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dc.contributor.advisorSampaio, Misako Uemura [UNIFESP]
dc.contributor.authorHansen, Daiane [UNIFESP]
dc.date.accessioned2015-12-06T23:03:11Z
dc.date.available2015-12-06T23:03:11Z
dc.date.issued2004
dc.identifier.citationSão Paulo: [s.n.], 2004. 91 p.
dc.identifier.urihttp://repositorio.unifesp.br/handle/11600/18804
dc.description.abstractO BbCI (Bauhinia bauhinioides Cruzipain Inhibitor) e um inibidor de cisteinoproteinase que mostra alta identidade sequencial com inibidores de planta do tipo Kunitz, porem nao apresenta nenhum residuo de cisteina. A inibicao da cruzipaina faz do BbCI um instrumento biotecnologico interessante no desenvolvimento de uma nova geracao de drogas para o combate a infeccoes causadas pelo Trypanossoma crua 0 BbCI tambem apresenta uma atividade inibitoria para HNE (Human Neutrophillus Elastase) enzima envolvida em varios processos fisiopatologicos. 0 gene codificante para BbCI foi clonado por RT-PCR usando oligonucleotideos degenerados, os quais foram sintetizados a partir da sequencia proteica previamente descrita. 0 produto amplificado foi inserido no vetor pGEM-T para sequenciamento. Uma vez confirmada a sequencia, oligonucleotideos internos foram sintetizados para a realizacao do RACE 5' e 3'(Rapid Amplification of cDNA Ends). A informacao gerada mostrou que o BbCI e inicialmente sintetizado como uma pre-pro-proteina apresentando a seguinte estrutura: 19 residuos de aminoacidos na regiao N-terminal, 164 residuos correspondentes a proteina nativa e 10 residuos na regiao C-terminal. A sequencia correspondente a cadeia madura foi subclonada no vetor de expressao pET-28a (Novagen). 0 BbCI foi produzido por expressao heterologa fusionado a uma sequencia de 6 residuos de histidinas com um sitio de clivagem de trombina entre eles. A expressao em E. coli BL21 (DE3) produziu o inibidor em grande escala o qual foi purificado por cromatografia de afinidade em resina Ni-NTA SuperFlow. A proteina de fusao foi submetida a clivagem com trombina e posteriormente purificada em gel filtracao Superdex 75a(au)pt
dc.format.extent91 p.
dc.language.isopor
dc.publisherUniversidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
dc.rightsAcesso restrito
dc.subjectInibidores de proteasespt
dc.subjectCisteína endopeptidasespt
dc.subjectClonagem molecularpt
dc.subjectBauhiniapt
dc.titleBbCI, inibidor de cruzipaína de Bauhinia bauhinioides: isolamento do cDNA e expressão heterólogapt
dc.title.alternativeBbCI, a cruzipain inhibitor of the Bauhinia baujinoides: isolation of it's cDNA an heterrologous expressionen
dc.typeDissertação de mestrado
dc.identifier.fileepm-019598.pdf
dc.description.sourceBV UNIFESP: Teses e dissertações
unifesp.campusSão Paulo, Escola Paulista de Medicina (EPM)pt
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