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    Adrenoceptores alfa-1 no trato reprodutor masculino de macaco rhesus: caracterização molecular de variantes geradas por splicing alternativo
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2005) Patrão, Marilia Tavares Coutinho da Costa [UNIFESP]; Avellar, Maria Christina Werneck de [UNIFESP]
    Nos últimos anos, nosso laboratório tem identificado e caracterizado a regulação da expressão dos adrenoceptores a, em diferentes tecidos do trato reprodutor masculino, utilizando o rato como modelo experimental. No presente trabalho, estudos moleculares e de imuno-histoquímica foram realizados para avaliar adrenoceptores Alfa1 em tecidos do trato reprodutor masculino de primatas (macaco rhesus e humano). Os seguintes objetivos foram propostos: 1) Isolar e caracterizar a estrutura nucleotídica completa do adrenoceptor Alfa1Ae suas variantes de splice, expressas em macaco rhesus (Macaca mulatta); 2) Analisar a estrutura protéica e os aspectos funcionais dos receptores codificados por tais transcritos; 3) Comparar o padrão de expressão das variantes de splfce do adrenoceptor Alfa1A em diferentes tecidos do trato reprodutor masculino (testículo, epidídimo, vesícula seminal e próstata) de humano e de macaco rhesus; 4) Confirmar a expressão protéica e distribuição celular de adrenoceptores Alfa1A em tecidos do trato reprodutor de macaco rhesus. Durante a execução deste trabalho, a seqüência nucleotídica parcial e a análise da estrutura protéica e dos aspectos funcionais do adrenoceptor Alfa1B isolado em macaco rhesus também foram realizadas. A comparação do padrão de expressão de transcritos desse adrenoceptor foi também estudada em diferentes tecidos do trato reprodutor masculino(testículo, epidídimo, vesícula seminal e próstata) de macaco rhesus…(au).
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    Caracterização e regulação androgênica de receptores muscarínicos em epidídimo de rato
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2002) Marostica, Elisabeth [UNIFESP]; Porto, Catarina Segreti [UNIFESP]
    Estudos anteriores do nosso laboratorio, usando ensaios com radioligantes, mostraram a predominancia de receptores muscarinicos M? na cabeca e cauda do epididimo de ratos com 50 dias de idade. Por outro lado, estudos funcionais mostraram o envolvimento dos receptores muscarinicos M3 com processo contratil de tubulos epididimais obtidos da regiao da cauda. Desta forma, o objetivo deste estudo foi melhor identificar e caracterizar os subtipos de receptores muscarinicos presentes no epididimo de ratos com 50 dias de idade e investigar o papel Jos androgenos na expressao destes receptores. Usando o ensaio da transcriptase reversa seguido da reacao em cadeia da polimerase (RT-PCR), a expressao de RNA mensageiro para :)s subtipos de receptores muscarinicos m1, m2 e m3 foi observada na cabeca e cauda do epididimo de ratos com 50 dias de idade, enquanto transcritos para o subtipo m4 nao foram detectados. Estes resultados 'oram confirmados pelos ensaios de protecao a ribonuclease (RPA). Para estudar a regulacao androgenica dos receptores muscarinicos presentes na cabeca e cauda do epididimo foram usados ratos com 50 dias de idade (controle), castrados (10dias), castrados e tratados com testosterona (3mg/kg peso corporal, 10 dias) e animais com 30 dias de idade. A concentracao plasmatica de testosterona aumentou cerca de 50 por cento nos animais com 50 dias de idade(puberes), quando comparada aos animais de 30 dias de idade(imaturos). Em paralelo foi observado um aumento do peso relativo da cabeca e cauda do epididimo dos animais com 50 dias de idade. Apos a orquidectomia, a concentracao plasmatica de androgeno apresentou-se abaixo dos niveis de sensibilidade do ensaio utilizado, resultando em atrofia da cabeca e cauda do epididimo. O tratamento dos animais castrados com testosterona aumentou 5 vezes a concentracao plasmatica de androgeno, quando comparadaaos animaiscom 50 dias de idade, mas impediu, apenas parcialmente, a diminuicao do peso relativo das duas regioes do epididimo estudadas...(au)
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    Caracterização e regulação da expressão da isoforma c do gene spag11b durante o desenvolvimento do epidídimo do rato.
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2013) Ribeiro, Camilla Moreira [UNIFESP]; Avellar, Maria Christina Werneck de [UNIFESP]; Silva, Erick José Ramo da [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/4726447529800886; http://lattes.cnpq.br/5534065920525009; http://lattes.cnpq.br/9498472516886944; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Nosso grupo de pesquisa tem se dedicado ao estudo da organizacao genomica, expressao e funcao do gene Sperm-Associated Antigen 11B (SPAG11B). Produtos proteicos derivados de mecanismos de splicing alternativo desse gene possuem homologia com proteinas antimicrobianas da familia das β-defensinas. Sao expressos e secretados de forma abundante por celulas epiteliais para a luz do ducto epididimario de diferentes mamiferos, incluindo o homem. Apesar da acao antimicrobiana in vitro ja relatada para algumas isoformas recombinantes, o papel in vivo e a regulacao da expressao de isoformas do gene SPAG11B ainda nao foi esclarecido. Dessa forma, o objetivo do presente projeto foi caracterizar a expressao e regulacao da isoforma C do gene Spag11b durante o desenvolvimento do epididimo do rato. Para tal, foram utilizados os modelos experimentais de desenvolvimento pre- e pos-natal, cultura organotipica do ducto mesonefrico (precursor embrionario do epididimo) e, de castracao cirurgica bilateral. Ensaios moleculares, farmacologicos e de hibridizacao in situ, imuno-histoquimica, imunofluorescencia e analises de bioInformática foram realizados. Os resultados revelaram distribuicao ampla do RNAm Spag11b/c em tecidos genitais e extra-genitais embrionarios, em contraste a sua distribuicao preferencial em tecidos do trato reprodutor de ratos adultos, especialmente no epididimo. Nesse orgao, a expressao espaco-temporal da SPAG11B/C (RNAm e proteina) foi diferencialmente regulada durante o periodo embrionario e pos-natal. No epididimo embrionario, a expressao do RNAm Spag11b/c foi negativamente regulada pelo desenvolvimento, enquanto no periodo pos-natal a sua expressao aumentou com o avanco da idade. Foi observada uma transicao da localizacao celular da SPAG11B/C no epididimo, do compartimento mesenquimal para o epitelial, entre o periodo embrionario e pos-natal. Alem disso, a regulacao da expressao e da imunolocalizacao da SPAG11B/C por androgenios no epididimo de ratos adultos foi dependente do tempo de privacao androgenica, da regiao epididimaria e do tipo celular avaliado. A previsao in silico das sequencias regulatorias no promotor A do gene Spag11b revelou a presenca de elementos cis-regulatorios relacionados com funcoes diversas, entre eles os fatores de transcricao AR (receptor de androgenio) e PEA3 (Polyomavirus Enhancer Activator 3 Homolog). Mecanismos pos-transcricionais tambem podem estar envolvidos nessa regulacao. Em conjunto, os resultados apresentados ampliaram o potencial repertorio funcional da SPAG11B/C, que pode envolver acoes que vao alem da sua atividade antimicrobiana como uma proteina de secrecao epitelial e, tambem contribuiram para o melhor entendimento da participacao de proteinas da familia das β-defensinas no desenvolvimento do epididimo e manutencao da sua funcao.
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    Distribuição de adrenoreceptores alfa-1 e caracterização de elementos neurais ao longo do epidídimo de ratos
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2004) Queiróz, Daniel Barboza Cava [UNIFESP]; Avellar, Maria Christina Werneck de [UNIFESP]
    No presente) trabalho I a distribuicao dos adrenoceptores ai e', a caracterizacao de elementos neuronais foi analisada ao longo do epididimo de ratos em com 40 dias (animais imaturos) e 120 dias de idade (animais adultos). Foram, realizados ensaios' de Westem blot, imunohistoquimica ei de imunofluorescencia com anticorpos seletivos (AMA, ADR-B e ADR-D) ou nao seletivo (ADR-1) para os adrenoceptores a,A, a,,3 e a,p. O anticorpo ADR-A foi o unico anticorpo seletivo efetivo para os ensaios utilizados em epididimo de ratos Este anticorpo, em ensaios de Westem blot, reconheceu de forma especifica uma banda com aproximadamente 70 kDa na cabeca e cauda do epididimo de ratos com 40 dias e 120 dias de idade e uma banda, de aproximadamente 46 kDa, na cabeca e cauda dos animais imaturos., Ensaios de imunohistoquimica e, posteriormente, de imunofluorescencia com o anticorpo ADR-A indicaram imunomarcacao das celulas da musculatura lisa e celulas epiteliais presentes da cabeca e cauda do epididimo de ratos nas duas idades analisadas. Na camada muscular a imunomarcacao nao foi homogenea, apresentando-se concentrada na regiao mais periferica da celula muscular lisa, associada a membrana celular. Nas celulas epiteliais a imunorreatividade ocorreu predominantemente na regiao nuclear. Os ensaios de imunofluorescencia, juntamente com o marcador fluorescente DAPI, confirmaram a co-localizacao da marcacao do adrenoceptor a1A com a regiao nuclear das celulas epiteliais. Alem disso, observou-se que nem, todas) as I celulas) epiteliais expressavam positivamente o adrenoceptor 1A. Qualitativamente o numero de elementos positivos ao anticorpo ADR-A foi maior na cauda do que na cabeca do epididimo de ratos com 40 e 120 diasa(au)
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    Efeito da maturacao sexual no padrao de inervacao autonomica em epididimo de ratos
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2002) Silva, Adilson Marques da [UNIFESP]
    O objetivo do presente trabalho foi analisar as possiveis mudancas no padrao de inervacao autonomica durante o periodo de maturacao sexual do rato, utilizando o epididimo como modelo. Ensaios de histoquimica com o acido glioxilico e de imunohistoquimica, utilizando anticorpos seletivos contra as enzimas dopamina b-hidroxilase e acetilcolinesterase, indicaram uma reducao na quantidade de inervacao adrenergica e colinergica na cauda de epididimo de ratos adultos (120 dias), quando comparados com os animais imaturos(40 dias) e adultos jovens (60 dias). Na cabeca do epididimo, alem da menor abundancia de elementos marcados quando comparada com a regiao da cauda, nao houve variacoes com a idade no padrao de marcacao. Fibras marcadas para acetilcolinesterase, penetrando nas celulas epiteliais e terminando livres no lumen tubular, foram encontradas na regiao da cauda de animais adultos. Alem do mais, as celulas epiteliais da cabeca e cauda epididimal tambem apresentaram marcacao positiva para acetilcolinesterase em todas as idades estudadas. Ensaios radiometricos indicaram uma diminuicao significativa da atividade de acetilcolinesterase na cauda, mas nao na cabeca do epididimo, com a maturacao sexual. Estes resultados, em paralelo com resultados no nosso laboratorio demonstrando tambem uma reducao da concentracao tecidual de noradrenalina com a idade na cauda epididmal,l confirmaram os resultados obtidos com os ensaios de histoquimica pelo acido glioxilico e de imunohistoquimica. Alem disso, estudos imunohistoquimicos utilizando anticorpo contra a proteina 1B associada a microtubulo (MAP 1B), um marcador de citoesqueleto neuronal, tambem confirmaram as mudancas quantitativas observadas no padrao de marcacao de elementos neuronais na cauda do epididimo. Portanto, os resultados do presente trabalho indicam que as variacoes na concentracao de noradrenalina e atividade da acetilcolinesterase durante a maturacao sexual sao dependentes da regiao do epididimo do rato e sao resultado, pelo menos em parte, de um refinamento nervoso do padrao de inervacao autonomico que ocorre com a idade
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    Efeito do fulvestranto sobre a expressão de genes relacionados com a organização do epitélio epididimário de ratos.
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2013) Pereira, Marcos Fragoso de Noronha [UNIFESP]; Lázari, Maria de Fátima Magalhães [UNIFESP]; Porto, Catarina Segreti [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/6262412968631187; http://lattes.cnpq.br/6675272785407590; http://lattes.cnpq.br/5882403555169863; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    O epididimo desempenha um papel fundamental para o transporte, maturacao, protecao e estocagem dos espermatozoides. Essa funcao e garantida pelo epitelio altamente especializado, dividido em segmentos u segmento inicial, cabeca, corpo e cauda u que apresentam propriedades absortivas, secretorias, e expressao genica bastante diferenciadas entre si. O controle da funcao epididimaria e exercido principalmente pelos androgenos, mas algumas evidencias sugerem que os estrogenos tambem podem participar da regulacao da funcao desse tecido. O tratamento com o antiestrogeno fulvestranto tem sido uma ferramenta importante para esclarecer as funcoes do estrogeno no sistema reprodutor masculino e os seus efeitos mimetizam, muitas vezes, os do knockout do receptor de estrogeno ESR1. Em ductulos eferentes de rato o tratamento com antiestrogeno, alem de afetar de maneira prevista a expressao de genes relacionados com transporte ionico e absorcao de fluidos, tambem altera a expressao de genes importantes para a organizacao e manutencao do epitelio, entre eles: metaloproteinase 7 (Mmp7), beta-catenina (Ctnnb1), claudina 7 (Cldn7), caderina 13 (Cdh13), e prominina 2 (Prom2). O objetivo do presente estudo foi avaliar se a expressao desses genes, e a de um gene paralogo a Prom2 (Prom1), assim como a expressao das respectivas proteinas, estariam alteradas em epididimo de ratos pelo tratamento com antiestrogeno. Ratos Wistar de 30 dias de idade foram tratados, durante dois meses, com oleo de amendoim (Grupo controle) ou com fulvestranto, na dose de 10 mg/animal, 1 vez por semana (Grupo fulvestranto). Ao termino do tratamento, os animais foram sacrificados e os epididimos foram removidos para determinacao da expressao genica, por PCR quantitativo em tempo real, e da expressao proteica, por Western blot e/ou imunohistoquimica. O tratamento com fulvestranto nao alterou de forma significativa os niveis de RNA mensageiro para Mmp7, em contraste com o aumento de 14X observado nos ductulos eferentes. Entretanto, o tratamento aumentou marcadamente a expressao da proteina no segmento inicial e cabeca do epididimo, que sao regioes com intensa atividade endocitica e secretoria. A localizacao predominantemente supranuclear da proteina sugere que ela pode desempenhar papel na regiao apical e/ou ser secretada para o lume. Na regiao apical poderia regular proliferacao celular, liberacao de fatores de crescimento, clivagem de proteinas de juncoes, entre elas a ocludina e a E-caderina, com possivel repercussao na resistencia das tight junctions e na organizacao da barreira hematoepididimaria. No lume epididimario, poderia contribuir para a apoptose espermatica e clivagem de proteinas da superficie do espermatozoide. O tratamento com fulvestranto nao alterou a expressao genica relacionada a outras proteinas de juncoes, como Ctnnb1 e Cldn7, mas diminuiu a expressao genica e proteica de CDH13. A diminuicao da expressao genica ocorreu principalmente na regiao do corpo, a mais rica em receptor de estrogeno ESR1. CDH13 pode participar tanto de mecanismos de adesao celular como de transducao de sinal, como ocorre com outras proteinas complexadas a glicosilfosfatidilinositol. Os dois genes paralogos, Prom1 e Prom2, parecem ser diferencialmente regulados em ductulos eferentes e nos diferentes segmentos do epididimo. O tratamento com fulvestranto tendeu a diminuir a expressao genica de Prom1 (principalmente da variante 1, em todas as regioes do epididimo, e da variante 2, na regiao da cauda). A analise por Western blot mostrou uma reducao da expressao da PROM1 na regiao do segmento inicial/cabeca, e a imunohistoquimica revelou que o tratamento com o antiestrogeno favoreceu a localizacao da proteina nas microvilosidades das regioes da cabeca e do corpo do epididimo, sugerindo que pode haver um favorecimento da secrecao de vesiculas contendo PROM1 para o lume, o que poderia favorecer a sua incorporacao ao flagelo do espermatozoide, observada na regiao do corpo do epididimo. O tratamento com fulvestranto tambem tendeu a diminuir a expressao genica de Prom2, principalmente nas regioes do corpo e da cauda, mas a analise por Western blot nao revelou nenhuma alteracao do conteudo proteico. Entretanto, a imunohistoquimica revelou um leve aumento da expressao da proteina na regiao da cauda e foi possivel passar a detectar a expressao de PROM2, que era praticamente ausente na regiao da cabeca do epididimo. Em estudo anterior foi observado que o mesmo tratamento com fulvestranto aumentou a expressao do receptor de androgeno AR em todas as regioes do epididimo, especialmente no segmento inicial e cabeca, e a expressao do receptor de estrogeno GPER, na regiao do corpo e da cauda. Alem disso, o tratamento com fulvestranto dimininuiu o nivel tecidual de testosterona e aumentou o de estradiol, na cabeca e na cauda do epididimo. Portanto, e possivel que essas alteracoes tambem tenham um papel na regulacao dos diferentes alvos analisados no presente estudo. Em conclusao, o bloqueio da acao estrogenica afeta a expressao de proteinas importantes para a organizacao epitelial e secrecao epididimarias. A sensibilidade a estrogeno parece variar entre as diferentes regioes do epididimo e essa diversidade regulatoria pode ser importante para controlar funcoes especificas de cada regiao
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    Estereologia do epididimo humano: comparacao morfologica entre diferentes grupos etarios
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 1994) Rubinstein, Irineu [UNIFESP]
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    Estudo do granuloma espermatico do epididimo apos vasectomia em ratos
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 1986) Lamus, Alexis Manuel [UNIFESP]
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    Estudo morfológico dos órgãos genitais masculinos de Meleagris gallopavo(Phasianidae-Galliformes), com ênfase no testículo
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2002) Tonelli, Sandra Maria das Graças Maruch [UNIFESP]; Miraglia, Sandra Maria [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Com o objetivo de contribuir para o conhecimento da biologia reprodutiva do peru Meleagris gafopavo, descreveu-se, nesta pesquisa, a morfologia, histoquimica e morfometria de orgaos genitais masculinos desta especie, utilizando as tecnicas histologicas de rotina, coloracoes histoquimicas e analises morfometricas. O testiculo, epididimo e ducto deferente sao orgaos pares, situados simetricamente de cada lado da linha mediana corporal, no interior da cavidade celomatica. Revestido por delicada tunica albuginea, o testiculo apresenta riqueza em tubulos seminiferos (76,4 por cento do conteudo testicular) e escasso tecido intertubular. No epitelio seminifero sao observadas celulas de Sertoli; espermatogonias (A escura, A clara 1, A clara 2 e 13); espermatocitos e espermatides, em 13 etapas de diferenciacao. O ciclo do epitelio seminifero apresenta 11 estagios, descritos de acordo com as mudancas observadas no acrossoma, forma do nucleo e aspecto da cromatina das espermatides, durante a espermiogenese. O epididimo e constituido pela rede testicular ductulo eferente, ductulo de ligacao e ducto epididimario, mostrando diferencas no epitelio de revestimento, de acordo com a estrutura analisada A positividade aos metodos histoquimicos observada na tunica albuginea, tecido conjuntivo peritubular e membrana basal do epitelio dos tubulos seminiferos e dos componentes das vias genitais, indica presenca de glicosaminoglicanas caboxiladas, sulfatadas, bem como glicoproteinas' ricas em acido sialico. O epitelio seminifero e negativo aos metodos do acido periodicoreativo de Shiff (PAS) e do azul de Alcian. O epitelio dos ductulos eferentes e o unico do epididimo que mostra caracteristicas de celulas secretoras de glicoproteinas neutras. Revestido por epitelio pseudoestratificado prismatico, o ducto deferente e longo e abre-se no urodeo da cloaca, atraves de papila. E positivo aos metodos histoquimicos somente nos segmentos medio e caudal, sendo capaz de secretar glicosaminoglicanas caboxiladas, sulfatadas e glicoproteinas ricas em acido sialico...(au)
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    Expressão de adrenoceptores alfa 1 com a maturação sexual em epidídimo de ratos
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2000) Queiróz, Daniel Barboza Cava [UNIFESP]; Avellar, Maria Christina Werneck de [UNIFESP]
    No presente trabalho caracterizamos a expressao de adrenoceptores a1 presentes na cabeca e cauda do epididimo de ratos em diferentes estagios da maturacao sexual: 40 (animais imaturos), 60 (adultos jovens) e 120 dias de idade (animais adultos). Analisamos os seguintes aspectos: u Determinacao do peso corporal e peso relativo do epididimo. u Dosagem da concentracao plasmatica de testosterona. u Estudos da expressao de RNA mensageiro de subtipos de adrenoceptores a1. u Estudos de competicao da ligacao do [3 H]-prazosin por antagonistas de adrenoceptores a, nao marcados. u Determinacao da concentracao tecidual de monoaminas. Os seguintes resultados foram observados: * A maturacao sexual promoveu um aumento progressivo do peso corporal e do peso relativo da cabeca e cauda do epididimo. u A concentracao plasmatica de testosterona apresentou-se baixa aos 40 dias de idade, aumentando consideravelmente nos animais com 60 dias. Este aumento foi mantido nos animais com 120 dias de idade (animais adultos). u Ensaios de protecao por ribonuclease indicaram que diferentes subtipos de RNA mensageiro de adrenoceptores al sao expressos ao longo do epididimo. Houve predominancia de transcritos ala na cabeca do epidimo, enquanto transcritos a1a e a1d foram abundantes na regiao da cauda. O transcrito a1b foi pouco expresso em ambas as porcoes do epididimo em todas as idades. A maturacao sexual induziu alteracoes especificas da expressao dos transcritos de adrenoceptores a1, dependendo da porcao do epididimo analisada. Na cabeca do epididimo houve uma diminuicao significativa da expressao de transcritos a1a. Na cauda, a expressao do transcrito a1a, diminuiu dos 40 para 60 dias, retomando aos 120 dias de idade aos mesmos valores observados aos 40 dias, enquanto a expressao do transcrito a1d aumentou dos 40 para 120 dias de idade. A observacao de que a expressao diferencial dos transcritos de adrenoceptores a1, ocorre em paralelo com as mudancas dos niveis plasmaticos de testosterona e desenvolvimento do epididimo indica que, possivelmente, estes diferentes transcritos possam estar envolvidos em funcoes especificas do epididimo durante o desenvolvimento sexual. Os antagonistas de adrenoceptores a1 prazosin (antagonista a1 nao seletivo), 5-metil urapidil (antagonista alA seletivo) e BMY 7378 (antagonista a1D seletivo) produziram deslocamento da ligacao do [3 H]-prazosin tanto na cabeca quanto na cauda do epididimo...(au)
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    Expressão e regulação do fator de crescimento epidérmico (EGF) e seu receptor (EGFR) em epidídimo de ratos e humanos
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2009) Patrão, Marilia Tavares Coutinho da Costa [UNIFESP]; Avellar, Maria Christina Werneck de [UNIFESP]
    O fator de crescimento epidérmico (EGF) é um polipeptídeo envolvido na proliferação celular e no crescimento e diferenciação de diferentes órgãos de mamíferos. No trato reprodutor masculino, o EGF e os andrógenos têm um papel conjunto na proliferação e diferenciação dos ductos de Wolff, proliferação de células epiteliais da próstata e espermatogênese. Entretanto, a presença, função e regulação do EGF e de seu receptor (EGFR) no epidídimo não foram completamente elucidadas. Portanto, o objetivo do presente trabalho é caracterizar a expressão e a regulação do EGF e do EGFR (RNAm e proteína) ao longo do epidídimo de ratos. Paralelamente, a distribuição celular do EGFR foi analisada em epidídimo humano. Ensaios de Western blot indicaram que o epidídimo de ratos adultos expressa o precursor do EGF e suas formas parcialmente processadas (190 a 75 kDa), o EGF maduro (9 kDa) e o EGFR (175 kDa). A incubação in vitro do epidídimo com EGF (100 ng/mL, 1-15 min) induziu um aumento dependente do tempo na fosforilação do EGFR (pEGFR), confirmando que o gene Egfr codifica um receptor funcional nesse tecido. Ensaios de imuno-histoquímica demonstraram que o EGF, o EGFR e o pEGFR apresentam um padrão complexo de distribuição nas células epiteliais e intersticiais do epidídimo de ratos, sugestivo de interações autócrinas, parácrinas e justácrinas entre o EGF e seu receptor. A interação lumícrina entre essas proteínas, por outro lado, parece ter pouca influência nesse tecido, uma vez que ensaios de imuno-histoquímica indicaram que a ativação basal do EGFR nas células epiteliais do epidídimo não foi alterada em resposta à deprivação de fatores testiculares induzida pela ligadura bilateral dos dúctulos eferentes. A distribuição do EGFR e do pEGFR em células intersticiais e epiteliais do epidídimo humano e no espermatozóide em maturação também foi dependente do segmento epididimário analisado. De fato, ensaios de imunofluorescência indicaram que a localização do EGFR no espermatozóide de ratos é alterada durante seu trânsito pelo epidídimo, sugerindo que o EGFR está envolvido na maturação espermática. Para avaliar a regulação do EGF e do EGFR por variações na concentração plasmática de andrógenos, ensaios de RT-PCR, Western blot e imuno-histoquímica foram realizados utilizando epidídimos de ratos em diferentes estágios da maturação sexual ou de ratos adultos submetidos à castração cirúrgica. Nossos resultados indicaram que a expressão de RNAm e a imunodistribuição do EGF e do EGFR, assim como a imunodistribuição do pEGFR, são dependentes da região epididimária e do grupo experimental analisado, sugerindo que o hormônio masculino é capaz de direcionar a sinalização mediada pelo EGFR para diferentes tipos celulares ao longo do tecido. Em conjunto, nossos resultados indicam que o EGFR pode ter um papel na manutenção da fisiologia epididimária e na maturação espermática, o que reforça o potencial terapêutico dos fatores de crescimento na melhora da fertilidade masculina. Uma vez que a desregulação da sinalização mediada pelo EGFR e pelo AR está envolvida em uma variedade de carcinomas, o entendimento da regulação da expressão dos fatores de crescimento no epidídimo, um órgão que raramente sucumbe ao câncer, pode também auxiliar na procura de novos alvos terapêuticos para o tratamento dessa patologia..
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    Receptor de glicocorticoide no epidídimo de ratos: expressão, distribuição celular, modulação por hormônios esteroides e papel em parâmetros reprodutivos
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2009-05-27) Silva, Erick José Ramo da [UNIFESP]; Avellar, Maria Christina Werneck de [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
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    Receptores muscarínicos em epidídimo de ratos
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 1998) Marostica, Elisabeth [UNIFESP]; Porto, Catarina Segreti [UNIFESP]
    O objetivo do presente trabalho foi caracterizar os receptores muscarinicos e seus subtipos, em diferentes regioes do epididimo de ratos. Foi utilizado ratos machos, albinos, da colonia BAW com 48 a 52 dias de idade. O epididimo foi isolado e seccionado em tres regioes: cabeca (segmento inicial, cabeca proximal e distal), corpo (proximal e distal) e cauda (proximal e distal). Os seguintes aspectos foram analisados: Estudos de ligacao do [3H]QNB em preparacoes de membranas da cabeca e da cauda do epididimo. - ensaios de cinetica e determinacao da concentracao de proteina, do tempo e da temperatura. - ensaios de saturacao e determionacao dos parametros de ligacao, constante de dissociacao no equilibrio (KD)e densidade de receptor (Bmax). - ensaios de competicao e determinacao da constante de inibicao (Ki) e do logaritmo negativo da constante de inibicao (pKi). Estudo da reatividade farmacologica. - curvas concentracao-efeito simples de carbacol e determinacao do valor de pD2. - registro isometrico das concentracoes esponmtaneas, da concentracao maxima induzida pelo carbacol, na ausencia e na presenca de atropina, metoctramina e HHSiD, e da maxima capacidade contratil induzida pelo BaCl2. Observamos que: .Houve uma relacao linear entre a ligacao especifica do [3H]QNB e a concentracao de proteinas de membrana, a ligacao maxima ocorreu com a concentracao de 240 µg/ml. A concentracao de 160 µg/ml foi utilizada em todos os experimentos. A ligacao especifica do [3H]QNB foi dependente do tempo de incubacao e da temperatura do ensaio. A ligacao especifica do [3H]QNB as membranas epididimais foi maior a 30ºC e atingiu o equilibrio em 60 minutos. Porem, a 4ºC, a ligacao especifica nao foi dependente do tempo. As caracteristicas de especificidade, dependencia do tempo, da temperatura e da concentracao de proteina permitem concluir que a ligacao do [3H]QNB foi feita com um sitio receptor especifico. . Nas condicoes de equilibrio, a ligacao do [3H]QNB as membranas da cabeca e da cauda do epididimo foi especifica, saturavel e reversivel. .A analise do Scatchard revelou a presenca de um unico sitio de ligacao, de alta afinidade, tanto na cabeca como na cauda do epididimo. A afinidade e a densidade de receptores foram maiores na regiao da cauda quando comparada com a cabeca do epididimo. .Os antagonistas muscarinicos: atropina (nao seletivo), pirenzepina (M1-seletivo), metoctramina (M2-seletivo), 4-DAMP (M1/M3-seletivo) e HHSiD (M3-seletivo) produziram um deslocamento da ligacao do [3H]QNB tanto na cabeca como na cauda do epididimo. Nao houve diferenca significativa nos valores de pKi para os antagonistas muscarinicos entre as duas regioes. A ordem de potencia para os antagonistas foi: atropina > 4-DAMP = Metoctramina > HHSiD = pirenzepina. Os valores de pKi para os antagonistas muscarinicos obtidos na cabeca e cauda do epididimo foram comparados com os valores de pKi da literatura, obtidos para os mesmos antagonistas, em tecidos e celulas que expressam cada subtipo de receptor muscarinico. A analise demonstrou que os sitios de ligacao do [3H]QNB presentes no epididimo, correlacionaram-se melhor com o subtipo de receptor muscarinico M2. Os resultados indicam que os receptores muscarinicos do subtipo M2 estao presentes tanto na cabeca como na cauda do epididimo. A presenca de contracoes espontaneas foram observadas em tubulos epididimais da regiao da cauda. O valor de pD2 para o carbacol foi de 6,40 e a contracao maxima induzida pelo carbacol foi bloqueada pela atropina e pelo HHSiD, mas nao pela metoctramina. A maxima capacidade contratil do orgao, observada pela adicao de BaCl2, foi semelhante aquela induzida pelo carbacol. Os resultados indicam que os receptores muscarinicos do subtipo M3 podem estar envolvidos no processo contratil do epididimo de ratos. Em conclusao, nossos estudos demonstram a presenca de receptores muscarinicos na cabeca e na cauda do epididimo. A cauda mostra maior afinidade e maior densidade desses receptores quando comparada com a cabeca. Estudos de competicao com diferentes antagonistas indicaram a presenca do receptor muscarinico M2 em ambas as regoes do epididimo. Porem, receptores muscarinicos M3 tambem estao presentes na cauda do epididimo, e estao envolvidos no processo contratil. Assim, a neurotransmissao colinergica pode ser um fator controlador da contratilidade e/ou da funcao secretoria epididimal, essencial para preservacao do espermatozoide. A melhor caracterizacao dos subtipos de receptores muscarinicos e de suas funcoes nos orgaos genitais acessorios podem ser importantes para abordagem de novos alvos para o tratamento da infertilidade e/ou contracepcao masculina
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    Receptores muscarínicos em órgãos do trato reprodutor masculino de ratos
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2005) Porto, Catarina Segreti [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
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    Resposta do epididimo de ratos a desafio in vivo e in vitro com lipopolissacarideo de E. coli (LPS)
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2006) Rodrigues, Alexandre [UNIFESP]