Navegando por Palavras-chave "Endopeptidases"
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- ItemSomente MetadadadosAspectos bioquimicos e fisiologicos do sistema digestivo do Rhodnius prolixus(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 1978) Garcia, Eloi de Souza [UNIFESP]
- ItemSomente MetadadadosAtividade proteolitica relacionada a sinalizacao por melatonina e calcio em Plasmodium(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2005) Farias, Shirley Leite de Almeida [UNIFESP]
- ItemAcesso aberto (Open Access)Avaliação morfológica de diferentes técnicas de desepitelização da membrana amniótica humana(Conselho Brasileiro de Oftalmologia, 2007-06-01) Melo, Gustavo Barreto de [UNIFESP]; Gomes, José Álvaro Pereira [UNIFESP]; Glória, Maria Aparecida da [UNIFESP]; Martins, Maria Cristina [UNIFESP]; Freymüller-Haapalainen, Edna [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)PURPOSE: To evaluate the morphological features of the amniotic membrane denuded by different techniques. METHODS: Human amniotic membrane was collected at the time of delivery, fixed in increasing concentrations of glycerol (0-50% in DMEM) and preserved at -80ºC until the time of use. The study consisted of 4 groups: intact epithelium (control) and denuded by trypsin (2 mg/mL at 1:250), dispase (1.2 U/mL in Mg2+ and Ca2+ free Hank's balanced salt solution) or ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA), 0.02%. Specimens were submitted to electron (scanning and transmission) microscopy analysis. RESULTS: Scanning electron microscopy disclosed intact epithelium in the control group and its absence in the amniotic membranes denuded by trypsin and dispase. In those denuded by ethylenediaminetetraacetic acid there were areas with and without epithelium. When assessed by transmission electron microscopy, the epithelium was intact and firmly adhered to the basement membrane by hemidesmossomes in controls and in parts of ethylenediaminetetraacetic acid group. There were only collagen fibers in the dispase- and trypsin-treated groups. CONCLUSIONS: Trypsin and dispase treatment of the amniotic membrane may cause complete denuding of the epithelium and basement membrane whereas ethylenediaminetetraacetic acid may leave some intact epithelium-areas and partially destroy the basement membrane in others.
- ItemSomente MetadadadosAvancos na caracterizacao biologica da protease trombica Lachesis muta muta(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2000) Magalhaes, Henrique Pimenta Barroso [UNIFESP]1) Quanto ao efeito de cations mono e bivalentes na atividade amidasica da PTLmm sobre BZ-L-Arg-pNA, concluimos que a enzima em estudo e ativada significativamente pelo sodio (Na+) e inibida fortemente pelo cadmio (cd2+). 2) Quanto aos estudos cineticos da PTLmm frente a varios substratos fluorogenicos, que mimetizam o sitio de clivagem da trombina na cadeia (x e P do fibrogenio, no fator XIII, na protrombina; concluimos que a PTLmm apresentou maior especificidade pelos substratos que mimetizou a cadeia a do fibrogenio, sendo que a medida que aumentamos o tamanho do substrato, aumentou de modo direto a especificidade da enzima pelo substrato. A PTLmm nao hidrolisou o substrato de protrombina. 3) Quanto aos estudos cineticos da PTLmm frente aos substratos fluorogenicos que mimetizam o sitio de clivagem da calicreina plasmatica humana no cininogenio de alto peso molecular; concluimos que a PTLmm hidrolisou com efiCiência somente o substrato que mimetiza a sequencia carboxi-terminal do cininogenio, nao hidrolisou o substrato que mimetiza a sequencia N-terminal do cininogenio e nem o substrato maior que mimetiza a sequencia LeU373 _ lle 393 do cininogenio humano. Pelas experiencias com substratos sinteticos justificamos o fato da PTLmm nao ter atividade cinina liberadora. 4) Os diferentes substratos fluorogenicos com ligacoes Arg-X, potencialmente clivaveis pela PTLmm, nao sofreram hidrolise pela enzima, confirmando a natureza especifica da enzima pela cadeia a do fibrinogenio e pelos substratos que a mimetizam. 5) A PTLmm hidrolisou o substrato do receptor plaquetario de trombina de modo diferente da trombina, a trombina quebra somente a ligacao Arg@ser desencadeando o processo de agregacao, a PTLmm quebra in vitro a ligacao Arg@ser e outra ligacao Arg@Asn. 6) A PTLmm nao hidrolisou a cadeia P da insulina (substrato natural) que contem ligacao Arg-Gly, confirmando sua especificidade natural para quebra de ligacao Arg-Giy na cadeia a do fibrinogenio. 7) A curva de pH x atividade da PTLmm nos permitiu fixar a faixa de pH entre 8 e 9 com o pH adequado para maximizar a atividade da PTLmm sobre substratos fluorogenicos. 8) O estudo in vitro com fatores de coagulacao, nos permitiu concluir que a PTLmm tem atividade dirigida para...(au)
- ItemSomente MetadadadosCaracterização de ciminases purificadas a partir de urina humana utilizando substratos com apagamento intramolecular de fluorescência(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2000) Quinto, Beata Marie Redublo [UNIFESP]; Casarini, Dulce Elena [UNIFESP]Cininase e uma denominacao geral para enzimas proteoliticas capazes de inativar cininas como bradicinina (BK), lisil-bradicinina (LBK) e metionil-lisil-bradicinina (MLBK). Em estudos anteriores realizados em nosso laboratorio, foram purificadas de urina de individuos normais, atraves de cromatografia em DEAE-celulose, 8 enzimas com atividade cininasica: duas atividades do tipo carboxipeptidase, duas enzimas conversaras de angiotensina I, duas serino endopeptidase (Hl e H2), uma prolil endopeptidase (H) e uma endopeptidase neutra (NEP-Iike). Neste trabalho, com o objetivo de estabelecer um metodo extremamente sensivel para a quantificacao de endopeptidases, purificamos e caracterizamos 4 enzimas, a partir de urina humana, que foram classificadas com base nos estudos de inibicao e ligacao hidrolisada na molecula de BK, como serino tiol endopeptidase (H2), serino endopeptidase (Hl), prolil endopeptidase (H) e endopeptidase neutra (NEP-Iike). Para tanto utilizamos o substrato com apagamento intramolecular da fluorescencia AbzOBKQOEDDnp, bem como testamos diversos substratos fluorogenicos para estudar a especificidade das referidas enzimas. A prolil endopeptidase e uma tiol metalo endopeptidase sendo inibida por EDTA, 2-ME e POHMB. A serino endopeptidase Hl foi inibida por PMSF e a serino tio[ endopeptidase H2 alem de ser inibida por PMSF foi tambem inibida por E64 e POHMB. A NEP-Iike foi inibida por fosforamidom, tiorfam e OPA. Os substratos fluorogenicos Abz-FPQ-EDDnp, Abz-FGQ-EDDnp, AbzFRQ-EDDnp e Abz-FDQ-EDDnp foram determinados especificos para as enzimas H, Hl, H2 e NEP-Iike respectivamente. O Km encontrado foi da ordem de mM para estes substratos, bem como para Abz-BKQ-EDDnp. Utilizando o substrato Abz-BKQ-EDDnp a atividade maxima encontrada para a prolil endopeptidase foi em 9,0; para a serino endopeptidase Hl foi em 7,0 e 8,5, e para a NEP-Iike foi em 7,0 e 8,0. Quando utilizamos os substratos especificos para cada enzima encontramos atividade maxima nos seguintes pHs: 6,5 e 8,0 para a prolil endopeptidase, utilizando o substrato Abz-FPQ-EDDnp; 5,5 e 8,0 para a serino Hl utilizando o substrato Abz-FRQ-EDDnp; e 6,0 e 7,0 para a NEP-/ike utilizando o substrato Abz-FDQ-EDDnp. Para a endopeptidase H2 nao foi possivel determinar o pH otimo de atividade. Os pesos moleculares determinados para a prolil endopeptidase, 45 kDa; para a serino endopeptidase Hl, 49 kDa...(au)
- ItemSomente MetadadadosCaracterizacao de endopeptidase hepatica cinino-inativadora(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 1998) Molina, Hercilia Maris [UNIFESP]Verificamos em trabalhos anteriores que o figado perfundido possui grande capacidade de inativar a bradiclnina e purificamos cininase cininoinativadora. Removemos do figado, e purificamos, esta endopeptidase cininoinativadora (BIE). Sua remocao do ligado de rato previamente exsanguinado foi obtida perfundindo-se o orgao com Krebs-Henseleit-bicarbonato contendo Triton X-IOO O,05 por cento . A localizacao celular da enzima pode ser suposta (pela quantificacao de enzimas co-removidas) mas novos experimentos sao necessarios para demonstra-la. A purificacao da cininase envolveu as etapas de cromatografia em coluna de troca ionica (QAE Cellex), coluna de gel filtracao (Sephacryl S- 300) e coluna de afinidade em coluna de Blue Sepharose CL-6B. A enzima purlficada (BIE) hidrolisa eficientemente os substratos analogos a bradicinlna: Abz-R-P-P-G-F-S-P-F-R-EDDnp (na ligacao F 5S6 ) e Abz-R-P-P-G-F-S-P-F-R-Q-EDDnp (na ligacao P7F 8) . A Introdução do residuo de glutamina na posicao C-terminal da bradicinlna mudou a ligacao de hidrolise, por mecanismo ainda nao elucidado. O substrato Abz-F-R-K(Dnp)P, preferencial da enzima conversara de 2 3) anglotensina (ECA), foi hidrolisado pela BIE (na ligacao R K com efiCiência desprezivel, quando comparada a da ECA. A atividade da BIE foi 'n'bida por reagentes bloqueadores de grupo tiol (p-CXM), indicando que a enzima contem pelo menos um grupo tiol livre e importante para sua atividade; a adicao de cisteina ao meio de incubacao reverteu a inibicao. A BIE foi tambem inibida por inlbidores inespecificos de cisteinoproteases (p- e Ac Hg), que reagem com a sulfidrila de residuos de cisteina. A endopeptidase nao foi inibida por lnibidor especifico de I cisteinoproteases (E64), sugerindo que o residuo de cisteina, embora essencial Para sua atividade, nao esta no sitio ativo da enzima. A cininase foi inibida por agentes quelantes (EDTA e orto-fenantrolina), mas nao por captopril e enalapril (inibidores especificos da ECA). Estes resultados sugerem ser a BIE metaloendopeptidase, contendo grupo tiol importante para sua atividade. Estas caracteristicas bioquimicas sao vi similares as descritas para a enzima EC 3.4.24.14 (thimet oligoendopeptidase, TOP). A BIE tem a mesma migracao eletroforetica (PAGE) da EC 3.4.24.15 e em immunoblotting reconhece o anticorpo especifico antl-EC 3.4.24.15. As duas enzimas hidrolisam os substratos Abz-R-P-P-G-F-S-P-F-R-EDDnp e Abz-G-G-F-L-R-R-V-EDDnp (analogo a dinorfina A....(au)
- ItemSomente MetadadadosCaracterização de uma arginil endopeptidase e um inibidor de tripsina das sementes de Dioclea glaba Benth(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 1994) Bueno, Norlene Regina [UNIFESP]; Sampaio, Claudio Augusto Machado [UNIFESP]
- ItemSomente MetadadadosCoagulação sanguínea: ação de substratos e de inibidores peptídicos(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2003) Andrade, Sonia Aparecida de [UNIFESP]; Oliva, Maria Luiza Vilela [UNIFESP]BuXI, o inibidor do tipo Kunitz isolado das sementes de B. ungulata inativa fator Xa, calicreina plasmatica humana, tripsina e o LOPAP, ativador de protrombina isolado das cerdas da lagarta Lonomia obliqua. BvTI, isolado das sementes de B. variegata,l extensamente (70 por cento) homologo a BuXI, inibe tripsina mas nao inibe fator Xa e LOPAP. A diferenca mais marcante entre os sitios reativos de BuXI e BvTI encontra-se nos residuos Met59, Met66 e Thrs7. As constantes de inibicao medidas foram confirmadas para tripsina e fator Xa,1 em sistema Biacore. BuXI tambem inibe o fator Xa no complexo protrombinase. A hidrolise de substratos peptidicos de fluorescencia apagada, sintetizados com base nos sitios reativos desses inibidores, foi estudada com fator Xa, LOPAP,1 calicreina plasmatica, calicreina pancreatica de porco, trombina e tripsina. Abz-VMIAALPRTMFIQ-EDDnp,l peptideo modelo baseado em BuXI, foi eficientemente hidrolisado fator Xa, mas nao Abz-WISALPRSLFIQ-EDDnp baseado em BvTI. A influencia do numero de residuos de aminoacidos, para a interacao com o tor Xa, foi demonstrada pelo decrescimo de efiCiência catalitica da hidrolise de bstratos de cadeia mais curta. Contudo, para trombina, tais mudancas foram de eito menor. Devido a constatacao de que BuXI deixa de inibir o fator Xa apos ser oxidado, a articipacao dos residuos de metionina para a interacao enzima-substrato foi estudada. ais residuos efetivamente estao envolvidos nas reacoes catalisadas por fator Xa e OPAP como demonstrado na serie de substratos peptidicos baseados nos sitios ativos de BuXI e BvTI, que e desprovido de metionina...(au)
- ItemSomente MetadadadosDeterminação da sequência primária do inibidor glicosilado das sementes de Bauhinia rufa(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2003) Sumikawa, Joana Tomomi [UNIFESP]; Oliva, Maria Luiza Vilela [UNIFESP]Objetivo principal: Isolar e caracterizar a glicoproteina que apresenta atividade inibitoria de elastase detectada no extrato das sementes de Bauhinia rufa. Metodos: O inibidor foi purificado por precipitacao por acetona (80 por cento v/v), cromatografia de afinidade Con A Sepharose, cromatografia de troca ionica (HiTrap Q e ResourceTM Q em sistema FPLC), cromatografia de filtracao em gel SuperdexTm 200 (sistema FPLC) e cromatografia de fase reversa em coluna C1$ (sistema HPLC). gBrEl foi analisado por SDS PAGE para analise da massa molecular e deteccao de carboidratos. Resultados: pela analise eletroforetica o inibidor com atividade anti elastasica apresentou-se como uma cadeia unica com uma massa molecular aproximadamente de 20 kDa e pela coloracao com reagente de Schiff confirmou a presenca de carboidratos na estrutura da proteina. gBrEl inibe elastase pancreatica de porco e nao inibe elastase de neutrofilo humana, calicreina plasmatica humana, calicreina pancreatica de porco e tripsina. Atraves da analise por sequenciamento, a proteina e composta por 143 residuos de aminoacidos e o sitio de glicosilacao foi detectado em Asn 38 apresenta Mr. 1170 por espectrometria de massa. Discussao: A metedologia empregada para a purificacao do inibidor de elastase obteve rendimento de 21 e purificacao de cerca de 306 vezes. A constante de inibicao da elastase e de 6,18.10-8 M e a estequiometria de reacao e 1:2. Atraves da analise de similariedade (FASTA program) gBrEl apresenta-se muito similar aos inibidores da familia Kunitz de plantas e pela comparacao conservativa do sitio reativo, o...(au)
- ItemSomente MetadadadosEndopeptidases com atividade cininásica isoladas da urina humana: purificação e caracterização de uma cininase do tipo quimotripsina(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 1988) Casarini, Dulce Elena [UNIFESP]; Stella, Regina Celes de Rosa [UNIFESP]
- ItemSomente MetadadadosEnzimas proteolíticas no veneno de aranha marrom (Gênero Loxosceles): identificação, caracterização bioquímica e sua relevância biológica(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2002) Silveira, Rafael Bertoni da [UNIFESP]; Dietrich, Carl Peter von [UNIFESP]Os acidentes envolvendo aranhas marrons (genero Loxosceles) tem sido descritos como causadores de dois sinais clinicos distintos de grande importancia medica. As lesoes na pele, caracterizadas inicialmente por uma reacao inflamatoria que progride para uma lesao dermonecrotica com espalhamento gravitacional, e os efeitos sistemicos compostos por desordens hematologicas como anemia hemolitica, trombocitopenia e coagulacao intravascular disseminada, bem como outros disturbios como falencia renal, febre, fraqueza, nausea e vomito. Apesar dos mecanismos moleculares pelos quais os venenos de aranhas marrons causam estes efeitos patologicos serem complexos e obscuros, eles permanecem sob continua investigacao e muitos relatos na literatura apontam para enzimas proteoliticas como importantes agentes para o desenvolvimento do loxoscelismo. A presente dissertacao e um estudo mais aprofundado da relevancia biologica e das propriedades bioquimicas das enzimas proteoliticas presentes nos venenos de aranhas marrons, bem como uma descricao do aparato produtor de veneno nestes animais. O veneno de Loxosceles intermedia contem duas serino proteases de alta massa molecular, ativadas pelo tratamento com proteases exogenas, com estreita (ou especifica) especificidade de substrato. Tambem e relatado aqui o dano aos vasos sanguineos e os efeitos trombogenicos observados durante o loxoscelismo experimental, alem de uma caracterizacao bioquimica mais detalhada da atividade fibrinogenolitica presente em venenos de Loxosceles. A glandula de veneno de L. intermedia e uma estrutura muscular de formato bulbar, diretamente conectada a quelicera da aranha. Esta glandula possui um epitelio no seu lumen, com um mecanismo holocrino de secrecao do veneno. A glandula exibe, entre o epitelio e os feixes musculares, matriz extracelular conjuntiva e membrana basal. Uma vez que as atividades proteoliticas tambem sao identificadas no extrato de glandula de aranhas marrons, com as mesmas metaloproteases com atividades gelatinolitica, fibronectinolitica e fibrinogenolitica como previamente descrito para o veneno eletroestimulado, fica evidente que estes sao componentes proprios do veneno. Este resultado responde a critica da possivel contaminacao do veneno com enzimas hidroliticas presentes nas secrecoes orais e abdominais da aranha, durante o processo de obtencao do veneno
- ItemSomente MetadadadosEnzimas urinarias tubulares na glomerulonefrite aguda(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 1999) Naghettini, Alessandra Vitorino [UNIFESP]Nos ultimos anos, tem sido valorizado o papel das alteracoes tubulo-interticiais na progressao das doencas renais. A falta de literatura medica referente as disfuncoes tubulares na glomerulonefrite aguda nos alertou para a necessidade de avaliacao de alguns aspectos da funcao tubular nessa patologia. Este trabalho visa investigar possivel disfuncao tubular entre criancas portado de glomerulonefrite aguda pos-infecciosa, atraves da avaliacao da acao de e com atividade no tubulo proximal e distal. 17 criancas com idade de 2,3-10,4 anos, portadoras de glomerulonefrite foram acompanhadas por um periodo de 6 meses. Apos os primeiros resultado optamos por manter algumas dessas criancas (8) em acompanhamento por 1 ano. As enzimas com atividade principal no tubulo distal, prolil-endopeptidase, serino-proteinases, apresentaram elevacao progressiva da enzimuria ate o periodo de meses de acompanhamento, com diluicao desses valores aos 12 meses seguimento. Com relacao as enzimas com maior acao no tubulo proximal, obtivemos resultados diferentes. A endopeptidase neutra-like apresentou aumento da atividade ja no momento do diagnostico, que se manteve durante os 6 primeiros meses, diminuindo no final do primeiro ano. A enzima conversora de angiotensina cursou com minima variacao durante todo o periodo de seguimento. Entre as enzimas urinarias avaliadas, o padrao de variacao e compativel com a disfuncao tubular nos primeiros 6 meses de evolucao da glomerulonefrite aguda. A analise dos dados obtidos demonstra ainda que o tubulo distal fica mais intensamente comprometido durante a doenca
- ItemSomente MetadadadosEspecie e tecido-especificidade das Thimet oligopeptidases (EC3.4.24.15 e EC3.4.22.19)(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 1997) Hayashi, Mirian Akemi Furuie [UNIFESP]A metalo-endooligopeptidase recombinante de testiculo de rato (EC 3.4.24.15 ou EOP 24.15) e a endo-oligopeptidase A de cerebro de coelho ou EOPA (outrora denominada de EC 3.4.22.19) foram comparadas, lado a lado, quanto as suas propriedades fisico-quimicas mais marcantes e quanto a sua especificidade por oligopeptideos. Em relacao a distribuicao tecidual em ratos e coelhos, nao foi possivel estabelecer nenhuma correlacao entre os niveis de atividade enzimatica no citosol e os niveis de RNA mensageiro codificante para a metalo-endooligopeptidase 24.15 (EOP 24.15). Os resultados sugerem que a atividade de metabolizacao de neuropeptideos predominante no citosol, atribuida a metalo-endooligopeptidase 24.15 (EOP 24.15), deva provavelmente ser determinada pela atividade de pelo menos duas enzimas citosolicas distintas, sendo uma predominante no testiculo de ratos (EOP 24.15) e a outra no cerebro e testiculo de coelho, e possivelmente, no cerebro de rato tambem (EOPA). Tanto a EOPA como a EOP 24.15 sao ativadas por DTT e inibidas irreversivelmente por compostos derivados da dinorfina marcados com grupamento SH-reativos, alem de nao serem inibidas por EDTA de forma proporcional a concentracao. Estas enzimas exibem a mesma especificidade frente a uma serie de peptideos bioativos, exceto quanto ao LH-RH e substancia P, que sao hidrolisados apenas pela EOP 24.15. Analisando todos os resultados observados, podemos concluir que e improvavel que a EOP 24.15 de testiculo de rato e a EOPA de cerebro de coelho sejam a mesma proteina, embora devam pertencer a uma mesma familia de oligopeptidases. Visando a determinacao da sequencia primaria da EOPA, o cDNA de uma biblioteca de cerebro de coelho, identificado atraves da selecao com anticorpo policlonal monoespecifico anti-EOPA, foi clonado e sequenciado. A sequencia primaria deduzida deste cDNA apresenta o omotifo tipico das metalo-proteases [HEXXH] , sem ter contudo, homologia significativa com proteases ou oligopeptidases conhecidas, incluindo a EOP 24.15. Por outro lado, foi observado um alto grau de homologia (~ 88% da sequencia num segmento de aproximadamente 400 pb) com a regiao rica em cisteinas, aparentemente envolvida na ligacao de citocinas, presente na proteina ohevino, e que parece exercer um papel importante na facilitacao da migracao dos linfocitos (Springer e cols., 1995). Ainda nao foi possivel expressar a proteina recombinante integra para que a atividade especifica caracteristica da endooligopeptidase A de cerebro de coelho fosse verificada, porem ensaios imunologicos realizados com anticorpos produzidos contra a proteina recombinante parcial e a distribuicao do RNA mensageiro correspondente nos diversos tecidos do coelho sugerem que o cDNA em questao codifica para a endooligopeptidase A, responsavel pela atividade de metabolismo de neuropeptideos no citosol de cerebro de coelho
- ItemSomente MetadadadosEstrutura primaria de inibidores de enzimas digestivas extraidos de sementes de Algaroba (Prosopis juliflora)(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 1995) Negreiros, Andre Newton do Monte [UNIFESP]
- ItemSomente MetadadadosEstudo comparativo da expressao da endopeptidase neutra em tecidos e urina de ratos Wistar e espontaneamente hipertensos (SHR)(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2008) Watanabe, Ingrid Kazue Mizuno [UNIFESP]
- ItemSomente MetadadadosExpressao da endopeptidase neutra nas celulas mensangiais em cultura(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2004) Ebihara, Fabiana [UNIFESP]A endopeptidase neutra (NEP) e uma metalopeptidase de 94 kDa que se localiza na superficie celular, sendo a principal enzima do ciclo de degradacao dos peptideos natriureticos, sendo tambem responsavel pela hidrolise da bradicinina (BK) e da angiotensina (Ang) I, alem de muitos outros substratos biologicamente ativos. A inibicao da enzima conversora de angiotensina I (ECA) e bastante conhecida como tratamento anti-hipertensivo, entretanto, estudos recentes demonstraram que a inibicao da NEP aumenta nao so os niveis do peptideo natriuretico atrial (ANP), como tambem da BK, levando a sintese dos inibidores de vasopeptidases que inibem a NEP e a ECA simultaneamente. Estes, por inibirem o sistema renina-angiotensina e ao mesmo tempo estimularem o sistema do peptideo natriuretico, diminuem a vasoconstricao, aumentam a vasodilatacao, melhoram o equilibrio sodio/agua e, desta maneira, diminuem a resistencia vascular periferica e pressao arterial, tornando melhor o fluxo sanguineo local. Estudos com celulas mesangiais tem sido continuamente realizados a fim de esclarecer a fisiologia deste importante tipo celular que recobre os capilares do glomerulo. A presenca da NEP nas celulas mesangiais foi investigada, devido a importancia fisiologica da mesma na modulacao de respostas pressoricas, uma vez que estas celulas controlam a funcao glomerular e sao responsaveis pela sintese de varios componentes do sistema renina angiotensina. A partir do lisado de celulas mesangiais, a endopeptidase neutra-like foi purificada utilizando-se cromatografia de troca ionica em coluna Mono-Q, seguida por gel filtracao em coluna Superdex-200. A NEP-like isolada hidrolisou a molecula de BK na ligacao G4-F5, descrita como preferencial para sua acao endopeptidasica; bem como foi responsavel pela hidrolise dos substratos fluorogenicos Abz-BKQ-EDDnp e Abz-dRRL-EDDnpa(au)
- ItemSomente MetadadadosIdentificação da expressão de proteases intracelulares e extracelulares no desenvolvimento renal de ratos: correlação com o fator de crescimento hepatócito (HGF)(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2004) Cabrera, Adriana [UNIFESP]; Santos, Oscar Fernando Pavão dos [UNIFESP]
- ItemSomente MetadadadosIsolamento e caracterização de genes codificadores de cisteína proteinases de amastigotas de Leishmania (L.) amazonensis(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2003) Castanho, Fernanda Lasakosvitsch [UNIFESP]; Mestriner, Clara Lúcia Barbiéri [UNIFESP]O enfoque do presente trabalho foi o isolamento e a caracterizacao de dois genes codificadores de cisteina proteinases de formas amastigotas de L. (L.) amazonensis, LIacys1 e Llacys2. O gene Llacys1 foi obtido pela amplificacao por PCR, utilizando-se oligonucleotideos derivados da regiao codificadora do gene Lpcys1 de Leishmania (L.) pifanoi e DNA genomico de L. (L.) amazonenses, originando um fragmento de 1.08 kb. O gene Llacys1 foi clonado e sequenciado e a analise da sua sequencia mostrou que ele apresenta alta identidade com genes codificadores de cisteina proteinases de varias especies de Leishmania, tais como Lpcys1 de L. (L.) pifanoi, Lmcpa de L. (L.) mexicana, cpa de L. (L.) major e Ldccys2 de L. (L.) chagasi. A analise da sequencia predita de aminoacidos mostrou que a proteinase codificada pelo Llacys1 apresenta a pre e a pro-regiao, assim como os residuos conservados de cisteina e histidina presentes no sitio catalitico dessas enzimas e os motivos conservados caracteristicos de cisteina proteinases do tipo catepsina L. Foram tambem observados nessa sequencia alguns provaveis epitopos de classe I e II do MHC. Dois clones foram isolados de uma genoteca de cDNA de amastigotas de L. (L.) amazonensis previamente construida em vetor AZipLox, 2A1 e 3A, que apresentaram 100 por cento de identidade com o gene Llacys1, porem diferiam entre si em relacao ao numero de tratos de pirimidina presentes nas suas regioes 3'UTR. A expressao do gene Llacys1 em sistema bacteriano so foi possivel apos a eliminacao do seu peptideo sinal, utilizando a amplificacao por PCR a partir da segunda metionina e resultando um fragmento de 870 pb denominado Llacys1'. A expressao do Llacys1' em E. coli gerou uma proteina recombinante que nao foi reconhecida pelo AcMo 2E5D3, reativo com a cisteina proteinase de 30 kDa, p30, de L. (L.) amazonensis, indicando que o gene Llacys1 codifica uma cisteina proteinase diferente da p30. O gene Llacys2 de L. (L.) amazonensis foi isolado da...(au)
- ItemSomente MetadadadosNovas isoformas da enzima conversora de angiotensina I: isoforma de 90/80 kDa como possível marcador genético de hipertensão(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2003) Casarini, Dulce Elena [UNIFESP]
- ItemSomente MetadadadosPapel intracelular e extracelular das oligopeptidases(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 1997) Cabrera, Adriana [UNIFESP]; Camargo, Antonio Carlos Martins de [UNIFESP]