Navegando por Palavras-chave "Espermatozoides"

Agora exibindo 1 - 20 de 33
  • Imagem de Miniatura
    Item
    Acesso aberto (Open Access)
    Ação do resveratrol sobre os parâmetros reprodutivos de ratos tratados com cisplatina, etoposide e bleomicina a partir da peripuberdade
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2016-03-30) Neves, Flavia Macedo de Oliveira [UNIFESP]; Valdeolivas, Sandra Maria Miraglia [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/7489168456011888; http://lattes.cnpq.br/0827450849507557; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Protocols that include co-administration of bleomycin, etoposide and cisplatin (BEP protocol) have been effective against this disease; however, cause deleterious effects on fertility. Resveratrol can be considered as potential candidate to reverse this panorama due to its anti-cancer, anti-apoptotic, anti-inflammatory and antioxidant. This study aimed to determine the effect of the co-administration of resveratrol against the side effects on reproduction of rats, caused by the administration of BEP in a clinical dose adapted for peripubertal rats. A hundred and seventy two rats were distributed into four groups: Sham Control (SC); Resveratrol (R); Bleomicin, Etoposide and Cisplatin (BEP) and Resveratrol + Bleomicin, Etoposide and Cisplatin (R-BEP). At 36th days postpartum (dpp), the rats from the groups R (n=44) and R-BEP (n=42) were treated with resveratrol, by gavage, with a single daily dose of 300 mg/kg body weight. From the 41st dpp, the animals of RBEP group were submitted to the co-administration BEP intraperitoneally (i.p.), for three consecutive weeks using the following protocol: 3.5 mg/kg etoposide and 0.70 mg/kg of cisplatin, for 5 consecutive days, with 02 days off treatment every week and 0.35 mg/kg of bleomycin on the 2nd day of every week. Animals of the BEP group (n=42) were exclusively treated with bleomycin, etoposide and cisplatin via ip; those of the SC group received saline solution via i.p. and carboxymethyl-cellulose (by gavage), which is the vehicle for resveratrol (n=44). The euthanasia was performed at two ages: i) 60 dpp (Experiment 1) and ii) 113 dpp (Experiment 2). In both ages the following parameters were investigated: testicular and epididymal biometry, testicular morphometry and stereology, and sperm quantitative analysis. The number of apoptotic germ cells (numerical density of TUNEL-positive cells) and the histopathological analysis of the testes were also assessed in both ages. At 60 dpp we also determined: dosages of sex hormones (testosterone and estradiol) in the plasma (P) and in the intratesticular fluid (ITF); the testicular levels of malondyaldehyde and nitric oxide were carried out to access the oxidative stress and qualitative sperm analysis (mitochondrial activity; acrosome integrity; DNA integrity; morphology and motility - CASA/HTM-IVOS). At 113 dpp the total estimate of spermatogonia RB1-positive was investigated. Neither in 60 nor in 113 dpp animals there were significant differences when CS and R groups were compared, in any of the parameters analyzed. At 60 dpp the animals of BEP and RBEP group showed a reduction of the following parameters: body weight, epididymis and testis weights, diameter of seminiferous tubules, including the androgendependent tubules, seminiferous epithelium height and area, both P an ITF testosterone dosages and the number of sperm in the different portions of the epididymis. Accentuated hypotrophy of the seminiferous epithelium (germ cell depletion) also occurred in this age in both groups, BEP and R-BEP. When the groups BEP and R-BEP where compared, no significant alterations were observed, except for the seminiferous epithelium area (R-BEP > BEP). Still in the 60 dpp, there was an increase in the testicular lipid peroxidation in both BEP and R-BEP groups. In the 60 dpp, the sperm parameters such as DNA integrity and motility (vigor - VCL and progression - VAP, VSL) showed to be similarly altered in both R-BEP and BEP groups, when compared to SC and R groups. However, the dosages of ITF testosterone and some parameters that indicate sperm quality (morphology, mitochondrial activity and acrosome integrity) point out to a benefic action of resveratrol against the damage caused by the chemotherapy, since a significant improvement in the R-BEP group was observed compared to the BEP group. However, the R-BEP group showed significant alterations in all the parameters analyzed, when compared to the SC group. At 113 dpp, the animals of BEP and RBEP groups presented similar alterations in the reproductive parameters as observed at 60 dpp, plus a reduction in the estimated number of total RB1-positive spermatogonia. There was an increase in the occurrence of germ cell death through apoptosis in the groups BEP and R-BEP (60 and 113 dpp), but at 60 dpp it was reduced in the animals from the R-BEP group, compared to the BEP group. The model of study presented here provided a broad analysis of the BEP protocol effects with or without the co-administration of resveratrol on different types of germ cells; it especially provided evidence on the impact of the treatments (BEP and R-BEP) on the survival of these cells and on the quality of the gametes, since the euthanasia was performed at two different time points: i) one day (Experiment 1) and ii) 54 days (Experiment 2) after the end of the treatment (at 59dpp). The reduction in the occurrence of germ cell apoptosis, the partial preservation of the seminiferous epithelium area, the improvement in some sperm qualitative parameters and in the ITF testosterone dosage observed in the R-BEP group (60 dpp), compared to the BEP group, indicate a positive action produced by the treatment with resveratrol, in the co-administration with BEP. On the other hand, resveratrol did not provide sufficient protective action against the chemotherapy to restore the seminiferous epithelium after the completion of a full spermatogenic cycle (53 days, 113 dpp). Longer periods of recovery elapsed after treatment could raise the chances of clarifying the role of resveratrol on the late restoration of the seminiferous epithelium and on the recovery of sperm reserves.
  • Nenhuma Miniatura disponível
    Item
    Somente Metadadados
    Análise dos níveis de peroxidação lipídica, da função dos espermatozóides e do perfil protéico do plasma seminal de adolescentes antes e após a varicocelectomia
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2009) Del Giudice, Paula Toni [UNIFESP]; Bertolla, Ricardo Pimenta [UNIFESP]
    Introdução: a varicocele e uma das principais causas de infertilidade masculina tratavel. Sua incidencia na populacao masculina e de 15%. Alem de ser uma doenca que geralmente apresenta seu inicio durante a adolescencia, a varicocele demonstra ter um carater progressivo e apresenta impacto nas variaveis seminais e na funcao dos espermatozoides. Objetivos: avaliar o efeito da varicocelectomia na funcao dos espermatozoides, na peroxidacao lipidica e no perfil proteico de plasma seminal de adolescentes. Metodo: as amostras foram obtidas e analisadas de acordo com os parametros da OMS (1999) e morfologia segundo criterio estrito de Kruger (1986). O grupo de estudo incluiu 27 adolescentes com indicacao de tratamento cirurgico da varicocele. A integridade do DNA nuclear dos espermatozoides foi avaliada pelo ensaio Cometa alcalino, e as celulas foram classificadas de acordo com a intensidade de dano no DNA: grau I (alta integridade do DNA), grau II (DNA ainda integro ou em inicio de fragmentacao), grau III (DNA moderadamente fragmentado) e grau IV (DNA altamente fragmentado). A atividade mitocondrial foi avaliada pelo metodo colorimetrico proposto por Hrudka (1987), e as celulas foram classificadas em: classe I (mitocondrias todas ativas), classe II (mais de 50% de mitocondrias ativas), classe III (menos de 50% de mitocondrias ativas) e classe IV (mitocondrias todas inativas). A peroxidacao lipidica foi determinada usando-se o metodo descrito por Ohkawa (1979), que se baseia na determinacao de MDA devido a sua reacao com o TBA, e o nivel de peroxidacao lipidica foi descrito em nanogramas de TBARS/mL de semen. O perfil proteico de plasma seminal foi avaliado por eletroforese bidimensional de proteinas em gel de poliacrilamida. As proteinas foram quantificadas e foi preparado um pool para cada grupo (Pre e Pos) e corridos em triplicata. As proteinas foram separadas por 2D SDS-PAGE em uma fita de 18cm, pI 3-10, em gel de gradiente 10-17.5%. Os geis foram corados, digitalizados e comparados atraves do ImageMaster 2D platinum 6.0. Os spots de interesse (estatisticamente diferentes entre os grupos) foram identificados atraves da comparacao de pI e massa molecular no banco de dados ExPASy e as proteinas foram identificadas atraves de Maldi-Quad-ToF MS/MS. Resultados: quanto a integridade do DNA, as amostras pos-varicocelectomia apresentaram maior porcentagem de celulas grau I (p=0,011), e menor porcentagem de celulas grau II (p=0,0002), grau III (p=0,023) e grau IV (p=0,001). Quanto a atividade mitocondrial, as amostras pos-varicocelectomia apresentaram menor porcentagem de celulas classe III (p=0,013). Nao houve diferenca nas classes I, II e IV. Com relacao ao nivel de peroxidacao lipidica, nao foi encontrada nenhuma diferenca estatisticamente significante entre as amostras pre e pos-varicocelectomia. Por fim, em relacao ao perfil proteico, foram identificados 23 spots diferencialmente expressos entre as amostras pre e pos. As proteinas identificadas pertencem a resposta inflamatoria, ao processo de coagulacao, participantes no processo de fertilizacao, no processo de espermatogenese e componentes de HDL. Os resultados obtidos pela espectrometria de massas indicaram as proteinas fosfatase acida prostatica, antigeno prostatico especifico, calicreina-2 e proteina indutora de prolactina. Conclusoes: Neste estudo, a varicocelectomia promoveu melhora na funcao dos espermatozoides. Todavia, nenhuma diferenca entre os niveis seminais de MDA foi encontrada. Em relacao ao proteoma, a varicocelectomia promoveu alteracao no perfil proteico bidimensional em plasma seminal
  • Imagem de Miniatura
    Item
    Acesso aberto (Open Access)
    Análise morfofuncional de órgãos reprodutivos masculinos e investigação do comportamento sexual em modelo animal de mucopolissacaridose do Tipo I (MPS I)
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2018-03-29) Nascimento, Cinthia Castro do [UNIFESP]; D'Almeida, Vania [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/7220411418339421; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    A Mucopolissacaridose do Tipo I (MPS I) é uma doença de depósito lisossômico causada pela mutação do gene IDUA, codificador da enzima α-L-iduronidase. Trata-se de uma hidrolase lisossômica que degrada heparan e dermatan sulfatos, dois tipos de glicosaminoglicanos (GAGs). GAGs são moléculas estruturais e sinalizadoras, abundantes na matriz extracelular e importantes para a manutenção fisiológica de células e tecidos. Devido à deficiência enzimática, os GAGs são continuamente acumulados em inúmeros tipos celulares, o que caracteriza a doença como multissistêmica e progressiva. Com o aumento da expectativa de vida dos pacientes em decorrência das possibilidades terapêuticas, julgou-se relevante avaliar o efeito da doença sobre parâmetros reprodutivos masculinos e sobre o comportamento sexual do modelo animal de MPS I. Utilizamos camundongos machos C57BL, de 6 meses de idade, com genótipo normal (Idua+/+) e afetado (Idua-/-) para avaliar a morfologia de testículos, epidídimos, vesículas seminais e próstatas. O comportamento sexual foi observado aos 3 e 6 meses de idade. Alguns acasalamentos foram monitorados para que a ocorrência de prenhez fosse registrada. As quantificações hormonais e de GAGs também foram obtidas. Na análise morfológica, encontramos células intersticiais vacuolizadas em todos os órgãos avaliados referentes ao grupo Idua-/-. Danos epiteliais epididimários foram detectados, embora a morfologia e motilidade espermáticas estivessem mantidas. As vesículas seminais apresentaram menores pesos absolutos e relativos (p=0,013 e p=0,009; respectivamente) e sinais de atrofia, enquanto as próstatas foram bastante comprometidas, contendo alguns ácinos com sinais de necrose. Sob análise ultraestrutural, detectamos alterações nas células mioides, de Leydig e de Sertoli. As últimas com maior quantidade de vesículas contendo material em digestão semelhantes a autofagossomos (p=0,0005) e menor número de vesículas semelhantes a lisossomos (p=0,01). Porém, sob análise molecular, não comprovamos aumento de proteínas autofágicas oriundas do homogenato testicular. Quanto ao comportamento sexual, detectamos maiores latências de montas no grupo Idua-/- independentemente da idade (p=0,05) e também de intromissões no grupo Idua-/- de 3 meses (p=0,02), provavelmente devido à limitação motora comprovada pelo teste do campo aberto, que indicou menor atividade horizontal e vertical independentemente da idade dos animais Idua-/- (p=0,01 e p=0,04 respectivamente). As concentrações de hormônios foram similares entre os grupos e houve acúmulo de dermatan sulfato nos testículos (p<0,0001), epidídimos (p=0,007) e próstatas (p=0,0004). Concluímos que a deficiência da enzima IDUA afeta a morfologia de importantes órgãos reprodutivos, porém, os gametas são morfologicamente normais e móveis. Embora apresentem limitações motoras, machos Idua-/- são aptos à copula e muitos foram capazes de emprenhar fêmeas e gerar filhotes.
  • Nenhuma Miniatura disponível
    Item
    Somente Metadadados
    Análise proteômica de plasma seminal e lipidômica de plasma seminal e de espermatozóides e suas possíveis correlações com gestação em ciclos de injeção intracitoplasmática de espermatozóide
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2011) Barbosa, Thiesa Butterby Soler [UNIFESP]; Cedenho, Agnaldo Pereira [UNIFESP]
    Objetivos: Analisar o perfil proteico de plasma seminal e o perfil lipidico de plasma seminal e de espermatozoides de pacientes submetidos a fertilizacao in vitro, atraves de injecao intracitoplasmatica de espermatozoides (ICSI), que atingiram ou nao a gestacao. Metodo: Foi realizado um estudo transversal caso-controle incluindo amostras seminais de casais em ciclos de reproducao assistida, cuja estimulacao ovariana tenha utilizado analogo antagonista de GnRH como metodo de supressao pituitaria; FSH recombinante e/ou altamente purificado como fonte de gonadotrofina e hCG para pico de LH, quando o foliculo maior tivesse atingido 17mm de diametro. Foram excluidas amostras seminais de casais cuja parceira apresentasse idade superior a 37 anos, indicios de endometriose, falencia ovariana prematura, SOP (Sindrome dos Ovarios Policisticos), cancer ou amenorreia prolongada. Tambem foram incluidas apenas amostras de pacientes cujas parceiras tivessem recebido no minimo um embriao com qualidade boa no terceiro dia apos a ICSI. As amostras seminais foram obtidas e analisadas de acordo com os criterios estabelecidos pela Organizacao Mundial da Saúde (1999) e a morfologia segundo o criterio estrito de Kruger (1986). O perfil proteico de plasma seminal foi avaliado atraves da tecnica de nanoUPLC tandem nanoESI-MSE. O perfil lipidico de plasma seminal e de espermatozoides foi avaliado atraves de MALDI-TOF. Resultados: Foram avaliados 75 casais e aplicando-se os criterios de exclusao, 26 amostras foram incluidas no presente experimento. Nao houve diferenca significativa em relacao a idade, tempo de abstinencia ejaculatoria e analise seminal pre e pos processamento entre os grupos. Um total de 94 proteinas foram identificadas e quantificadas atraves da tecnica de MSE, sendo 28 comuns aos dois grupos. Foram identificadas 54 proteinas diferencialmente expressas, das quais 35 hiperexpressas no grupo β-hCG negativo e 19 no grupo β-hCG positivo. Foram identificadas 9 proteinas exclusivas no grupo β-hCG negativo e 3 no grupo β-hCG positivo. Na analise de lipideos de plasma seminal, foram observados 974 ions comuns aos grupos β-hCG negativo e β-hCG positivo. Destes, 89 apresentaram diferenca estatistica entre os grupos, estando 69 hiperrepresentados no grupo β-hCG negativo e 20 hiperrepresentados no grupo β-hCG positivo. Apenas um ion (m/z 857,9621) exclusivo ao grupo β-hCG negativo foi observado. Em espermatozoides foram observados 951 ions comuns aos grupos β-hCG negativo e β-hCG positivo. Destes, apenas 7 apresentavam diferenca significativa entre os grupos, estando 6 hiperrepresentados no grupo β-hCG negativo e um hiperrepresentado no grupo β-hCG positivo, nao sendo nenhum identificado com erro de massa menor do que 50 ppm. Alem disso, foi observado um ion exclusivamente representado no grupo β-hCG negativo, com m/z 845,582, identificado como um fosfolipideo (fosfatidilcolina). Conclusoes: o perfil de proteinas de plasma seminal de amostras de ciclos que atingiram a gestacao difere do perfil de proteinas de plasma seminal de amostras de ciclos que nao atingiram a gestacao; o perfil lipidico de plasma seminal demonstrou diversos lipideos diferencialmente representados entre as amostras de ciclos que atingiram ou nao a gestacao; a diferenca do perfil lipidico de espermatozoides foi menos evidente entre os grupos
  • Imagem de Miniatura
    Item
    Acesso aberto (Open Access)
    Análise proteômica quantitativa de plasma seminal e sua associação com aspectos funcionais dos espermatozoides e com o nível de peroxidação lipídica no plasma seminal
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2014) Intasqui Lopes, Paula [UNIFESP]; Bertolla, Ricardo Pimenta [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/8479803539567479; http://lattes.cnpq.br/5188240479960852; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    funcionais nos espermatozoides e o nivel seminal de peroxidacao lipidica. Metodo: Um estudo transversal foi realizado incluindo 156 pacientes normozoospermicos. Apos a coleta do semen por masturbacao, uma aliquota foi utilizada para a analise seminal e outra para a avaliacao da atividade mitocondrial, da integridade do acrossoma e da integridade do DNA dos espermatozoides. O volume remanescente de semen foi centrifugado e o plasma seminal sobrenadante foi utilizado para a avaliacao do nivel seminal de peroxidacao lipidica e para a analise proteomica. Posteriormente, os pacientes foram divididos em percentis (15%) para formacao dos grupos experimentais de cada estudo: Estudo 1 - alta (grupo controle) e baixa (grupo alterado) atividade mitocondrial dos espermatozoides, Estudo 2 - alta (grupo controle) e baixa (grupo alterado) integridade do acrossoma dos espermatozoides, Estudo 3 - baixa (grupo controle) e alta (grupo alterado) fragmentacao do DNA dos espermatozoides e Estudo 4 - baixo (grupo controle) e alto (grupo alterado) niveis seminais de peroxidacao lipidica. A analise proteomica foi realizada utilizando LCMS/MS. Os grupos foram comparados por meio de analise univariada (teste t de Student) e analise multivariada (PLS-DA e analise discriminante). As proteinas significantes foram posteriormente submetidas a analise de enriquecimento funcional. Resultados: Nos estudos 1, 2, 3 e 4 foram observadas 506, 493, 474 e 629 proteinas, respectivamente. As funcoes enriquecidas no estudo 1 foram detoxificacao de EROs e ligacao a NADP (controle) e atividade de oxidoredutase intramolecular, catabolismo de aminoglicanos, inibicao de endopeptidases, lisossomos e resposta imune de fase aguda (alterado). As principais funcoes enriquecidas no estudo 2 foram resposta imune (controle) e inibicao de fosfolipase, metabolismo do acido araquidonico, exocitose, resposta inflamatoria aguda, resposta ao peroxido de hidrogenio e transporte lisossomal (alterado). As principais funcoes enriquecidas no estudo 3 foram metabolismo de carboidratos, regulacao de lipoproteinas, regulacao negativa da apoptose, metabolismo de hormonios, atividade de metalopeptidases, ligacao ao NAD e lisossomos (controle) e biossintese de prostaglandinas e ligacao a acidos graxos (alterado). As principais funcoes enriquecidas no estudo 4 foram biossintese de acidos graxos insaturados, atividade de oxidantes e antioxidantes e resposta celular ao estresse termico (alterados). Nos estudos 1, 2, 3 e 4 foram sugeridos 8, 6, 8 e 7 biomarcadores seminais de atividade mitocondrial, integridade acrossoma, fragmentacao de DNA e peroxidacao lipidica, respectivamente. Conclusoes: O perfil proteomico do plasma seminal reflete alteracoes funcionais dos espermatozoides e o nivelseminal de peroxidacao lipidica e diversas funcoes pos-genomicas estao relacionadas as alteracoes estudadas. Proteinas relacionadas as alteracoes funcionais dos espermatozoides e ao nivel seminal de peroxidacao lipidica constituem potenciais biomarcadores seminais para cada alteracao
  • Imagem de Miniatura
    Item
    Acesso aberto (Open Access)
    Análise retrospectiva da qualidade seminal de pacientes que procuraram tratamento para infertilidade
    (Universidade Federal de São Paulo, 2024-03-19) Vieira, Henrique Cunha [UNIFESP]; Fraietta, Renato [UNIFESP]; Carvalho, Renata Cristina de [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/2678949812673271; http://lattes.cnpq.br/1545035937368744; http://lattes.cnpq.br/3093892639933283
    Objetivo: Avaliar a qualidade seminal de pacientes que procuraram Setor Integrado de Reprodução Humana e os fatores de agravo ao seu potencial fértil. Métodos: Estudo retrospectivo dos homens que passaram no Ambulatório da Unifesp e Hospital São Paulo, entre os anos de 2006 e 2020. Coleta de dados anonimizados de prontuários médicos, como informações gerais (idade, altura e peso); dados clínicos (comorbidades, cirurgias prévias, fatores ocupacionais, presença e grau de varicocele, uso de medicamentos, volume testicular e hábitos de vida); e avaliação dos dados provenientes da análise de uma ou duas amostras seminais que foram avaliadas de acordo com os padrões do manual da Organização Mundial de Saúde (WHO). Foram realizados o teste de Kolmogorov-Smirnov, a análise descritiva, modelos lineares generalizados (GLM) e teste de correlação. Os resultados foram considerados estatisticamente significantes quando p<0,05 e intervalo de confiança de 95%. Resultados: Foram avaliados 1853 homens membros de um casal com infertilidade primária. A frequência de normozoospermia foi de 42,57%, azoospermia de 8,85% e oligozoospermia de 28,55%. Analisando-se os fatores de agravo, a presença de ao menos um fator na avaliação inicial ocorreu em cerca de 77,66%. Os fatores mais prevalentes foram varicocele grau 2 e 3 (48,84%), etilismo (36,1%) e obesidade (23,85%). Entre os parâmetros seminais, destaca-se a morfologia que quando na presença de um fator de agravo, teve seu valor mais próximo ao percentil 5% dos homens férteis, valor este determinado pelo manual da WHO, além de ter uma correlação com todos os outros parâmetros: concentração de espermatozoides (R = 0,480 p < 0,0001), contagem (R = 0,495 p < 0,0001), motilidade progressiva (R = 0,467 p < 0,0001), motilidade total (R = 0,460 p < 0,0001), imóveis (R = -0,461 p < 0,0001) e vitalidade (R = 0,323 p < 0,0001). A concentração de espermatozoides foi inferior para orquite (p = 0,012), caxumba sem orquite (p = 0,037), terapias gonadotóxicas (radioterapia e quimioterapia), varicocele grau 2 e 3 (p <0,0001) e obesidade (p = 0,003). Conclusões: Homens componentes de casais que procuraram tratamento para infertilidade têm uma predominância de alterações nos parâmetros seminais. Os fatores de agravo à fertilidade influenciam em diferentes graus os parâmetros seminais e com diversos mecanismos.
  • Imagem de Miniatura
    Item
    Acesso aberto (Open Access)
    Avaliação da integridade funcional de espermatozoides recuperados após processamento seminal por microfluídica
    (Universidade Federal de São Paulo, 2024-07-03) Ribeiro, Amanda das Neves [UNIFESP]; Lopes, Paula Intasqui [UNIFESP]; Bertolla, Ricardo Pimenta [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/8479803539567479; http://lattes.cnpq.br/5188240479960852; http://lattes.cnpq.br/6423541480542066
    Objetivo: O fator masculino de infertilidade pode ser uma das razões para que não haja gravidez de forma natural. Quando há necessidade de realização de técnicas de reprodução assistida, a amostra deve ser previamente processada, para remoção do plasma seminal e para seleção de espermatozoides móveis e viáveis. Diferentes técnicas podem ser utilizadas, mas pouco se sabe sobre a qualidade funcional dos espermatozoides recuperados. Por isso, o objetivo deste estudo é analisar e comparar a integridade funcional dos espermatozoides processados por gradiente de densidade descontínuo e por microfluídica. Métodos: Foi realizado um estudo prospectivo que incluiu trinta homens voluntários (n=30), com uma idade média de 29,8 anos, que coletaram sêmen por masturbação. Após a liquefação do sêmen, uma porção do sêmen a fresco foi utilizada para avaliar a integridade funcional dos espermatozoides (integridade acrossômica, usando coloração PNA, atividade mitocondrial, usando ensaio DAB e fragmentação de DNA pelo ensaio cometa alcalino). O volume restante foi, então, dividido igualmente em duas porções, uma utilizada para o gradiente de densidade descontínuo e a outra para o processamento por microfluídica, utilizando o dispositivo Zymot. Após o processamento, os espermatozoides selecionados foram também avaliados quanto à integridade funcional. Os dados foram comparados entre o controle (amostra a fresco), gradiente de densidade descontínuo e Zymot utilizando teste de Friedman para amostras pareadas com post hoc de Conover ou ANOVA de medidas repetidas com post hoc de Bonferroni (p<0,05). Resultados: O processamento por Zymot não levou a nenhuma alteração em relação à integridade do acrossoma dos espermatozoides quando comparado à amostra a fresco, enquanto o gradiente de densidade descontínuo levou à piora dessa variável. Por outro lado, o Zymot melhorou significativamente a atividade mitocondrial dos espermatozoides, quando comparado à amostra a fresco e aos espermatozoides recuperados por gradiente de densidade descontínuo. A fragmentação de DNA espermático não apresentou diferença significativa entre os três tratamentos. Conclusão: O uso do dispositivo de seleção de espermatozoides via microfluídica (Zymot) permite a seleção de espermatozoides com alta atividade mitocondrial, evitando a reação/dano do acrossoma que ocorre durante a centrifugação em gradiente de densidade, porém não demonstra seleção de espermatozoides com menor taxa de fragmentação de DNA.
  • Nenhuma Miniatura disponível
    Item
    Somente Metadadados
    Avaliacao da taxa de fragmentacao apoptotica de DNA de espermatozoides de pacientes com tumor de testiculo
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2006) Ribeiro, Taisa Michelucci [UNIFESP]
  • Imagem de Miniatura
    Item
    Acesso aberto (Open Access)
    Avaliação do efeito precoce da orquiectomia radical unilateral no perfil de proteínas do plasma seminal de homens portadores de tumor de células germinativas de testículo
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2019-11-06) Andrade, Maria Beatriz Ribeiro De [UNIFESP]; Spaine, Deborah Montagnini [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Objective: To evaluate the effect of orchiectomy on the seminal plasma proteomic profile of men with testicular germ cell tumors. Methods: Seventeen men with Testicular Germ Cell Tumors provided one semen sample before (Pre-orchiectomy) and another 30 days after orchiectomy (Post-orchiectomy). Following liquefaction, an aliquot was used for semen analysis and other one was centrifuged for collection of seminal plasma. The remaining volume was criopreservated. The seminal plasma was used to proteomic analysis .For semen analysis a Student’s t-test for paired samples was used and to proteomic analysis a one sample Student’s t-test was performed. For both analysis was adopted p˂0,05. Effect size was assessed using Cohen’s d coefficient. Results: No significant difference was observed in semen analysis. Two hundred and seven proteins were identified and quantified with high fidelity, of which five were increase in the pre-orchiectomy period and eight proteins were increase in post-orchiectomy period. Conclusion: Removal of the affect testis alters the seminal plasma molecular environment.
  • Imagem de Miniatura
    Item
    Acesso aberto (Open Access)
    Avaliação seminal de ciclistas de baixo e alto rendimento
    (Universidade Federal de São Paulo, 2022-05-20) Adami, Luana Nayara Gallego [UNIFESP]; Bertolla, Ricardo Pimenta [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/8479803539567479; http://lattes.cnpq.br/8127972790085890
    Objetivo: Estudar o efeito da prática intensa do ciclismo no potencial fértil masculino. Método: O estudo transversal incluiu 72 amostras seminais provenientes do grupo Alto Rendimento (AR=32), do grupo Baixo Rendimento (BR=28) e do grupo Controle (C=12). Inicialmente os voluntários foram avaliados por um urologista e encaminhados para a coleta seminal. Uma alíquota do sêmen foi utilizada para avaliação do espermograma, outra foi centrifugada a 600xG por 30 minutos quando o plasma seminal foi separado e utilizado na análise proteômica por meio de quantificação e digestão proteica, análise por espectrometria de massas e busca das proteínas correspondentes aos espectros encontrados. Quanto ao pellet restante, foi ressuspendido e analisado de acordo com a função dos espermatozoides, como análise cinética por meio da motilidade espermática, integridade acrossômica, atividade mitocondrial, aferição do potencial de membrana mitocondrial, fragmentação de DNA e quantificação de ânions superóxidos nos espermatozoides. A análise estatística foi realizada no programa SPSS, iniciando com análise descritiva dos dados e aplicando um teste por Modelos Lineares Generalizados, adotando um α de 5%. Para análise proteômica foi realizado o teste Kruskal-Wallis com post hoc de Games Howell e a Análise Discriminante. Resultados: O grupo BR apresentou maiores valores de neutrófilos, cinética espermática (velocidade média de percurso e velocidade retilínea) e integridade de DNA espermático, quando comparado ao grupo AR. Por outro lado, o grupo AR apresentou maiores taxas de presença do ânion superóxido e fragmentação do DNA classe III, quando comparado ao grupo BR, assim como alta taxa de fragmentação classe IV quando comparado ao grupo C. Foram encontradas 14 proteínas diferencialmente expressas do total de 281 quantificadas, sendo 2 hiperexpressas no grupo AR e 4 no grupo BR. As demais proteínas estiveram hipoexpressas em relação ao grupo C. Conclusões: O ciclismo de Alto Rendimento está associado a um aumento dos níveis de fragmentação do DNA espermático e elevação da atividade oxidativa intracelular, enquanto o de Baixo Rendimento à alta expressão proteica de resposta ao processo imune e inflamatório, à via alterativa de energia e à proliferação celular.
  • Nenhuma Miniatura disponível
    Item
    Somente Metadadados
    Avaliacao seminal de pacientes submetidos a orquiectomia por cancer de testiculo antes e apos o tratamento com quimioterapia ou radioterapia
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2007) Spaine, Deborah Montagnini [UNIFESP]
  • Nenhuma Miniatura disponível
    Item
    Somente Metadadados
    Capacidade de aderência de espermatozóides de adolescentes com e sem varicocele, à zona pelúcida de oócitos humanos
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2001) Cedenho, Agnaldo Pereira [UNIFESP]
    Objetivo: Investigar a capacidade de aderencia de espermatozoides d adolescentes com e sem varicocele. a zona pelucida de oocitos humanos. Tipo de estudo: Prospectivo, controlado, cego. Local: Setor de Reproducao Humana, Disciplina de Urologia, Departamentos de Cirurgia e Ginecologia, Universidade Federal de Sa Paulo. Metodo: 15 adolescentes com varicocele graus II ou III, unilateral ou bilatera1, 15 adolescentes sem varicocele e,um doador de semen tomaram parte neste estudo. O teste de aderencia de espermatozoides a hemizona pelucida foi realizado com os oocitos excedentes do programa de fertilizacao in vitro, preservados em solucao salina estoque. No dia do teste, dois oocitos foram retirados da solucao salina e lavados varias vezes em meio de cultura. Cada oocito foi cortado ao meio, manualmente sob o estereomicroscopico e as hemizonas transferidas para gotas separadas de meio de cultura, sob oleo mineral, numa placa de Petri. Em cada experimento, as hemizonas resultantes foram co-incubadas(5 por cento de CO2 a 37ºC por 4 horas) com semen do adolescente em estudo(0,5x106 espermatozoides moveis/mL) e com semen de doador(0,5x106 espermatozoides moveis/mL), respectivamente. Apos esse periodo, as hemizonas foram lavadas novamente em meio de cultura e os espermatozoides aderidos firmemente a zona pelucida foram contados em microscopio invertido(x400). O indice de aderencia dos espermatozoides a hemizona(IAEH),para cada oocito, foi calculado dividindo-se o numero de espermatozoides aderidos do adolescente em estudo pelo numero de espermatozoides aderidos do doador(controle), multiplicado por 100. OIAEH para cada adolescente foi o resultado da media aritmetica dos indices obtidos com os dois oocitos seccionados. Analise estatistica: Foram utilizados os teses t e de Fisher, admitindo-se a propabilidade de erro tipo I£5(por cento). Resultados: A idade media dos adolescentes com varicocele foi de 16,4 anos e a do grupo controle 16,0 anos. No grupo com varicocele, 40 por cento(6/15) apresentaram o indice de aderencia dos espermatozoides a hemizona alterado; apenas 6,7 por cento (1/15) dos adolescentes do grupo de controle tiveram o teste alterado e, esta diferenca foi considerada estatisticamente significativa. Conclusao: Os espermatozoides de adolescentes portadores de varicocele graus II ou III, unilateral ou bilateral, apresentaram capacidade de aderencia a hemizona pelucida de oocito humanos diminuida quando comparados ...(au)
  • Nenhuma Miniatura disponível
    Item
    Somente Metadadados
    Caracteristicas individuais e seminais de pacientes portadores de tumores germinativos do testiculo
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2005) Fraietta, Renato [UNIFESP]
    Objetivos: Verificar caracteristicas individuais e seminais de pacientes portadores de tumor de testiculo e comparar os parametros seminais desses pacientes de acordo com o tipo histologico (seminomatoso ou nao¬seminomatoso ). Metodo: Neste estudo prospectivo, foram entrevistados 100 pacientes com tumor de testiculo que foram encaminhados para criopreservacao de amostras seminais no banco de semen de nossa instituicao entre 2002 e 2004. Foram avaliadas as caracteristicas dos pacientes como idade, tempo entre o diagnostico e a orquiectomia, antecedente de criptorquidia, tipo histologico do tumor alem das analises seminais de ambos os grupos histologicos. Resultados: A media da idade dos pacientes por ocasiao do diagnostico foi de 26,9 anos, variando de 15 a 45 anos. O tempo medio entre a suspeita de cancer e o diagnostico da neoplasia foi de 58,9 dias, sendo necessarios mais 19,4 dias, em media, ate que a orquiectomia fosse realizada. Onze pacientes tinham antecedente de criptorquidia sendo dez, unilateral e um, bilateral. Somente 16 dos 100 pacientes ja tinham filhos antes da deteccao do tumor. Trinta e sete pacientes tinham tumor seminomatoso. A classe medica representa o grande veiculo de informacao e encaminhamento ao banco de semen, visto que 96 por cento dos pacientes chegaram ao nosso centro gracas a estes profissionais, 74 por cento deles apos a orquiectomia num intervalo medio de 72,5 dias. Na ocasiao do diagnostico, 55 por cento dos individuos eram completamente desconhecedores das consequencias da doenca com relacao a fertilidade, seja pelo proprio tumor ou pelos tratamentos subsequentes. Nao ha diferenca estatisticamente significante na analise seminal quando comparados pacientes portadores de tumor seminomatoso com nao-seminomatoso, considerando¬se volume, concentracao, motilidade, morfologia, numero de celulas redondas e leucocitos. 55 por cento dos pacientes eram oligozoospermicos, 29 por cento, astenozoospermicos e 6 por cento, azoospermicos. Conclusoes: A maioria dos pacientes portadores de tumor de testiculo sao jovens, solteiros, sem paternidade previa e desconhecedores das consequencias sobre a fertilidade futura apos o tratamento da doenca de base por ocasiao do diagnostico. Nao ha diferenca entre os parametros seminais de pacientes portadores de tumor testicular seminomatoso e nao-seminomatoso, sendo igualmente importantes as alteracoes apresentadas por ambos os grupos
  • Nenhuma Miniatura disponível
    Item
    Somente Metadadados
    Caracterização dos parâmetros reprodutivos de ratos diabéticos tratados com castanha do Brasil e selenito de sódio
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2013-01-30) Nascimento, Leonardo Parreira Silva [UNIFESP]; Aguiar, Odair [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    A hiperglicemia diabética é conhecida por causar um desequilíbrio entre a defesa antioxidante endógena e a produção de espécies reativas de oxigênio. Estresse oxidativo desencadeia diversos danos ao sistema reprodutor masculino. A suplementação com nutrientes que possuem função antioxidante tem se mostrado protetora contra esses danos. A castanha do Brasil é um alimento com alto poder antioxidante, devido a sua grande quantidade de selênio. Os objetivos do presente estudo foram caracterizar os parâmetros reprodutivos dos ratos Wistar diabéticos e avaliar os efeitos protetores ou atenuantes do extrato de castanha do Brasil e do selenito de sódio, sobre as possíveis alterações induzidas pela doença. Seis grupos (n=8/grupo) foram utilizados: 3 grupos com diabetes induzido (controle, tratado com extrato de castanha do Brasil e tratado com selenito de sódio) e 3 não diabéticos (controle, tratado com extrato de castanha do Brasil e tratado com selenito de sódio). Para induzir o diabetes, 65 mg/kg de estreptozotocina diluída em tampão citrato foi injetada intravenosamente, enquanto os animais controles receberam injeção com tampão citrato. Os grupos que receberam extrato de castanha do Brasil e solução aquosa de selenito de sódio (ambas com concentração de selênio de 0,112 ng/g) foram tratados diariamente por 56 dias. O grupo controle recebeu doses diárias de água. Foram analisadas massa corporal e peso de órgãos e glândulas acessórias, além da produção espermática diária, morfologia espermática, histopatologia testicular, níveis de testosterona e marcadores antioxidantes. Houve diferença significativa entre o grupo diabetes e o grupo controle não diabético no ganho de massa corporal, peso dos órgãos reprodutivos (testículo, epidídimo, próstata ventral e vesícula seminal), morfologia espermática, produção espermática diária, contagem espermática no epidídimo, níveis de testosterona e glutationa peroxidase. Os tratamentos com extrato de castanha do Brasil e selenito de sódio foram capazes de melhorar significativamente a produção espermática diária, porcentagem de área tubular e a atividade da glutationa peroxidase, além de diminuir os níveis glicêmicos dos animais diabéticos e nos animais controle. Além disso, os danos causados ao epitélio seminífero, encontrados em animais com diabetes, não foram observados nos grupos diabéticos tratados com extrato de castanha ou selenito de sódio. O estresse oxidativo originado da hiperglicemia, aliado à alteração nos níveis de testosterona, podem ter sido os causadores dos danos observados. Selênio, em ambas as formas, pode ter atenuado tais danos, possivelmente devido a suas propriedades antioxidantes e hipoglicemiantes.
  • Nenhuma Miniatura disponível
    Item
    Somente Metadadados
    Correlacao entre a forma do espermatozoide e o teste da hemizona pelucia do oocito humano
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 1999) Rafaelli, Reinaldo Jose [UNIFESP]
  • Nenhuma Miniatura disponível
    Item
    Somente Metadadados
    Efeito da amifostina(WR-2721)sobre a fertilidade de ratos pré-puberes tratados com doxorrubicina, com ênfase na integridade do DNA dos espermatozoides e na qualidade dos embriões concebidos
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2009) Vilela, Vanessa Vendramini [UNIFESP]; Miraglia, Sandra Maria [UNIFESP]
  • Imagem de Miniatura
    Item
    Acesso aberto (Open Access)
    Efeito da melatonina sobre o perfil de miRNA de espermatozoides, regiões do cérebro e cerebelo de ratos Wistar
    (Universidade Federal de São Paulo, 2024-04-15) Nascimento, Mísia Helena da Silva Ferro [UNIFESP]; Teixeira, Taiza Stumpp [UNIFESP]; Amaral, Fernanda Gaspar [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/6398402888086154; http://lattes.cnpq.br/1024329256080770
    Introdução: A melatonina é sintetizada exclusivamente à noite, em diversos organismos. Nos mamíferos, a melatonina se origina nos pinealócitos presentes na glândula pineal. Dentre várias funções associadas a melatonina, a ação e influência do hormônio na espermatogênese é de particular interesse porque os gametas transferem não apenas informações genéticas, mas também epigenéticas para o embrião. Sabe-se que o espermatozoide é rico em miRNAs, que são transferidos para o embrião e podem configurar os mecanismos de herança epigenética paterna. Objetivo: investigar a influência da melatonina afeta a expressão de miRNA nos espermatozoides, regiões do cérebro e cerebelo de ratos. Metodologia: Esse estudo compreendeu três grupos experimentais: PINX, PINX MEL e controle. O primeiro consiste em animais que sofreram remoção da glândula pineal. O grupo PINX MEL foi composto por animais pinealectomizados que tiveram suplementação de melatonina. O grupo controle não sofreu manipulação. Os miRNAs foram extraídos dos espermatozoides, hipotálamo, córtex pré-frontal e cerebelo para análise de sua expressão por RT-qPCR. Foram analisados 8 miRNAs-alvos: miR-18a-5p, miR-34a-5p, miR-106b-5p, miR-132-5p, miR-195-5p, miR-219a-5p, miR-182-5p e Let-7g-5p. Foi realizada também análise de bioinformática buscando compreender as possíveis implicações biológicas das alterações da expressão dos miRNAs analisados. Resultados: Os animais pinealectomizados apresentaram redução da expressão de todos os miRNAs avaliados nos espermatozoides e de alguns desses miRNAs no cérebro e cerebelo. A administração da melatonina exógena levou à restauração da expressão desses miRNAs nos espermatozoides e também em algumas regiões do cérebro. A análise bioinformática indicou que todos os miRNAs analisados estão envolvidos em processos biológicos relacionados a neurogênese, sinapses e ao comportamento. Conclusão: O presente estudo sugere que a deficiência de melatonina afeta de forma significativa a expressão de miRNAs relacionados ao neurodesenvolvimento e à neurofisiologia em espermatozoides de ratos pinealectomizados. Estudos futuros são de grande valia a fim de esclarecer quais os significados biológicos dessas alterações para os animais pinealectomizados e se elas podem ter impacto para sua prole.
  • Nenhuma Miniatura disponível
    Item
    Somente Metadadados
    Efeito da varicocelectomia microcirurgica na qualidade seminal e
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2009) Lacerda, Jose Iran de Medeiros [UNIFESP]
    Objetivos: Verificar o impacto da varicocelectomia na qualidade seminal e na taxa de fragmentacao de DNA nuclear de espermatozoides em adolescentes com varicocele. Metodos: foram incluidos 27 individuos do sexo masculino na adolescencia em fase pos-puberal (de 14 a 19 anos de idade) em estadio de desenvolvimento sexual Tanner IV ou V. Pacientes diagnosticados com varicocele de grande volume (grau II e III) acompanhada de hipotrofia testicular do mesmo lado afetado e/ou alteracao de pelo menos um parametro seminal (concentracao, motilidade e morfologia) foram submetidos a varicocelectomia microcirurgica. As amostras seminais foram obtidas e analisadas de acordo com os parametros da OMS e morfologia segundo criterio estrito de Kruger, e colhidas antes da cirurgia e 3 meses apos a mesma. A integridade do DNA nuclear dos espermatozoides foi avaliada pelo ensaio em Cometa alcalino, e as celulas foram classificadas de acordo com a intensidade de dano no DNA: grau I (alta integridade do DNA), grau II (DNA ainda integro ou em inicio de fragmentacao), grau III (DNA moderadamente fragmentado) e grau IV (DNA altamente fragmentado). Resultados: Foi verificada melhora da morfologia espermatica de 6.6% (+/- 3.2) [IC 95% 5.3; 7.9] no pre-operatorio, para 8.1% (+/- 3.2) [IC 95% 6.8; 9.3] no pos-operatorio. Os outros indices (concentracao e motilidade) nao apresentaram diferenca estatisticamente significante. Quando os niveis de integridade do DNA espermatico foram avaliados pelo ensaio Cometa, foi evidenciado que a classe I de Cometa (DNA com alta integridade) aumentou apos a varicocelectomia (45.4%; 16.9 a 67.4%; 13.7, p=0.00001), o que levou a uma reducao em todas as outras classes de Cometa. Conclusoes: O presente estudo conclui que a varicocelectomia em adolescentes proporcionou uma reducao da taxa de fragmentacao de DNA, alem de melhorar a morfologia espermatica tres meses apos o ato cirurgico
  • Nenhuma Miniatura disponível
    Item
    Somente Metadadados
    O efeito do processamento seminal e a integridade do DNA nuclear do espermatozoide humano
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2006) Stevanato, Juliana [UNIFESP]; Cedenho, Agnaldo Pereira [UNIFESP]
    Objetivo: Avaliar o efeito da centrifugacao em gradiente de densidade descontinuo na taxa de fragmentacao em fita dupla do DNA dos espermatozoides. Metodos: Foi realizado um estudo prospectivo e pareado, constituido de 35 amostras seminais antes e depois do processamento seminal em gradiente de densidade descontinuo, provindas de pacientes encaminhados ao Ambulatorio de Reproducao Humana para tratamento de infertilidade conjugal atraves das tecnicas de Reproducao Assistida. As amostras foram colhidas por masturbacao apos um periodo de 2 a 7 dias de abstinencia ejaculatoria e em seguida analisadas de acordo com os criterios da Organizacao Mundial da Saúde (OMS). As amostras foram divididas em duas aliquotas (antes do processamento seminal e depois do processamento seminal) para subsequente avaliacao da motilidade e integridade do DNA espermatico atraves da tecnica do TUNEL, que avalia fragmentacao apoptotica do DNA dos espermatozoides. A integridade do DNA foi avaliada por microscopia optica e expressa em porcentagem de espermatozoides com fragmentacao apoptotica no DNA por amostra. Resultados: A motilidade pos-processamento seminal foi maior do que a motilidade pre¬-processamento (86,6; 17,7 por cento e 60; 14,4 por cento, respectivamente, p <0,0001), no entanto nao foi observada diferenca na fragmentacao apoptotica do DNA dos espermatozoides apos o processamento seminal nas amostras analisadas (antes do processamento seminal: 5; 4,3 por cento e apos 5; 4,5 por cento, p=0,958). Ja as amostras seminais com alteracoes nas variaveis seminais apresentaram maiores porcentagens de celulas com fragmentacao apoptotica do DNA, em relacao as amostras que nao apresentaram alteracoes seminais (Pre-processamento - 8; 4 por cento e 4,5; 3,3 por cento respectivamente, p= 0,011 e pos-processamento - 7,7; 5,1 por cento e 4,4; 3,1 por cento respectivamente, p= 0,027). Mas nao houve melhora na porcentagem de fragmentacao apoptotica do DNA das amostras com e sem variacao seminal apos o processamento (p= 0,929). Conclusao: Nas condicoes deste estudo, o processamento seminal pela centrifugacao em gradiente de densidade descontinuo de duas camadas nao produz efeito na fragmentacao apoptotica do DNA dos espermatozoides, e apesar de pacientes com alteracao seminal apresentarem maior taxa de fragmentacao apoptotica no DNA dos espermatozoides, o processamento seminal nao melhorou os resultados em nenhum dos dois grupos. Portanto atencao especial deve ser dada aos pacientes que apresentam altas taxas de...(au)
  • Nenhuma Miniatura disponível
    Item
    Somente Metadadados
    Efeito do tabagismo nos aspectos funcionais dos espermatozoides e no perfil proteico de plasma seminal de pacientes com varicocele
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2011) Fariello, Roberta Maria [UNIFESP]