Navegando por Palavras-chave "Angiotensinas"

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    Associação das isoformas da enzima conversora de angiotensina I(ECA) a disfunções dos sistemas renal e pancreático no diabetes melito em ratos Wistar e espontaneamente hipertensos (SHR)
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2006) Ronchi, Fernanda Aparecida [UNIFESP]; Casarini, Dulce Elena [UNIFESP]
    O Sistema Renina Angiotensina Aldosterona (SRAA) está envolvido na homeostase da pressão sangüínea. Descontando a evidência da intolerância à glicose no hiperaldosteronismo, na hipertensão essencial, as inter-relações entre o SRAA e a tolerância à glicose e sensibilidade à insulina não tem sido exploradas sistematicamente. Estudos têm apontado para uma interessante possibilidade de que a inibição da Enzima Conversora de Angiotensina I (ECA) pode melhorar a resistência à insulina na hipertensão essencial. A ECA participa da regulação da pressão sangüínea, inativando um peptídeo biologicamente ativo vasodilatador, a Bradicinina, e converte a Angiotensina I (Ang I) em Angiotensina 11 (Ang 11), um potente peptídeo vasopressor, que exerce várias funções fisiológicas e fisiopatológicas, e ainda é capaz de hidrolisar diferentes substratos como o hormônio LH-RH, a substância P e a Angiotensina 1-7 (Ang 1-7) . Recentemente, a Ang 1-7 tem apresentado um importante papel no controle da função renal, contrabalançando as ações da Ang 11. Em estudos anteriores de nosso laboratório, foram detectadas em urina de ratos Wistar (W) as isoformas de 190 e 65 kDa, perfil semelhante ao descrito para os indivíduos normotensos. Na urina de ratos espontaneamente hipertensos (SHR), foram identificadas as isoformas de 80 e 65 kDa, fragmentos N-terminais da ECA, repetindo o perfil encontrado em indivíduos hipertensos leves. Neste estudo, verificamos as possíveis alterações na expressão protéica e/ou atividade enzimática das isoformas da Enzima Conversora de Angiotensina I (ECA), no modelo in vivo de Diabetes melito. Além disso, analisamos o efeito renoprotetor de um bloqueador de AT1 (Losartan) e um inibidor de ECA (enalapril) nesse modelo e o reflexo sobre os níveis das angiotensinas. Para realizarmos nossos objetivos, utilizamos estreptozotocina para induzir os animais Wistar e SHR ao Diabetes melito, sendo a droga administrada na veia caudal do animal. Os animais SHR tratados receberam uma dose de 50mg/kg/dia de losartan e 20mg/kg/dia de enalapril. As drogas foram administrada na água de beber, após a indução do diabetes, durante 30 dias...(au).
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    Caracterizacao de endopeptidase hepatica cinino-inativadora
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 1998) Molina, Hercilia Maris [UNIFESP]
    Verificamos em trabalhos anteriores que o figado perfundido possui grande capacidade de inativar a bradiclnina e purificamos cininase cininoinativadora. Removemos do figado, e purificamos, esta endopeptidase cininoinativadora (BIE). Sua remocao do ligado de rato previamente exsanguinado foi obtida perfundindo-se o orgao com Krebs-Henseleit-bicarbonato contendo Triton X-IOO O,05 por cento . A localizacao celular da enzima pode ser suposta (pela quantificacao de enzimas co-removidas) mas novos experimentos sao necessarios para demonstra-la. A purificacao da cininase envolveu as etapas de cromatografia em coluna de troca ionica (QAE Cellex), coluna de gel filtracao (Sephacryl S- 300) e coluna de afinidade em coluna de Blue Sepharose CL-6B. A enzima purlficada (BIE) hidrolisa eficientemente os substratos analogos a bradicinlna: Abz-R-P-P-G-F-S-P-F-R-EDDnp (na ligacao F 5S6 ) e Abz-R-P-P-G-F-S-P-F-R-Q-EDDnp (na ligacao P7F 8) . A Introdução do residuo de glutamina na posicao C-terminal da bradicinlna mudou a ligacao de hidrolise, por mecanismo ainda nao elucidado. O substrato Abz-F-R-K(Dnp)P, preferencial da enzima conversara de 2 3) anglotensina (ECA), foi hidrolisado pela BIE (na ligacao R K com efiCiência desprezivel, quando comparada a da ECA. A atividade da BIE foi 'n'bida por reagentes bloqueadores de grupo tiol (p-CXM), indicando que a enzima contem pelo menos um grupo tiol livre e importante para sua atividade; a adicao de cisteina ao meio de incubacao reverteu a inibicao. A BIE foi tambem inibida por inlbidores inespecificos de cisteinoproteases (p- e Ac Hg), que reagem com a sulfidrila de residuos de cisteina. A endopeptidase nao foi inibida por lnibidor especifico de I cisteinoproteases (E64), sugerindo que o residuo de cisteina, embora essencial Para sua atividade, nao esta no sitio ativo da enzima. A cininase foi inibida por agentes quelantes (EDTA e orto-fenantrolina), mas nao por captopril e enalapril (inibidores especificos da ECA). Estes resultados sugerem ser a BIE metaloendopeptidase, contendo grupo tiol importante para sua atividade. Estas caracteristicas bioquimicas sao vi similares as descritas para a enzima EC 3.4.24.14 (thimet oligoendopeptidase, TOP). A BIE tem a mesma migracao eletroforetica (PAGE) da EC 3.4.24.15 e em immunoblotting reconhece o anticorpo especifico antl-EC 3.4.24.15. As duas enzimas hidrolisam os substratos Abz-R-P-P-G-F-S-P-F-R-EDDnp e Abz-G-G-F-L-R-R-V-EDDnp (analogo a dinorfina A....(au)
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    Acesso aberto (Open Access)
    Caracterização do sistema renina angiotensina no rim e coração do camundongo transgênico que expressa tonina de rato
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2010-05-26) Ribeiro, Amanda Aparecida [UNIFESP]; Casarini, Dulce Elena [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Angiotensin II (Ang II), one of the most relevant angiotensinergic peptides, has an important role in the renal and cardiac physiology. There are many enzymes that generate Ang II. One of them is tonin, that is able to liberate AII from angiotensin I (Ang I) or directly from angiotensinogen (AGT). Our goal was to characterize the RAS in the kidney and heart of transgenic mouse that express rat tonin [TGM(rTon)]. Twenty-four hours after implantation of cannulas, 12 weeks old awake animals were subjected to hemodynamic evaluation. Data showed no statistical differences for the hemodynamic parameters analyzed between transgenic and the wild-type (control, CT). After that mice were sacrificed by decapitation and their organs (kidney and heart) removed. Heart was separated into atria [right plus left (AT)], right ventricle (RV), and left ventricle (LV)]. Using the synthetic tetradecapeptide renin substrate, tonin activity was evaluated in the kidney and cardiac structures. The angiotensin converting enzyme (ACE) activity was determined using the substrates Z-Phe- His-Leu (specific for N-domain ACE active site) and Hip-His-Leu (specific for Cdomain active site). Both the activity of tonin and the ACE, in the kidneys and AT were significantly higher in TGM(rTon) when compared with CT mice. Among the cardiac structures AT showed significantly greater activity in both groups when compared to the ventricles.The expression of the 65 kDa ACE isoform was significantly higher in TGM(rTon) in the kidney and AT when compared with CT. ACE2 expression was determined only in the kidney and there was not statistic differences between groups. The levels of angiotensin 1- 7 [Ang-(1-7)] and Ang I was significantly decreased in TGM(rTon) when compared with CT. However, the levels of Ang II were not statistically different between groups. We suggest that the environment of tonin abundance may increase N-domain ACE activity by a secretase activity, which could explain the low levels of Ang-(1-7) in the transgenic animal. Our data show, for the first time, the physiologic role of tonin as an important modulator of renal and cardiac RAS.
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    Efeitos do exercicio fisico aerobio de alta intensidade em ratos com Diabetes Mellitus experimental
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2012) Rampaso, Rodolfo Rosseto [UNIFESP]
    Introdução: O Diabetes Mellitus tem se mostrado um tema de constante preocupacao entre os profissionais da area de Saúde. E uma das principais doencas que levam a nefropatias e doencas cardiovasculares. O exercicio fisico de baixa e moderada intensidade tem se mostrado um importante adjuvante no tratamento nao medicamentoso do diabetes, porem, pouco se sabe sobre os beneficios que o exercicio fisico aerobio de alta intensidade poderia adicionar como variante complementar a este tratamento. Objetivo:Este trabalho teve como objetivo analisar os efeitos do exercicio fisico aerobio de alta intensidade sobre os parametros renais e cardiovasculares, a producao de oxido nitrico (NO) e as Angiotensinas I, II e 1-7 sericas no diabetes experimental. Metodos: Foram utilizados ratos Wistar com peso corporal entre 240 e 280 gramas, divididos em quatro grupos: controle sedentario (C-SED), controle exercicio (C-EXE), Diabetes Mellitus sedentario (DM-SED) e Diabetes Mellitus exercicio (DM-EXE). No inicio do protocolo os grupos DM-SED e DM-EXE receberam dose unica de (50 mg/kg) de estreptozotocina (STZ), endovenosa (ev), e foram considerados diabeticos os animais que apresentaram glicemia superior ou igual 250 mg/dl nas 48 horas apos a inducao. Os animais foram tratados com 0,5 unidades de insulina NPH por dia. O exercicio fisico aerobio de alta intensidade foi realizado em esteira rolante por um periodo de 8 semanas e sua velocidade ajustada apos testes de esforco maximo. Para as medidas de funcao renal colhemos sangue e urina de 24h para avaliarmos a creatinina e as alteracoes nas fracoes de Na+ e K+ bem como a proteinuria. Foi realizado ecodopplercardiograma para avaliacao da variabilidade da FC, volume de sistole e diastole e as paredes anteriores e posteriores do coracao. Foram dosados NO urinario e serico por quimiluminescencia e as Angiotensinas I, II, e 1-7 sericas foram quantificadas pelo HPLC. Resultados: O exercicio fisico aerobio de alta intensidade atenuou a perda de peso e a glicemia do grupo diabetes e exercicio (DM-EXE). O treinamento fisico aumentou a capacidade fisica deste grupo em 60%. Em relacao aos parametros renais, o clearance de creatinina reajustado pelo peso nao apresentou diferenca significante entre os grupos. Por outro lado, o grupo DM-EXE teve uma fracao de excrecao de Na+ 50% menor que o grupo DM-SED, e a fracao de excrecao de K+ o grupo DM-SED apresentou um aumento de 78% quando comparado aos outros grupos. Observamos que a proteinuria do grupo DM-EXE apresentou uma reducao de 60% se comparado ao grupo DM-SED. O NO serico dos grupos exercitados apresentaram um aumento expressivo em relacao aos grupos nao exercitados, destacando-se o grupo DM-EXE que teve um aumento de 40% se comparado ao grupo DM-SED. O oxido nitrico urinario dos grupos DM apresentaram reducao significativa em relacao aos grupos C-SED e C-EXE, porem, o grupo DM-EXE atenuou esta perda e teve seu uNO 138% maior que o grupo DM-SED. Nas angiotensinas, os grupos exercitados mostraram resultados relevantes quando comparados aos grupos nao exercitados. As Ang I e II sericas do grupo DM-EXE apresentaram reducao de 45% quando comparado ao grupo DM-SED, ja a Ang 1-7 do grupo DM-SED teve aumento de 118% quando comparado aos outros grupos. Pela avaliacao com o ecodopplercardiograma, os grupos exercitados tambem tiveram desempenho relevante se comparados aos grupos nao exercitados. O grupo DM-SED apresentou volume sistolico e diastolico 45% menor que os grupos DM-EXE e C-EXE. A frequencia cardiaca do grupo DM-SED foi 17% maior que a dos grupos exercitados. As paredes posteriores e anteriores durante a diastole dos grupos DM-SED e C-SED apresentaram uma reducao de 30% e 20%, respectivamente, quando comparadas aos grupos DM-EXE e C-EXE. As paredes do coracao na sistole nao apresentaram diferencas entre os grupos. Conclusao: Desta maneira, os resultados obtidos no presente trabalho indicam que o exercicio fisico aerobio de alta intensidade se mostrou eficaz e potencial contribuinte no tratamento do diabetes, induzindo melhoria nos parametros renais e cardiovasculares, aumentando a capacidade fisica e atenuando os efeitos deleterios da doenca, neste protocolo experimental
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    Estudo comparativo da expressao da endopeptidase neutra em tecidos e urina de ratos Wistar e espontaneamente hipertensos (SHR)
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2008) Watanabe, Ingrid Kazue Mizuno [UNIFESP]
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    Acesso aberto (Open Access)
    Estudo da enzima aminopeptidase A e sua importância no controle da pressão arterial
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2015-03-25) Morais, Rafael Leite Tavares de [UNIFESP]; Pesquero, Joao Bosco [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    A hipertensão é um sério problema de saúde e responsável pela maior parte das mortes de origem cardíaca e vascular. A Organização Mundial da Saúde estima que há atualmente mais de um bilhão de hipertensos em todo o mundo e considera o aumento da pressão sanguínea como fator de risco número um para mortes. O sistema renina-angiotensina-aldosterona, atualmente o mais conhecido regulador da pressão sanguínea, é um sistema alvo no qual já foram desenvolvidos diversos rnedicarnentos destinados ao controle da hipertensão. A angiotensina 11apresenta-se como o principal efetor desse sistema na circulação periférica, atuando diretamente na vasoconstrição através do receptor AT1 e na elevação da pressão sanguínea. A aminopeptidase A é uma enzima que atua no sistema renina-angiotensina-aldosterona pela conversão angiotensina 11-7 111, sendo citada em diversos estudos por suas ações no controle da pressão sanguínea. Portanto, o nosso objetivo neste projeto foi estudar a função da aminopeptidase A no controle da pressão sanguínea por meio da regulação dos peptídeos angiotensina 11e 111na circulação e tecido renal em camundongos obesos ob/ob. Nossos resultados mostram que camundongos obesos ob/ob apresentam pressão arterial normal apesar de possuírem fatores de risco como obesidade mórbida, hiperglicemia, dislipidemia e diabetes, as quais predispõem a fatores de risco para o desenvolvimento da hipertensão. Interessantemente, verificamos que camundongos ob/ob apresentam maior atividade da aminopeptidase A sérica e renal, maiores níveis circulantes de angiotensina 111,maior expressão gênica do receptor AT2 no rim e maior excreção de sódio na urina que seus controles. Esses dados sugerem um possível efeito protetor contra a hipertensão, tanto pela maior ativação do receptor AT2 via angiotensina III quanto pela maior capacidade de metabolização angiotensina II -7 111.
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    Acesso aberto (Open Access)
    Estudo da expressão de genes relacionados a receptores nucleares e a complexos ativadores e repressores da transcrição em linhagens tumorais mamárias SKBR3 após tratamento com angiotensina-(1-7) ou gonadotrofina coriônica humana
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2014) Binda-Neto, Isidoro [UNIFESP]; Facina, Gil [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    O cancer de mama e o cancer mais comum entre as mulheres, excluindo-se o cancer de pele nao melanoma. A angiotensina-(1-7) [Ang-(1-7)] tem sido associada a efeitos antiproliferativos e apoptoticos no cancer, com propriedades semelhantes as da gonadotrofina corionica humana (hCG). Os objetivos deste trabalho sao avaliar o papel da Ang-(1-7) e do hCG na modulacao da expressao genica de receptores nucleares e de correguladores na linhagem celular tumorigenica da mama SKBR3. Tres grupos experimentais foram produzidos de acordo com o tratamento que receberam: controle; hCG e hCG + Ang-(1-7). As celulas foram tratadas durante 11 dias e, em seguida, procedeu-se a extracao do RNA total das celulas de cada um dos grupos. As amostras de RNA extraidas foram analisadas por meio de placas de PCR Array, contendo 84 genes relacionados a receptores nucleares e a correguladores. Os dados de expressao genica obtidos foram utilizados na identificacao de vias canonicas (MetacoreTM). O tratamento com hCG ou Ang-(1-7)+hCG marcadamente modulou a expressao dos genes relacionados aos receptores nucleares e aos correguladores. O tratamento isolado com hCG causou expressao diferencial em 17% dos genes da linhagem tumoral SKBR3, sendo que, destes, 29% estavam hiperexpressos e 71% hipoexpressos em relacao ao controle. Enquanto isso, o tratamento destas celulas com Ang-(1-7)/hCG mudou a expressao de 30% destes mesmos genes. Entretanto, 56% estavam hiperexpressos e 44% hipoexpressos. Dentre estes genes diferencialmente expressos, vale destacar ESR1, Nr3C1 e Nr2f1 e Nr4A1 (mais que tres vezes). A analise por MetaCoreTM, com base na Ontologia do Gene (GO), gerou seis redes de interacao intracelular para o tratamento com hCG e dez para o tratamento combinado das celulas SKBR3. Todas as redes geradas estao relacionadas com a regulacao da apoptose ou com seus processos. Em resumo, os resultados demonstram que a modulacao de hormonios sexuais e de outros genes relacionados ao fator de expressao nuclear pode acarretar tanto o efeito de protecao tumorigenica, quanto da inducao da diferenciacao celular causada pelos hormonios hCG e Ang-(1-7), especialmente em linhagens de celula mamarias pouco diferenciadas, similares as celulas-tronco tumorais
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    Acesso aberto (Open Access)
    Estudo da secreção de CXCL12 por astrócitos e células-tronco mesenquimais
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2015-06-24) Reis, Marcella Braga da Costa [UNIFESP]; Porcionatto, Marimelia Porcionatto [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/6155537170968904; http://lattes.cnpq.br/6151594754276408; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    O CXCL12 é uma quimiocina presente na maioria dos tecidos de mamíferos. Possui dois receptores conhecidos, o CXCR4 e o CXCR7, porém a maior parte de suas funções está relacionada à ativação do CXCR4. Na neurobiologia, sua importância se deve a sua capacidade de modulação de diferentes etapas da neurogênese como proliferação, migração, diferenciação, extensão neurítica e formação de sinapses. O estudo de suas funções, assim como de sua expressão e secreção são de extrema importância para o entendimento dos processos neuroregenerativos. Neste trabalho construímos vetores para expressão de CXCL12 acoplado a proteína fluorescente em células-tronco mesenquimais (CTM) com o intuito de utilizá-las em lesão cortical isquêmica. Paralelamente, analisamos a secreção de CXCL12 em astrócitos nocaute para conexina 43 (Cx43), proteína previamente relacionada à secreção de CXCL12 por CTM. Observamos inicialmente que os vetores foram produzidos com sucesso e que células HEK293T transfectadas com os vetores construídos expressavam e secretavam a proteína de fusão. Também analisamos a funcionalidade da quimiocina recombinante e, por ensaio de migração em câmara transwell, concluímos que a proteína de fusão secretada possuia atividade quimiotática. Porém, quando aumentamos a expressão de CXCL12 por transdução viral em CTM, detectamos a proteína de fusão apenas dentro da célula, não sendo possível detectar secreção de CXCL12 recombinante por CTM. Também observamos que animais isquêmicos transplantados com CTM contendo a sequência da proteína híbrida não apresentaram aumento de neuroblastos migratórios atraídos para o local do transplante. Adicionalmente, verificamos que a secreção e expressão de CXCL12 por astrócitos imortalizados e provenientes de cultura primária é regulada negativamente pela Cx43 e que essa modulação não interfere na expressão e localização subcelular do Sp1, fator de transcrição responsável pela regulação da expressão do CXCL12.
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    Acesso aberto (Open Access)
    Estudo de parâmetros de função renal e vesical em pacientes com bexiga neurogênica por mielomeningocele com lesão renal detectada por cintilografia renal com DMSA e submetidos à análise de marcadores séricos e urinários do sistema renina angiotensina aldosterona
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2019-06-14) Amaral, Cassia Maria Carvalho Abrantes Do [UNIFESP]; Macedo Junior, Antonio [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/6550002842303204; http://lattes.cnpq.br/3154437582348700; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Introduction: Myelomeningocele (MMC) is defined as a malformation of the central nervous system caused by a failed closure of the neural tube in the embryonic period. MMC is mainly associated with nephrological manifestations such as urinary tract infection, neurogenic bladder, sphincter dysfunction, and vesicoureteral reflux (VUR) that could progress in the most severe cases to chronic kidney disease (CKD). The prevalence of CKD has fallen in the last two decades, following the advent of intermittent catheterization, as well as the use of anticholinergic drugs and urological surgeries. A risk factor for the development of CKD is the active intrarenal reninangiotensin-aldosterone system (RAAS) in acute renal diseases. Involved in alterations of the electrolytic homeostasis and arterial blood pressure, the RAAS, intermediated by the angiotensin converting enzyme (ACE), angiotensin I (Ang I), and angiotensin II (Ang II), promotes kidney vasoconstriction. Objective: To evaluate clinically, demographically and radiologically the patients with MMC and neurogenic bladder (BN) in follow-up at the Pediatric Nephrology Outpatient Clinic of UNIFESP. To evaluate within this group of patients those who present alterations of renal scintigraphy with DMSA (patients group, GP=17), observing their clinical, demographic and radiological characteristics. To evaluate the urinary and serum RAAS modulators (ECA and ECA 2 serum and urinary ECA) within the GP. To compare the RAAS modulators with 17 healthy controls, paired by sex and age (control group, CG). Methods: DMSA altered patients were selected from 87 patients in regular follow-up at the Pediatric Nephrology Outpatient Clinic of UNIFESP. The selected patients (n=17) were submitted to an urological evaluation, with verification of their subsidized exams and urodynamic study. All 17 patients performed the data collection of ACE and ACE 2 serum and urinary ACE, as well as the patients in the control group (CG, n=17). Results: The highest average age (11,2 years), the presence of alteration in renal function (23,5) and of RVU (41,2%) were statistic correlated to pacientes with positive DMSA. The ACE serum activity was significant bigger in patients with altered DMSA in comparison with the control grup, what wasn’t observed regarding serum ACE 2 and urinary. Conclusion: Despite the advances in the understanding of RAAS as a participant in the mechanism of renal injury, the presence of renal injury evidenced by renal scintigraphy with DMSA was not accompanied by alteration of all serum and urinary markers evaluated in this study.
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    Acesso aberto (Open Access)
    Estudo dos efeitos da radiação na estrutura de alguns peptídeos de relevância biológica
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2009-07-29) Nardi, Daniela Teves [UNIFESP]; Nakaie, Clovis Ryuichi [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Os produtos de reações e os mecanismos envolvidos na radiólise de macromoléculas de relevância fisiológica têm sido objetos de diversos estudos. Estes fatores são conhecidos por atuarem em diversos tipos de patologias no organismo humano. Como uma das fontes de geração de radicais livres em solução pode ser obtida pela ação da radiação ionizante, decidiu-se nesta tese, avaliar-se o efeito da irradiação de alguns peptídeos de importância fisiológica. A parte preponderante deste trabalho envolveu o estudo dos peptídeos vasoativos angiotensina II (DRVYIHPF, AngII) e bradicinina (RPPGFSPFR, BK). Foram realizadas irradiações com doses variando entre 1 e 15 kGy, nas quais foram observadas uma progressiva degradação de suas estruturas em função da dose de radiação. Notou-se neste processo, a formação de subprodutos que foram purificados e caracterizados por diferentes procedimentos experimentais dentre os quais: HPLC, análise de aminoácidos e espectrometria de massa, e sequenciamento de aminoácidos. Além destes, foram também realizados ensaios de dicroísmo circular (CD) e atividade biológica (contrações musculares). No estudo da AngII, foram isolados três análogos: Tyr 8 -AngII, m-Tyr 8 -AngII, e Lys 6 -AngII. Quanto ao estudo da BK, notou-se novamente a transformação do resíduo de Phe em Tyr e m-Tyr, mas apenas ocorrendo com o resíduo de Phe 8 e não Phe 5 da estrutura da BK. Este dado, de grande relevância, indica que o efeito da radição é sequência dependente. Vale a pena ressaltar que não se observou alterações simultâneas tanto na AngII quanto na BK. Os produtos isolados sempre contiveram apenas uma destas alterações mencionadas. Além destes peptídeos, foram estudados em caráter preliminar, a angiotensina I (DRVYIHPFHL, AngII, o hormônio liberador de melanócito (acetil-SYSMEHFRWGKV- amida, α-MSH), e dois análogos marcados com o spin label TOAC (ácido 2,2,6,6- tetrametilpiperidina-1-oxil-4-amino-4-carboxílico) na posição 1 (AngII) e na posição 3 (BK). Em comum, todos os peptítdeos mostraram uma degradação não linear e em função da dose de radiação. Observou-se também um acréscimo de massa de 16 Da em relação ao peptídeo nativo nos subprodutos encontrados nos peptídeos que apresetaram a formação de subprodutos. Foi também realizado um estudo com soluções equimolares de L-aminoácidos livres no qual foi observado apenas um decréscimo dose-dependente dos aminoácidos Cys e Met, nas condições estudadas. Em conclusão, este tipo de projeto de pesquisa parece ser promissor no sentido de poder-se continuar com os estudos já iniciados e que poderão levar a um esclarecimento mais aprofundado do efeito da irradiação e, por conseguinte, do mecanismo de ação dos radicais livres gerados em solução. Estes achados poderão ser, portanto, relevantes para estudos de diferentes tipos de processos fisiológicos que ocorrem no organismo animal. Além do mais, esta estratégia experimental desenvolvida no presente estudo, pode ser de grande relevância para a produção de novas drogas terapêuticas, pois como foi observado, podem se gerar derivados peptídicos não usuais e, portanto de difícil obtenção pelos métodos convencionais envolvendo a síntese de peptídeos (e por extensão, de proteínas)
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    Estudo populacional para verificar a prevalencia da isoforma N-dominio de 90 kDa da enzima conversora da angiotensina (ECA)
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2007) Meiken, Leila Cristina Verlangieri Maluf [UNIFESP]
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    Expressão da enzima conversora de angiotensiva 2(ECA2) em células mesangiais imortalizadas
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2008) Aragao, Danielle Sanches [UNIFESP]; Casarini, Dulce Elena [UNIFESP]
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    Influência das disfunções do sistema renal na atividade da enzima conversora de angiotensina I N-domínio, em modelo de insuficiência renal crônica
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2006) Arita, Danielle Yuri [UNIFESP]; Casarini, Dulce Elena [UNIFESP]
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    Mecanismos de ação simpática em um modelo de hipertensão arterial renal
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2006) Dugaich, Adriana Poli Castilho [UNIFESP]; Campos Júnior, Ruy Ribeiro de [UNIFESP]
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    Relação entre a estrutura e a atividade das angiotensinas
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 1962) Paiva, Antonio Cechelli de Mattos [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo [UNIFESP]
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    Sinalização celular pela ativação do receptor AT1 da angiotensina II permanentemente transfectado em células CHO: estudos com mutações sitio-dirigidas
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2002) Corrêa, Silvana Aparecida Alves [UNIFESP]; Shimuta, Suma Imura [UNIFESP]
    Mutaçoes do receptor AT1 da angiotensina II (AII) foram designadas para determinar a importância dos resíduos alifáticos na regiao C-terminal de hélice VI e no segmento proximal da alça extracelular EC-3. Células CHO expressando os mutantes puntuais L262D, L265D e L268D foram utilizadas pare ensaios de ligaçao e ativaçao. Mutaçoes pelas substituiçoes do resíduo Leu268 no domínio extracelular EC-3 e do Leu262 no domínio transmembrana, por resíduo aspartil, nao causaram significantes variaçoes na afinidade do receptor à AII e aos antagonistas, peptídico Sar1Leu8 Ali e nao-peptídico DuP 753 e na produçao de IP. Em contraste, a mutaçao puntual L265D, na hélice VI, reduziu drasticamente a afinidade e a capacidade de estimular a hidrólise de fosfatidilinositol. De acordo com um novo modelo molecular do receptor AT1 que foi construído em homologia com a recentemente obtida estrutura da rodopsina, Leu268 está na inserçao da alça extracelular EC-3, mas Leu262 e Leu265 estao ambos na porçao C-terminal transmembrana da hélice VI, com as cadeias laterais apontando para fora. Os dados experimentais analisados à luz desse modelo, permitem sugerir que: (1) diferentemente do Leu262, Leu265 tem a sua cadeia lateral voltada para uma fenda formada entre as hélices V e VI na regiao periplasmática do receptor, aparentemente participando de um arranjo estrutural que poderia ter um papel crítico para estabilizar a interface receptor-membrana; (2) esse arranjo estrutural que foi impedido pela carga negativa da cadeia lateral de Asp poderia ser um fator determinante para orientar a regiao de ligaçao do agonista, que contém resíduos importantes para ligaçao Lys199 da hélice V e His256 da hélice VI para uma conformaçao favorável para ligaçao e ativaçao
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    Síntese e estudos enzimáticos e conformacionais de análogos da angiotensina I e da bradicinina contendo marcador de Spin Toc
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2011) Teixeira, Luis Gustavo de Deus [UNIFESP]; Nakaie, Clovis Ryuichi [UNIFESP]
    O presente projeto procurou investigar os peptideos vasoativos angiotensina I (AI) e bradicinina (BK) como substratos da enzima conversora da angiotensina I (ECA), lancando-se mao da marcacao dos mesmos com um derivado de aminoacido paramagnetico e supressor de fluorescencia. O composto ciclico 2,2,6,6-tetrametilpiperidina-1-oxil-4-amino-4-carboxilico (TOAC) foi o escolhido e analogos da AI e BK marcados nas posicoes 0, 1, 3, 5, 8, 9 e 10 e 0, 3, 7 e 9, respectivamente foram sintetizados. Em termos farmacologicos, apenas os derivados de ambos os peptideos marcados nas extremidades aminicas ainda mantiveram parcialmente as atividades contrateis em utero de rata e ileo isolado de cobaia. Quanto as suas propriedades de substrato frente a ECA, os derivados que continham o TOAC mais afastados das ligacoes suceptiveis a hidrolise (posicoes 8-9 para a AI e 7-8 e 5-6 para a BK) foram os que mantiveram ainda propriedades de substratos para esta enzima. Com o objetivo de encontrar correlacoes entre as estruturas destes derivados peptidicos e suas atividades farmacologicas e tambem de substrato enzimatico, as espectroscopias de RPE (Ressonancia Paramagnetica Eletronica), viavel em funcao da presenca do TOAC, CD (Circular Dichroism) e fluorescencia foram aplicadas para a avaliacao conformacional dos mesmos, variando-se tanto o pH do meio quanto a porcentagem de TFE em solucao. No aspecto geral, praticamente todos os peptideos estudados apresentaram conformacoes estendidas, mas com algumas diferencas especificas entre si. A adicao dos solventes estruturantes teve efeitos diferenciados nestes analogos e de mais importante, se observou caracteristicas conformacionais similares entre alguns analogos e seus peptideos nativos (AI e BK), sendo estes, os que se mostraram mais ativos farmacologicamente e tambem em termos de propriedades de substrato frente a ECA. A parte final desta tese envolveu a tentativa de monitorar o processo da hidrolise enzimatica dos substratos, via RPE, fluorescencia e CD. Este enfoque, de carater inovador, apresentou dados cineticos, principalmente via as tres espectroscopias acima referidas, que permitiram distinguir caracteristicas de catalise especificas para alguns substratos. Esta constatacao deixa em aberto a perspectivas de que, em conjugacao com outras estrategias experimentais a serem ainda propostas, podem facilitar um melhor entendimento do complexo mecanismo de acao catalitica da ECA. Alem disso, o projeto permite tambem antever aplicacoes para outras enzimas, nao necessariamente envolvidas nos sistemas renina-angiotensina ou cinina-calicreina envolvidos no presente trabalho
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    Taquifilaxia à angiotensina em diferentes preparações isoladas de aorta de coelho
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 1987) Silva, Eneida de Gusmao [UNIFESP]; Paiva, Therezinha Bandiera [UNIFESP]