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    Análise bioinformática de miRNAs envolvidos no autismo, suas vias biológicas e seu possível papel na herança epigenética desse transtorno
    (Universidade Federal de São Paulo, 2024-09-25) Silva, Larissa Naisa Acerbi da [UNIFESP]; Teixeira, Taiza Stumpp [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/1024329256080770; http://lattes.cnpq.br/6007223619782234
    Objetivo: analisar as informações disponíveis na literatura e nos bancos de dados genéticos sobre os miRNAs sugeridos como alterados no autismo e investigar sua expressão em espermatozoides, neurônios e PBMC e possíveis vias biológicas reguladas por eles. Métodos: Para encontrar miRNAs potencialmente relacionados ao autismo, duas estratégias foram adotadas: uma busca direta por miRNAs relacionados ao autismo e uma busca indireta. Primeiramente, buscas bibliográficas foram realizadas. Os miRNAs relacionados ao autismo expressos em comum em neurônios, espermatozoides e PBMC foram identificados e seus genes alvos foram obtidos. Ao realizar a análise de enriquecimento de vias, processos biológicos potencialmente regulados pelos miRNAs candidatos foram investigados. Finalmente, uma análise inversa, partindo de genes relacionados ao autismo, foi realizada. Genes relacionados ao autismo e genes de vias biológicas implicadas no neurodesenvolvimento foram obtidos do Reactome, Gene Ontology e WikiPathways e miRNAs que regulam sua expressão foram identificados. Resultados: Usando a estratégia direta, 416 miRNAs potencialmente envolvidos no autismo foram encontrados, dos quais 77 são expressos em espermatozoides, PBMC e neurônios. Destes, 18 são diferencialmente expressos no cérebro e em pelo menos uma amostra periférica, sugerindo que eles podem ser adequados para serem usados na investigação de biomarcadores e herança do autismo. A análise de enriquecimento mostrou que esses miRNAs têm como alvos genes envolvidos com processos do neurodesenvolvimento, embora processos biológicos gerais também tenham sido indicados. Usando a estratégia indireta, 36 miRNAs foram identificados, dos quais 9 coincidiram com os resultados da análise direta. Conclusão: Embora não haja consenso sobre miRNAs relacionados ao autismo, há miRNAs candidatos que mostram potencial claro para serem explorados como biomarcadores. A identificação de miRNAs com expressão diferencial coincidente em diferentes estudos mostra que a evidência para a relação entre expressão de miRNA e autismo é promissora. Além disso, a coincidência na expressão de miRNAs nesses diferentes tipos de células indica que eles são tipos de amostras biológicas viáveis para estudar o papel dos miRNAs na herança epigenética paterna do autismo.
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    Análise da expressão e do número de cópias de LINE-1 em PBMC de indivíduos dentro do transtorno do espectro autista e nos espermatozoides de seus pais
    (Universidade Federal de São Paulo, 2024-10-30) Sousa, Kathleen da Silva [UNIFESP]; Stumpp, Taiza [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/1024329256080770; http://lattes.cnpq.br/5128529345894889
    Objetivo: Estudos recentes demonstram que alterações epigenéticas em elementos transponíveis (TE) estão correlacionadas ao risco de autismo. Entre os TE, o retrotransposon LINE-1 tem demonstrado estar com a expressão, a metilação e o número de cópias alterados em diversos tecidos de coortes autistas. Assim, a presente pesquisa objetivou analisar a expressão e o número de cópias do LINE-1 no genoma de indivíduos dentro do autismo com grau I e II, como também no genoma dos seus respectivos pais. Métodos: Foram coletadas células mononucleares de sangue periférico (PBMC) dos participantes autistas, bem como de PBMC e espermatozoides de pais de participantes autistas. Participantes controles também tiveram as mesmas amostras coletadas. Após a extração de DNA e RNA e síntese de cDNA, as amostras foram submetidas à qPCR utilizando primers previamente desenhados para a análise do número de cópias e da expressão de LINE-1. Resultados: Nas PBMCS, a expressão de LINE-1 não apresentou diferenças significativas entre os grupos, apesar de um aumento significativo no número de cópias desse retrotransposon em indivíduos autistas. Aumento da expressão de LINE-1 foi observado nos espermatozoides dos pais de autistas, sugerindo uma possível alteração nos mecanismos de controle da expressão desse retrotransposon. Limitações metodológicas e tamanho amostral foram reconhecidos, indicando a necessidade de estudos futuros para confirmar e expandir esses achados. Conclusões: Esse estudo fornece indicações preliminares de que existe variação do número de cópias do LINE-1 em pessoas autistas e a alterações da expressão desse retrotransposon nos espermatozoides dos pais de indivíduos autistas. Os resultados obridos levantam questões importantes sobre o envolvimento da desregulação de LINE-1 nos autismos. Embora esse estudo tenha se concentrado na expressão e na variação do número de cópias do LINE-1, pesquisas futuras de nosso grupo estão se dedicando a investigar fatores adicionais, como a regulação epigenética do LINE-1.
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    Acesso aberto (Open Access)
    Análise dos aspectos funcionais dos espermatozoides e dos níveis de peroxidação lipídica no plasma seminal de pacientes portadores de tumor de células germinativas de testículo pré e pós-orquiectomia
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2016-03-29) Andrade, Maria Beatriz Ribeiro de [UNIFESP]; Spaine, Deborah Montagnini [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/1321284998759806; http://lattes.cnpq.br/5373251016652631; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Objective: To verify if quality of spermatozoa from men with testicular germ cell tumors is better before or after orchiectomy. Methods: This prospective study was carried out including 24 patients with testicular germ cell tumors. The patients provided one semen sample before they were submitted to unilateral orchiectomy, and one other semen sample 30 days after the surgery. After collection by masturbation and liquefaction, an aliquot of the semen sample was used for semen analysis and another was used to evaluate sperm mitochondrial activity, DNA fragmentation and acrosomal integrity. The remaining volume was centrifuged and the supernatant seminal plasma was used to evaluate lipid peroxidation levels. Mitochondrial activity was determined by a colorimetric stain (3,3? ? diaminobenzidine ? DAB) and classified as DAB I (all mitochondrial active), DAB II (more than 50% mitochondrial active), DAB III (less than 50% mitochondrial active) and DAB IV (all mitochondrial inactive). Sperm DNA fragmentation was assessed by an Alkaline Comet assay, in which sperm were classified as high DNA integrity (class I and II) to high DNA fragmentation (class III and IV). Acrossome integrity was determined by a fluorescent probe (PNA ? FITC) and assessed by fluorescent microscopy. Lipid peroxidation levels were quantified by measuring thiobarbituric acid reactive substances (TBARS) levels, and were described in TBARS nmol/mL. Pre and Post-orchiectomy sample were compared using a paired Student?s T test (normal distribution) or a paired Wilcoxon test, when appropriate (p?0.05). Results: No significant difference was observed in semen analysis. A significant decrease in DNA fragmentation (p=0.019) and lipid peroxidation (p=0.014), and an increase in mitochondrial activity (p=0.048) was observed after orchiectomy. Conclusions: Based on our findings, the semen quality from men with testicular germ cell tumors is better quality after orchiectomy.
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    Acesso aberto (Open Access)
    Caracterização da proteína parkina em espermatozoides murinos e sua influência no desenvolvimento embrionário
    (Universidade Federal de São Paulo, 2022-04-12) Melo, Karla Pacheco de [UNIFESP]; Camargo, Mariana; http://lattes.cnpq.br/0574614880460399; http://lattes.cnpq.br/7662001645578261
    Objetivo: Avaliar o papel da proteína Parkina na distribuição das mitocôndrias paternas após a fertilização in vitro. Métodos: Foram utilizados camundongos C57BL / 6 normais e nocaute para PARK2 para promover deleção da proteína Parkina. Dos machos foram coletados espermatozoides para a avaliação da função espermática (concentração, motilidade, fragmentação do DNA dos espermatozoides e atividade mitocondrial), e análise da ubiquitinação e presença de Parkina, além da coleta de espermatozoides para a fertilização in vitro. As fêmeas foram estimuladas com hormônios para a indução da ovulação e delas foram coletados os oócitos para a fertilização in vitro. Com a fertilização pretendeu-se avaliar a presença das mitocôndrias paternas nos embriões e se a ausência de Parkina gera déficit na degradação de mitocôndrias paternas pela via de degradação proposta. Resultados: Não foram observadas diferenças significativas quanto aos parâmetros seminais e funcionais dos espermatozoides em ambos os grupos (p>0,05). Identificamos a proteína Ubiquitina na peça intermediária e região acrossomal dos espermatozoides e a proteína Parkina em toda a extensão desta célula. Observou-se diminuição na intensidade de marcação das proteínas Ubiquitina e Parkina nos espermatozoides de machos nocaute (p<0,05). Quanto à segregação mitocondrial, observamos que ela é dependente do tempo após a fertilização e sofre efeito da mutação no gene da PARK2, onde a união dos gametas entre uma fêmea nocaute e um animal controle demonstrou maior déficit na degradação mitocondrial. Conclusões: A proteína Parkina está presente em todo o espermatozoide e a diminuição da sua expressão no oócito impacta negativamente a fertilização e a eliminação de mitocôndrias paternas no zigoto após a fertilização in vitro.
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    Cloridrato de metilfenidato e herança paterna: da genotoxicidade às células germinativas às implicações para o perfil epigenético de blastocistos
    (Universidade Federal de São Paulo, 2023-11-10) Gomes, Ana Clara da Costa Nunes [UNIFESP]; Vilela, Vanessa Vendramini [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/7430244790148504; http://lattes.cnpq.br/3419372674559999
    O Cloridrato de metilfenidato (MPH) é o fármaco de primeira linha no tratamento do Transtorno de Déficit de Atenção e Hiperatividade (TDAH), especialmente em crianças e adolescentes. Classificado como psicoestimulante, o MPH atua aumentando a biodisponibilidade de neurotransmissores, como dopamina e noradrenalina, e tem sido amplamente utilizado indevidamente como potencializador do desempenho cognitivo. O seu uso prolongado tem sido associado a alterações no neurodesenvolvimento, além de sugerir efeitos colaterais na fertilidade masculina em estudos com animais experimentais. No entanto, os mecanismos subjacentes a esses efeitos e suas implicações futuras ainda não são completamente compreendidos. O presente estudo avaliou os efeitos genotóxicos e epigenotóxicos do MPH sobre as células germinativas masculinas de ratos Wistar pré-púberes, e as repercussões para o desenvolvimento embrionário inicial. Aos 38 dias de idade, os animais foram tratados por gavagem com água destilada (C) ou MPH, na dose de 5 mg/kg durante 30 dias consecutivos (protocolo subcrônico) ou de 20 mg/kg em dose única (protocolo agudo). Foram analisados biomarcadores de estresse oxidativo, integridade do acrossoma e qualidade da cromatina espermática, bem como a população de células germinativas foi estimada, por citometria de fluxo. Os efeitos da contribuição paterna sobre o desenvolvimento embrionário (2,5, 4,5 e 20 dias pós-coito) e sobre o perfil de marcas epigenéticas nos blastocistos (H3K4me3, H3K9me3 e H4K20me3) também foram avaliados. Os resultados sugerem que o MPH não é citotóxico, mas causa danos genéticos às células germinativas masculinas independente da presença de estresse oxidativo, provocando queda na qualidade de embriões em clivagem, alterações na morfologia e no perfil epigenético de blastocistos, reduzindo a viabilidade da prole.
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    Efeito antiapoptótico e antissenescência do açaí liofilizado (Euterpe Oleracea Martius) sobre as células germinativas masculinas
    (Universidade Federal de São Paulo, 2024-04-15) Mumcu, Merve [UNIFESP]; Vilela, Vanessa Vendramini [UNIFESP]; Gomes, Ana Clara da Costa Nunes [UNIFESP]; https://lattes.cnpq.br/3419372674559999; https://lattes.cnpq.br/7430244790148504; https://lattes.cnpq.br/1795670842574045
    O açaí (Euterpe oleracea Mart.) possui inúmeras propriedades benéficas à saúde e vem sendo utilizado no tratamento de enfermidades ligadas à síndrome metabólica e ao envelhecimento. O modelo experimental de indução à senescência, utilizando o tratamento de roedores com D-galactose, apresenta características indicativas de comprometimento cognitivo, motor e reprodutivo muito semelhantes àquelas observadas no envelhecimento natural em roedores e tem potencial para mimetizar o perfil de danos que caracterizam a idade paterna avançada. O presente estudo buscou verificar se o açaí protege a integridade da cromatina das células germinativas masculinas, por meio da modulação da expressão de da SIRT1 e ação anti-apoptótica, sob indução à senescência pela D-galactose por 4 semanas de tratamento. Ratos machos (n=24) foram subdivididos em 4 grupos: o grupo DG foi submetido ao tratamento com D-galactose em doses diárias de 200mg/kg de peso corpóreo, por 4 semanas; o grupo DGA recebeu, além do tratamento com a D-galactose, suplementação com 200mg/kg de açaí liofilizado diluído em água destilada, 5 vezes por semana; o grupo controle (C) e açaí (A) receberam, respectivamente, água destilada e açaí. Após os tratamentos, todos os animais foram anestesiados e os órgãos reprodutivos foram coletados e pesados. O tecido testicular foi processado para a quantificação de SIRT1, receptor de leptina, BAX e BCL-2. A quantificação das células germinativas apoptóticas e da qualidade da cromatina dos espermatozóides armazenados na cauda do epidídimo foram verificadas. O monosacarídio D-galactose apresentou acentuado aumento no número de células TUNEL-positivas e redução na qualidade da cromatina, o que foi significantemente revertido pelo açaí. Entretanto a expressão da receptor de leptina, BAX e BCL-2 testiculares, bem como a protaminação do DNA espermático, não apresentaram significância estatística, mas indicaram tendência de alteração para o grupo envelhecido (DG). Nas condições experimentais aqui propostas, a ação antienvelhecimento do açaí, via ativação de SIRT1, apresentou-se como uma tendência, porém, não foi detectada significância estatística quando o grupo suplementado com açaí (DGA) foi comparado ao grupo envelhecido (DG). Os resultados sugerem que o açaí apresenta efeito anti-apoptótico e protetor da qualidade genômica das células germinativas, provavelmente por via de ativação da SIRT1.
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    Efeito da exposição ao material particulado inalável fino (MP2,5) presente no ar da cidade de São Paulo na qualidade funcional dos espermatozoides de camundongos.
    (Universidade Federal de São Paulo, 2021-12-15) Tamashiro, Leticia Kaory [UNIFESP]; Lopes, Paula Intasqui [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/5188240479960852; http://lattes.cnpq.br/5512027014768127
    Objetivo: Avaliar experimentalmente o efeito da exposição ao material particulado inalável fino (MP2,5) presente no ar da cidade de São Paulo na qualidade funcional dos espermatozoides de camundongos. Métodos: Foram utilizados 14 camundongos machos BALB/c isogênicos distribuídos em dois grupos, controle (n=6) e poluição (n=8). Para o grupo poluição, após o desmame (21 dias), os animais foram diariamente expostos a altas concentações do MP2,5 (600 µg/m3) durante 96 dias no Concentrador de Partículas Ambientais. O grupo controle foi exposto simultaneamente ao ar filtrado em uma câmara paralela. Após, os animais foram eutanasiados com overdose de isoflurano, o peso corporal foi avaliado e foi feita a coleta cirúrgica dos epidídimos. Espermatozoides obtidos da cauda dos epidídimos foram utilizados para as análises de integridade funcional (motilidade, viabilidade, integridade do acrossoma e atividade mitocondrial), de fragmentação de DNA e da produção intracelular de espécies reativas de oxigênio. Para a análise estatística, foi verificada a normalidade da distribuição dos dados pelo teste de Kolmogorov-Smirnov. Então, os grupos controle e poluição foram comparados pelo teste t de Student para amostras independentes e um erro alfa de 5% foi adotado. Resultados: No presente estudo, não foram observadas diferenças estatisticamente significativas entre os grupos controle e poluição em relação ao peso corporal e à integridade funcional, fragmentação do DNA e produção de espécies reativas de oxigênio nos espermatozoides. Conclusão: A exposição a altas concentrações de MP2,5 não provocou alterações nas variáveis espermáticas avaliadas neste estudo.
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    Acesso aberto (Open Access)
    Efeito do desacoplamento da fosforilação oxidativa na criopreservação do sêmen humano
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2018-03-02) Lima, Bruna Tuani De [UNIFESP]; Nichi, Marcilio [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/7054360633543023; http://lattes.cnpq.br/7262889884982858; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Aim: To evaluate the possible protective effect of the decoupling of oxidative phosphorylation and concomitant stimulation of glycolysis during cryopreservation of human spermatozoa. Methods: Each semen collected through the spermogram was divided into two fractions that received the following treatment: (1) simultaneous treatment of oxidative phosphorylation and stimulation of glycolysis (treated group); The aliquots were cryopreserved and analyzed, before and after this process, through evaluations of oxidative status, structural integrity and sperm motility. The obtained data were evaluated and the level of significance used to reject H0 (null hypothesis) was 5%. Results: The aliquots received from the Treated Group showed more cells with intact acrosomes, less DNA fragmentation and better mitochondrial activity compared to the Control Group. Conclusions: From the results obtained, we can conclude that the treatment had a protective effect on human spermatozoa during cryopreservation: (1) preventing cryoinjury, such as high DNA fragmentation and decreased acrosome integrity; (2) maintaining the integrity and activity of mitochondria.
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    Acesso aberto (Open Access)
    O efeito do tratamento com carnosina durante o processamento seminal de amotras humanas por gradiente de densidade descontínuo
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2018-02-27) Adami, Luana Nayara Gallego [UNIFESP]; Nichi, Marcilio; http://lattes.cnpq.br/7054360633543023; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Introdução: A infertilidade masculina pode ser causada pelo estresse oxidativo seminal que leva prejuízos aos espermatozoides. Entretanto, o plasma seminal possui mecanismos antioxidantes para tentar neutralizar esses danos celulares. Por outro lado, as biotécnicas utilizadas durante o processamento seminal tendem a diminuir essa proteção antioxidante aumentando os danos oxidativos ao gameta. Na tentativa de minimizar os danos, antioxidantes exógenos são suplementados nos sistemas in vitro. A carnosina, reportada por sua potente função antioxidante, tem capacidade de reagir com produtos responsáveis por provocar danos celulares. Dessa forma suplementar carnosina nos meios de processamento seminal levaria a uma melhora na qualidade funcional dos espermatozoides. Objetivo: Avaliar o efeito de diferentes concentrações da carnosina no processamento das amostras seminais. Método: As amostras seminais (n=34) foram divididas em 3 grupos e seguiram para o processamento seminal: grupo controle sem suplementação com a carnosina (0) recebeu as camadas de gradiente de densidade descontínua – Percoll (80% e 40%) e a amostra; o grupo 20 mM, por sua vez, teve as camadas de Percoll suplementadas com 20 mM de carnosina; finalmente, o grupo 50mM teve as camadas de Percoll suplementadas com 50 mM de carnosina. As amostras passaram pelo processo de gradiente de densidade descontínuo por 20 minutos a 600xG e foram lavadas com meio de cultura fluido tubário humano (HTF) por 10 minutos a 600xG. Após o processamento, os espermatozoides foram avaliados quanto ao potencial de membrana mitocondrial, à produção de ânion superóxido intracelular, à fragmentação de DNA espermático, à integridade acrossômica, à atividade mitocondrial, à integridade de membrana plasmática e à motilidade espermática. Para analisar a normalidade e esfericidade dos dados, utilizamos os testes de Kolmogorov-Smirnov e de Mauchly respectivamente, e então o General Linear Model (GLM) com teste post-hoc de Sidak. Para as variáveis não normais foi utilizado o teste não paramétrico de Friedman com post-hoc de Games-Howell, considerando α = 5% e utilizando o programa SPSS21. Resultados: A suplementação com a carnosina na concentração de 50 mM levou à melhora da atividade mitocondrial dos espermatozoides quando comparado ao grupo controle. Para variáveis como % de espermatozoides móveis e % de espermatozoides progressivos, velocidade média de percurso, retilínea e curvilínea, e linearidade dos espermatozoides houve uma melhora nos índices após o gradiente de densidade descontínuo, entretanto as concentrações de carnosina não foram efetivas. Já para a frequência de batimento dos flagelos a presença de carnosina em ambas concentrações elevou as frequências quando comparadas à amostra antes do gradiente de densidade descontínuo. Conclusão: A suplementação da carnosina nas amostras seminais humanas pode apresentar efeito benéfico para a atividade mitocondrial espermática e a frequência de batimento cruzado, amenizando os possíveis danos provocados pelo processamento seminal.
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    Restrito
    Efeito tardio do estresse crônico moderado, induzido a partir da peripuberdade, sobre os parâmetros reprodutivos de ratos machos adultos, tratados ou não com escitalopram, e o desenvolvimento da progênie
    (Universidade Federal de São Paulo, 2023-02-01) Fischer, Leonardo Wensing [UNIFESP]; Miraglia Valdeolivas, Sandra Maria [UNIFESP]; Oliva, Samara Urban de [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/5886968082690915; http://lattes.cnpq.br/7489168456011888; http://lattes.cnpq.br/9493337524010437
    Introdução: A prevalência de depressão em adolescentes tem aumentado significativamente em todo o mundo. Escitalopram é um inibidor seletivo da recaptação de serotonina aprovado para tratamento de transtornos psiquiátricos em crianças e adolescentes pela Food and Drugs Administration. Objetivos: Investigar os parâmetros espermáticos, o comportamento sexual e o desenvolvimento fetal de ratos adultos expostos ao estresse crônico moderado imprevisível (ECMI), desde a peripuberdade até a fase adulta, tratados ou não com escitalopram. Materiais e métodos: Cento e oito ratos machos foram distribuídos em quatro grupos: GE - submetidos a ECMI; Ge - Escitalopram (10 mg/kg, via gavagem); GEe - ECMI + ES; GC - Controle Sham. O protocolo para indução da depressão consistiu na exposição dos animais a nove estressores diferentes (um estressor/dia), aleatoriamente durante 8 semanas, desde a peripuberdade (41 dias pós-parto, dpp) até a idade adulta (97 dpp). O período de tratamento com escitalopram começou em 70 dpp e durou 4 semanas. A eutanásia foi realizada para coleta de material biológico aos 114 dpp. Foram avaliados parâmetros morfométricos e biométricos dos órgãos reprodutivos, parâmetros espermáticos qualitativos e quantitativos, análises de estresse oxidativo, dosagens hormonais, comportamento sexual, capacidade reprodutiva, malformações fetais e imunoexpressão de SIRT1 nos testículos, além da histopatologia testicular. Resultados: Foram observadas reduções da produção diária e da concentração de espermatozoides no epidídimo de ratos tratados e/ou submetidos ao ECMI. Esses grupos (Ge, GE, GEe) também apresentaram redução da: atividade mitocondrial; integridade acrossômica; compactação da cromatina espermática; motilidade e vitalidade dos espermatozoides, além de aumento da frequência de espermatozoides morfologicamente anormais. O tempo de trânsito espermático através do epidídimo foi significativamente maior nos ratos tratados com escitalopram (Ge, GEe). Não foram observadas diferenças quanto à fragmentação do DNA espermático. A peroxidação lipídica aumentou significativamente nos níveis epididimário (Ge, GE e GEe) e testicular (grupo GE). Animais estressados, tratados ou não com escitalopram, apresentaram redução na motivação sexual e nos níveis de testosterona. Os grupos Ge, GE e GEe apresentaram maior percentual de túbulos seminíferos com alterações na histoarquitetura de seu epitélio e redução na imunoexpressão de SIRT1. Aumento de alterações esqueléticas na progênie também ocorreram nestes grupos. Animais estressados (GE) apresentaram queda nos parâmetros de fertilidade. Conclusão: ECMI, com ou sem o tratamento com escitalopram, causa: i) alterações do estado oxidativo no espermatozoide e órgãos reprodutivos masculinos, piorando os parâmetros espermáticos qualitativos e quantitativos; ii) redução da motivação sexual e dos níveis de testosterona e iii) aumento na frequência das alterações esqueléticas fetais. O protocolo ECMI afeta a fertilidade masculina.
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    Restrito
    Efeito tardio do estresse térmico em camundongos pré-púberes
    (Universidade Federal de São Paulo, 2022-07-21) Ikesaki, Sara Makie [UNIFESP]; Lopes, Fabíola Freitas de Paula [UNIFESP]; Moura, Marcelo Tigre; http://lattes.cnpq.br/0480082638852833; http://lattes.cnpq.br/0954914266701996; http://lattes.cnpq.br/3448470833404738
    O estresse térmico é um problema multifatorial que afeta negativamente a eficiência reprodutiva em mamíferos. No caso dos machos púberes, o estresse térmico aumenta a temperatura escrotal e testicular causando erros na espermatogênese, alterando a morfologia e motilidade espermática, reduzindo a capacidade fecundante do espermatozoide além de induzir alterações celulares no gameta masculino. Apesar do efeito deletério do estresse térmico na fertilidade masculina já ser bem caracterizado, pouco se conhece sobre os efeitos do estresse em animais pré-púberes. Dessa forma, este projeto visou determinar se as alterações induzidas pelo estresse térmico na função espermática de camundongos machos pré-púberes podem ser carreadas até a fase tardia de vida do animal. Para tanto, camundongos Suíços foram cruzados para gerar a progênie (geração F0). No dia 10 do desenvolvimento pós-natal (P10) os filhotes juntamente com as fêmeas em lactação foram alocados aleatoriamente aos gabinete de estresse térmico (35°C por 12h no período claro e 21°C por 12h no período escuro) ou controle (21°C por 24h) até o dia 21 do desenvolvimento pós-natal (P21). Os machos da geração F0 foram mantidos sob condição controle até a meia-idade (12 meses) para avaliar os efeitos tardios do estresse térmico. Um grupo de animais adultos (3-4 meses de idade) mantido sob condição controle (21°C por 24h) foram utilizados como controle. Os animais adultos, de meia-idade controle e estresse térmico foram eutanasiados para a coleta dos espermatozoides, onde foram submetidos a determinação da contagem, motilidade e cinemática espermática pela Análise Computadorizada de Espermatozóide (CASA; CEROS II Hamilton-Thorne) . A massa corporal do animal meia-idade estressado (P = 0.0064) foi menor em comparação ao meia-idade controle (P = 0.0437) e ambos são significativamente maiores que o camundongo adulto (P <.0001). Os animais estressados de meia-idade apresentaram aumento da massa da cabeça e corpo epididimal (P = 0.0419), diminuição da média espermática (P = 0.0051), diminuição da contagem absoluta (P = 0.0064) e da contagem relativa da cabeça/corpo do epidídimo em relação ao animal adulto (P = 0.0055) e de meia-idade controle (P = 0.0018). Houve também diminuição da média espermática na cauda epididimal, sendo o meia-idade estressado (P =0.0160) e o controle (P=0.0198) reduzido em relação ao adulto. Isso foi observado no tempo de trânsito espermático no estressado (P = 0.0016) e controle (P = 0.0005). A contagem absoluta no estressado (P = 0.0187) e controle (P = 0.0149), além da contagem relativa do estressado (P = 0.0084) e controle (P = 0.0187) seguirem o mesmo padrão na cauda epididimária. No testículo, houve aumento da massa do órgão nos grupos de meia-idade, sendo maiores que o animal adulto (P = 0.0380). A hiperativação espermática foi reduzida no animal estressado de meia-idade (P = 0.0332) e controle (P = 0.0542) em relação ao adulto. Diminuição consequente do estresse térmico foi observado na cinemática espermática, no parâmetro VCL (P = 0.0535) com o adulto. Por fim, tendências de diminuição também foram observadas no parâmetro ALH do grupo meia-idade estressado (P = 0.0636) e controle (P = 0.0620). Esses dados indicam que a exposição de camundongos pré-púberes ao estresse térmico teve seus efeitos carreados quando os animais foram avaliados com meia-idade.
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    Efeitos da carbamazepina sobre espermatozoides epididimários e a capacidade reprodutiva de ratos adultos e possíveis impactos sobre o desenvolvimento reprodutivo da prole (geração F1)
    (Universidade Federal de São Paulo, 2024-01-15) Santos, Marina Nunes dos [UNIFESP]; Oliva, Samara Urban [UNIFESP]; Miraglia, Sandra Maria [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/7489168456011888; http://lattes.cnpq.br/5886968082690915; http://lattes.cnpq.br/7075826792106019
    INTRODUÇÃO: A carbamazepina (CBZ) é um fármaco amplamente utilizado no controle de convulsões, no tratamento da neuralgia do trigêmeo e de desordens afetivas. Alterações nas características seminais, nos níveis de hormônios sexuais, na espermatogênese e na fertilidade masculina têm sido observadas durante e após tratamentos prolongados com CBZ. Apesar da falta de estudos que evidenciem a ação desse medicamento sobre o epidídimo e o processo de maturação espermática, é importante considerar possíveis efeitos diretos da CBZ nos espermatozoides epididimários, dada sua alta lipossolubilidade. OBJETIVOS: Portanto, este estudo teve como objetivos investigar: a) a possível ação direta da CBZ sobre parâmetros quantitativos, qualitativos e funcionais dos espermatozoides epididimários em ratos adultos; b) os efeitos da CBZ em ratos machos tratados desde a pré-puberdade até a fase adulta sobre o desenvolvimento da genitália externa, qualidade espermática, comportamento sexual e capacidade reprodutiva; c) a possível ocorrência de malformações congênitas na prole de ratos machos tratados com CBZ; d) os efeitos sobre a reprodução masculina em ratos da geração F1. RESULTADOS: Até o momento, nossos resultados indicam impactos substanciais na qualidade espermática e na saúde reprodutiva masculina tanto na exposição aguda quanto na crônica à CBZ. Os espermatozoides epididimários apresentaram uma série de alterações significativas, incluindo redução na motilidade progressiva, deterioração na integridade da cromatina, fragmentação do DNA nuclear e alterações morfológicas, particularmente nas regiões da cabeça e cauda do espermatozoide. Além disso, é importante destacar que, apesar de não terem sido observadas alterações no comportamento sexual dos animais tratados cronicamente com CBZ, foram identificadas alterações placentárias significativas em animais submetidos a essa exposição crônica. Adicionalmente, observou-se a ocorrência de alterações esqueléticas na prole desses animais. CONCLUSÕES: As alterações espermáticas quantitativas e qualitativas observadas em diferentes protocolos de tratamento, níveis de dosagem de CBZ e em grupos etários enfatizam os efeitos multifacetados da CBZ na espermatogênese e maturação espermática.
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    Efeitos do estresse térmico na espermatogênese de camundongos: aspectos celulares e epigenéticos
    (Universidade Federal de São Paulo, 2022-08-25) Ferreira, Gláucia Helena [UNIFESP]; Lopes, Fabíola Freitas de Paula [UNIFESP]; Moura, Marcelo Tigre; http://lattes.cnpq.br/0480082638852833; http://lattes.cnpq.br/0954914266701996; http://lattes.cnpq.br/2348835088157015
    O efeito deletério do estresse térmico na fertilidade animal é um problema multifatorial, afetando tecidos e células do sistema reprodutor em mamíferos. Existem evidências de que, no sistema reprodutor de machos púberes, o estresse térmico compromete a espermatogênese, reduzindo a motilidade, a capacidade fecundante do espermatozoide e a fertilidade do animal. No entanto, pouco se sabe sobre os efeitos imediatos e/ou tardios do estresse térmico em animais pré-púberes. Desta forma, este trabalho visou determinar se o estresse térmico aplicado em camundongos machos pré-púberes exerce efeitos imediatos (período pré-púbere) e tardios (período púbere) sobre os aspectos morfológicos das células testiculares bem como determinar os efeitos tardios do estresse térmico no perfil bioquímico e motilidade espermática e na produção in vivo de embriões. Para tanto, casais da linhagem Suiça foram utilizados para obtenção de ninhadas. No 10º dia de desenvolvimento pós-natal (DPN), as matrizes e os filhotes foram aleatoriamente alojados em câmara climática nas condições controle (21°C durante o dia todo) e estresse térmico (35°C por 12 horas do período de luz e 21°C por 12 h durante o período escuro) até́ o 21º dia DPN. Em seguida, os animais foram mantidos na condição controle até o dia da eutanásia. No primeiro experimento, os camundongos foram avaliados quanto a massa corporal, massa testicular e histologia dos testículos nos momentos imediato (dias 22 a 25 DPN) e tardio (dias 91 a 122 DPN). Para caracterização dos efeitos tardios do estresse térmico foi realizada também a contagem espermática, análise computadorizada de espermatozoides (CASA) e perfil bioquímico espermático (Espectroscopia Raman). Para tanto, os testículos direitos foram fixados em 4% (p/v) paraformaldeído, processados para histologia clássica e submetidos à aquisição e análise de imagem. Os testículos e epidídimos esquerdos foram congelados em nitrogênio líquido e destinados às análises de contagem espermática. Os epidídimos direitos foram repicados em meio HTF (human tubal fluid) ou solução tamponada de fosfato (PBS 0,1M) para avaliação do perfil funcional (CASA) ou bioquímico (Raman), respectivamente. Em um segundo experimento, os machos foram submetidos ao estresse térmico no período pré-púbere como previamente descrito. Ao atingirem a puberdade os animais foram acasalados (2 fêmeas para cada macho, com intervalo de 10 dias) para determinação das taxas de blastocistos e estruturas viáveis. A exposição de camundongos pré-púberes ao estresse térmico exerceu um efeito imediato reduzindo o número de espermatócitos (p=0.0076), espermátides arredondadas (p<0,0001) e alongadas (p=0.0016), e células de Leydig (p=0.0065). Além disso o estresse térmico aumentou a porcentagem de túbulos seminíferos com alterações tubulares caraterísticas de atrofia (p=0,0123), vacúolos (p=0,0300), corpos residuais anormais (p=0.0017), perdas parciais de células germinativas (p=0,4159) e redução do epitélio germinativo íntegro (p<.0001). Houve também aumento no número de vacúolos (p<.0001) e corpos residuais anormais (p<.0001) por túbulo. Quando as mesmas características histológicas testiculares foram avaliadas durante a puberdade, o grupo submetido ao estresse térmico apresentou aumento no número de espermatogônias (p=0.0044), espermátides arredondadas (p<0.0001) e células de Sertoli (p<.0001). Em contraste, houve redução no número de espermatócitos (p<0001) e tendência na redução no número de espermátides alongadas (p=0.0832). Além disso o estresse térmico aumentou a porcentagem de túbulos seminíferos com alterações tubulares caraterísticas de corpos residuais anormais (p=0.0002), perdas parciais de células germinativas (p<.0001) e desorganização do epitélio germinativo (p<.0001) e tendência de desorientação de espermátides (p=0.0652). Houve também aumento no número de vacúolos (p=0.0133) e corpos residuais anormais (p=0.0007). O estresse térmico reduziu a massa da cabeça e corpo do epidídimo e aumentou a contagem espermática relativa nessa porção do epidídimo (p=0.0086). Foi observado o aumento na contagem espermática absoluta no testículo (p=0.0131) e na produção diária de espermatozoides (p=0.0131). A exposição de camundongos ao estresse térmico no período pré-púbere aumentou a motilidade progressiva (p=0.0314) mas reduziu a hiperativação espermática (p=0,0239). Os efeitos imediatos e tardios do estresse térmico em machos compactuaram para a redução da fertilidade, com queda na taxa de blastocistos (p=0.0130) e de estruturas viáveis (p=0.0130) e aumento de estruturas degeneradas (p=0.0078) e oócitos não fecundados (p=0.0459) em relação ao grupo controle. Não foram observados efeitos do do estresse térmico sob o perfil bioquímico do espermatozoide. O estresse térmico em camundongos machos pré-púberes exerceu efeito imediato e tardio, comprometendo a histologia dos túbulos seminíferos, a concentração espermática, e alterou os padrões de motilidade espermática acarretando na redução da fertilidade.
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    Acesso aberto (Open Access)
    Expressão de microRNAS no cérebro e espermatozoides de ratos SHR: avaliação preliminar para estudos futuros sobre herança epigenética da esquizofrenia
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2019-05-30) Cantao, Isabelle Hernandez [UNIFESP]; Teixeira, Taiza Stumpp [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/1024329256080770; http://lattes.cnpq.br/1819143400886779; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Schizophrenia (SCZ) is a psychiatric disorder that affects around 1% of world population. Despite the great number of studies about the etiology of SCZ and the identification of genetic alterations related to this disorder, a definitive and clear genetic basis for SCZ has not been established so far. Considering that SCZ is influenced by environmental aspects, the influence of epigenetic mechanisms in the manifestation and development of SCZ started to be considered. However, longitudinal clinical and molecular studies that follow SCZ development before its manifestation are complex, not to mention the obvious unfeasibility of getting brain samples. Thus, animal models, such as the Spontaneously Hypertensive Rats (SHR), have been used to explore some aspects of SCZ. In the present study we investigated the expression of miRNAs previously reported as dysregulated in patients diagnosed with psychiatric disorders in the brain and sperm of SHR rats. For this, the hippocampus, the pre-frontal cortex and the sperm of adult SHR and control rats were collected and submitted to miRNA and DNA extraction. The expression of miRNAs was analyzed by RT-qPCR. The copy number of LINE-1 retrotransposon was also analyzed. The results showed that miR-34a, miR-18a and miR-134 were dysregulated in the brain and in the sperm of SHR rats when compared with control rats. miR-132, miRN219a, miR-106b and miR-182 were dysregulated only in the sperm of the SHR rats. No alterations in LINE-1 copy number was observed in SHR sperm, pre-frontal cortex and hippocampus when compared with control rats. These data suggest that SHR rats can be a useful model to study the relationship of miRNA with SCZ and that the alterations in the expression of SCZ-related miRNA observed in SHR rats might be transferred to the descendants.
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    Acesso aberto (Open Access)
    Impacto das variáveis seminais nos resultados dos tratamentos de reprodução humana assistida
    (Universidade Federal de São Paulo, 2024-09-10) Nogueira, Camila [UNIFESP]; Antoniassi, Mariana Pereira [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/0783506316934214; http://lattes.cnpq.br/9122676059725528
    Objetivo: Verificar se as variáveis seminais influenciam nos tratamentos de reprodução assistida, na formação de embriões e blastocistos e nas taxas de gestação. Método: Foram analisados 4946 prontuários de pacientes que realizaram tratamento para infertilidade conjugal no Setor Integrado de Reprodução Humana da UNIFESP do ano de 2010 até 2020. Foram utilizados os dados clínicos masculinos, de análise seminal, número de embriões e blastocistos formados e gravidez. A análise estatística foi realizada por meio do software SPSS 18.0. Resultados: Ao comparar-se os fatores analisados e a presença ou não de gestação, houve diferença estatística na idade feminina, no número de oócitos, de MII (oócito em metáfase II), taxa de MII e MI (oócito em metáfase I), número de oócitos injetados e fertilizados, quantidade de embriões em D3 (dia 3 de desenvolvimento embrionário) e D5 (dia 5 de desenvolvimento embrionário) e quantidade de embriões transferidos, porém não houve diferença quando comparadas as variáveis seminais e as taxas de gestação. Em relação às correlações, houve correlação positiva entre a concentração inicial, total, total de móveis e total de móveis morfologicamente normais. A concentração total correlacionou-se positivamente com o total de móveis e o total de móveis morfologicamente normais. A morfologia e o total de móveis correlacionaram-se positivamente com o total de móveis morfologicamente normais. Por fim, a análise discriminante demonstrou que as variáveis que melhor discriminam os grupos beta positivo e negativo foram idade da mulher, taxa de MII, número de oócitos e taxa de fertilização, sendo a taxa de MII a que melhor prediz o grupo beta positivo. Conclusão: Dessa forma, o presente estudo não demonstrou diferença significativa entre as variáveis seminais e as taxas de gestação e de formação de blastocistos em tratamentos de reprodução humana assistida.
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    Investigação da expressão de microRNAs nos espermatozoides de ratos wistar modelo de transtorno do espectro do autismo induzido por ácido valproico
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2019-05-30) Roloff, Helena Bertazolli [UNIFESP]; Teixeira, Taiza Stumpp [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Epigenetics deals with changes in the genome that do not alters the sequence of base pairs of DNA, but affect the modulation of gene expression. These modifications can occur in different ways, including DNA methylation and post-transcriptional regulation by microRNAs (miRNAs), which modulate messenger RNA (mRNA) activity. The miRNAs have been identified as potential biomarkers for the diagnosis and evaluation of response of psychiatric disorders. Among psychiatric syndromes, ASD (Autism Spectrum Disorder) is a neurodevelopmental disorder that involves a broad spectrum of clinical phenotypes and a complex genetic contribution. Many miRNAs differentially expressed in this disorder are involved in neuronal differentiation, maturation and proliferation, so that their dysregulation may be associated with the neurodevelopmental deficits observed in ASD. The environmental factors involved in the ASD etiology may be pre- or postnatal, highlighting, in the present study, in utero exposure to the teratogenic drug valproic acid (VPA), a broad spectrum anticonvulsant drug. VPA acts through epigenetic mechanisms and studies have been using prenatal exposure to VPA in animals to produce a model of autism that presents a constructive and face validity. Two important events of epigenetic reprogramming occur during embryonic development: the first immediately after fertilization and the second during the development of primordial germ cells (PGCs), which are the precursors of gametes. During this reprogramming period, PGCs become more susceptible to epigenetic changes, which can remain in the gametes and can be passed on to the next generation and generate an epigenetic inheritance mechanism. It is important to mention that during the epigenetic reprogramming of PCG, alternative silencing mechanisms of retrotransposons, whose expression is controlled by methylation, need to be activated. Thus, impairments during this process may lead to inappropriate mobilization of retrotransposons, which may result in mutations and other important changes in the genome. Copy number variations of retrotransposon Line-1 (long interspersed element 1), for example, are considered a possible cause of neurobehavioral disorders, such as ASD. Aim: Given these data, it was decided to use the ASD model based on the treatment with valproic acid to investigate the expression of miRNAs related to this disorder, as well as to investigate possible XIII changes in the number of Line-1 copies in the spermatozoa of these animals. Methods: For this, Wistar rats were treated with 800mg / kg VPA at 12.5 days post-conception (dpc). Male descendants were submitted to basic behavioral tests to verify the induction of behaviors that could confirm the model. The spermatozoa, pre-frontal cortex and cerebellum of the male offspring from these rats were collected and subjected to miRNA or DNA extraction. The testicles were also collected and fixed in Bouin's liquid for morphological analysis. The expression of miR-132-5p, miR-106b-5p, miR-182, miR-18a-5p, miR-34a-5p, miR134-5p, miR219a-5p, miR3596 e miR-195-5p was evaluated. Expression changes those miRNAs has been described in patients with ASD or other psychiatric disorders. For this analysis, TaqMan assays were used. The extracted DNA was used for the analysis of the number of copies variation (CNV) of Line-1 by qPCR with Sybr assays. Results: The results show that the male offspring of VPA treated rats present behavioral changes, although it was not possible to carry out more conclusive tests because they caused stress, which could add more bias to the experiment. These animals presented significant alterations in sperm morphology when compared to controls, although they did not show relevant testicular morphological alterations. The miRNAs miR-132-5p, miR-106b-5p, miR-182, miR-34a-5p, miR134-5p, miR219a-5p, miR3596 and miR-195-5p had reduced expression in cerebellar samples from VPA animals compared to CT animals. There was no change in the expression of any of the nine miRNAs comparing pre-frontal cortex samples from VPA and CT animals. Expression of miRNAs miR-132-5p, miR-34a-5p and miR-219a-5p was shown to be altered in the spermatozoa of the offspring of VPA-treated females in contrast to CT animals. Unfortunately, no results could be obtained from the investigation of the number of Line-1 copies in brain and sperm samples. Conclusion: With this study, it was possible to establish strategies and obtain basic data to study mechanisms of epigenetic inheritance of ASD in animal models.
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    Investigação da herança intergeracional - via espermatozoides - de alterações na expressão de miRNAs relacionados a transtornos psiquiátricos
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2020-09-30) Campagnoli, Gabriella Mesas [UNIFESP]; Teixeira, Taiza Stumpp [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo
    Introduction: Epigenetics is identified as an important component of the inheritance of several conditions, among which “missing heritability”, such as schizophrenia, since the genetic aspects of this disorder do not explain its heritability. Besides, the fact that the environment is crucial for the manifestation and development of schizophrenia brings to light the importance of the involvement of epigenetic mechanisms in this disorder. As schizophrenia is considered a developmental disorder, or the use of experimental models that allow investigating the development of this disorder from the early life is essential,especially with regard to respect for its molecular aspects. MiRNAs play an important role in neurogenesis, involved in behavioral changes and psychiatric disorders. Thus, an epigenetic analysis of brain regions and sperm can contribute to the understanding of epigenetic aspects involved in schizophrenia and specific about their epigenetic inheritance. Aims: To investigate the profile of miRNAs related to schizophrenia in sperm, prefrontal cortex and hippocampus of SHR rats. Methods: Sperm miRNAs, prefrontal cortex and hippocampus were extracted, quantified and reproduced in the construction of libraries for further sequencing. The captured data were used for bioinformatics and statistical analyzes, as well as an interactive analysis was carried out between differently expressed miRNAs and target genes through the Metascape and Cytoscape platforms. Results: We observed differential expression of miRNAs in the three types of tissue/cell. A bioinformatics analysis has shown that the vast majority of differently expressed miRNA target genes, both for sperm and the prefrontal cortex and hippocampus, are using the nervous system and its important pathways to relate to behavior, neurodevelopment and synaptic processes. Among the genes included, the miRNAs differently expressed, 12 coincide with the genes expressly expressed in patients with schizophrenia, or that reinforce SHR as a good model for the study of these disorders. Conclusion: the male rats of the SHR lineage show alterations in the expression of miRNAs related to neurological involvement and schizophrenia in sperm, prefrontal cortex and hippocampus, as the SHR model is useful for epigenetic studies and other molecular aspects related to schizophrenia. Finally, this study suggests that the SHR model may be useful for future studies on the epigenetic inheritance of miRNAs.
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    Resveratrol melhora a qualidade espermática, a fertilidade e a capacidade reprodutiva de ratos adultos com diabetes tipo1 induzido, na pré-puberdade, pela administração de estreptozotocina
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2020-10-05) Simas, Joana Nogueres [UNIFESP]; Valdeolivas, Sandra Maria Miraglia [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo
    Introduction: Diabetes Mellitus is characterized by a series of metabolic disorders. It is estimated that, in the coming decades, about 628.6 million individuals worldwide may develop the disease. Its pathogenesis progresses with the development of arteriosclerosis, angiopathies, nephropathies and neuropathies. Although conditions in the male reproductive system have already been described, the ultimate impact on the male reproductive outcomes cannot be neglected. Resveratrol, phytoalexin found in plants such as grapes and açai berries, is a powerful antioxidant capable of decreasing glycemic levels and several metabolic effects associated with diabetes mellitus. In previous studies, we observed that chronic treatment with resveratrol improves not only glycemic levels, but also plasmatic levels of testosterone, estradiol and LH, as well as quantitative sperm parameters and sperm morphology in adult animals (75 days postpartum, dpp), which had type 1 diabetes induced by streptozotocin, from prepuberty. Objectives: To investigate the protective action of resveratrol on male reproduction against the damage caused by type 1 diabetes mellitus, induced in prepuberty, with regard to future sperm quality, with an emphasis on the integrity of the DNA and the structure of the sperm chromatin and in the evaluation of the reproductive competence of the animals, when adults. Material and Methods: a hundred and twelve male Wistar rats were used, obtained by mating 15 males and 30 females, aged 12 weeks, which were used as breeders. The male rats, aged 30 days, belonging to these matings, were distributed into 7 groups: Sham control (SC; sodium citrate buffer solution); Resveratrol-vehicle control (RV-carboxymethylcellulose, resveratrol vehicle); Resveratrol (R); Diabetic (D); Diabetic-treated-with-insulin (DI); Diabetic-treated-with-resveratrol (DR); Diabetic-treated-with-insulin + resveratrol (DIR). Type 1 diabetes mellitus (DM1) was induced in animals at 30 dpp with a single intraperitoneal injection of streptozotocin (65 mg / kg). Blood glucose was monitored at 30, 33, 45, 64, 75, 100 and 110 dpp. The DR, DIR and R groups were treated, in the morning, with 150mg of resveratrol / kg of body weight / day (administered by gavage), from 33º dpp to 110º dpp. Animals of DI and DIR groups received subcutaneous injections of NPH (Neutral Protamine Hagedorn) insulin, at a dose of 1U / 100g of body weight / day, from the 5th day of diabetes induction, up to 110dpp. At 100 dpp, all animals were mated with two healthy primiparous females (n = 84) in order to evaluate fertility and gestation rates and reproductive capacity. The males were submitted to euthanasia at 110 dpp to collect the material destinated to sperm analysis and to evaluate testicular and epididymal oxidative stress levels. Qualitative sperm analysis comprised the following tests: a) Comet assay (to investigate DNA fragmentation); b) Acridine orange, to study chromatin and DNA structures and c) Chromomycin A3 (CMA3- for chromatin compaction and protamination analyses); the latter (items b and c) were evaluated using a flow cytometer. We also investigated: sperm motility (using a computerized analysis system); acrosome integrity (PNA-Arachis hypogaea lectin method); the mitochondrial mass (Mitotracker Green probe), as well aspregnancy, fertility and reproductive capacity rates. Results: DM1 significantly altered the qualitative sperm parameters and impaired xvi the fertility and pregnancy rates likewise the reproductive capacity of the animals. Consonant with other reproductive parameters previously evaluated by our group, under the same experimental conditions, the results of this research ratify the beneficial action of resveratrol on reproduction, improving sperm quality in animals with DM1, with regard to motility, mitochondrial mass and acrosomal integrity. Likewise, the administration of insulin and insulin + resveratrol also improved these parameters. The results showed that the treatment also improvemed fertility and pregnancy rates in diabetic rats treated with resveratrol and / or insulin, in relation to untreated diabetics. Conclusion: Considering the positive data regarding the normalization of glycemia in DM1, the reduction of MDA (oxidative stress marker) levels, both in the testis and in the epididymis, the improvement of the quality of sperm DNA and reproductive results in diabetic rats treated with RES, regardless of insulin therapy, we believe that RES could be considered a very promising adjuvant to control glycemic homeostasis and improve the fertility status associated with DM1, alone or in conjunction with insulin therapy.