Navegando por Palavras-chave "Ciclo celular"

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    Aumento da síntese de heparam sulfato e bloqueio do ciclo celular induzidos pela ativação da proteína quinase C em células endoteliais
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 1996) Porcionatto, Marimélia Aparecida [UNIFESP]; Nader, Helena Bonciani [UNIFESP]
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    Acesso aberto (Open Access)
    Avaliação dos efeitos de um inibidor do tipo Kunitz (Amblyomin-X) em culturas celulares de carcinoma renal
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2011-10-27) Akagi, Erica Mie [UNIFESP]; Tavassi, Ana Marisa Chudzinski [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    The renal cell carcinoma (RCC) is currently a disease of great clinical interest. Its incidence is increasing, especially the incidental findings, which now represent 50% of new cases diagnosed. Because it is highly resistant to disease chemotherapy and radiotherapy, their potential to cure is the surgical treatment, while in the early stages, organo-confined. Numerous clinical trials have been proposed to treat locally advanced or metastatic tumors, but results are inconsistent in the literature with chemotherapy, immunotherapy, hormone therapy or radiotherapy have shown that clinical research should progress in other directions. It was produced in our laboratory, a recombinant protein originating from a cDNA library of the salivary glands of Amblyomma cajennense called amblyomin-X, capable of inhibiting factor Xa coagulation and induce cytotoxicity in different tumor cell lines. This study evaluated the effects of Amblyomin-X in cultured murine renal cell adenocarcinoma (Renca) and human renal cell carcinoma (Caki-1) at different concentrations (0.15 to 1.5 ƒÝM) of this compound. We analyze the morphology and cell viability, cell cycle and the type of cell death induced by treatment with the protein. It also evaluated the potential of proteasome inhibition of the activity front in dealing with Amblyomin-X. Then determine that the strains Caki-1 and Renca are sensitive to Amblyomin-X, which induces changes in morphology and cell viability after 24 and 48 hours of treatment with Amblyomin-X. We also observed that death was dose-dependent and time-dependent, inducing a decrease in all phases of the cell cycle and decreased levels of IL-6. The results described herein suggest that the Amblyomin-X induces cytotoxicity in Renca cells through the mechanism of apoptosis. One of the possible targets of Amblyomin-X is the ubiquitin-proteasome system, as was also observed inhibition of catalytic activity of the proteasome chymotrypsin type.
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    Avaliação semanal da atividade proliferativa do epitélio mamário de mulheres durante a utilização de um ciclo de anticoncepcional hormonal combinado oral
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2005) Garcia y Narvaiza, Debora [UNIFESP]; Nazário, Afonso Celso Pinto [UNIFESP]
    Contexto e Objetivo: O efeito do anticoncepcional hormonal oral no epitélio mamário permanece tema ainda mal conhecido. Os escassos trabalhe existentes são conflitantes e a maioria não apresenta rigorosa padronização, que dificulta qualquer conclusão. Temos, por objetivo, comparar a proliferação celular do epitélio mamário de mulheres durante o uso de um ciclo c anticoncepcional hormonal combinado oral com a de um ciclo natural. Métodos: Selecionaram-se 82 pacientes eumenorréicas que apresentava nódulo mamário benigno, divididas em dois grandes grupos. O grupo A utilizou um ciclo de anticoncepcional combinado oral composto de 150 g de levonorgestrel 30 g de etinilestradiol; o grupo B foi composto por mulheres com ciclos naturais ou seja, não utilizaram qualquer medicação hormonal. As mulheres do grupo A foram subdivididas em quatro grupos. O grupo A1 submeteu-se a cirurgia c retirada do nódulo e do tecido mamário adjacente na primeira semana de uso do anticoncepcional; o A2, na segunda semana; o A3, na terceira semana e o A4, na quarta semana, isto é, na semana da pausa da medicação. As mulheres do grupo B foram subdivididas em quatro grupos, levando-se em consideração a data c biópsia e a fase do ciclo. No grupo Bfp a biópsia foi feita durante a fase folicular precoce, entre o 1º e o 7º dia do ciclo menstrual; no grupo Bft, na fase folicular tardia, entre o 8º e o 14º dia do ciclo, no grupo Blp, na fase lútea precoce, entre 15º e o 21º dia, e o grupo Blt, na fase lútea tardia, entre o dia 22º e o 28º do ciclo menstrual. Avaliamos a proliferação celular do epitélio mamário normal por meio da expressão imunoistoquímica do Ki-67 em todos os grupos descritos. Resultados: A média do índice de proliferação celular durante o uso de um ciclo de anticoncepcional combinado oral nos grupos A1, A2, A3 e A4 foi respectivamente, de 7,02 por cento; 5,46 por cento; 4,77 por cento e 4,44 por cento. Já no ciclo natural, a média da proliferação celular nos grupos Bfp, Bft, Blp, Blt foi, respectivamente, de 1,10 por cento; 3,89 por cento; 2,72 por cento e 5,39 por cento. Houve diferença estatisticamente significativa entre os grupos A1 e Bfp (p<0,001). A proliferação no grupo Bfp foi menor quando comparada com os grupos Bft e Blt (p<0,005). A atividade proliferativa total durante as fases folicular e lútea(ciclo natural) foi de 13,10 por cento, significativamente menor em comparação ao ciclo artificial, que foi de 21,69 por cento (p<0,005). Conclusões: Durante a primeira semana de uso do anticoncepcional combinado oral ocorreu maior proliferação celular comparativemente com a fase folicular precoce do ciclo natural. Nas semanas subseqüentes não houve diferenças estatísticas entre os grupos com anticoncepcional e o ciclo natural. Nas mulheres em uso de anticoncepcional, a primeira semana se iniciou com alta proliferação celular e, no decorrer do ciclo, houve tendência à queda, porém, a variação não foi estatisticamente significativa. O epitélio mamário na fase folicular precoce apresentou proliferação significativamente menor do que nas fases folicular tardia e lútea tardia. Considerando a atividade proliferativa total ao longo do ciclo, esta foi significativamente maior nas usuárias de ACO.
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    Beta carbolinas: estudo dos mecanismos de morte, proliferação e diferenciação em leucemias e células-tronco leucêmicas
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2018-10-25) Torquato, Heron Fernandes Vieira [UNIFESP]; Gamero, Edgar Julian Paredes [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/9562213378846769; http://lattes.cnpq.br/7439686090439905; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Acute myeloid leukemia ( AML) is a type of cancer that occurs from the clonal expansion of myeloid pr ecursors. Over the past few years, a hypothesis used to explain the leukemia origin has been the presence of a rare population inside of the tumor, which represents a refractory reservoir to therapy, named leukemic stem cell (LSC). For this reason, the elimination of this population is considered an important treatment method nowadays. Among all natural products that have provided new molecules with different clinical applications, we highlight the betacarbolinic alkaloids, in particular, the canthinone and its derived, which have demonstrated diverse pharmacological activities s uch as antibacterial, antifungal, antimalarial, antiulcerogenic and cytotoxic. Thus, the aim of this project was to investigate the antitumor effects of betacarbolinic alkaloids in leukemias and in the LSC population. Therefore, the effects of betacarboline alkaloids on cell death, proliferation and differentiation were investigated. It was observed that the effect on cell death occurred by apoptosis ( dissipation of mitochondrial potential, permeabilization of lysosomes, production of reactive oxygen species [ROS], and activation of caspases) and by Necroptosis ( use of pharmacological inhibitors of necroptosis, Nec1 and necrosulfonamide, as well as their association with caspase inhibitors). In addition, a cytostatic effect with cell cycle ar rest in the G2/M phase associated by activation of DNA damage sensor proteins and the decrease of clonogenic capability was observed. Induction of cell differentiation was also observed by expression increased of myeloid differentiation markers ( CD15, C D11b, C D14, P U.1 and MPO). The differentiation also affected LSC population with expression increase of PU.1 factor, and proliferation increase, but the reduction of clonogenic potential. Part of the effects on differentiation and proliferation was blocked by the p38 inhibitor, SB203580. The results show important actions of this metabolites class, highlighting the effects of MTXc as privileged structures for the construction of new antileukemic drugs
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    Caracterização de uma fucana da alga Spatoglossum schroederi e análise de suas atividades anti-adesiva, antimigratória, antiproliferativa e antitrombótica
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2002) Rocha, Hugo Alexandre de Oliveira [UNIFESP]; Nader, Helena Bonciani [UNIFESP]
    Fucana e uma denominacao utilizada para polissacarideos sulfatados, lineares ou nao, que tem como caracteristica estrutural mais marcante a presenca de L-fucose sulfatada. A alga Spatoglossum schroederi produz tres fucanas, denominadas de fucanas A, B e C. A Fuc B, com massa molecular de 21,5 kDa, constituida de fucose: xilose: galactose: sulfato (1: 0,5: 2: 2) e tracos de acido uronico, foi extraida da alga por hidrolise enzimatica e purificada por precipitacao diferencial com acetona e cromatografias de troca ionica e gel filtracao. As analise quimicas, estudos de metilacao e espectroscopia de RMN de 113 e 213, indicaram as principais caracteristicas estruturais da Fuc B. Ela e formada por um estrutura central de (3-D-1-galactose-3504-4, com aproximadamente 50 por cento dessas galactoses sendo substituidas em C2 por cadeia laterais formadas por a-L-1-fucose-4 ou a-L-fucose(1 -->4) (3D-xilose-, estando as (coses sulfatadas em C3, apresentando essas cadeias monomeros de xilose ou galactose na posicao de acucar terminal nao redutor. A Fuc B nao apresentou atividades anticoagulante e hemorragica. Todavia, testes in vivo indicaram que ela possui atividade antitrombotica no estudo de ligadura de veia ficava, dependente do tempo, da dose e do seus grupamentos sulfato. Verificou-se, tambem, que a Fuc B foi duas vezes mais potente do que a heparina ou a fucana A (Fuc A) em estimular a sintese do heparam sulfato (HS) pelas celulas endoteliais de aorta de coelho. Esse efeito foi dose dependente e foi abolido com a dessulfatacao da Fuc B. Todavia, tanto Fuc B como Fuc A nao apresentaram atividades citotoxicas como citostaticas frente as celulas endoteliais. Esses dados levam a proposta de que a capacidade de estimular a sintese de HS pelas celulas endoteliais e que e responsavel pela atividade antitrombotica da Fuc B...(au)
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    Acesso aberto (Open Access)
    Componentes do ciclo celular ao longo da gênese do melanoma e seus possíveis reguladores
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2010-08-25) Cruz, Adriana Taveira da [UNIFESP]; Jasiulionis, Miriam Galvonas [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Epigenetic studies regulatory mechanisms of the activity and inheritance in gene expression that is independent of modifications in the nucleotide sequence. The main epigenetic events are: DNA methylation and histone pos-translational modifications. miRNAs are non-coding RNAs that bind to mRNA targets and disturb their stability and/or translation, thus acting in the post-transcriptional regulation. It is estimated that over 30% of mRNAs are regulated by miRNAs and therefore these molecules are considered essential in the processing of many biological responses, such as cell proliferation, apoptosis and stress responsiveness. Changes in the epigenetic machinery like modifications in miRNA expression profile can modify the expression of cell cycle components. Some studies suggest that cancer is also a disease of cell cycle. In this regard the aim of the present study was identify the contribution of cell cycle components in melanoma genesis and their possible regulators. For that it was used a murine model of melanoma genesis in which several cell lineages were obtained after submitting melan-a melanocytes to sequential cycles of anchorage blockade. Significant alterations were identified in expression of the cell cycle components, p53, p21, cyclin D1 and cdk4 along melanocyte malignant transformation. It was observed loss of p53 expression in the same time that was observed an increase in expression of p21 in the aggressive melanoma lineages. It was also observed alterations in the expression of dnmt1 during the genesis of melanoma. Protein immunoprecipitation assays showed that p53 interact with dnmt1 only in melan-a melanocytes. Twenty five miRNAs were found differentially expressed along the process of malignant transformation and the miRNAs 138, 340-5p, 678 and 330 were recognized as possible regulators of p53, cyclin D1, Cdk4 and p21, respectively. These data show the contribution of epigenetic and miRNA machinery in the regulation of cell cycle and the importance of the equilibrium of these pathways in maintenance of cell phenotype. Cell cycle components imbalance are involved in malignant transformation of melan-a melanocytes and epigenetic machinery might contribute to these alterations. The therapeutic targets that focus on epigenetic machinery could be useful interventions against cancer. Besides that, the p53 protein interacts with one of the major components of the epigenetic machinery, dnmt1. This indicates that the components of cell cycle may regulate this enzyme and contribute for the maintenance of DNA methylation pattern. The miRNAs identified also represent strong candidates in the contribution of melanoma genesis. They may be useful as therapeutic targets on interventions against cancer.
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    Efeito da resistência à morte celular por perda de adesão (anoikis) na expressão do sindecam-4 e no ciclo celular de células endoteliais em cultura
    (Universidade Federal de São Paulo, 2013-04-25) Carneiro, Bruna Ribeiro [UNIFESP]; Azevedo, Carla Cristina Lopes de [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Tumors produce several molecules that facilitate their proliferation, invasion and maintenance, especially proteoglycans. The syndecan-4, a heparan sulfate proteoglycan, can act as a co-receptor of growth factors and proteins of the extracellular matrix (ECM) by increasing the affinity of adhesion molecules to their specific receptors. It participates together with integrins and FAK (focal adhesion kinase) in cell adhesion at focal contacts connecting the ECM to the cytoskeleton. Changes in the expression of syndecan-4 have been found in tumor cells, indicating its involvement in cancer. The acquisition of resistance to cell death induced by blockade of adhesion to the substrate (anoikis resistance) is a feature of neoplastic transformation and a critical step during the metastatic process. Aiming to clarify the role of sindecan-4 in the process of anoikis and in the processes of cell transformation, wild endothelial cells (EC) were subjected to transformation induced by blockade of adhesion to the substrate (Adh-EC) and studied in comparison with endothelial cells transfected with the EJ-ras oncogene (EJ-ras EC) in relation to: tumorigenic capacity, adhesive ability, cell cycle, cell proliferation, synthesis and degradation of sulfated glicosaminoglycans (SGAG), expression and localization of syndecam-4 and heparanase expression. After cycles of blocking adhesion, phenotypic changes were observed in the surviving cells. The clones obtained exhibited characteristics similar to tumorigenic cells: multilayer growth, loss of contact inhibition, tumorigenic capacity, uncontrolled cell cycle, differences at the dependence of growth factors present in fetal bovine serum (FBS), decreased adhesive capacity and a major anti-proliferative effect after treatment with specific inhibitors of PI3K/Akt e Ras/Raf/MAPK/ERK pathways. Further, an increase in the synthesis of heparan sulfate (HS) was detected in the clones resistant to anoikis. This increase is observed for both HS chains present in cells and secreted to culture medium. Structural changes in HS chains were also observed. We have seen that there is an increase in the syndecan-4 and heparanase expression in EJ-ras EC and Adh-EC cells. The data suggests that the syndecan-4 is involved in the acquisition of resistance to cell death induced by blockade of adhesion to the substrate (resistance to anoikis), contributing to neoplastic transformation.
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    Efeito da transfecção com oncogene EJ-ras na expressão de proteoglicanos e no ciclo celular de células endoteliais em cultura
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2000) Azevedo, Carla Cristina Lopes de [UNIFESP]; Nader, Helena Bonciani [UNIFESP]
    Celulas endoteliais de aorta de coelho transfectadas com o oncogene EJ-ras apresentam caracteristicas morfologicas diferentes das celulas selvagens (CLPS) e um descontrole do cicio celular, o que as torna independentes dos fatores de crescimento contidos no soro fetal bovino (SFB). Os clones contendo o oncogene Ras possuem caracteristicas morfologicas que os distinguem da CLPs selvagem, crescendo em cultura formando multicamadas e nao apresentam inibicao por densidade. Para alguns clones de celulas transfectadas somente com o plasmideo contendo resistencia ao antibiotico tambem mudancas na forma e no ciclo foram observadas, o que sugere que o plasmideo por si so tambem pode causar alteracoes dependendo do local aonde estiver inseri o. As celulas CLPs selvagens e transfectadas nao possuem diferencas em relacao a expressao da proteina p2l ras. Por outro lado ocorre um aumento na expressao do proteoglicano de heparam sulfato (PGHS) presente na celula e secretado para o meio de cultura. A celula selvagem apresenta uma queda na liberacao de PGHS na transicao Gl-S, que nao e mais observada para a celula transfectada com Ras. Para o condroitim sulfato, observa-se um aumento no composto secretado para o meio de cultura, e uma diminuicao na celula. O heparam sulfato e o condroitim sulfato do extrato celular e do meio de cultura de celulas transfectadas foram degradados com heparitinases I e li e condroitinase ABC e alteracoes estruturais importantes, ou seja, diminuicao na sulfatacao foram observadas. Essa diminuicao de O-sulfatacao e caracteristica da transformacao neoplasica. Os resultados sugerem que o oncogene EJ-ras, atraves da cascata de transducao de sinal, altera o ciclo celular e a expressao de proteoglicanos. Celulas transfectadas com o oncogene Ras nao necessitam de fatores de crescimento de competencia e apresentam um relaxamento no controle do cicio celular e na expressao de proteoglicanos
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    Acesso aberto (Open Access)
    O efeito do carcinógeno 4-nitroquinolina 1-óxido (4NQO) no esôfago e estômago de ratos wistar: parâmetros morfológicos e imuno-histoquímicos
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2013) Gomes, Thiago Simao [UNIFESP]; Oshima, Celina Tizuko Fujiyama [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/8007052437699905; http://lattes.cnpq.br/3549547076658230
    Objetivo: Este estudo teve como objetivo, padronizar o modelo de carcinogenese experimental esofagica e gastrica quimicamente induzida pela 4-Nitroquinolina 1-oxido em ratos, a partir de alteracoes morfologicas bem como a imunoexpressao de p53, p21WAF1/CIP1, Caspase 3 Clivada, 8-OHdG, Ki-67, Cox-2 e ICAM-1 nos tecidos esofagico e gastrico. Material e metodos: Ratos Wistar machos foram distribuidos em quatro grupos de 4 animais cada, por um periodo de 4, 12, 20 e 24 semanas. Paralelamente, utilizamos 4 animais como controle. Foram feitas analises macroscopica, histopatologica e imuno-histoquimica do esofago e estomago. Resultados: Os grupos tratados com a 4NQO por 4 e 12 semanas apresentaram hiperqueratose, hiperplasia (esofago), hiperplasia e gastrite quando comparados ao seu grupo controle. Os grupos tratados por 20 semanas apresentaram esofagite, hiperplasia, hiperqueratose, displasia leve (esofago) e hiperplasia (estomago). Ja o grupo tratado por um periodo de 24 semanas nao apresentou qualquer alteracao histopatologica em nenhum dos dois tecidos. A expressao da proteina p53 no esofago apresentou diferenca estatisticamente significativa apenas nos grupos de 4 (31,9%), 20 (52%) e 24 (30,3%) semanas quando comparados ao seu grupo controle, no estomago, foi considerado estatisticamente significativo apenas os grupos de 4 (38,8%), 12 (60,8%) e 20 (16,3%) semanas respectivamente. A imunoexpressao de p21WAF1/CIP1 no esofago foi considerada estatisticamente significativa apenas nos grupos de 4 (34,8), 12 (14%) e 20 (44,8%) semanas, ja no estomago observamos diferenca estatistica apenas nos grupos tratados por 4 (35,1%) e 12 (44,4%) semanas, quando comparados ao seu grupo controle. Em relacao a Caspase 3 clivada, os grupos que apresentaram diferenca significativa tanto no esofago, quanto no estomago, foram os tratados por um periodo de 20 (2,4%; 2,8%) e 24 (2,6%; 3,3%) semanas. A proteina 8-OHdG apresentou diferenca significativa apenas nos grupos de 12 semanas (38,3%) no esofago e 20 semanas (67,5%) no estomago, quando comparados ao seu grupo controle. Ao analisar a expressao de Ki-67 no esofago, foi considerado significativo apenas os grupos de 4 (42,7%) e 20 (65,1%) semanas, ja em relacao ao estomago, apenas os grupos de 12 (22,8%) e 20 (30%) semanas apresentaram uma diferenca estatisticamente significativa quando comparados ao seu grupo controle. No esofago, a proteina Cox-2 apresentou diferenca estatisticamente significativa apenas nos grupos tratados por um periodo de 4 (1,5%), 12 (2,0%) e 20 (3,5%) semanas, no estomago, apenas o grupo de 4 semanas (1,8%) foi considerado significativo. Em relacao a proteina ICAM-1, o esofago apresentou significancia estatistica apenas no grupo tratado por 12 semanas (0,5%), ja no estomago foi considerado estatisticamente significante, apenas os grupos tratados por 4 (3,8%), 12 (4,0%) e 20 (4,0%) semanas respectivamente.. Conclusao: A 4-Nitroquinolina 1-Oxido, induziu alteracoes no esofago e estomago dos animais, porem, a concentracao utilizada nao foi capaz de induzir a tumorigenese durante o periodo estabelecido. As proteinas p53, p21WAF1/CIP1, Caspase 3 clivada, 8-OHdG e Ki-67 podem estar envolvidas nas alteracoes induzidas pela 4-Nitroquinolina 1-Oxido
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    Efeito do xilosídeo, bradicinina e do PMA na síntese de proteoglicanos durante o ciclo celular de células endoteliais em cultura
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 1998) Moreira, Claudia Regina [UNIFESP]; Nader, Helena Bonciani [UNIFESP]
    Este trabalho utiliza PMA (12-miristato-13-acetato de forbol), n-butanol, bradicinina (BK) e p-nitrofenil b-D-xilosideo para o estudo da sintese de proteoglicanos e glicosaminoglicanos no decorrer do ciclo celular. O PMA, um ativador da PKC, estimulou a sintese de proteoglicano de heparam sulfato secretado para o meio de cultura de celulas endoteliais preferencialmente durante a fase G1 do ciclo celular. O tratamento desta linhagem celular com n-butanol, um inibidor da PKC, seguido de PMA mostrou total inibicao do efeito estimulatorio do PMA. Ainda, o n-butanol aboliu o efeito antimitogenico do PMA sobre o ciclo celular. O tratamento das celulas com n-butanol nao alterou a sintese de proteoglicanos e do ciclo celular, indicando a existencia de uma outra via de estimulo independente da PKC para ambos os fenomenos. O tratamento desta mesma linguagem celular cfom BK, a exemplo dp PMA, estimulou a sintese preferencial do proteoglicano de heparam sulfato secretado para o meio de cultura, e produziu um efeito antimitog
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    Estudo do efeito da restituição do gene P27Kip1 (CDKN1B) na proliferação celular em cultura de células de endométrio de mulheres com endometriose
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2012) Camargo-Kosugi, Cintia Meirelles de [UNIFESP]; Silva, Ismael Dale Cotrim Guerreiro da [UNIFESP]
    Objetivo: Avaliar a superexpressao da proteina de controle de ciclo celular - p27 - na cultura de celulas de endometrio eutopico, provenientes de mulheres com endometriose. Metodos: Apos constatar que as celulas de endometrio de mulheres com endometriose apresentavam menor expressao da proteina p27, quando comparadas com as celulas endometriais provenientes de mulheres sem a doenca, os efeitos da superexpressao da proteina p27, nas celulas endometriais em cultivo, foram avaliados sob o ponto de vista de: proliferacao celular; expressao de outras proteinas envolvidas no ciclo celular e apoptose; p16, p21 e p53, alem da p27 apos a Introdução do gene P27kip1 (CDKN1B), por meio de vetores adenovirais; estudo do ciclo celular e apoptose. Resultados: As celulas endometriais, apos a Introdução do gene P27kip1 (CDKN1B), apresentaram crescimento celular 50% menor quando comparadas com as celulas que nao receberam o gene terapeutico. A expressao das demais proteinas envolvidas no ciclo celular: p16, p21 e p53 - bem como, p27 apresentaram-se muito diferentes nas celulas das mulheres com endometriose quando estas foram comparadas as celulas endometriais do Grupo Controle. Apos o restabelecimento da expressao da p27, as celulas endometriais sofreram interrupcao na progressao do ciclo celular nas fases G0/G1 do ciclo. Em adicao, as celulas endometriais, das mulheres com endometriose, superexpressando p27 tornaram a sofrer apoptose. Conclusoes: A superexpressao da p27 nas celulas endometriais levou a diminuicao da proliferacao celular em 50%. O endometrio de mulheres com endometriose responde de maneira diferente a superexpressao da p27, como mostram os niveis significantemente mais elevados de expressao proteica de p27, p21, p16 e p53. Os niveis de p16 e p21 bem como aqueles de p27, p53 encontram-se aumentados e diminuidos, respectivamente, nos Grupos Endometriose e Controle transfectados com o vetor vazio. Em relacao ao ciclo celular, a superexpressao da p27 culminou na parada do ciclo celular nas fases G0/G1 das celulas endometriais superexpressando a proteina. A interrupcao do ciclo celular na fase G0/G1 devido, a Introdução do gene P27kip1 nas celulas endometriais, confirmou o seu efeito antiproliferativo, previamente observado em nosso estudo. Em relacao a apoptose, a superexpressao da p27 elevou a ocorrencia desse fenomeno nas celulas endometriais que receberam o gene P27kip1
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    Expressão da P27 no epitélio normal e no condiloma da vulva de mulheres com sorologia positiva e negativa para HIV
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2000) Zucchi, Flavio [UNIFESP]
    O trabalho tem como objetivo a avaliacao comparativa da expressao da proteina p27 no epitelio normal e em condilomas de vulva de pacientes com sorologia positiva e negativa para HIV. O condiloma da vulva e doenca produzida pelo HPV (Papilomavirus Humano). A proteina p27 e resultante da trancricao do gene p27, que e considerado um supressor tumoral porque inibe as ciclinas dependentes de quinase (CDK), fazendo com que a celula permaneca estacionada em G1. Foram avaliadas oito amostras de epitelio vulvar normal (Grupo A), 10 de condiloma de vulva em pacientes HIV negativo (Grupo B) e outras oito de condiloma de vulva em pacientes HIV positivo (Grupo C), por meio de imuno-histoquimica utilizando-se anticorpo monoclonal de camundongos (Monoclonal Mouse; anti-human p27, Clone Sx 53 G8). Avaliou-se a imunoexpressao com aumento de 4OOX, contando-se no minimo 1000 celulas por lamina. Os resultados obtidos foram: a) quando se comparam os grupos A e B e os grupos A e C, observou-se diferenca significativa quanto a expressao da p27 que foi encontrada em 63,62 por cento no grupo A e em apenas em 13,35 por cento e em 18,89 por cento nos grupos B e C, respectivamente; b) ao se comparar os grupos B e C entre si nao houve diferenca significativa. Notamos, ainda, que a expressao da proteina p27 foi mais uniforme e acentuada na camada basal e na periferia das papilas, diminuindo no sentido da base para a superficie do epitelio. Concluimos pois, que nos condilomas vulvares a expressao da p27 esta acentuadamente diminuida, tanto nos casos soropositivos como nos soronegativos para HIV
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    Acesso aberto (Open Access)
    Expressão de proteínas reguladoras do ciclo celular em células endoteliais resistentes ao anoikis submetidas ao silenciamento gênico do sindecam-4
    (Universidade Federal de São Paulo, 2023-08-08) Ferreira, Bianca Zaia Franco [UNIFESP]; Lopes, Carla Cristina [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/6280504619546509; http://lattes.cnpq.br/6435149792172510
    Introdução e Objetivo: A remodelação da arquitetura do citoesqueleto durante o ciclo celular é crucial para uma divisão precisa. Apesar da importância do sindecam-4 (SDC4) em diversos eventos celulares, seu papel específico na desregulação do ciclo celular em células tumorais ainda não está completamente elucidado. Este trabalho buscou entender o papel do sindecam-4 na progressão e regulação do ciclo celular e no remodelamento do citoesqueleto em células endoteliais resistentes ao anoikis. Métodos: Células endoteliais selvagens (EC), EC resistentes ao anoikis (Adh1-EC), EC resistentes ao anoikis silenciadas para o gene do sindecam-4 (Adh-shRNA-Syn4-EC) e EC transfectadas com o oncogene EJ-ras (EJ-ras EC) foram estudadas em relação à expressão de proteínas reguladoras expressas nas diferentes fases do ciclo como: CDKs, ciclinas, os inibidores p21 e p27, além de algumas proteínas do citoesqueleto. A expressão proteica foi avaliada por meio das técnicas de Western Blotting e Citometria de Fluxo, enquanto a análise do RNAm foi conduzida utilizando a técnica de qPCR. Além disso, a localização das proteínas foi investigada por meio da técnica de imunofluorescência, e a viabilidade celular foi avaliada por meio de um ensaio de resistência ao anoikis. Os dados obtidos foram analisados estatisticamente utilizando o programa GraphPad Prism 6, com valor de significância p<0,05. Resultados: O silenciamento gênico do sindecam-4 diminuiu a taxa de proliferação. Isso ocorreu por meio da alta expressão de p27 e baixa expressão do complexo ciclina E-CDK2, que impedem a célula de avançar ao ponto R em direção a fase S do ciclo celular, confirmado pela diminuição da ciclina B1. Conclusões: O silenciamento do sindecam-4 resultou em um aumento na suscetibilidade das células ao processo de anoikis, indicando que sua regulação pode representar um alvo terapêutico promissor. Essa descoberta evidencia a capacidade do sindecam-4 em modular os processos relacionados ao desenvolvimento do câncer, destacando sua relevância como um potencial alvo terapêutico no combate a essa doença.
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    Imunoespressão de p53, p21Waf1/Cip1, p27 Kip1, Bcl2, caspase-3-clivada e Hsp27 em neoplasias intraepiteliais e cânceres invasivos cérvicas
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2007) Dobo, Cristine [UNIFESP]; Oshima, Celina Tizuko Fujiyama [UNIFESP]
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    Mutação eqlb causa alteração na expressão de genes do controle do ciclo celular de precursores de neurônios cerebelares
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2011-04-27) Ariza, Carolina Batista [UNIFESP]; Porcionatto, Marimélia Aparecida [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Várias doenças humanas atualmente conhecidas têm causas genéticas. Uma maneira de se entender as alterações moleculares que levam a essas doenças é através da análise da disfunção de um gene, que pode ser feito usando modelos animais que recapitulem tais patologias. O camundongo desempenha muito bem essa função, devido à alta porcentagem de homologia entre os genomas murino e humano. Mutações espontâneas ou quimicamente induzidas são ferramentas úteis para elucidar como um gene mutado dá origem ao fenótipo da doença. Apesar do atual banco de dados de camundongos mutantes, que é composto na sua maioria por animais nocautes, ser uma fonte valiosa de modelos animais, apenas uma pequena proporção do total de genes mamíferos é representada. Esse vazio está sendo, em parte, completado pelo estabelecimento de novos programas de mutagênese utilizando-se potentes agentes mutagênicos como N-ethyl-N-nitrosourea (ENU). Através de um projeto de mutagênese por ENU, foram isolados mutantes recessivos apresentando vários fenótipos, sendo um deles um mutante apresentando problemas de equilíbrio com características de falta de coordenação motora, denominado equilibrio (eqlb). O fenótipo apresentado por esse mutante nos levou à hipótese de que a mutação gerada poderia estar afetando o desenvolvimento do cerebelo, região do sistema nervoso que controla a execução dos movimentos e o equilíbrio. A avaliação do comportamento de camundongos adultos selvagem e mutantes em teste de desempenho em barra rotatória mostrou que o tempo de permanência dos mutantes eqlb estava significantemente diminuído em relação aos camundongos controle BALB/c. Análises histológicas de cerebelo de camundongos mutantes revelaram formação anormal das camadas celulares, com desorganização da camada de células de Purkinje, o principal tipo de neurônio do cerebelo. As análises histológicas também revelaram uma camada granular externa (CGE) mais espessa nos camundongos mutantes, quando comparados com cerebelos de camundongos selvagem de mesma idade. Ensaio de incorporação de [3H]-timidina mostrou que o espessamento dessa camada pode ser atribuído ao alto índice de proliferação observado nos cerebelos dos camundongos mutantes. Esse aumento no índice de proliferação de precursores de neurônios granulares não foi observado em outros órgãos e outras regiões do SNC, bem com também não foi observado células tronco neurais e mesenquimais derivadas da medula óssea. O mapeamento genético da mutação, usando-se marcadores microssatélites polimórficos, localizou a mutação no cromossomo 17, em uma sub-região delimitada pelo marcador D17Mit267 (3,31Mb) e o limite centromérico. Essa região possui sintenia conservada com a região telomérica do cromossomo 6 humano, a qual apresenta loci relacionados ao aparecimento de ataxias recessivas. Dois genes candidatos foram sequenciados: ENSMUSG00000044697 foi sequenciado completamente e a mutação não foi encontrada, e ENSMUSG00000046201 (Rbm16) e o sequenciamento não foi completo. Análise de expressão gênica diferencial revelou alteração na expressão de genes relacionados a doenças neurológicas e crescimento celular e proliferação nos camundongos mutantes de 6 dias pós natal, e alterações na expressão de genes relacionadas a tumor cerebral e meduloblastoma em camundongos mutantes de 15 dias de desenvolvimento pós natal.
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    Óxido nítrico estimula a vias Ras-MAP quinase promovendo a progressão do ciclo celular e proliferação em células endoteliais de aorta de coelho
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2004) Oliveira, Carlos Jorge Rocha [UNIFESP]; Monteiro, Hugo Pequeno [UNIFESP]
    As vias regulatórias do ciclo celular, como a cascata de proteínas quinases dependentes de ciclina (CDKs), são moduladas por sinais extracelulares, principalmente fatores de crescimento e hormônios. Observações feitas no início da década de 90 (Ziche et ai., 1994) que têm sido corroboradas por vários grupos de pesquisa, apontam para a participação do óxido Nítrico (NO) na angiogênese, processo que envolve a proliferação e a migração de células endoteliais (Folkman & Shing, 1992). Deve-se entretanto ressaltar que o papel do NO na seqüência dos eventos envolvendo a cascata de sinalização Ras-MAP quinases e suas conexões com ciclinas e quinases dependentes de ciclinas, culminando com a proliferação das células endoteliais não foi descrito. Nossa contribuição vem no sentido de preencher esta lacuna. Levando em conta essas observações e os resultados obtidos neste estudo, concluímos que o NO através da cascata de sinalização por ele induzida (Rocha Oliveira, et ai, 2003), contribui para o entendimento do mecanismo que marca a participação deste radical na proliferação de células endoteliais de aorta de coelho. Nossos estudos demonstram a participação do NO na progressão do ciclo celular em células endoteliais de aorta de coelho. Seus efeitos são exercidos especificamente sobre a via p21 Ras - MAP quinase. A seqüência de eventos: fosforilação de Elk-1, síntese de ciclina D1, cdk4, cdk6, fosforilação da pRb, transição do ciclo celular da fase G1 para a fase S, controlada peia ciclina E, passagem da fase S para G2/M através do aumento da expressão da ciclina A que culmina com a proliferação das células endoteliais de aorta de coelho.
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    Acesso aberto (Open Access)
    O papel da sumoilação de proteínas na biologia celular de giardia lamblia
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2016-05-07) Genova, Bruno Martorelli Di [UNIFESP]; Tonelli, Renata Rosito [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/3194859951192116; http://lattes.cnpq.br/3727587755111270; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Protein post-translational modification (PTM) increases the functional diversity of the proteome by the covalent addition of functional groups or proteins. PTMs include the bonding of a chemical group (acetyl, methyl), modifications of amino acids (deamination, elimination), addition of more complex molecules like sugars (glycosylation), lipids (isoprenylation) or another protein. In the latter case, ubiquitination (addition of an ubiquitin) and SUMOylation (addition of a SUMO) are well known PTMs occurring in eukaryotic cells. Modification of a protein by SUMO (Small Ubiquitin-like MOdifier) is known to play a role in many cellular processes such as nuclear-cytoplasmic transport, transcriptional regulation, progression through cell cycle, protein stability and protein cellular localization. In this thesis the biological role of protein SUMOylation was investigated in Giardia lamblia and the data herein show that Giardia genome contains a single SUMO gene, codifying for a SUMO protein (GlSUMO) with 42,7 % identity with the human SUMO-1. In trophozoites GlSUMO is localized mainly at the cell cytoplasm, but also in the nuclei, the perinuclear region and at the cell periphery where it co- localizes with VSPs, suggesting a possible role for SUMOylation in antigenic variation. Silencing of of GlSUMO by RNA interference resulted in trophozoites with abnormal morphologies, adhesion-deficient and slower growth rates. Compared to wild type parasites Flow cytometry and EdU assays suggest that cells with silenced expression of GlSUMO arrest in the G1/S transition. Moreover, the levels of transcripts for cyclin B and ?-giardin are reduced in trophozoites GlSUMO depleted. Ablation of GlSUMO also interfered in encystment, RNAi GlSUMO trophozoites produces less cyst, also the cysts with silenced expression of GlSUMO present deformed cyst walls. CMGC kinase, malate dehydrogenase, glycil t-RNA synthetase, uridine kinase, actin, poly-A polymerase, Lek 1, dnaJ chaperone, elongation factor 2 and arginine deiminase were identified as possible GlSUMO susbtrates by immunoprecipitation with anti-GlSUMO antibody and mass spectrometry. The present study provides strong evidence for a role for SUMO in the regulation of genes involved in cell cycle and cell architecture in Giardia lamblia and has revealed a potential mechanism for SUMO-mediated growth arrest.
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    Papel dos proteoglicanos de heparam sulfato de matriz e superfície na divisão celular
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2002) Moreira, Claudia Regina [UNIFESP]; Nader, Helena Bonciani [UNIFESP]
    O presente trabalho visa o estudo do papel dos proteoglicanos (PGs) da superficie e matriz extracelular (MEC) na divisao celular empregando como modelo celulas endoteliais e de melanoma em cultura. O ester de forbol PMA, um ativador da PKC, apresentou um duplo efeito no crescimento de celulas endoteliais: acao mitogenica no inicio de G1 e acao antiproliferativa ao final de G1, bloqueando a passagem de G1 para a fase S. Por outro lado, PMA estimulou especificamente a sintese de PGHS de maneira dose-dependente em Gol Gl. Alem do PMA, somente o ionoforo de Ca2+ foi capaz de induzir o aumento na sintese de proteoglicano de heparam sulfato (PGHS). De maneira semelhante ao PMA, a bradicinina (BK) estimulou a sintese de PGHS e tambem bloqueou o ciclo celular. O conjunto de dados sugere o envolvimento de diversas isoformas da PKC nestes dois processos, em especial as isoformas de PKC dependentes de calcio. Utilizando n-butanol, um inibidor da PKC, observamos que a biossintese de PGHS nao foi totalmente abolida, indicando a existencia de outra via para a biossintese de PGs, independente da PKC. Esta outra via poderia ser representada por NO, pois dados da literatura mostram que BK interfere na producao deste composto. A importancia dos PGs na proliferacao celular foi estudada empregando-se xilosideos ligados a diferentes agliconas, que atuam como moleculas aceptoras para a biossintese dos glicosaminoglicanos (GAG). Dentre todos os compostos testados, o-nitrofenii-P-D-xilosideo e o melhor aceptor para a sintese de HS sendo o unico composto capaz de alterar o ciclo celular, por bloquear a entrada do ciclo na fase S. Este efeito e similar ao apresentado pelo tratamento de celulas endoteliais com PMA e BK. Estudando PGs de celulas de melanoma e expressao de glicosidases e proteases, foi possivel demonstrar que as celulas com maior potencial invasivo, e portanto maior capacidade migratoria, apresentaram aumento na excrecao de cisteinoproteases (tipo tiol). Por outro lado, as celulas de menor potencial metastatico, apresentam maior atividade das exoglicosidases...(au)
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    Transfecção com oncogene EJ-ras afeta adesão, migração, ciclo celular e expressão do proteoglicano de heparam sulfato (sindecam-4) de células endoteliais
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2004) Azevedo, Carla Cristina Lopes de [UNIFESP]; Nader, Helena Bonciani [UNIFESP]
    Celulas endoteliais de aorta de coelho (EC) foram transfectadas com o oncogene EJ-ras (EJ-ras-EC). As celulas transfectadas apresentam mudancas morfologicas, alta expressao do oncogene Ras, descontrole do ciclo celular, formam multicamadas e sao independentes de fatores do soro. Soro fetal bovino (SFB) e PMA (12-miristato 13-acetato de forbol) especificamente, estimulam a sintese do proteoglicano de heparam sulfato, sindecam-4, em celulas endoteliais de aorta de coelho (EC). Este efeito nao e observado em EJ-ras-EC. A cinetica de entrada da celula na fase S foi determinada pela sintese de DNA ([3H]-timidina e incorporacao de BrdU) e citometria de fluxo. O efeito mitogenico do SFB foi abolido por PMA nas celulas selvagens e PMA causa um bloqueio do ciclo celular na fase G1. Alem disso, o ciclo celular de EJ-ras-EC nao foi afetado pela adicao de FCS ou PMA. Usando um anticorpo monoclonal especifico para a sequencia N-terminal do core proteico do sindecam-4, foi demonstrado que celulas transfectadas com EJras apresentam um aumento na expressao de sindecam-4 (proteoglicano de heparam sulfato). O aumento e observado tanto para o proteoglicano presente nas celulas, como para o secretado para o meio de cultura. Analises estruturais nas cadeias de heparam sulfato usando heparitinases mostraram uma notavel diminuicao na O-sulfatacao na regiao do polimero contendo acido iduronico. Analise da expressao do core proteico do sindecam-4, epimerase e diferentes sulfotransferases por RT-PCR confirmam estes resultados. Transfeccao com EJ-ras leva a um aumento na sintese de heparam sulfato com uma diminuicao da sulfatacao, similar aos dados encontrados em tumores humanos e transformacao neoplasica. A sintese de acido hialuronico (AH) e tambem estimulada em celulas transfectadas com o oncogene Ej-ras. Celulas EJ-ras-EC retem pouca quantidade de AH nas celulas quando comparadas com as celulas selvagens(4 por cento e 26 por cento, respectivamente). Adesao e migracao celular na presenca de diferentes proteinas da matriz extracelular(fibronectina, FN; laminina, LN; colageno tipo I, Col I e colageno tipo IV, Col IV) foram tambem investigadas. Celulas transfectadas com oncogene EJ-ras aderem menos quando comparadas com as celulas selvagens, exceto para FN. Usando PD 98059, um inibidor de MAPKK, foi observado um aumento da adesao em colagenos
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    Trypanosoma cruzi: Uma nova visão de um velho conhecido
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2010-08-25) Ramos, Thiago Cesar Prata [UNIFESP]; Schenkman, Sergio [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Trypanosoma cruzi is the protozoan that causes Chagas’ disease. It divides in the insect vector gut or in the cytosol of an infected mammalian cell. Although the protozoan ultrastructure has been extensively described, little is known about how it changes at the ultrastructural level during the cell division cycle. T. cruzi has one mitochondrion one Golgi complex, one flagellum and one cytostoma. To better understand how the organelles are distributed during its cell cycle, here we provide 3D reconstructions based on images obtained from serial sections on electron microcopy of these parasites at different stages of cell cycle. The parasites were fixed in a mixture of formaldehyde e glutaraldehyde, post-fixed in osmium tetroxide, contrasted with a solution of uranyl acetate membrane contrast enhancement, dehydrated in ethanol and embedded in Epon resin. Ultrathin serial sections of parasites were obtained, analyzed and photographed in a transmission electron microscope JEOL, model, JEM1200EX2. "Reconstruct" software was used for alignment and mounting stacks for the production of a representative 3D models. Subsequently, models of certain structures were merged with the "Blender 3D" modeling software. The localization and distribution of organelles were evaluated and attributed to specific morphological patterns as deduced by distribution of markers by immunofluorescence analysis. We observed an interconnected heterochromatin G1 to G2 phases. The disk shaped kinetoplast, which is the mitochondrial DNA, duplicates at G2 phase, and its division starts from the interior, when the new flagellum is present. The kinetoplast is accommodated within the unique and highly branched mitochondrion, with similar shapes in cells before and after entry into G2. There is an increase in the size and number of intracellular vesicles. The single Golgi complex, localized in the anterior part of the cell, enlarges before division. There is a progressive retraction of the cytostome relative to the nucleus probably to allow formation of a new endocytic structures. This study provides new informations about the parasite anatomy during different stages of the cell division cycle.