Navegando por Palavras-chave "Cryptococcus neoformans"

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    A aspartil aminopeptidase APE4 contribui para os atributos de virulência em Cryptococcus neoformans
    (Universidade Federal de São Paulo, 2016-05-31) Gontijo, Fabiano de Assis [UNIFESP]; Vallim, Marcelo Afonso [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Cryptococcus neoformans is an opportunistic pathogenic fungus of human beings that infects mainly immunocompromised patients. When left untreated can lead to death and due to similarities between fungal cells and animals, antifungal compounds available to treat mycoses are limited and usually result in toxicity to the host. Still, literature brings reports of clinical and environmental strains with antifungal resistance of canonical usage. This limitation takes investigators to extend the knowledge on the biology of pathogenic fungi in search of new therapeutic targets and drugs. Therefore, Dr. Marcelo A. Vallim generated a mutant library by random inserting a cassette that confers resistance to neomycin that was mediated by Agrobacterium tumefaciens that aim was to identify mutants unable to grow on mammalian physiological temperature (37°C). This mutant library was described by de Gontijo et al. (2014). Among the various mutants sensitive to 37°C, we identified one with the interruption in the APE4 gene that encodes the protein aspartyl aminopeptidase. In Saccharomyces cerevisiae, the metalloproteinase family M18 Ape4 is activated by nitrogen deprivation. This protein is involved in Autophagy, and also part of the pathway of transport cytoplasm to vacuole targeting (CVT) along with proteins, Atg11 and Ams1 Ape1, Atg19. The lack of Ape4 protein in S. cerevisiae does not prevent growth to high temperature, however, in C. neoformans the ape4 mutant does not grow at 37°C, produces less melanin and features lower capsular volume at 30°C and 37°C. The ape4 strain features increased sensitivity to antifungal fluconazole and lower survival within macrophages (p<0.05) when compared with wild strains (KN99) and reconstituted (ape4 + APE4), yet, the ape4 mutants are avirulent in animal model. The experiments with fusion protein GFP
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    Avaliação da importância do gene MSL1 para a via de captação de aminoácidos em Cryptococcus neoformans e a sua relação com a virulência
    (Universidade Federal de São Paulo, 2021-08-06) Oliveira, Mateus Possari [UNIFESP]; Pascon, Renata Castiglioni [UNIFESP]; Martho, Kevin Felipe Cruz; http://lattes.cnpq.br/3222282659352681; http://lattes.cnpq.br/4203540318082044; http://lattes.cnpq.br/0972853582461107
    Cryptococcus neoformans é uma levedura patogênica oportunista que durante seu ciclo de vida tem como principal desafio se adaptar às mudanças ambientais, pois pode ser encontrado no ambiente, em troncos de árvore em decomposição, excretas de pombo, mas também possui a capacidade de colonizar animais e humanos, principalmente os imunocomprometidos. Neste caso, pode causar Infecções Fúngicas Invasivas (IFIs) em vários sítios corpóreos, inclusive no sistema nervoso central, quando o quadro se agrava para meningite fúngica que pode ser fatal. Estes tipos de infecções são de difícil tratamento, principalmente quanto à falta de fármacos no mercado, sendo que os poucos existentes tem baixa toxicidade seletiva causando inúmeros efeitos colaterais. Neste contexto, estudar a biologia básica desta levedura vem se tornando cada vez mais necessário para a identificação de novos alvos específicos e eficazes para o desenvolvimento de novos antifúngicos. Segundo estudos do grupo de Cryptococcus do Laboratório de Interações Microbianas da UNIFESP (LIMic), as vias de captação de aminoácidos por permeases se destacam por serem essenciais para a sobrevivência e virulência de C. neoformans. Além disso, a expressão destes transportadores está, em parte, sob o controle da via de sinalização governada por Ras1. Sabese que a transcrição dos vários genes que codificam as permeases de aminoácidos em C. neoformans foi reduzida no mutante Δras1, porém o mecanismo por trás disso ainda não está totalmente esclarecido. No organismo modelo, S. cerevisiae e no patógeno oportunista, C. neoformans, o gene MSL1 codifica uma proteína que é conhecida por regular negativamente a via de sinalização de Ras/cAMP. Além disso, a proteína codificada por MSL1 regula a expressão gênica junto aos complexos de enovelamento da cromatina. Ainda, os dados da literatura sugerem que a deleção de MSL1 em C. neoformans levou a falha na indução da expressão da permeasse AAP5. Portanto, este trabalho de conclusão de curso tem como objetivo testar a hipótese de que Ras1 controla a expressão das permeases de aminoácido em C. neoformans por meio de sua proteína efetora Msl1. Para tanto, o gene MSL1 foi deletado em C. neoformans sorotipo A. A análise fenotípica demonstrou que MSL1 (i) codifica uma proteína importante para a resposta ao estresse, principalmente de membrana, parede e osmótico, sendo os dois últimos através de Ras; (ii) está envolvida na produção de melanina e possivelmente (iii) na produção de urease; bem como, (iv) a expressão de algumas das permeases de aminoácidos, foram alteradas no mutante Δmsl1. Os dados permitem concluir que Msl1 funciona como um efetor de Ras na captação de aminoácidos, porém, como esta proteína possui diversas funções regulatórias ligadas à sinalização e às modificações na cromatina, não foi possível identificar de qual modo ela atua na modulação da expressão das permeases de aminoácidos
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    Avaliação dos perfis de susceptibilidade a antifúngicos e cariotipagem eletroforética de isolados clínicos de Cryptococcus neoformans, do Brasil, Chile e Venezuela, segundo variedades e sorotipos
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 1999) Calvo Morales, Belinda Milagros [UNIFESP]; Gompertz, Olga Fischman [UNIFESP]
    Para investigar os perfis de susceptibilidade e cariotipagem eletroforetica ( segundo areas geograficas estudadas, variedades, sorotipos e presenca de infeccao por HIV foram analisados 100 isolados clinicos de Cryptococcus neoformans, de 93 pacientes de ambos os sexos, de idade variaveis, com ou sem alteracao da funcao imune. As cepa provinham das regioes norte, nordeste, sudeste e sul do Brasil (69), do Chile (11) e da Venezuela (20). De cada paciente foi colhida, pelo menos, uma amostra para exame microscopico direto e cultivo, no inicio e durante o tratamento quando possivel. De seis pacientes com primoinfeccao e um com recorrencia foram obtidos isolados sequenciais Foi empregado o meio canavanina-glicina-azul de bromotimol (CGB) para separar a variedades de C. neoformans. Foi realizado o teste de susceptibilidade a anfotericina B, 5 fluorocitosina, fluconazol e itraconazol, comparativamente, pelo metodo de microdiluicao, segundo National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS) e modificacao usando o meio de YNB. Em 75 amostras a sorotipagem foi realizada pela tecnica de aglutinacao em lamina (Crypto Check Iatron Co. Japao). CE atraves de eletroforese em campo pulsatil (PFGE), no sistema counter-clamped homogeneus electric field (CBEF) foi investigada em 51 cepas. Observaram-se 89 amostras da variedade neoformans, sendo pesquisado o sorotipo em 64 delas. Sorotipo A foi observado em 60, sorotipo D em uma e sorotipo AD em tres amostras. Entre 11 isolados da variedade gattii, nove pertenciam ao sorotipo B e dois, ao sorotipo C. As cepas exibiram alta susceptibilidade aos antifungicos testados. Nao houve diferencas significativas das CIMs das amostras investigadas no Brasil, nem entre essas e as dos outros paises e entre aquelas de pacientes com ou sem infeccao por HIV. No entanto, foram identificados distintos padroes de susceptibilidade a azolicos entre isolados de arnbas as variedades. O crescimento foi satisfatorio tanto no meio RPMI-1640 como em YNB. Indice de concordancia de 97 por cento foi obtido para fluconazol, com leituras realizadas apos 72 horas em RPMI-1640 versus 48 horas em YNB, o que sugere leituras mais precoces de ensaios com YNB para esse antifungico. A susceptibilidade de cepas sequenciais de sete casos nao mostrou diferencas significativas das CIMS, na maioria delas. A variacao do numero de cromossomos foi de seis a 11 e o peso molecular de 450/565 a 2200 Kb...(au)
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    Biological activity of Cryptococcus neoformans and Cryptococcus gattii from clinical and environmental isolates
    (Sociedade Brasileira de Patologia ClínicaSociedade Brasileira de PatologiaSociedade Brasileira de Citopatologia, 2013-06-01) Barbosa Junior, Antonio Marcio; Santos, Bruno Fernandes De Oliveira [UNIFESP]; Carvalho, Erick De Oliveira; Mélo, Dângelly Lins Figuerôa Martins De; Trindade, Rita De Cássia; Stoianoff, Maria Aparecida De Resende; Universidade Federal de Sergipe; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP); Instituto Dante Pazzanese; UFSE Applied Microbiology Laboratory; UFMG Mycology Laboratory
    INTRODUCTION: Cryptococcus neoformans and Cryptococcus gattii are encapsulated basidiomycetous yeasts with worldwide distribution. They cause cryptococcosis with features of systemic infection, affecting the central nervous system, lungs and skin in humans and animals. These fungi present numerous virulence factors that allow them to invade the host and multiply, among which extracellular enzyme capacity and microbial adaptation to different temperatures are worth mentioning. OBJECTIVE: To evaluate the production of protease and investigate possible differences in thermotolerance and urease activity in clinical and environmental yeast isolates. MATERIAL AND METHODS: Culture methods and Pz analysis were applied to assess urease and protease, whereas the optical density method was used to analyze biological activity in thermotolerance. RESULTS: There was no significant results as to microbial growth at the tested temperatures (25º, 37º and 42ºC). It was observed that clinical specimens grew better than environmental ones at elevated temperatures. As to C. neoformans, the moderate production of urease enzyme prevailed in both clinical and environmental isolates within 24h or 48h. Moreover, there was significant production on the seventh day of reading. The best reading time for viewing protease production in both isolates and species was the seventh day: 96% clinical samples and 94% environmental isolates. CONCLUSION: Further studies are required in order to investigate the virulence factors of C. neoformans and C. gattii cerebrospinal isolates from patients with meningoencephalitis and environmental samples from Sergipe. Furthermore, a higher technical accuracy and statistical precision are indispensable.
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    Caracterização bioquímica da enzima antranilato fosforibosil transferase de cryptococcus neoformans
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2015-09-12) Chagas, Rayane Arraes Jardim [UNIFESP]; Alfonso, Martin Rodrigo Alejandro Wurtele [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/0625673643875019; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    The number of patients with opportunist fungal diseases, e.g. criptococosis, has increased in recent years due to the higher occurrence of immunosuppressed patients. This phenomenon can be associated, for example, to the appearance of AIDS, to the utilization of new medical practices, like immunosuppressive therapies, and to the indiscriminate use of antimicrobial drugs. Nevertheless, the number of available antifungal drugs has remained sparse, mainly due to the low availability of new targets with highly selective toxicity, since the fungal cells are similar to the human ones, both eukaryotes. The tryptophan biosynthetic pathway is absent in human beings and past studies showed a decreasing virulence in microorganisms in which mutations caused the absence of the production of this amino acid. Thus, the study of this biosynthetic pathway is important to develop new drugs with high selective toxicity against fungal diseases. The tryptophan biosynthetic pathway is composed of five enzymes, which are: anthranilate synthase, anthranilate phosphoribosyltransferase, phosphoribosyl anthranilate isomerase, indole-3-glycerol phosphate synthase, and tryptophan synthase. In the human-pathogen model Cryptococcus neoformans, the gene APRT codifies the anthranilate phosphoribosyltransferase enzyme, which, in turn, catalyzes the second step of this pathway, catalyzing the transfer of the phosphoribosyl group of phosphoribosyl pyrophosphate (PRPP) to anthranilate , thus forming phosphoribosyl anthranilate. Therefore, the aim of this work was to clone, to express, and to purify in a recombinant form this pathogenic organism?s enzyme and to analyze its activity through fluorescence assay. Activity of the enzyme was verified by a Michaelis-Menten kinetic. Hence, it was possible to obtain the following constants: Km = 1,3995 ?M ± 0,6 ?M for anthranilate, Km = 0,3745 mM ± 0,14 mM for PRPP, and kcat = 0,0037s-1 ± 0,0005s-1. Biochemical characterization of this enzyme will enable future chemical compounds screens to find specific inhibitors. This, in turn, will allow the development of new techniques against this opportunist pathogen, thus demonstrating the expected impact of this applied research area.
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    Caracterização das proteínas parceiras de Ape4, Ams1 e Atg8 durante o processo de autofagia em Cryptococcus neoformans: estudo sobre os impactos na virulência e sensibilidade aos antifúngicos
    (Universidade Federal de São Paulo, 2019-10-23) Roberto, Thiago Nunes [UNIFESP]; Vallim, Marcelo Afonso [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/4039129182586680; http://lattes.cnpq.br/4906645347015121
    A criptococose é uma micose de caráter sistêmico de grande importância clínica. A doença é causada, sobretudo, pelo complexo Cryptococcus neoformans, na qual, está associado principalmente a pacientes imunodeficientes. O tratamento dessa micose compreende o uso de fármacos que, geralmente, são tóxicos para o paciente. Assim sendo, futuras pesquisas precisam ser desenvolvidas visando identificar novos alvos/estratégias de tratamento e controle da doença. Por sua vez, a elucidação das vias autofágicas em fungos pode fornecer novos entendimentos sobre as relações estabelecidas para garantir o processo de infecção. A autofagia é um sistema de degradação e reciclagem intracelular de macromoléculas e organelas, essencial para a sobrevivência da célula em condições adversas. Em Saccharomyces cerevisiae, durante o processo de autofagia do tipo Cvt (Cytoplasm to vacuole targeting) há a participação de cinco principais proteínas, sendo que, a espécie C. neoformans é capaz de codificar apenas três dessas proteínas, isto é: Ape4, Ams1 e Atg8. Por esta razão, este projeto teve como objetivo analisar quais proteínas interagem com Ape4, Ams1 e Atg8 em C. neoformans, verificando seus respectivos papéis no mecanismo da autofagia e, também, em eventos não autofágicos. Utilizando a metodologia de dois-híbridos, conseguimos identificar e confirmar a interação de Atg8 com a proteína Os-9. Os resultados mostraram que a deleção do gene OS-9 não interferiu no desenvolvimento celular para as condições analisadas. Além disso, confirmamos experimentalmente para C. neoformans a interação física descrita na literatura entre as proteínas Atg8 e Atg3, Atg4 e Atg7. Ainda, os resultados mostraram que os genes ATG4 e ATG8 são fundamentais para a sobrevivência da célula em privação nutricional; o transporte e proteólise intravacuolar da proteína Atg8 é dependente de Atg4; os mutantes atg4 e atg8 são mais tolerantes ao estresse oxidativo, sensíveis ao corante vermelho de Congo e ao inibidor de proteassoma bortezomibe (BTZ). Concluímos assim que as interações de Atg8 para a sua conjugação com fosfatidiletanolamina (PE) e regulação da via da autofagia encontram-se conservadas em C. neoformans.
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    Characterization of an ecto-ATPase activity in Cryptococcus neoformans
    (Elsevier B.V., 2005-07-01) Junior, I. C.; Rodrigues, M. L.; Alviano, C. S.; Travassos, Luiz Rodolpho [UNIFESP]; Meyer-Fernandes, JR; Universidade Federal do Rio de Janeiro (UFRJ); Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Cryptococcus neoformans is the causative agent of pulmonary cryptococcosis and cryptococcal meningoencephalitis, which are major clinical manifestations in immunosuppressed patients. in the present study, a surface ATPase (ecto-ATPase) was identified in C. neoformans yeast cells. Intact yeasts hydrolyzed adenosine-5'-triphosphate (ATP) at a rate of 29.36 +/- 3.36 nmol Pi/h x 10(8) cells. in the presence of 5 mM MgCl2, this activity was enhanced around 70 times, and an apparent K-m for Mg-ATP corresponding to 0.61 mM was determined. Inhibitors of phosphatases, mitochondrial Mg2+-ATPases, V-ATPases, Na+-ATPases or P-ATPases had no effect on the cryptococcal ATPase, but extracellular impermeant compounds reduced enzyme activity in living cells. ATP was the best substrate for the cryptococcal ecto-enzyme, but it also efficiently hydrolyzed inosine 5'-triphosphate (ITP), cytidine 5'-triphosphate (CTP), guanosine 5'-triphosphate (GTP) and uridine-5'-triphosphate (UTP). in the presence of ATP, C. neoformans became less susceptible to the antifungal action of fluconazole. Our results are indicative of the occurrence of a C. neoformans ectoATPase that may have a role in fungal physiology. (c) 2005 Federation of European Microbiological Societies. Published by Elsevier B.V. All rights reserved.
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    Cleavage of human fibronectin and other basement membrane-associated proteins by a Cryptococcus neoformans serine proteinase
    (Elsevier B.V., 2003-02-01) Rodrigues, M. L.; Reis, FCG dos; Puccia, R.; Travassos, L. R.; Alviano, C. S.; Universidade Federal do Rio de Janeiro (UFRJ); Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    The interaction between the fungal pathogen Cryptococcus neoformans and human fibronectin (HFN) was examined in this study. Polypeptides from cryptococcal whole homogenates and cell wall with molecular masses of 25 and 35 kDa, respectively reacted with HFN. the relevance of the occurrence of these proteins in intact cells was uncertain, since yeast cells from different strains and serotypes of C neoformans did not significantly adhere to soluble or solid-phased HFN. in contrast, an exocellular proteolytic activity that cleaves HFN was suggested. Degradation of HFN by culture supernatant fluids was demonstrated by Western blotting using a monoclonal anti-HFN antibody. Several fragments of lower molecular weights were observed which reacted with the antibody. Proteolysis was mediated by a serine protease activity, since HFN cleavage was completely inhibited by phenylmethylsulfonyl fluoride (PMSF), aprotinin, and N-tosyl-L-phenylalanyl chloromethylketone (TPCK), but not by inhibitors of metalo, cysteine, or aspartyl proteases. Similar results were obtained when the fluorogenic peptide carbobenzoxy-phenylalanyl-arginyl-7-amido-4-methylcoumarin (CBZ-Phe-Arg-NHmet-C) was used as substrate. the cryptococcal supernatant also cleaved laminin and type IV collagen, as demonstrated by polyacrylamide gel electrophoresis with co-polymerized proteins. the hydrolysis of these proteins was mediated by a single cryptococcal protease with a molecular mass of 75 kDa. the cleavage of key host components of the basement membrane and extracellular matrix by C. neoformans may be a relevant factor in the process of fungal invasion. (C) 2003 Elsevier B.V. All rights reserved.
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    Comparação do LCR de pacientes com neurocriptococose sem AIDS e com AIDS
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 1992) Matas, Sandro Luiz de Andrade [UNIFESP]; Reis Filho, João Baptista dos [UNIFESP]; Reis Filho, João Baptista dos [UNIFESP]
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    Acesso aberto (Open Access)
    Criptococcose: causas, tratamento e epidemiologia
    (Universidade Federal de São Paulo, 2020-10-05) Oliveira, Letícia Vitória Venâncio de [UNIFESP]; Ferreira, Karen Spadari [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/9765455719275677; http://lattes.cnpq.br/3718532008629783
    A criptococcose é uma infecção fúngica oportunista que atinge principalmente os pulmões e o sistema nervoso central. A infecção se dá através da inalação de um esporo do fungo ou levedura dessecada que ao chegar ao pulmão pode disseminarse por todo o organismo, principalmente ao SNC pelo qual possui tropismo. A criptococcose é uma doença causada por duas espécies: C. neoformans e C. gattii. O fungo C. neoformans é comumente reportada em pessoas portadoras de HIVAIDS ou com imunodepressão, enquanto que a doença por C. gattii atinge principalmente pessoas imunocompetentes. Estudos demostram que a principal fonte ambiental do C. neoformans são as fezes de aves como pombos, galinhas e perus, por sua vez, o C. gattii é comumente isolada de algumas espécies de árvores. A criptococcose é uma doença que ocorre globalmente e que apresenta altas taxas de mortalidade. O continente Africano é a região em que ocorre a maior taxa de óbitos, visto a grande prevalência de HIV na população. O presente trabalho tem como objetivo levantar os principais pontos sobre a doença e seus agentes etiológicos, através de uma revisão bibliográfica na base cientifica PubMed, como: causas da doença, sintomas, epidemiologia e tratamento da doença, bem como outros dados pertinentes a essa micose sistêmica.
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    Acesso aberto (Open Access)
    Criptococose em pacientes submetidos a transplante renal
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2007) Ponzio, Vinicius [UNIFESP]; Colombo, Arnaldo Lopes [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Introdução: A criptococose e a terceira causa de infeccao fungica invasiva nos pacientes submetidos a transplante renal, apresentando alta mortalidade. Objetivo: Descrever as caracteristicas epidemiologicas, clinicas e diagnostica, assim como os fatores prognosticos e o impacto da anfotericina B sobre a funcao do enxerto da criptococose em pacientes submetidos a transplante renal. Metodos: Foi utilizada ficha clinica padrao, com mais de 250 variaveis, para avaliar todos os casos de criptococose acompanhados nos hospitais do complexo UNIFESP/EPM durante o periodo de janeiro de 1995 a janeiro de 2007. Resultados: Um total de 40 casos de criptococose foi identificado entre 4.727 transplantes renais, sendo 67,5 por cento do genero masculino. Desses, 37,5 por cento apresentaram rejeicao do enxerto previa a micose e 30 por cento dos casos eram portadores de hepatite C. A criptococose ocorreu com media de 4,5 anos apos o transplante renal, sendo que em 77,5 por cento dos casos ocorreu apos um ano do transplante. O antigeno criptococico teve alta sensibilidade, mas, correlacao limitada com a evolucao clinica frente ao tratamento. Os comprometimentos mais frequentes foram: do sistema nervoso central (75 por cento), pulmonar (30 por cento), cutaneo (30 por cento) e doenca disseminada (40 por cento). Dos 40 pacientes, 97,5 por cento foram tratados, sendo a anfotericina B utilizada em 89,7 por cento dos casos. A diminuicao da imunossupressao durante o tratamento foi realizado em 57,9 por cento dos casos. Apenas 41,4 por cento apresentaram resposta terapeutica favoravel em duas semanas. A mortalidade de 90 dias ocorreu em 29,4 por cento dos individuos, sendo maior no comprometimento disseminado. Os fatores prognosticos encontrados foram: sonolencia na admissao; hipoglicorraquia e tinta da China positiva no liquor inicial e resposta desfavoravel ao tratamento com duas semanas. A anfotericina B desoxicolato causou nefrotoxicidade em 97,1 por cento dos casos, sendo grave em 45,5 por cento. Observou-se a perda do enxerto em 12,1 por cento dos pacientes que utilizaram essa medicacao. A perda do enxerto em 30 dias foi significantemente mais frequente nos pacientes com idade superior a 50 anos; nos com creatinina basal ou do diagnostico elevada e nos pacientes que apresentavam causas adicionais para a nefrotoxicidade. Conclusoes: A criptococose se mantem como uma complicacao importante nos pacientes submetidos a transplante renal, com uma apresentacao tardia no periodo pos-transplante e alta mortalidade. A anfotericina B desoxicolato mostrou alta nefrotoxicidade nessa populacao, associada a significante taxa de perda do enxerto
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    Acesso aberto (Open Access)
    Disseminated cryptococcosis with skin lesions: report of a case series
    (Soc Brasileira Dermatologia, 2017) Hayashida, Marina Zoega [UNIFESP]; Seque, Camila Arai [UNIFESP]; Pasin, Victor Pavan [UNIFESP]; Enokihara, Mílvia Maria Simões e Silva [UNIFESP]; Porro, Adriana Maria [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Cryptococcosis is a common fungal infection in immunocompromised patients, caused by genus Cryptococcus, presenting with meningitis, pneumonia, and skin lesions. Cutaneous presentation can be varied, but specifically in solid organ transplant recipients (iatrogenically immunocompromised), cryptococcosis should always be considered in the differential diagnosis of cellulitis-like lesions, since the delay in diagnosis leads to worse prognosis and fatal outcome. We report four cases of cryptococcosis with cutaneous manifestation not only for its rarity, but also to emphasize the important role of the dermatologist in the diagnosis of this disease.
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    Effects of microplusin, a copper-chelating antimicrobial peptide, against Cryptococcus neoformans
    (Wiley-Blackwell, 2011-11-01) Silva, Fernanda D.; Rossi, Diego C. P.; Martinez, Luis R.; Frases, Susana; Fonseca, Fernanda L.; Campos, Claudia Barbosa L. [UNIFESP]; Rodrigues, Marcio L.; Nosanchuk, Joshua D.; Daffre, Sirlei; Universidade de São Paulo (USP); Long Isl Univ CW Post; Albert Einstein Coll Med; Inst Nacl Metrol Normalizacao & Qualidade Ind; Universidade Federal do Rio de Janeiro (UFRJ); Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Microplusin is an antimicrobial peptide isolated from the cattle tick Rhipicephalus (Boophilus) microplus. Its copper-chelating ability is putatively responsible for its bacteriostatic activity against Micrococcus luteus as microplusin inhibits respiration in this species, which is a copper-dependent process. Microplusin is also active against Cryptococcus neoformans (MIC(50) = 0.09 mu M), the etiologic agent of cryptococcosis. Here, we show that microplusin is fungistatic to C. neoformans and this inhibitory effect is abrogated by copper supplementation. Notably, microplusin drastically altered the respiratory profile of C. neoformans. in addition, microplusin affects important virulence factors of this fungus. We observed that microplusin completely inhibited fungal melanization, and this effect correlates with the inhibition of the related enzyme laccase. Also, microplusin significantly inhibited the capsule size of C. neoformans. Our studies reveal, for the first time, a copper-chelating antimicrobial peptide that inhibits respiration and growth of C. neoformans and modifies two major virulence factors: melanization and formation of a polysaccharide capsule. These features suggest that microplusin, or other copper-chelation approaches, may be a promising therapeutic for cryptococcosis.
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    Fungal morphogenesis and virulence
    (B I O S Scientific Publishers Ltd, 2000-01-01) San-Blas, G.; Travassos, Luiz Rodolpho Raja Gabaglia [UNIFESP]; Fries, B. C.; Goldman, D. L.; Casadevall, A.; Carmona, Adriana Karaoglanovic [UNIFESP]; Barros, Tânia Fraga [UNIFESP]; Puccia, Rosana [UNIFESP]; Hostetter, M. K.; Shanks, S. G.; Copping, VMS; Knox, Y.; Gow, NAR; Inst Venezolano Invest Cient; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP); Albert Einstein Coll Med; Dept Biofis; Yale Univ; Univ Aberdeen
    Phenotypic variability in pathogenic fungi has long been correlated with virulence, but specific genetic and molecular mechanisms are only recently being unraveled. Fungal morphogenesis, reflecting the expression of several regulated genes, and the capacity of the rising forms or phases to cause disease has been focused on at the XIVth Congress of the International Society for Human and Animal Mycology. Three experimental models of pathogenic fungi have been discussed. in Cryptococcus neoformans, phenotypic variability or switching represents controlled and programmed changes rather than random mutations. Evaluated phenotypic traits were the capsular polysaccharide, cell and colony morphology and virulence. in the dimorphic Paracoccidioides brasiliensis, the serine-thiol proteinase from the yeast phase cleaves the main components of the basal membrane, thus being potentially relevant in fungal dissemination. in Candida albicans, relationships between adhesion proteins and those of lymphocytes and neutrophils are related to fungal pathogenicity. Regulation of the directional growth of hyphae and its tropic responses are correlated with the invasive potential of C. albicans.
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    Glucuronoxylomannan-mediated interaction of Cryptococcus neoformans with human alveolar cells results in fungal internalization and host cell damage
    (Elsevier B.V., 2006-02-01) Barbosa, F. M.; Fonseca, F. L.; Holandino, C.; Alviano, C. S.; Nimrichter, L.; Rodrigues, M. L.; Universidade Federal do Rio de Janeiro (UFRJ); Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Infection by Cryptococcus neoformans begins with inhalation of infectious propagules. Fungi reach the lung tissue and interact with epithelial cells in a crucial but poorly understood process. in this study, the interaction of C. neoformans with the human alveolar epithelial cell lineage A549 was investigated, focusing on the relevance of the capsular polysaccharide in this process. the association of encapsulated strains with A549 cells was significantly inhibited by a monoclonal antibody to glucuronoxylomannan (GXM), a major component of the cryptococcal capsule. A purified preparation of GXM produced similar results, suggesting the occurrence of surface receptors for this polysaccharide on the surface of alveolar cells. A549 cells were in fact able to bind soluble GXM, as confirmed by indirect immunofluorescence analysis using the anti-polysaccharide antibody. C. neoformans is internalized after GXM-mediated interaction with A549 cells in a process that culminates with death of host cells. Our results suggest that C. neoformans can use GXM for attachment to alveolar epithelia, allowing the fungus to reach the intracellular environment and damage host cells through still uncharacterized mechanisms. (c) 2005 Elsevier SAS. All rights reserved.
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    Gomesin, a peptide produced by the spider Acanthoscurria gomesiana, is a potent anticryptococcal agent that acts in synergism with fluconazole
    (Blackwell Publishing, 2007-09-01) Barbosa, Fabiane M.; Daffre, Sirlei; Maldonado, Rosa A.; Miranda, Antonio [UNIFESP]; Nimrichter, Leonardo; Rodrigues, Marcio L.; Universidade Federal do Rio de Janeiro (UFRJ); Universidade de São Paulo (USP); Univ Texas; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Gomesin is an 18-residue cysteine-rich antimicrobial peptide produced by hemocytes of the spider Acanthoscurria gomesiana. in the present study, the antifungal properties of gomesin against Cryptococcus neoformans, the etiologic agent of cryptococcosis, were evaluated. Gomesin bound to the cell surface of cryptococci, which resulted in cell death associated with membrane permeabilization. Antifungal concentrations of gomesin were not toxic for human brain cells. Supplementation of cryptococcal cultures with the peptide (1 mu M) caused a decrease in capsule expression and rendered fungal cells more susceptible to killing by human brain phagocytes. the possible use of gomesin in combination with fluconazole, a standard antifungal drug, was also evaluated. in association with fluconazole, gomesin concentrations with low antimicrobial activity (0.1-1 mu M) inhibited fungal growth and enhanced the antimicrobial activity of brain phagocytes. These results reveal the potential of gomesin to promote inhibition of cryptococcal growth directly or by enhancing the effectiveness of host defenses.
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    Acesso aberto (Open Access)
    Lymphocyte transformation assay for C neoformans antigen is not reliable for detecting cellular impairment in patients with Neurocryptococcosis
    (Biomed Central Ltd, 2012-10-30) Rocha, Katya C.; Pinhal, Cinthia; Cavalcanti, Sonia; Vidal, Monica S. M.; Toscano, Matheus; Moraes-Vasconcelos, Dewton; Duarte, Alberto J. S.; Fonseca, Fernando Luiz Affonso [UNIFESP]; Abreu, Luiz Carlos de; Valenti, Vitor E.; Grumach, Anete S. G.; Universidade de São Paulo (USP); Fac Med ABC; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP); Univ Estadual Paulista
    Background: Cryptococcus neoformans causes meningitis and disseminated infection in healthy individuals, but more commonly in hosts with defective immune responses. Cell-mediated immunity is an important component of the immune response to a great variety of infections, including yeast infections. We aimed to evaluate a specific lymphocyte transformation assay to Cryptococcus neoformans in order to identify immunodeficiency associated to neurocryptococcosis (NCC) as primary cause of the mycosis.Methods: Healthy volunteers, poultry growers, and HIV-seronegative patients with neurocryptococcosis were tested for cellular immune response. Cryptococcal meningitis was diagnosed by India ink staining of cerebrospinal fluid and cryptococcal antigen test (Immunomycol-Inc, SP, Brazil). Isolated peripheral blood mononuclear cells were stimulated with C. neoformans antigen, C. albicans antigen, and pokeweed mitogen. the amount of H-3-thymidine incorporated was assessed, and the results were expressed as stimulation index (SI) and log SI, sensitivity, specificity, and cut-off value (receiver operating characteristics curve). We applied unpaired Student t tests to compare data and considered significant differences for p<0.05.Results: the lymphotoxin alpha showed a low capacity with all the stimuli for classifying patients as responders and non-responders. Lymphotoxin alpha stimulated by heated-killed antigen from patients with neurocryptococcosis was not affected by TCD4+ cell count, and the intensity of response did not correlate with the clinical evolution of neurocryptococcosis.Conclusion: Response to lymphocyte transformation assay should be analyzed based on a normal range and using more than one stimulator. the use of a cut-off value to classify patients with neurocryptococcosis is inadequate. Statistical analysis should be based on the log transformation of SI. A more purified antigen for evaluating specific response to C. neoformans is needed.
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    Molecular characterization and antifungal susceptibility testing of Cryptococcus neoformans sensu stricto from southern Brazil
    (Microbiology Soc, 2018) Herkert, Patricia Fernanda; Meis, Jacques F.; Salvador, Gabriel Lucca de Oliveira; Gomes, Renata Rodrigues; Vicente, Vania Aparecida; Muro, Marisol Dominguez; Pinheiro, Rosangela Lameira; Colombo, Arnaldo Lopes [UNIFESP]; Schwarzbold, Alexandre Vargas; Oliveira, Carla Sakuma de; Ferreira, Marcelo Simao; Queiroz-Telles, Flavio; Hagen, Ferry
    Purpose. Cryptococcosis is acquired from the environment by the inhalation of Cryptococcus cells and may establish from an asymptomatic latent infection into pneumonia or meningoencephalitis. The genetic diversity of a Cryptococcus neoformans species complex has been investigated by several molecular tools, such as multi-locus sequence typing, amplified fragment length polymorphism (AFLP), restriction fragment length polymorphism and microsatellite analysis. This study aimed to investigate the genotype distributions and antifungal susceptibility profiles of C. neoformans sensu lato isolates from southern Brazil. Methodology. We studied 219 C. neoformans sensu lato isolates with mating-and serotyping, AFLP fingerprinting, microsatellite typing and antifungal susceptibility testing. Results/Key findings. Among the isolates, 136 (69 %) were from HIV-positive patients. Only C. neoformans mating-type a and serotype A were observed. AFLP fingerprinting analysis divided the isolates into AFLP1/VNI (n=172
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    Acesso aberto (Open Access)
    O papel do gene CNAG_05333 na captação de aminoácidos e na virulência em Cryptococcus neoformans
    (Universidade Federal de São Paulo, 2024-09-03) Alves, Verônica Lira [UNIFESP]; Pascon, Renata Castiglioni [UNIFESP]; Oliveira, Mateus Possari; http://lattes.cnpq.br/0972853582461107; http://lattes.cnpq.br/4203540318082044; http://lattes.cnpq.br/0026071831136259
    Cryptococcus neoformans é um fungo leveduriforme encapsulado e oportunista, responsável pela meningoencefalite fúngica (criptococose). Esta patologia é de significativa importância clínica, especialmente ameaçando pacientes com o sistema imunológico comprometido devido a tratamentos contra o câncer, transplantes e a Síndrome da Imunodeficiência Adquirida (AIDS). A criptococose tem sido associada a altas taxas de mortalidade, uma vez que pode colonizar uma variedade de tecidos corpóreos, especialmente o sistema nervoso central. O tratamento da criptococose é prolongado, aumentando o risco de desenvolvimento de cepas resistentes aos medicamentos disponíveis, os quais frequentemente apresentam efeitos hepatotóxicos e nefrotóxicos. Além disso, a semelhança estrutural entre as células fúngicas e as células animais limita a eficácia dos antifúngicos disponíveis na prática clínica. Devido à limitação das opções terapêuticas, há uma necessidade de estudos adicionais sobre os mecanismos de adaptação ao hospedeiro e virulência de Cryptococcus neoformans, os quais poderiam conduzir à identificação de novos alvos terapêuticos. Pesquisas conduzidas no Laboratório de Interações Microbianas da UNIFESP (LIMic) indicam que a biossíntese e a captação de aminoácidos são vitais para a sobrevivência e virulência deste fungo, destacando-se como possíveis alvos para o desenvolvimento de novos antifúngicos. Os dados obtidos pelo LIMic sugerem que a via de sinalização mediada por Ras1 e sua proteína efetora Msl1 controlam a captação desses aminoácidos, possivelmente através da regulação do fator de transcrição específico de fungos do tipo Zinc Cluster, ZCP2 (CNAG_5333). Nesse contexto, esta iniciação científica teve como objetivo principal investigar os fenótipos ligados à adaptação ao estresse e os mecanismos de virulência em uma linhagem de C. neoformans contendo a deleção do gene ZCP2. Nossos resultados demonstraram que o fator de transcrição em questão é essencial para o crescimento em meio mínimo à temperatura fisiológica dos mamíferos e influencia a resposta ao estresse osmótico e genotóxico. Os fatores de virulência, como a melanina e a cápsula também foram afetados pela deleção, sugerindo que este gene tem impacto na virulência de C. neoformans e, portanto, pode ser útil como alvo molecular para o desenvolvimento de antifúngicos.
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    Acesso aberto (Open Access)
    A Paracoccidioides brasiliensis glycan shares serologic and functional properties with cryptococcal glucuronoxylomannan
    (Elsevier B.V., 2012-11-01) Albuquerque, Priscila C.; Cordero, Radames J. B.; Fonseca, Fernanda L.; Silva, Roberta Peres da [UNIFESP]; Ramos, Caroline L.; Miranda, Kildare R.; Casadevall, Arturo; Puccia, Rosana [UNIFESP]; Nosanchuk, Joshua D.; Nimrichter, Leonardo; Guimaraes, Allan J.; Rodrigues, Marcio L.; Fiocruz MS; Universidade Federal do Rio de Janeiro (UFRJ); Albert Einstein Coll Med; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    The cell wall of the yeast form of the dimorphic fungus Paracoccidioides brasiliensis is enriched with alpha 1,3-glucans. in Cryptococcus neoformans, alpha 1,3-glucans interact with glucuronoxylomannan (GXM), a hetero-polysaccharide that is essential for fungal virulence. in this study, we investigated the occurrence of P. brasiliensis glycans sharing properties with cryptococcal GXM. Protein database searches in P. brasiliensis revealed the presence of sequences homologous to those coding for enzymes involved in the synthesis of GXM and capsular architecture in C. neoformans. in addition, monoclonal antibodies (mAbs) raised to cryptococcal GXM bound to P. brasiliensis cells. Using protocols that were previously established for extraction and analysis of C neoformans GXM, we recovered a P. brasiliensis glycan fraction composed of mannose and galactose, in addition to small amounts of glucose, xylose and rhamnose. in comparison with the C. neoformans GXM, the P. brasiliensis glycan fraction components had smaller molecular dimensions. the P. brasiliensis components, nevertheless, reacted with different GXM-binding mAbs. Extracellular vesicle fractions of P. brasiliensis also reacted with a GXM-binding mAb, suggesting that the polysaccharide-like molecule is exported to the extracellular space in secretory vesicles. An acapsular mutant of C. neoformans incorporated molecules from the P. brasiliensis extract onto the cell wall, resulting in the formation of surface networks that resembled the cryptococcal capsule. Coating the C. neoformans acapsular mutant with the P. brasiliensis glycan fraction resulted in protection against phagocytosis by murine macrophages. These results suggest that P. brasiliensis and C. neoformans share metabolic pathways required for the synthesis of similar polysaccharides and that P. brasiliensis yeast cell walls have molecules that mimic certain aspects of C. neoformans GXM. These findings are important because they provide additional evidence for the sharing of antigenically similar components across phylogenetically distant fungal species. Since GXM has been shown to be important for the pathogenesis of C neoformans and to elicit protective antibodies, the finding of similar molecules in P. brasiliensis raises the possibility that these glycans play similar functions in paracoccidiomycosis. (C) 2012 Elsevier Inc. All rights reserved.