Navegando por Palavras-chave "Opi1"

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    Acesso aberto (Open Access)
    Investigação do papel do metabolismo do inositol e fosfato na manutenção da estabilidade genômica em Saccharomyces cerevisiae
    (Universidade Federal de São Paulo, 2023) Pires, Marina Rodrigues [UNIFESP]; Cussiol, José Renato Rosa [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/4717700560534533; http://lattes.cnpq.br/5482411443059459
    A DDR (DDR, do inglês, DNA Damage Response) compreende um conjunto de processos biológicos complexos que tem como principal função manter a estabilidade genômica e proteger a célula de danos na molécula de DNA. Diferentes estudos apontam que, especificamente, o metabolismo do inositol e de fosfato inorgânico atuam durante a DDR. O metabolismo do inositol é responsável pela produção dos polifosfatos de inositol, moléculas que desempenham funções essenciais para a manutenção da viabilidade celular. Já o metabolismo de fosfato inorgânico é responsável por manter a homeostase celular, principalmente, em condições de baixos níveis nutricionais. As proteínas Opi1 e Pho81 (dois reguladores do metabolismo do inositol e fosfato, respectivamente) são extensivamente fosforiladas durante o dano genotóxico pelas quinases da DDR. Interessantemente, a perda de função de Opi1 leva a hipersensibilidade à genotoxinas. Além disso, foi anteriormente demonstrado que Pho81 acumula no núcleo durante o dano genotóxico. Esses achados sugerem que a função celular dessas proteínas é importante durante a DDR. Portanto, esse projeto teve como objetivo principal estudar a importância do metabolismo do inositol e do fosfato inorgânico para a estabilidade genômica de células eucarióticas utilizando a levedura Saccharomyces cerevisiae como organismo modelo. Para isso, através da técnica de clonagem e mutação sítio-dirigida, geramos clones nos quais os resíduos de serina e treonina, que são fosforilados pelas quinases da DDR, foram substituídos por resíduos de alanina, criando assim fosfomutantes. De posse dos fosfomutantes, monitoramos a capacidade de fosforilações mediadas pelas quinases da DDR de regular a via do inositol, pois verificamos que houve desregulação no metabolismo do inositol no contexto de estresse de replicação induzido pelo MMS. Além disso, caracterizamos o papel da proteína Pho81 durante o estresse genotóxico. Nossos resultados indicaram um aumento na ativação de Pho81 com consequente hiporregulação do metabolismo do fosfato durante o estresse genotóxico induzido pelo agente alquilante de DNA, o metanossulfonato de metila ou MMS. Por último, nossos resultados sugerem que a modulação do metabolismo do inositol pode não estar relacionada com a fosforilação direta das quinases da DDR.