Navegando por Palavras-chave "Sulfato de Ceratano"
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- ItemSomente MetadadadosCaracterização de glicosaminoglicanos urinários de pacientes portadores de mucopolissacaridose do tipo IV A(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2006) Coulson-Thomas, Vivien Jane [UNIFESP]; Toma, Leny [UNIFESP]A Mucopolissacaridose do tipo IVA (MPS IVA) é uma doença genética do tecido conjuntivo, que envolve mutações no gene N-acetil galactosamina-6-sulfato sulfatase. Esta enzima participa da degradação seqüencial do condroitim sulfato (CS) e queratam sulfato (KS), removendo sulfato da N-acetilgalactosamina-6-sulfato e galactose–6-sulfato do terminal não redutor destes GAGs. Quando esta enzima está ausente, os órgãos acumulam produtos de digestão incompleta destes GAGs, levando a um aumento na excreção de tais compostos na urina. Neste estudo nós analisamos KS e CS purificados de urina doada por pacientes portadores de MPS IVA e de indivíduos normais. GAGs totais foram extraídos da urina de indivíduos normais e pacientes utilizando uma resina de troca iônica . O KS foi isolado, incubando GAGs totais com extrato bruto de enzimas da F. heparinum, que digere todos os GAGs, com exceção do KS. Os produtos menores remanescentes foram separados do composto intacto por cromatografia de gel filtração sequenciais, Sephadex G-25 (PD10) e Sephadex G-10. KS foi detectado através de eletroforese em poliacrilamida e confirmado com queratanases específicas. Na tentativa de separar KS e CS, mantendo a integridade de ambos, os GAGs totais foram submetidos a cromatografia em Sephadex G-50 para fracionamento de acordo com a massa molecular. O perfil de eluição de CS foi detectado com reagente de carbazol que reage com ácido urônico, presente no CS e não no KS. Este foi detectado nas frações através de blotting com o anticorpo monoclonal específico para queratam sulfato. A maior parte do KS foi detectado na membrana de nitrocelulose, indicando um possível KS-ligado a peptídeo na urina. O mesmo procedimento de blotting foi realizado, e a membrana de nitrocelulose corado com reagente Ponceau, revelando a presença de proteína comigrando com o KS previamente detectado. Para confirmar o complexo KS-peptídeo GAGs totais foram submetidos a cromatografia hidrofóbica em coluna de Octyl-Sepharose, e eluídos com um gradiente linear de sulfato de amônio 2M e uma lavagem final com isopropanol50%. Uma população de KS foi retida na coluna, sendo eluído apenas com isopropanol 50%, devido à interação hidrofóbica do peptídeo com a resina. KS, CS e proteína foram detectados nessa população retida. Amostras de GAGs totais foram submetidos a uma reação química de β-eliminação, que remove açucares O-ligados a proteínas, e então aplicados a HPLC, em colunas de fase reversa, C4 Ultrasphere rotein and C18 Sephasil. Vários fragmentos protéicos ou peptídicos foram purificados nas colunas, que estão sendo sequenciados para análise estrutural..
- ItemSomente MetadadadosEfeito agudo da cirurgia refrativa sobre a sintese de proteoglicanos em explantes de cornea humana(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2005) Martins, Suy Anne Reboucas [UNIFESP]
- ItemSomente MetadadadosEfeito da desepitelizacao na sintese de glicosaminoglicanos em corneas humanas mantidas em cultura(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2000) Soriano, Eduardo Sone [UNIFESP]Os objetivos do presente trabalho foram identificar os glicosaminoglicanos presentes na cornea humana, analisar a sintese dos glicosaminoglicanos em corneas humanas mantidas em cultura e avaliar o efeito da remocao do epitelio sobre a sintese destes compostos em corneas mantidas em cultura. Para tal, foram utilizadas corneas do Banco de Olhos do Hospital São Paulo que foram rejeitadas para transplantes. Os glicosaminoglicanos foram extraidos apos proteolise dos tecidos com papaina e identificados por uma combinacao de eletroforese em gel de agarose e degradacao enzimatica com mucopolisacaridases bacterianas especificas. Os principais glicosaminoglicanos extraidos da cornea humana foram o queratam sulfato e o dermatam sulfato, cada um correspondendo a cerca de 50 por cento do total. Para analisar os glicosaminoglicanos sintetizados em cultura, as corneas foram mantidas em meio Fl2, por 24 horas, a 37§C, em atmosfera contendo 2,5 por cento de gas carbonico. Ao meio de cultura foi adicionado 35S-sulfato, de forma que os glicosaminoglicanos sintetizados em 24 horas fossem, entao, metabolicamente marcados. OS 35S-glicosaminoglicanos foram isolados da mesma forma descrita acima, exceto que foram vistos por radioautograma e quantificados em um contador de cintilacoes. O principal glicosaminoglicano sintetizado foi o dermatam sulfato (72 por cento do total), seguido pelo queratam sulfato (l7 por cento). Alem desses dois glicosaminoglicanos, apareceu heparam sulfato (11 por cento), que nao foi identificado como constituinte da cornea por estar em pequena quantidade (abaixo do limite de deteccao do metodo). Esses resultados sugerem que o dermatam sulfato e o heparam sulfato apresentem uma taxa de turnover maior que a do queratam sulfato. A desepitelizacao corneana levou a uma alteracao no padrao de sintese de glicosaminoglicanos, com uma maior marcacao de dermatam sulfato e uma diminuicao no heparam sulfato, em relacao ao controle. Este efeito foi proporcional a area da cornea desepitelizada. Para verificar quais Os glicosaminoglicanos sintetizados em cada camada celular, o epitelio, o endotelio e o estroma foram separados e os glicosaminoglicanos sintetizados em cada uma delas foram identificados. Verificou-se que os ceratocitos foram os principais responsaveis pela sintese de dermatam sulfato e queratam sulfato, enquanto as celulas epiteliais produziram basicamente heparam sulfato. Esta observacao explica a ...(au)