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    Caracterização molecular dos mecanismos de resistência às polimixinas em isolados clínicos multirresistentes de acinetobacter baumannii provenientes de hospitais brasileiros
    (Universidade Federal de São Paulo, 2020-05-28) Nodari, Carolina Silva [UNIFESP]; Gales, Ana Cristina [UNIFESP]; Silva, Rodrigo Cayô da [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/5699739668358897; http://lattes.cnpq.br/8402272715765172; http://lattes.cnpq.br/5028397030700989
    O objetivo deste trabalho foi caracterizar isolados clínicos de A. baumannii resistentes às polimixinas provenientes de diferentes hospitais brasileiros. A identificação dos isolados em nível de espécie foi realizada através do sequenciamento do gene rpoB e o perfil de sensibilidade aos antimicrobianos foi determinado por microdiluição em caldo. Os isolados foram submetidos a sequenciamento do genoma completo utilizando a plataforma Illumina e a similaridade genética entre eles foi determinada por ApaI-PFGE, MLST e cgMSLT. A presença de genes que codificam carbapenemases, metilases e de genes qnr foi triada por PCR. A análise do sequenciamento genômico foi utilizada para determinar as variantes de β-lactamases e enzimas modificadoras de aminoglicosídeos (AMEs) presentes nos isolados, bem como identificar outros genes adquiridos de resistência aos antimicrobianos e verificar o contexto genético em que estavam inseridos. As sequências proteicas do sistema de efluxo AdeABC e das principais proteínas de membrana externa (OMPs) de A. baumannii também foram avaliadas. As sequências dos genes lpxACD e pmrAB foram comparadas entre isolados sensíveis e resistentes às polimixinas para a pesquisa de mutações com provável função neste fenótipo e suas expressões relativas foram determinadas por qRT-PCR. Inicialmente, 15 isolados com fenótipo sugestivo de resistência às polimixinas provenientes de cinco instituições brasileiras foram incluídos no estudo. Posteriormente, sete isolados sensíveis a estes antibióticos foram incluídos para comparação. Todos foram identificados como A. baumannii e foram classificados em seis grupos clonais por PFGE, pertencentes aos complexos clonais 1 (n=1), 15 (n=4), 25 (n=3) e 79 (n=14). A resistência às polimixinas foi confirmada nos 15 isolados. Além disso, todos os isolados foram resistentes aos carbapenêmicos e à ciprofloxacina e a grande maioria apresentou elevados valores de CIM para as cefalosporinas, para a amicacina e para a tigeciclina. Já as atividades in vitro da gentamicina e da ampicilina/sulbactam variaram entre as amostras testadas. O antimicrobiano mais ativo contra estes micro-organismos foi a minociclina. Os isolados incluídos no estudo apresentaram uma diversidade de variantes de blaOXA-51, compatíveis com os clones a que pertenciam, sendo a OXA-65 a mais frequente. Além disso, todos os isolados produziam uma CHDL adquirida, podendo ser OXA-23 e/ou OXA-72, sendo que a sequência de inserção ISAba1 foi detectada à montante de blaOXA-23 em todos os isolados. Não foram detectadas outras carbapenemases, nem metilases ou genes qnr. Por outro lado, foi encontrada uma diversidade de AMEs e de genes de resistência a outras classes de antimicrobianos, bem como mutações em gyrA e parC associadas à resistência às fluoroquinolonas. Também foram identificadas mutações não-sinônimas no sistema de efluxo AdeABC e na maioria das OMPs. A expressão do operon lpxACD estava levemente reduzida tanto nos isolados resistentes quanto nos sensíveis e só foram encontradas substituições de aminoácidos em LpxD. Essas substituições, no entanto, foram encontradas em isolados com diferentes perfis de sensibilidade às polimixinas e os padrões de substituição encontrados foram característicos de cada complexo clonal, tratando-se, portanto, de polimorfismos. Por outro lado, grande parte dos isolados apresentou aumento na expressão de pmrAB e uma diversidade de mutações nos genes pmrA e pmrB, incluindo duplicações. Algumas dessas mutações foram consideradas polimorfismos naturais característicos de cada grupo clonal, enquanto outras foram identificadas apenas em isolados resistentes. Não foi possível identificar mutações em PmrAB presentes apenas em isolados resistentes às polimixinas do CC15. Além disso, o operon pmrAB dos isolados pertencentes ao CC25 parece ter sido proveniente de outros complexos clonais e ter sido transferido por recombinação homóloga. Nos isolados pertencentes ao CC79 ainda foi identificado um gene adicional que codifica uma fosfoetanolamina transferase e, em pelo menos um dos isolados, este gene apresentou mutações não sinônimas. Conclui-se, portanto, que os mecanismos moleculares de resistência às polimixinas variaram e devem ser determinados de forma individualizada para cada isolado. Estudos adicionais são necessários para verificar a presença de mecanismos desconhecidos de resistência às polimixinas, especialmente no CC15.
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    Detection of OXA-58-Producing Acinetobacter seifertii Recovered from a Black-Necked Swan at a Zoo Lake
    (Amer Soc Microbiology, 2017) Narciso, Ana Clara [UNIFESP]; Martins, Willames M. B. S. [UNIFESP]; Cayo, Rodrigo [UNIFESP]; de Matos, Adriana Pereira [UNIFESP]; Santos, Stefanie Vanessa [UNIFESP]; Ramos, Patricia Locosque; da Cruz, Joao Batista; Gales, Ana Cristina [UNIFESP]