Navegando por Palavras-chave "BRAF V600E"

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    Acesso aberto (Open Access)
    AGK-BRAF gene fusion is a recurrent event in sporadic pediatric thyroid carcinoma
    (Wiley-Blackwell, 2016) Cordioli, Maria Isabel C. V. [UNIFESP]; Moraes, Lais [UNIFESP]; Carvalheira, Gianna [UNIFESP]; Sisdelli, Luiza [UNIFESP]; Alves, Maria Teresa S. [UNIFESP]; Delcelo, Rosana [UNIFESP]; Monte, Osmar; Longui, Carlos A.; Cury, Adriano N.; Cerutti, Janete M. [UNIFESP]
    Thyroid cancer is the fastest increasing cancer worldwide in all age groups. Papillary thyroid carcinoma (PTC) is the most common type of thyroid cancer in both adults and children. PTC genomic landscape has been extensively studied in adults, but information regarding sporadic pediatric patients is lacking. Although BRAF V600E mutation is highly prevalent in adults, this mutation is uncommon in pediatric cases. As adult and pediatric PTC is a mitogen-activated protein kinase-driven cancer, this altered pathway might be activated by different genetic events. The aim of this study was to investigate the occurrence of AGK-BRAF fusion gene, recently described in radiation-exposed pediatric PTC, in a cohort of exclusively sporadic pediatric PTC. The series consisted of 30 pediatric PTC younger than 18 years of age at the time of diagnosis and 15 matched lymph node metastases (LNM). Primary tumors and matched LNM were screened for the presence of the AGK-BRAF fusion transcript by RT-PCR. To confirm the identity of the amplified products, randomly selected samples positive for the presence of the fusion transcripts were sequenced. Moreover, BRAF dual-color, break-apart probes confirmed BRAF rearrangement. Overall, the AGK-BRAF fusion gene was detected in 10% (3/30) of primary tumors. For one of these cases, paired LNM was also available, which also shows the presence of AGK-BRAF fusion gene. This study described, for the first time, the presence of AGK-BRAF in sporadic pediatric PTC. Understanding the molecular events underlying pediatric PTC may improve preoperative diagnosis, allow molecular prognostication and define a therapeutic approach toward sporadic PTC patients.
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    Acesso aberto (Open Access)
    AGK::BRAF no carcinoma papilífero da tiroide pediátrico: investigação do mecanismo associado à agressividade tumoral e análise funcional
    (Universidade Federal de São Paulo, 2023-03-31) Sisdelli, Luiza de Mello Oliveira [UNIFESP]; Cerutti, Janete Maria [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/1384038091754225; https://lattes.cnpq.br/8310429990740701
    Introdução: O carcinoma papilífero da tireoide (CPT), apesar de ser raro em crianças e adolescentes, geralmente têm uma apresentação clínica mais agressiva nesta população do que o CPT em adultos, apresentando multifocalidade, subtipos histológicos mais agressivos, presença de invasão tumoral, e maior prevalência de metástase loco-regional e à distância. Apesar disso, a mortalidade pelo câncer na faixa etária pediátrica é inferior àquela reportada em adultos. Tem sido sugerido que estas características clínico patológicas observadas em pacientes pediátricos (≤ 18 anos) deve-se, principalmente, às diferenças observadas quanto ao tipo de alteração observada nos genes “drivers” que levam à ativação constitutiva da via MAPK/ERK neste grupo de pacientes, bem como, maior responsividade ao tratamento convencional como iodo. Objetivos: Esta tese teve como objetivo analisar alterações genéticas associadas a ativação das vias RAS/MAPK/ERK e PI3K/AKT em 79 casos de CPT pediátricos e avaliar o efeito da presença da fusão AGK::BRAF na ativação da via MAPK, na expressão do gene NIS (do inglês, sodium/iodide symporter) e na atividade de NIS, bem como, em processos biológicos associados à progressão tumoral. Metodologia: As fusões gênicas (RET::PTC1, RET::PTC3, AGK::BRAF, ETV6::NTRK3 e STRN::ALK) foram avaliadas por RT-PCR e as variantes patogênicas do tipo SNVs (do inglês, Single Nucleotide Variants) (BRAF V600E, e TERT C228T/C250T) avaliadas por sequenciamento de Sanger. A análise funcional foi realizada na linhagem celular derivada de células foliculares de tiroide normal de rato (PCCL3) permanentemente e independentemente transfectadas com plasmídeo contendo cDNA de AGK::BRAF, ETV6::NTRK3, RET::PTC1, RET::PTC3, BRAF V600E, e BRAF WT (do inglês, wild type). Para examinar o efeito destes eventos genéticos nas vias de sinalização RAS/MAPK/ERK e PIK3/AKT e nas taxas da expressão de NIS, utilizamos a técnica de Western-blot. A atividade de NIS foi analisada por um ensaio de captação de iodeto não radioativo. A instabilidade genômica foi investigada por ensaio de micronúcleos com DAPI e microscopia fluorescente. A organização dos telômeros foi avaliada por hibridização in situ fluorescente quantitativa (Q-FISH) seguida por análise da organização tridimensional (3D) dos telômeros utilizando o software TeloView®. A organização da cromatina, por microscopia de super-resolução de iluminação estruturada tridimensional (3D-SIM), seguido por granulometria. Resultados: Na análise do perfil molecular, identificamos alterações genéticas em 53/79 (67%) dos casos de CPT, sendo que 59% (47/79) apresentavam fusões gênicas. RET::PTC1 foi a alteração genética mais frequente (22/79, 28%), seguida de AGK::BRAF (15/79, 19%), ETV6::NTRK3 (14/79, 18%), RET::PTC3 (12/79, 15%), BRAF V600E (11/79, 14%) e STRN::ALK (3/79, 4%). Entre as amostras analisadas para mutações do promotor de TERT (C228T e C250T) (n = 42), apenas uma (1/42, 2,4%) carregava uma variante patogênica (C250T). Além disso, identificamos a coexistência de mais de uma alteração genética associada à via MAPK em cerca de 1/3 desta coorte. Encontramos uma associação entre a presença de fusão RET::PTC3 e metástases linfonodais, multifocalidade e tamanho do tumor. A análise funcional demonstrou que a fusão AGK::BRAF leva a maior ativação da via MAPK e menor expressão e atividade de NIS em células PCCL3. Estes dados foram acompanhados por um maior número de micronúcleos e pontes anafásicas, alteração da organização 3D dos telômeros e da estrutura da cromatina. Demonstramos que os tumores de pacientes pediátricos têm diferentes assinaturas de organização telomérica e estrutura do DNA, em comparação com o tecido normal, sugerindo uma ruptura progressiva da organização da cromatina e dos telômeros, que pode estar relacionada à instabilidade genômica. Além disso, dados preliminares do 3D-SIM demonstram que pacientes com características clinicopatológicas de mau prognóstico (metástase à distância, multifocalidade e tamanho tumoral > 2 cm) apresentam mais espaços pobres em DNA nos núcleos dos tumores. Curiosamente, os tumores positivos para a fusão AGK::BRAF, mostraram uma tendência a ter mais espaços pobres em DNA em seus núcleos. De fato, demonstramos, em uma análise feita em um relato de caso, que a fusão AGK::BRAF resulta em uma organização diferente dos telômeros e do DNA, quando comparada a RET::PTC3. Conclusão: Aqui confirmamos que rearranjos são o evento genético mais comum no CPT pediátrico, e ainda demonstramos que co-ocorrência de mais de uma alteração genética que levam à ativação da via RAS/MAPK/ERK são prevalentes nos tumores desta população. Importante, observamos que o rearranjo RET::PTC3 está associado a características de mau prognóstico no CPT pediátrico. Os dados da análise funcional ajudaram a elucidar os mecanismos pelos quais a fusão AGK::BRAF causa a desdiferenciação das células tiroidianas e um comportamento mais agressivo das células tumorais em casos pediátricos de CPT com metástase à distância. Também demonstramos como o estudo da organização tridimensional nuclear e da estrutura do DNA do CPT pediátrico pode ser de extrema importância para o melhor entendimento desses tumores.
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    Acesso aberto (Open Access)
    Novos insights no prognóstico de microcarcinoma papilífero da tiroide: análise do status mutacional de BRAF V600E e sequenciamento de RNA
    (Universidade Federal de São Paulo, 2022-08-22) Colozza-Gama, Gabriel Avelar [UNIFESP]; Cerutti, Janete Maria [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/1384038091754225; http://lattes.cnpq.br/1103255497443172
    O carcinoma papilífero da tiroide (PTC) é o subtipo mais comum de câncer de tiroide e também é o que apresentou maior aumento de incidência nos últimos anos. O aumento na prevalência deve-se, principalmente, ao aumento nas taxas de diagnóstico de tumores pequenos, sendo que, pelo menos 50%, são tumores com tamanho igual ou menor de 1cm, os chamados microcarcinomas (microPTC). Em geral, estes tumores são considerados altamente indolentes, com baixa taxa de recorrência e alta taxa de sobrevida. Entretanto, aproximadamente 30% dos casos pode ter comportamento mais agressivo. Mesmo assim, a grande maioria dos microcarcinomas, seguem o tratamento preconizado para tumores >1cm. Além da probabilidade de ocorrência de complicações devido a tiroidectomia por microcarcinoma, como hipocalcemia, existem gastos associados ao procedimento que podem onerar o sistema público, necessidade de reposição hormonal e outros. A identificação de marcadores de diagnóstico e prognóstico pré-cirúrgicos pode auxiliar no manejo, diagnóstico e tratamento clínico ou cirúrgico. Desta forma, permite melhor seleção dos pacientes encaminhados para cirurgia, além de permitir determinação do tipo e da extensão da cirurgia. Apesar de haver poucos estudos sobre o uso de marcadores de prognóstico nos casos de microPTC, a mutação BRAF V600E tem sido associada a pior prognóstico nos casos de PTC com tamanho > 1cm. Tem sido sugerido que além de identificar a mutação BRAF V600E, determinar a percentualidade das células com a presença da mutação pode fornecer informações relacionadas ao comportamento biológico do tumor. Sendo assim, nos propomos inicialmente investigar a presença da mutação BRAF V600E e avaliar o percentual de células com a presença do alelo V600E no tumor primário e nas metástases linfonodais pareadas, por meio da técnica do pirosequenciamento para determinar se, além da mutação, determinar o percentual de células mutadas pode desempenhar papel relevante no prognóstico dos microPTC. Para isso, o status mutacional das amostras será correlacionado com os dados demográficos e clínico-patológicos. Posteriormente, com o objetivo de identificar novos marcadores de prognóstico e dignóstico, selecionamos os casos que apresentam um comportamento biológico mais agressivo e que forem negativos para BRAF V600E, além de selecionar casos positivos para a mutação a fim de buscar genes que possam colaborar com BRAF. Os casos selecionados foram submetidos a sequenciamento de RNA. Trata-se de um estudo original e que deve auxiliar o diagnóstico e prognóstico pré-cirúrgico dos nódulos da tiroide.