleep apnea syndrome have metabolic abnormalities similar to those observed in patients with non-alcoholic fatty liver disease. In addition, chronic intermitente hypoxia occurring in obstructive sleep apnea syndrome may be involved in the pathogenesis of fatty disease. Based on these evidences, this study aimed to evaluate the risk of obstructive sleep apnea syndrome, through the Berlin questionnaire, in patients with non-alcoholic fatty liver disease treated on an outpatient clinic basis and to relate this risk with demographic, biochemical and histological characteristics of the study population. Methods: A cross-sectional cohort study of 249 subjects of both genders with nonalcoholic fatty liver disease treated at the Liver Disease Clinic from the Clinical Gastroenterology Department of the Federal University of São Paulo, diagnosed by histological or clinical, biochemical and Image. Anthropometric data (body mass index, waist and neck circumferences), biochemical parameters (liver enzymes, total cholesterol and fractions, triglycerides, glycemia and insulin), HOMA-IR insulin resistance index, and metabolic syndrome according to National Cholesterol Education Programme Adult Treatment Panel III (2001). Histological analysis was performed according to Kleiner et al. (2005). The Berlin Questionnaire was applied, and a 3-day food record was requested to evaluate food intake. After applying the Berlin questionnaire, participants were classified as having high risk (group 1) or low risk (group 2) for sleep apnea syndrome. For the statistical analysis, Chi-Square, Student's t-test and bivariate logistic regression were used. Values were expressed as mean ± standard deviation. Results: There were significant differences between the groups regarding body mass index, waist circumference and neck, but did not differ in biochemical, metabolic and food consumption parameters. In the histological evaluation, it was found that patients at high risk were more likely to present fibrosis (F1-F4) (64.7%) and non-alcoholic steatohepatitis, in the bivariate regression analysis the body mass index, presence of any degree fibrosis and steatohepatitis on biopsy were independently associated with the high risk of obstructive sleep apnea syndrome. Conclusions: Patients with non-alcoholic fatty liver disease who are at increased risk of obstructive sleep apnea syndrome are more likely to be obese to present fibrosis and steatohepatitis in liver biopsy, suggesting that obstructive sleep apnea syndrome may participate in the pathogenesis of non-alcoholic fatty liver disease.
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    Avaliação dos escores MELD, Child-Turcotte-Pugh, APRI, contagem de plaquetas e testes hepáticos como indicadores da presença de varizes de esôfago com ou sem necessidade de profilaxia para sangramento
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2010-10-29) Tafarel, Jean Rodrigo [UNIFESP]; Ferrari, Angelo Paulo [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Purpose: The aim of this study was to determine whether MELD, Child-Turcotte-Pugh (CTP) class, APRI and laboratory tests could predict the presence of EV or varices which need prophylactic therapy (EV with medium or large size). Methods: Three hundred cirrhotic patients (193 men; mean age 53,1 years; majority with cirrhosis from chronic C hepatitis) were prospective analyzed. Uni and multivariate analysis were used to evaluate associations between the presence of EV (any size and medium or large EV) and patients’ characteristics (MELD, CTP class, APRI, platelets count and liver tests). Small varices were regarded as those which flatten with insufflation; medium varices those which protruded less than 1/3 of the lumen and large ones those which protruded more than 1/3. Results: One hundred seventy one patients (57%) had EV, of whom 35% (105) had varices which need prophylactic therapy. The distribution of EV according to the CTP class was as follows: A, 49%; B, 75,3% and C, 80%. Independent predictors of the presence of EV were: MELD > 8 (p = 0,02); APRI > 1,64 (p = 0,01); a platelet count < 93.000/mm3 (p < 0,01); AST > 1,34xUNL (p = 0,01) and total bilirubin > 1 mg/dl (p = 0,04). MELD > 8 had the highest discriminative value for presence of EV with sensitivity of 80,1% and specificity of 51,2%. Factors independently associated with EV which need prophylactic therapy were: thrombocytopenia (< 92.000/mm3; p < 0,01) and AST > 1,47xUNL (p = 0,03). A platelet count < 92.000/mm3 had sensitivity of 65,7% and specificity of 57,9% for the presence of varices which need prophylactic therapy. Conclusions: High values on MELD are associated with EV and thrombocytopenia (< 92.000/mm3), with varices which need prophylactic therapy. Considering their low sensitivity and specificity, it is suggested to maintain the recommendation of upper gastrointestinal endoscopy for all cirrhotic patients.
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    Acesso aberto (Open Access)
    Caracterização da regeneração, inflamação e estresse oxidativo no músculo de modelo experimental para distrofia muscular de Duchenne com fenótipo exacerbado pelo exercício
    (Universidade Federal de São Paulo, 2021-05-12) Lazzarin, Mariana Cruz [UNIFESP]; De Oliveira, Flavia [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/3387760393535776; http://lattes.cnpq.br/1579497511371132; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Introdução: A distrofia muscular de Duchenne é uma doença caracterizada por necrose muscular progressiva. O avanço das intervenções terapêuticas e das terapias genéticas tem trazido esperanças quanto à manutenção da funcionalidade motora mesmo em estágios mais tardios da doença. Entretanto, um grande desafio na prescrição de exercícios na reabilitação física para esses pacientes é a ausência de um perfil abrangente da resposta do músculo distrófico ao exercício. Dessa forma, o objetivo desse trabalho foi compreender, em camundongos mdx com fenótipo exacerbado pelo exercício, parâmetros relacionados à regeneração muscular, à inflamação e ao estresse oxidativo. Materiais e métodos: Camundongos C57BL/10 e C57BL/10-DMDmdx, com seis meses de vida, distribuídos em três grupos (n=10 cada): Controle, Mdx e Mdx+Exercício. O protocolo de corrida em declive foi de sete semanas, com frequência de cinco vezes na semana, a uma velocidade máxima particular para cada animal durante 60 minutos. Após eutanásia, o m. gastrocnêmio foi dissecado e realizou-se as análises: histopatológica; imunoistoquímica para marcadores de regeneração muscular (MyoD e Miogenina), de inflamação (COX-2) e para estresse oxidativo (8-OHdG); expressão de genes (qPCR) de NF-kB e NADP(H) Oxidase 2. Resultados: O grupo Mdx+Exercício apresentou a histopatologia do m. gastrocnêmio alterada pela corrida em declive, com maior incidência de fibrose endomisial e menor porcentagem de área de mionecrose. A análise imunoistoquímica revelou aumento da imunoexpressão de Miogenina no grupo Mdx+Exercício, mesmo não influenciando a expressão de MyoD; menor imunoexpressão do 8-OHdG no grupo Mdx e alterou a região histopatológica com imunoexpressão da COX-2. No grupo Mdx, a COX-2 estava relacionada com áreas de regeneração e infiltrado inflamatório, enquanto que no grupo Mdx+Exercício estava associado a regiões de fibrose muscular. Além disso, o exercício não influenciou a expressão gênica de NF-kB, porém aumentou o RNAm de NAD(P)H Oxidase 2. Conclusão: A exacerbação do fenótipo da DMD no músculo gastrocnêmio de camundongos mdx adultos está associada com o aumento da Miogenina, da COX-2 em regiões de fibrose e do 8-OHdG nuclear, bem como da expressão gênica de NAD(P)H Oxidase 2.
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    Comparacao entre dois modelos de avaliacao do estado nutricional na cirrose hepatica: tradicional e multicomportamental
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2000) Figueiredo, Fatima Aparecida Ferreira [UNIFESP]
    Apesar de estar intimamente associada a doenca hepatica cronica e representar um fator de risco para morbi/mortalidade, a desnutricao proteico-calorica (DPC) e frequentemente subdiagnosticada, pois as tecnicas tradicionais de avaliacao nutricional possuem inumeras limitacoes quando utilizadas nestes pacientes. O objetivo deste estudo foi avaliar o estado nutricional em pacientes com cirrose, atraves de dois modelos de estudo da composicao corporal, comparando com controles. O modelo tradicional utilizou a Avaliacao Global Subjetiva, a antropometria e testes bioquimicas, dividindo a massa corporal em massa de gordura e massa sem gordura. No modelo multicompartimental, quatro compartimentos (agua extracelular, massa celular, gordura corporal e mineral corporal) foram medidos, atraves da absortometda e da tecnica de diluicao do deuterio corrigida pelo brometo. Esta metodologia foi aplicada a 79 pacientes e 17 controles. As principais mudancas na composicao corporal dos pacientes com cirrose foram aumento da agua extracelular e diminuicao da massa celular e da gordura corporal. Estas alteracoes aumentaram com o agravamento da doenca hepatica e foram independentes da etiologia. A perda de gordura predominou nos estagios iniciais e foi seguida pela perda de massa celular nos estagios mais avancados da doenca hepatica. DPC foi mais frequente e grave no modelo multicompartimental, especialmente nos pacientes Child A e B. Embora alguns parametros antropometricos tenham se correlacionado com massa celular e gordura corporal, nenhum modelo obtido por regressao linear foi suficientemente preciso para detectar pequenas variacoes nestes compartimentos do mesmo individuo. A prevalencia, a gravidade e as caracteristicas da DPC foram dependentes da classificacao funcional da doenca hepatica e do modelo de avaliacao nutricional utilizado. O modelo multicompartimental proporcionou uma avaliacao mais precisa da DPC na cirrose, fornecendo dados que auxiliarao no entendimento da sua fisiopatologia e no planejamento do suporte nutricional destes pacientes
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    Contratura subclínica do músculo quadríceps: avaliação clínico-epidemiológica de 1060 escolares de Belo Horizonte na faixa etária de 7 a 13 anos
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 1996) Cunha, Fernando Milton da [UNIFESP]; Mestriner, Luis Aurélio [UNIFESP]
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    Contribuicao ao estudo clinico e eletrencefalografico da encefalopatia hepatica nas cirroses e na esquistossomose mansonica
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 1983) Silva, Ademir Baptista [UNIFESP]
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    Detecção de RNAm de canal de potássio ATP-sensível em modelo de cirrose em ratos: correlação com a atividade simpática e função renal
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2000) Monte, Júlio César Martins [UNIFESP]; Santos, Oscar Fernando Pavão dos [UNIFESP]
    Introdução: A ativacao de KATP em musculatura lisa de vaso induz a vasodiiatacao. Sabe-se que o principal determinante das alteracoes funcionais renais observadas na cirrose e a vasodilatacao periferica que antecede o aparecimento de ascite nessa situacao. Objetivo: O proposito desse estudo foi analisar a expressao de RNAm de KATP no figado, rim e aorta atraves da tecnica de RT-PCR apos 12 e l8 semanas de cirrose induzida. Materiais e Metodos: Ratos da raca Wistar foram estudados em gaiola metabolica com livre acesso a agua e racao. Induzimos cirrose atraves de um protocolo de administracao intragastrica semanal de tetracloreto de carbono (CCL4). O diagnostico de cirrose foi confirmado por anatomo-patologico. Apos 12 semanas de gavagem com CCL4, rins, aorta e figado foram removidos e utilizados para extracao de RNA. Eletrolitos plasmaticos e urinarios foram dosados. Estimou-se a funcao renal atraves do calculo da depuracao de creatinina. Dosamos as catecolaminas plasmaticas por HPLC. O mesmo protocolo foi realizado em outro grupo apos 18 semanas. Resultados: Primeiro, a analise por RT-PCR demonstrou expressao de RNAm de KATP no figado apos 18 semanas, mas nao em 12 e controles. Segundo, a analise por RT-PCR demonstrou a expressao de RNAm de KATP somente em aortas de ratos cirroticos. Finalmente, um aumento na reabsorcao tubular renal de sodio em ratos com funcao renal normal associado a uma maior ativacao simpatica (consideramos noradrenalina plasmatica como um marcador de ativacao simpatica) sugere um papel desse sistema como mediador. A tabela abaixo sumariza os dados comentados (excrecao urinaria de sodio e noradrenalina plasmatica). Os dados foram expressos como media n desvio padrao, * p
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    Acesso aberto (Open Access)
    Diferenciação entre esquistossomose hepatoesplênica e cirrose utilizando ressonância magnética
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2007) Bezerra, Alexandre Sérgio de Araújo [UNIFESP]; D'Ippolito, Giuseppe [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Objetivos: Identificar quais caracteristicas podem ser usadas para diferenciar doentes com esquistossomose hepatoesplenica e cirrose usando ressonancia magnetica e medir a reprodutibilidade deste metodo de imagem na avaliacao destes doentes. Metodos: Estudo transversal e observacional em 24 pacientes com esquistossomose hepatoesplenica cronica e 27 pacientes com cirrose alcoolica ou induzida por virus, submetidos a exame de ressonancia magnetica do abdome. Todas as imagens foram interpretadas independentemente por dois radiologistas, avaliando-se os seguintes aspectos em exames de ressonancia magnetica do figado e baco: alargamento de fissuras hepaticas, irregularidade de contornos hepaticos, fibrose periportal, heterogeneidade do parenquima hepatico e nodulos sideroticos esplenicos. Medidas dos lobos esquerdo, direito e caudado do figado e dos maiores diametros esplenicos tambem foram realizadas. A reprodutibilidade da ressonancia magnetica foi medida por meio do calculo da concordancia interobservador e intra-observador pelo testes kappa e correlacao intraclasses. Foram realizados os testes x2, exato de Fischer, teste t e analise de regressao com o objetivo de comparar os dois grupos de pacientes. Resultados: A concordancia interobservador e intra-observador foi substancial ou quase perfeita em quase todas as variaveis analisadas (k ou r = 0,81-1,00). Fibrose periportal, heterogeneidade do parenquima hepatico e nodulos sideroticos esplenicos foram mais frequentes no grupo de pacientes esquistossomoticos (p < 0,05). A fibrose periportal mostrou maior diferenca entre os dois grupos, sendo mais frequente nos esquistossomoticos. Houve tambem diferenca quanto a distribuicao, sendo a fibrose periportal periferica mais comum que a central em pacientes com esquistossomose. O diametro transverso do lobo hepatico direito foi maior nos pacientes cirroticos, e a relacao caudado/lobo direito, todos os diametros esplenicos e o indice esplenico foram maiores nos pacientes esquistossomoticos (p < 0,001). Na analise por regressao multipla, os nodulos sideroticos esplenicos e o indice esplenico foram altamente indicativos de esquistossomose e podem ser usados para diferenciacao entre os dois grupos. Em doentes previamente esplenectomizados, a relacao lobo caudado I lobo direito foi a variavel que diferenciou melhor os dois grupos (p = 0,009). Conclusao: A presenca de fibrose periportal periferica, heterogeneidade do parenquima hepatico e nodulos sideroticos esplenicos sao mais frequentes em pacientes esquistossomoticos. O indice esplenico e significativamente maior na esquistossomose. O exame de ressonancia magnetica apresentou elevada reprodutibilidade para a avaliacao das alteracoes morfologicas hepaticas e esplenicas em pacientes esquistossomoticos e em pacientes cirroticos
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    Acesso aberto (Open Access)
    Efeito da administração de células-tronco mesenquimais derivadas da medula óssea ou seu meio condicionado na obstrução ureteral unilateral em ratas
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2014) Silva, Andrei Furlan da [UNIFESP]; Schor, Nestor [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    O potencial efeito terapeutico das celulas-tronco mesenquimais (MSCs) e seu meio condicionado (CM) tem sido extensivamente estudados. Eles possuem a capacidade de reparar tecidos, reduzir inflamacao local e modular respostas imunologicas. A inflamacao tubulo-intersticial progride para fibrose e pode levar a doenca renal cronica (DRC). A obstrucao ureteral unilateral (UUO) e um modelo bem estabelecido de fibrose renal. No presente estudo examinamos fatores que podem ser influenciados pela administracao de MSCs ou de seu CM na modelo de UUO. As MSCs foram extraidas de femures e tibias de ratos, cultivadas in vitro e caracterizadas por citometria de fluxo e diferenciacao celular. Quatro grupos de ratas foram usados nos experimentos (n=7, cada): SHAM, UUO (Obstrucao Ureteral Unilateral), UUO+MSCs (Obstrucao+ MSCs) e UUO+CM (Obstrucao + CM). As MSCs ou seu CM foram administrados via veia cava abdominal apos total ligadura do ureter. Apos 7 ou 14 dias os animais foram eutanasiados e tiveram soro e rins coletados. Foram observadas reducoes nas expressoes de moleculas como COL1A1, α-SMA e TNF-α nos animais tratados com MSCs ou seu CM. Observou-se, por imunohistoquimica, reducoes nos niveis de caspase-3 ativada, α-SMA and PCNA nos animais tratados. Os resultados sugerem que a administracao intravenosa de MSCs ou de seu CM reduz a progressao da fibrose e modula fatores envolvidos na apoptose, inflamacao proliferacao celular e transdiferenciacao epitelio-mesenquimal (EMT) em ratas Wistar submetidas a UUO, indicando uma possivel ferramenta na prevencao ou reducao na progressao para DRC
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    Efeito da amitriptilina, irradiação e do micofenolato mofetil na fibrose túbulointersticial induzida pela obstrução ureteral unilateral em camundongos
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2008) Achar, Eduardo [UNIFESP]; Schor, Nestor [UNIFESP]
    A fibrose tubulointersticial é uma das principais características apresentadas durante a doença renal terminal e determinante na progressão da lesão renal. A OUU é um modelo representativo da fibrose renal intersticial com expressão significativa de citocinas e mediadores inflamatórios, como o TGF-Beta1, osteopontina (OPN), MCP-1 e ICAM-1. Nesse cenário, a OUU é um modelo experimental importante para o estudo de alvos terapêuticos, focando a prevenção ou diminuição da progressão da nefropatia. Alguns estudos demonstraram que a AMT é eficaz em quadros de cistite intersticial e possui efeitos antiinflamatórios. Este trabalho foi realizado para identificar se AMT pode ser uma droga com uso potencial no tratamento da progressão da doença renal, principalmente na fibrose intersticial, em modelo de OUU. o ureter direito de camundongos C57BU6 machos foi ligado e os animais receberam solução salina ou AMT (1 mg/Kg/dia) por gavagem oral durante um período que variou de 1 a 10 dias. Após esse período, o rim obstruído e contralateral foram removidos e processados. A fibrose intersticial foi analisada pela coloração do tricrômio de Masson. A infiltração de miofibroblastos e macrófagos foi avaliada por imunohistoquímica, utilizando anticorpos específicos para alfa-SMA e CD68, respectivamente. PCR quantitativa foi empregada para investigar o efeito de AMT na expressão de osteopontina, MCP-1, ICAM-1 e TGF-beta1. Os dados de AMT foram comparados com os dados de animais que receberam MMF (10 mg/Kg/dia) e irradiação corporal por raios-X após a OUU. Após a lesão por OUU, os animais sem tratamento apresentaram uma expressão abundante de a-SMA e deposição de colágeno no interstício renal, assim como uma intensa infiltração de macrófagos. AMT promoveu uma redução significante na fibrose intersticial, com uma mínima infiltração de macrófagos e...(au).
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    Efeito do tratamento contínuo com rapamicina na função renal, na arquitetura tecidual e na expressão gênica de fatores pró-fibróticos e citoprotetores num modelo experimental de fibrose renal
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2006) Damiao, Marcio Jose [UNIFESP]; Câmara, Niels Olsen Saraiva [UNIFESP]
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    Efeito do tratamento por eletroacupuntura sobre a fibrose induzida por ovoalbumina em ratos Wiostar
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2003) Katsuya, Elizabeth Marie [UNIFESP]
    Objetivo: O objetivo deste estudo foi inicialmente verificar se o modelo COC-OVASepharosem, descrito em camundongos para a investigacao dos mecanismos de fibrose imunomediada, poderia ser reproduzido em ratos. Em seguida analisar os efeitos do tratamento por acupuntura sobre a fibrose experimental, em ratos submetidos a esse modelo. Material e Metodos: Ratos Wistar pesando 200-250 g receberam implante subcutaneo de 400 mg de clara de ovo coagulada (COC) no dia 1 e depois de 14 dias foram desafiados com injecao endovenosa de OVA acoplada a cerca de 10.000, 20.000 ou 40.000 microesferas de Sepharose ® e suspensas em 400 gi- de PBS. Esses animais foram divididos em 4 grupos: Acupuntura (A), Falsaacupuntura (F A), Imobilizado (I) e Controle (C). O tratamento com eletroacupuntura (A), em pontos utilizados na clinica para doencas pulmonares, ou falsa-acupuntura (FA), em nao pontos, era feito a partir do dia 2, duas vezes por semana, por 3 semanas. Findo este periodo, era retirado sangue, pela veia da cauda dos animais previamente anestesiados, para dosagem de corticosterona plasmatica (metodo fluorimetrico) e o pulmao era removido para analises histologicas. O material foi corado pelos metodos da hematoxilina-eosina, picrosirius-vermelho e Litt para visualizacao das celulas inflamatorias, fibras colagenas e eosinofilos, respectivamente. Para a analise quantitativa a area das lesoes ao redor das microesferas foi medida por meio de sistema de analise de imagens computadorizadas acoplado a microscopio de luz. Resultados: Os ratos submetidos ao modelo da COC-OVA-Sepharose°, com a administracao endovenosa de aproximadamente 20.000 microesferas de Sepharose® acoplada a OVA apresentaram lesoes pulmonares inflamatorias constituidas de celulas mononucleares, intenso infiltrado eosinofilico e deposicao de colageno. Pela analise qualitativa observamos diminuicao das lesoes inflamatorias no grupo A em relacao ao grupo C. A analise quantitativa revelou que as areas das lesoes pulmonares nos grupos I, FA e A foram significativamente menores do que no grupo C. Este resultado foi atribuido ao estresse da imobilizacao que promove liberacao de hormonios adrenocorticais no inicio do procedimento experimental. Como os animais eram manipulados durante tres semanas provavelmente ocorreu adaptacao ao procedimento experimental, de forma que no final do experimento nao observamos diferencas significativas na concentracao plasmatica de corticosterona entre os grupos. Tambem nao observamos diferencas significativas entre as lesoesa(au)
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    Efeitos da amitriptilina sobre a fibrose em modelo de obstrução vesical parcial
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2010-04-28) Almeida Prado, Patricia Shirley de [UNIFESP]; Teixeira, Vicente de Paulo Castro [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Purpose: Chronic bladder outlet obstruction secondary to benign prostatic hypertrophy can reach up to 80% of men over 50 years and cause serious and irreversible changes throughout the urinary tract, especially in the bladder, however, current knowledge, therapeutics are still limited. Amitriptyline has recently been described as analgesic, anti-inflamatory and myorelaxing. Objective: To investigate the effects of amitriptyline hydrochloride on the process of fibrosis in a model bladder outlet obstruction in rats. Materials and Method: Wistar rats were subjected to infravesical obstruction and studied at intervals of 1 and 14 days after procedure. Animals were divided into 5 groups: sham, OIV1-T, OIV1-NT, OIV14-T e OIV14-NT. Bladder tissue was processed for histopathology, immunohistochemical and RT-PCR. Results: Groups OIV14 showed bladder fibrosis, hypertrophy of the smooth muscle cells and thickening of the bladder wall. Group OIV14-T demonstrated a higher intensity of fibrosis and higher macrophage infiltration rate and gene expression of TGF-β1. Conclusion: Amitriptyline presented an amplifying effect on the process of fibrosis as a whole in this experimental model.
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    Engenharia de vetores expressando o receptor de TGFβ1 tipo II solúvel sob controle do promotor NF-kB e análise da expressão em culturas musculares 2D e 3D
    (Universidade Federal de São Paulo, 2023-07-24) Sales, Sofia Mila Cantu [UNIFESP]; Stilhano, Roberta Sessa; http://lattes.cnpq.br/2122125365795721; http://lattes.cnpq.br/7344894651433108
    Introdução: O TGF-β1 (Transforming growth factor beta 1) é um fator importante na cicatrização e formação de fibrose, cuja inibição é terapeuticamente relevante em lesões com perda muscular significativa. No presente trabalho, foi avaliada a funcionalidade do vetor lentiviral carreando o receptor solúvel de TGFβ (sTGFβRII) juntamente com o promotor induzível pelo NF-kB (fator de transcrição nuclear ligado na cadeia leve kappa das células B), que é altamente expresso durante a fase inflamatória da lesão muscular, em modelos de lesão 2D e 3D de células musculares. Objetivo: Desenvolvimento de vetores expressando o receptor de TGF-β1 tipo II solúvel sob o controle do promotor NF-kB e a avaliação da expressão em culturas musculares 2D e 3D. Metodologia: Células C2C12 foram transduzidas com vetores 1 (NFkb_Luciferase) ou 3 (NFkB_sTGβFRII). Essas linhagens produzidas foram cultivadas com meio DMEMc (Dulbecco’s modified Eagle’s medium – DMEM; 10% de soro fetal bovino (SFB); 1% Penicilina/estreptomicina (P/S)). Os esferoides de MDSC (muscle derived-stem cells) e C2C12 foram produzidos em micromoldes de agarose e cultivados com os meios de proliferação (PM) (Dulbecco’s modified Eagle’s medium – DMEM; 10% de soro fetal bovino (SFB); 10% de soro de cavalo (SC); 1% Penicilina/estreptomicina (P/S); 0,5% de extrato de embrião de galinha) e com o meio de diferenciação (DM) (DMEM; 10% SFB; 1% P/S). Foram produzidos também esferoides das linhagens 1 e 3. A caracterização dos esferoides foi realizada por diversos ensaios: viabilidade por citometria de fluxo (7AAD e Anexina V), CellTiter-Glo, live and dead (calceína e 7AAD) e MTT. Histologia em historresina com coloração de azul de toluidina, imuno-histoquímica e imunofluorescência para os marcadores MyoD, Pax7 e eMyHC e a criação do modelo de lesão com cloreto de bário (BaCl2) e cardiotoxina (CTX). Resultados: Nos ensaios 2D, observamos uma modulação da expressão gênica do sTGFβRII e luciferase na presença de BaCl2. Caracterizamos esferoides de MDSC e C2C12 com forma e tamanho homogêneos tanto no meio padrão de cultivo quanto no meio de DM. A viabilidade dos esferoides do grupo PM foi alta (88% no 2º dia e 74% no 14º dia), enquanto a viabilidade do grupo DM diminuiu para 44%, e a porcentagem de células apoptóticas aumentou para 56% no 14º dia. Na análise da morfologia, observamos um aumento de células fusiformes, especialmente no grupo DM, sugerindo a diferenciação. Também houve um aumento significativo na intensidade de fluorescência de eMyHC (7,5X), Pax-7 (2,1X) e MyoD (2X) em relação ao grupo PM no dia 14. O grupo PM mostrou uma capacidade de proliferação 5X maior que o grupo DM após o 4º dia, tanto em número total de células quanto nas células aderidas à placa. Os esferoides cultivados em meio PM também apresentaram uma maior capacidade de proliferação e fusão quando comparados ao meio DM. Nos esferoides C2C12, observamos um crescimento exponencial com um platô a partir do dia 14 em relação ao volume, e uma diminuição do volume do centro necrótico a partir do 4º dia. Na padronização do modelo de lesão por CTX e BaCl2, observamos uma redução na viabilidade dos esferoides em todos os grupos quando comparados ao controle (CTL) (p<0,05), exceto no grupo BaCl2 6,25%. As concentrações de BaCl2 de 50%, 12,5% e 6,25%, e CTX (1µM) apresentaram viabilidades de 27%, 53%, 74% e 24%, respectivamente. A lesão induzida com BaCl2 50% levou a uma redução de 60,5% do volume do esferoide (p<0,05) e 54% da viabilidade (p<0,05) em comparação com o grupo controle. Esferoides das linhagens 1 e 3 mostraram uma redução do tamanho dos esferoides da linhagem 3 (p<0,05), sugerindo a importância do TGF-β1 para a proliferação celular e a possibilidade de sua depleção do meio de cultura. Também observamos uma redução na viabilidade dos esferoides que superexpressaram o sTGFβRII (p<0,05). No modelo transwell, verificamos que o receptor solúvel foi expresso e teve um efeito nas células C2C12, reduzindo sua viabilidade frente à lesão com BaCl2. Conclusão: foi possível produzir e caracterizar esferoides de células musculares usando a técnica de micromoldes de agarose scaffold-free. Observamos que as células MDSC foram capazes de se diferenciar ao longo do tempo, apresentando maior expressão de marcadores miogênicos no meio DM. Além disso, desenvolvemos um modelo de lesão em esferoides de células C2C12 utilizando BaCl2 e CTX, o qual resultou em redução da viabilidade e alteração no volume dos esferoides. Demonstramos que o receptor solúvel foi expresso e modulado por BaCl2, no entanto, sua expressão levou a uma diminuição no tamanho e na viabilidade dos esferoides. Embora sejam necessários estudos adicionais para compreender o efeito do receptor solúvel na redução da fibrose, nosso estudo evidenciou sua funcionalidade e modulação na presença de agentes indutores de lesão muscular, como o BaCl2.
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    Estudo comparativo entre a evolução clínica e a da fibrose em pacientes operados de hérnia discal lombar
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2006) Almeida, Daniel Benzecry de [UNIFESP]; Prandini, Mirto Nelso [UNIFESP]
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    Estudo de marcadores nao-invasivos de fibrose hepatica em pacientes com doenca renal cronica em hemodialise e hepatite C
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2007) Schiavon, Leonardo de Lucca [UNIFESP]
    Introdução: A infeccao pelo virus da hepatite C (HCV) possui elevada prevalencia entre os pacientes com doenca renal cronica (ORC) em hemodialise. Alem disso, a hepatite C cronica exerce impacto negativo sobre a morbidade e mortalidade destes individuos. Por este motivo, uma caracterizacao adequada do grau de lesao hepatica nesta populacao e essencial para indicacao de terapia antiviral e selecao adequada dos candidatos ao transplante renal. A biopsia hepatica e atualmente o padrao-ouro na caracterizacao do grau de fibrose hepatica, no entanto e um procedimento invasivo e com consideravel variabilidade diagnostica intra-e inter¬observador. Objetivos: Avaliar a acuracia de testes sanguineos simples, do YKL-40 e do acido hialuronico (AH) como marcadores nao-invasivos de fibrose hepatica em portadores de DRC em hemodialise e hepatite C. Material e Metodos: Estudo transversal com revisao de prontuarios padronizados que incluiu pacientes com DRC em hemodialise e HCV-RNA positivo atendidos no periodo de Janeiro de 1995 a Janeiro de 2006. Foram excluidos os individuos com historia de etilismo, tratamento previa com interferon e infeccao dupla com virus da hepatite B e/ou HIV. Apenas exames realizados com intervalo maximo de seis meses da biopsia hepatica foram utilizados. As dosagens de YKL-40 e AH foram feitas em soros estocados com ensaios imunoenzimaticos comerciais. A classificacao de METAVIR foi usada para analise histologica. Analises univariada e multivariada foram utilizadas para identificar os fatores associados a presenca de fibrose. Curvas ROC foram usadas para avaliar e comparar a acuracia dos testes e tambem para a escolha dos melhores pontos de corte. Resultados: Foram incluidos 203 pacientes com media de idade a epoca da bi6psia de 45,0 ± 11,0 anos, sendo 64 por cento do sexo masculino. As medias da idade na infeccao e do tempo de infeccao pelo HCV foram de 35,1 ± 12,6 e 10,0 ± 6,7 anos, respectivamente. Fibrose significativa (F2, F3 ou F4 de METAVIR) e fibrose avancada (F3 ou F4 de METAVIR) foram observadas em 24 por cento e 9 por cento da amostra respectivamente. Individuos com fibrose significativa apresentaram maiores medianas de niveis sericos de AST (P < 0,001), AL T (P = 0,002), GGT (P = 0,006) e menor contagem de plaquetas (P < 0,001). A analise multivariada identificou a AST e 0 numero de plaquetas como varaveis independentemente associadas a fibrose significativa. Estes testes foram combinados no indice AST/plaquetas (APRI) e a area sob a curva ROC (AUROC) alcancada para deteccao de fibrose significativa foi de 0,801. Usando os pontos de corte definidos pela curva ROC, valores de APRI < 0,40 alcancaram VPN de 93 por cento para exclusao de fibrose significativa. O ponto de corte superior (2: 0,95) alcancou VPP de 66 por cento para diagnostico de METAVIR F2-F4. Se a biopsia hepatica fosse reservada aos individuos com valores de APRI intermediarios (2: 0,40 e < 0,95), esta poderia ser evitada corretamente em 52 por cento dos casos. Da amostra inicial, 185 pacientes possuiam soro estocado com intervalo maximo de seis meses da biopsia hepatica. Neste subgrupo, individuos com fibrose significativa mostraram maiores niveis sericos de YKL-40 (P = 0,034), AH (P = 0,003), AST (P < 0,001), AL T (P = 0,003), GGT (P = 0,007) e menor contagem de plaquetas (P < 0,001). Analise multivariada identificou niveis de AH, AST e contagem de plaquetas como preditores independentes de fibrose. A formula do modelo de regressao logistica alcancou uma AUROC de 0,798, 0 que foi significativamente maior do que a alcancada pelo YKL-40 (0,607) e AH (0,650), porem foi semelhante ao APRI neste subgrupo (0,787). O ponto de corte inferior para o modelo da regressao (< 8,38) alcancou VPN de 94 por cento e valores 2: 9,6 mostraram VPP de 65 por cento. Usando estes pontos de corte para o modelo da regressao logistica, a biopsia hepatica poderia ter sido corretamente evitada em 61 por cento da amostra. Conclusoes: Testes simples como niveis de AST e contagem de plaquetas podem identificar o grau de fibrose hepatica em uma proporcao significativa dos pacientes com ORC em hemodialise e infeccao pelo HCV. A adicao do AH aumenta a proporcao de biopsias corretamente evitadas e pode representar um teste util caso outros estudos confirmem os achados desta tese
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    Estudo de membrana biológica em ratos na prevenção de fibrose pós laminectomia
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2003) Herculano, Marco Antonio [UNIFESP]; Tella Júnior, Oswaldo Inácio de [UNIFESP]
    Objetivos: Investigar a aplicacao de uma membrana biologica, constituida de cortical ossea bovina descalcificada, em cirurgias de coluna vertebral de ratos, com o intuito de tratar o defeito osseo minimizando ou impedindo a herniacao do tecido muscular para dentro do canal raquideano, inibindo a formacao de fibrose pos-operatoria e avaliar a biocompatibilidade do material. Metodos: A membrana biologica de cortical ossea bovina descalcificada - que tem ampla aplicacao em odontologia para cobertura de implantes dentarios, ou como barreira biologica nos setores de bucomaxilo, ortopedia e traumatologia, cirurgia plastica estetica e reparadora, cirurgia facial e oncologia - serviu ao uso em laminectomias lombares e toracicas, executadas em ratos Wistar-EPM, que apos intervalos de oito, dezesseis e vinte e quatro semanas, foram sacrificados, sendo removidas as pecas cirurgicas para analise anatomopatologica. Resultados: Os resultados obtidos da analise microscopica do material submetido a Hematoxilina e Eosina, divididos em grupos de acordo com o tempo de sacrificio e presenca ou ausencia de implante apresentou um comportamento semelhante sem diferencas estatisticamente significantes, porem com algumas percentagens apresentando diferencas significativas, o que sugere uma possivel diferenca de comportamento entre os grupos quanto a presenca ou ausencia de reconstituicao do tecido. Conclusoes: A membrana biologica liofilizada de cortical ossea bovina evitou a herniacao do tecido muscular para o canal raquideano, sendo totalmente reabsorvida em todas as pecas analisadas, demonstrando sua biocompatibilidade e favorecendo a neoformacao ossea e evitando aderencias
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    Acesso aberto (Open Access)
    Estudos dos mecanismos renoprotetores das células- ronco derivadas do tecido adiposo em modelos experimentais de doença renal crônica
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2014) Donizetti-Oliveira, Cassiano [UNIFESP]; Câmara, Niels Olsen Saraiva [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Atualmente cerca de 13% da populacao mundial e afetada por algum grau de doenca renal cronica, com um percentual de 45% de mortes atribuidas a desordens de carater fibrotico. Neste contexto, novas formas terapeuticas de tratamento se tornam imprescindiveis, como por exemplo, uso de terapia celular com celulas-tronco mesenquimais. Essas celulas podem ser obtidas do tecido-adiposo (CTAd) tornando-se possiveis terapias devido a sua facil obtencao e propriedades pro-regenerativas, principalmente as exercidas por acoes paracrinas. Portanto, neste presente trabalho analisamos o papel da CTAd na reducao da progressao da fibrose renal em dois modelos experimentais: 1) de isquemia e reperfusao renal unilateral severa (IR) e 2) de nefrite tubulo-intersticial (NTI). Inicialmente, as CTAd foram isoladas de camundongos C57BL/6j, e foram caracterizadas fenotipicamente e funcionalmente. Apos sua caracterizacao, as CTAds foram administradas por via intraperitoneal (2.105 celulas/animal) em diferentes tempos apos insulto inicial, e os animais foram avaliados 24 horas, 6 e 10 semanas apos a IR e 10 dias apos a inducao da NTI. No modelo de IR, no tempo de 24 horas, os animais tratados com CTAd apresentaram reduzida disfuncao renal e tubular e um aumento do processo regenerativo. Adicionalmente, a expressao renal de transcritos pro-inflamatorios (IL-6 e TNF) foi diminuida, enquanto que o nivel de moleculas antiinflamatorias e citoprotetoras (IL-4, IL-10 e HO-1) foram aumentadas. Apesar da melhora funcional, as CTAd nao foram observadas nos rins dos animais transplantados. Como esperado, apos 6 semanas de IR, os rins dos animais nao tratados retrairam, enquanto os rins dos animais tratados com CTAd permaneceram integros com menor deposicao de fibras de colageno do tipo 1 (Col-1) e menos expressao do marcador de fibrose FSP-1. A protecao renal observada em animais tratados com CTAd foi acompanhada por uma reducao nos niveis sericos de citocinas inflamatorias como TNF-α, KC, RANTES e IL-1a. No modelo de NTI o mesmo padrao foi observado, ou seja, os rins dos animais tratados apresentaram menor disfuncao renal com reduzida expressao de moleculas pro-inflamatorias (TNF-a e IL-6) e diminuicao da area fibrotica observada principalmente pela coloracao de Picrosirius e imunohistoquimica para marcadores pro-fibroticos como FSP-1 e Col-1. Surpreendentemente, quando avaliamos o tratamento das CTAd com 6 semanas de IR, periodo em que os animais ja apresentavam fibrose, foi constatado uma melhora nos parametros funcionais e menos fibrose e reducao da expressao de RNAm de Col-1 e vimentina, alem de menor expressao de FSP-1. Conclusivamente, nossos resultados demonstram que a terapia com CTAd pode afetar a progressao da fibrose renal, pela modulacao da resposta inflamatoria inicial. Acreditamos que essa protecao possa estar relacionada a modulacao dos mecanismos que governam a transicao epitelial/endotelio-mesenquimal. Esperamos que esse trabalho possa contribuir para a identificacao de potenciais vias de lesao ou de regeneracao, facilitando a sua traducao mais simples e rapida para a pratica clinica
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    Ferro, cobre e deficiência de alfa 1-antitripsina no fígado de pacientes com cirrose e em portadores de esquistossomose mansônica
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 1989) Barros Junior, Platao de [UNIFESP]; Mincis, Moysés [UNIFESP]