Navegando por Palavras-chave "Nitric oxide synthase endothelial"

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    Acesso aberto (Open Access)
    Participação da proteína tirosina quinase src e do óxido nítrico nas vias de sinalização celular estimuladas por estrógeno na linhagem MCF-7 obtida de tumor humano de mama
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2015-11-25) Rosa, Heloisa [UNIFESP]; Krieger, Jose Eduardo [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/6154759166234850; http://lattes.cnpq.br/0276075057814710; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    O receptor de estrógeno tem um papel central no câncer de mama responsivo a estrógeno. Evidências experimentais e clínicas sugerem ainda uma participação do óxido nítrico (NO) e das enzimas óxido nítrico sintases (NOS) na biologia do câncer de mama. A S-nitrosilação de proteínas sinalizadoras como Src quinase, mediada pelo NO, é importante para a progressão do tumor. O objetivo do presente estudo foi descrever uma via de sinalização não-nuclear estimulada por estrógeno que envolve a ativação de óxido nítrico sintase endotelial (eNOS) e de Src quinase em células de carcinoma mamário MCF-7. Para tanto, nós desenvolvemos uma ?isca? molecular a partir da clonagem e expressão da proteína Src quinase recombinante humana contendo uma cauda de Histidina (6xHis-Src). Células MCF-7/6xHis-Src foram tratadas com diferentes concentrações de 17?-estradiol (E2) durante 0, 2, 8, 16 ou 24 horas. Ensaio de Imunofluorescência revelou ativação de Src após tratamento com 100 nM E2. Análise de Western Blotting confirmou que a atividade de Src foi estimulada com 100 nM E2 alcançando sua atividade máxima após 8 e 24 horas de incubação. Níveis intracelulares de NO aumentaram após 24 horas de tratamento das células com 100 nM E2. A S-nitrosilação de Src foi estimulada com 10 nM E2 e inibida por pré-incubação das células com o inibidor de Src, PP1. E2 estimula a proliferação celular, que é inibida por pré-incubação com Fulvestranto (antagonista do receptor de estrógeno), PP1 ou L-N5-(1-Iminoethyl) ornithine (L-NIO) (inibidor da eNOS). Análise baseada em Espectrometria de Massas revelou a presença de proteínas associadas com a proliferação celular após tratamento das células com E2; a pré-incubação das células com inibidores revelou a presença de proteínas associadas com repressão transcricional. Nós concluímos que NO, eNOS e Src quinase desempenham um papel importante na via de sinalização não-nuclear estimulada por E2 associada à proliferação das células MCF-7