Navegando por Palavras-chave "Carboxipeptidases"

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    Biologia molecular do sistema calicreína-cininas: da estrutura à função
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2004) Pesquero, João Bosco [UNIFESP]
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    Clonagem, expressão e purificação da carboxipeptidase M humana em Pichia pastoris
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2004) Craveiro, Rogerio Bastos [UNIFESP]
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    Estrutura molecular e processamento alternativo do gene da carboxipeptidades M humana
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2001) Pessoa, Luciana Gilbert [UNIFESP]; Pesquero, João Bosco [UNIFESP]
    Usando a tecnologia RACE os terminais 5' e 3' do RNAm da carboxipeptidase M ,PM) humana foram determinados e observamos ser divergente da seqüência publicada. Com esses resultados a estrutura completa do gene da CPM humana foi estabelecido baseado na seqüência genômica humana no GenBank. O gene apresentado contem 9 exons compreendendo pelo menos 75 kb da seqüência genômica. Um novo exon 1 de 30 pb foi identificado e uma seqüência promotora ipstream contendo vários sítios ligados a fatores de transcriçao foi encontrada pela análise no computador. Além disso, o códon de iniciaçao ATG foi detectado definindo uma regiao codificadora de 1329pb que codifica para uma proteína de 443 resíduos. adicionalmente, o sítio de poliadenilaçao foi descoberto determinado a regiao nao lodificadora de 2000 nucleotídeos. As fronteiras exon-intron divergem substancialmente comparado as outras carboxipeptidases básicas, CPD, CPE, CPN, AEBP1. Clonagem e sequenciamento dos produtos de RT-PCR de diferentes :tecidos revelaram um splicing alternativo dos exons 3 e 5 responsáveis pela geraçao de quatro diferentes isoformas do RNAm. RNA extraído de tecidos com tumor ,ontem mais RNAm de CPM de todas as isoformas dos o tecido controle sugerindo uma super regulaçao da expressao de CPM em tumores e originando uma questao do papel dessa atividade enzimática em câncer.
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    Estudo da regulação da expressão do gene da carboxipeptidase M de camundongo
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2005) Pessoa, Luciana Gilbert [UNIFESP]; Pesquero, João Bosco [UNIFESP]
    A caracterização da estrutura molecular da carboxipeptidase M humana originou os estudos da enzima em camundongos. Utilizando análise computacional a estrutura do gene em camundongos foi determinada comparando a seqüência de humanos no banco de dados genômico de camundongos. As duas seqüências apresentaram 82 por cento de similaridade entre elas. Foram determinados todos os fatores envolvidos na caracterização do RNAm como tamanho de exons e introns, região de catálise, região hidrofóbica, peptídeo sinal, sítios de glicosilação e glutâmicos catalíticos. A análise computacional proporcionou também a observação de um EST o qual também se tomou objeto de estudos. Após serem definidos todos os fatores pertencentes ao gene iniciamos os experimentos com a demonstração da atividade luciferase para os promotores da CPM e do EST. A análise foi feita em três diferentes tipos celulares para evidenciar a existência de atividade promotora e sua diferente regulação nessas linhagens. O EST foi clonado e transfectado em células para dosagem fluorimetrica de sua atividade carboxipeptidase básica. A técnica de PCR em tempo real foi utilizada para obtenção dos resultados de expressão gênica relativa tanto da carboxipeptidase M como do EST em camundongos nas fases embrionária, neonatal e adulta. Com base nos dados obtidos pudemos concluir a estrutura da carboxipeptidase M e do EST encontrado, sua regulação transcricional e padrão de expressão nos diversos RNAs extraídos de tecidos de camundongos.
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    Importancia do sistema calicreina-cininas na genese e manutencao do choque endotoxico
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2002) Xavier, Janaina [UNIFESP]
    O sistema calicreina-cinina esta envolvido em varios processos biologicos, influenciando fundamentalmente na inflamacao, controle da pressao sanguinea, fluxo local de sangue, transporte de eletrolitos e glicose e proliferacao celular. A calicreina plasmatica libera o peptideo ativo bradicinina do cininogenio de alto peso molecular e este nonapeptideo age predominantemente no receptor 132 de cininas induzindo um efeito hipotensor. As ca rboxipeptidases, principalmente CPN, CPM and CPR, removem a arginina C-terminal da BK formando a des-Arg9-BK, um agonista do receptor B1 de cininas, que e expresso apenas em condicoes patofisiologicas. O mecanismo de formacao de des-Arg9-BK tem especial importancia em condicoes inflamatorias, quando endotoxinas e citocinas induzem o aumento de CPM, CPR e RB1. Nesta situacao, a des-Arg9-BK promove hipotensao acentuada que pode levar a uma perfusao inadequada dos orgaos e frequentemente morte. Este trabalho teve como objetivo geral a determinacao do papel de alguns componentes do sistema calicreina-cininas para o entendimento dos mecanismos que levam a esse processo inflamatorio. Com esta finalidade foram utilizados neste trabalho animais transgenicos nocautes para os receptores 131 de cininas e animais controles, submetidos ou nao a tratamento com endotoxina (LPS). Nesses animais foram avaliadas as atividades de carboxipeptidase em soro e em tecidos, usando como substrato a bradicinina e o substrato fluorogenico dansil-Ala-Arg, respectivamente. A expressao do RNAm das enzimas CPN, CPM e iNOS foi avaliada usando o metodo de RT-PCR e de CPR e CPN por ensaio de protecao a ribonuclease...(au)
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    Transcricao no locus da carboxipeptidase M do camundongo
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2008) Guimaraes, Alessander de Oliveira [UNIFESP]
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    Vias metabólicas na degradação da bradicinina e influência de inibidores de cininases
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 1997) Houch, Jurema Maria Dalle Lucca [UNIFESP]; Lindsey, Charles Julian [UNIFESP]
    A contribuicao de diferentes atividades cininasicas no metabolismo da bradicinina na circulacao arterial foi avaliada na preparacao de leito vascular mesenterico de rato. Os peptideos bradicinina (BK1-9), BK1-8 e BK1-7 foram injetados na preparacao na presenca e ausencia de inibidores de cininases e os produtos de degradacao analisados por HPLC. A potenciacao do efeito vasodilatador da bradicinina por inibidores de cininases foi tambem estudada nesta preparacao. Os resultados mostraram que 30% da bradicinina foram metabolizadas apos passagem pelo leito vascular mesenterico, sendo BK1-7, BK1-5 e BK1-8 os principais produtos gerados. O inibidor da enzima conversora de angiotensina, enalaprilato, inibiu a formacao de BK1-7 e BK1-5 e aumentou a recuperacao de BK1-8. O inibidor da carboxipeptidase M, MGTA, reduziu a formacao de BK1-8. Phosphoramidon, inibidor da endopeptidase neutra 24.11, reduziu fortemente a recuperacao de BK1-7. A recuperacao de BK1-5 e BK1-8 foi altamente dependente do pH diminuindo com o aumento do mesmo. A administracao prolongada do inibidor da ECA, ramipril, levou a um aumento significativo das atividades AmP/DAPIV na circulacao pulmonar de ratos. Nossos resultados mostram que as principais cininases ativas no catabolismo da bradicinina no leito vascular mesenterico sao NEP, ECA e carboxipeptidase M, que agem na porcao C-terminal da molecula. Alem disso, nossos resultados mostram tambem que a inibicao cronica da atividade da ECA leva a uma estimulacao da atividade de outras cininases na circulacao pulmonar, evidenciando a necessidade do desenvolvimento de inibidores de outras cininases para o uso clinico no tratamento de doencas cardiovasculares