Genótipo Duffy e gravidade das manifestações clínicas na anemia falciforme

Genótipo Duffy e gravidade das manifestações clínicas na anemia falciforme

Título alternativo Duffy Genotype and Clinical Manifestations Severity in Sickle Cell Anemia
Autor Mecabô, Grazielle Autor UNIFESP Google Scholar
Orientador Figueiredo, Maria Stella Autor UNIFESP Google Scholar
Instituição Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
Resumo INTRODUCTION: Sickle cell anemia (SCA) presents with large clinical variability and previous studies suggest that genetic polymorphisms may act as complications predictors. The Duffy antigen appears to play an important role in the removal of inflammatory chemokines from the circulation, suggesting that Duffy-Negative individuals have lower clearance of cytokines and increased endothelial injury. OBJECTIVES: To determine the frequency of Duffy phenotype, determine the allelic frequency of gene DUFFY, correlate the phenotypic findings with the genotype and determine the importance of the Duffy phenotype in clinical and laboratory data from a group of SCA patients. PATIENTS: 90 AF patients regularly followed in the outpatient clinic of Hemoglobinophaties of the Department of Hematology, Federal University of Sao Paulo (UNIFESP / EPM). METHODS: Erytrocyte phenotyping of Duffy blood group was performed by hemagglutination in gel and molecular analysis of DUFFY gene was performed with specific PCR primers followed by digestion with restrition enzymes. We analyzed the rs12075 polymorphism (125 G> A) that identifies the alleles FY*A and FY*B; mutations: rs2814778 (-33 T>C) that characterizes the allele FY*B-33, and rs34599082 (265 C>T) and rs13962 (298G>A) that identify the alleles FY*Bweak. These individuals were stratified according to the phenotype, in Duffy-Positive [Fy (a+b-), Fy (a+b+) and Fy (a-b+)] and Duffy-Negative [Fy(ab-)]. Through medical records review, we evaluated baseline hemoglobin (Hb), fetal hemoglobin (HbF), S hemoglobin (HbS), reticulocytes count, serum lactate dehydrogenase (LDH), ulcers of the lower limbs (UMI), priapism, acute chest syndrome episodes (STA), osteonecrosis (ON), elevated pulmonary arterial pressure (PAP . 30 mmHg), stroke (history and neuroimaging) and indication of use of hydroxyurea (HU). Statistical analysis was performed with Mann-Whitney and Fisher tests, with a significance level of 5%. RESULTS: 40% of the patients were male, median age was 30.04 } 10.15 years. Phenotypic analysis revealed 73.3% Duffy-Positive and 26.7% Duffy-Negative individuals. The allele FY*B was found in 71% of the patients, and the FY*B-33 allele was found in 43% of the FY*B alleles. Duffy-Negative patients had a mean Hb of 8.32 g/dL, while Duffy-Positive the mean Hb was 9.01 g/dL (p = 0.039). There were no differences in the reticulocyte count, Hb, HbF withing the groups. However, the mean DHL was 634.59 U/L in Duffy-Negative individuals and 506.42 U/L in Duffy-Positive (p=0.045). 63.6% of Duffy-Negative individuals and 31.5% in Duffy-Positive showed elevated PAP (p = 0.0118, odds ratio: 3.792, 95% confidence interval: 1.350 to 10.652). There were no statistical differences in priapism, ON, STA and UMI frequencies of amoung groups. Stroke was observed only in Duffy-Positive patients (p=0.0049, odds ratio: 0.0625, 95% Confidence Interval: 0.0035 to 1.089). Indications of HU use was higher in Duffy-Positive subjects (p=0.0528, odds ratio: 0.3524, 95% Confidence Interval: 0.1278 to 0.9717). CONCLUSION: Given the results above, we can infer that the presence of the studied mutations is strongly associated with expression of the Duffy antigens. From clinical and laboratory data viewpoint, although Duffy-Negative individuals had a greater frequency of PAP, its rate of use of HU is smaller and therefore one can not say that they had a worse clinical outcome. Thus, further studies, preferably multicenter, are needed to clarify this issue.

INTRODUCAO: Anemia falciforme (AF) apresenta grande variabilidade clinica e estudos previos sugerem que polimorfismos geneticos podem atuar como preditores de complicacoes. O antigeno Duffy parece ter importante papel na retirada de quimiocinas inflamatorias da circulacao, sugerindo que individuos Duffy-Negativo apresentariam menor clearance de citocinas e maior lesao endotelial. OBJETIVOS: Em um grupo de individuos com diagnostico de AF, tivemos por objetivos: determinar a frequencia dos fenotipos do sistema Duffy, determinar a frequencia alelica do gene DUFFY, correlacionar os achados fenotipicos com os genotipicos, determinar a importancia dos fenotipos Duffy em alteracoes clinico-laboratoriais selecionadas. CASUISTICA: 90 pacientes com AF em acompanhamento regular no ambulatorio de hemoglobinopatias da Disciplina de Hematologia e Hemoterapia da Universidade Federal de Sao Paulo (UNIFESP/EPM). METODOS: A fenotipagem eritrocitaria foi realizada pela tecnica de hemaglutinacao em gel. A pesquisa molecular do gene DUFFY foi feita com primers especificos atraves da tecnica de PCR seguida de digestao com enzimas especificas. Foram analisados o polimorfismo rs12075 (125 G>A) que identifica os alelos FY*A e FY*B; as mutacoes: rs2814778 (-33 T>C) que caracteriza o alelo FY*B-33; e rs34599082 (265 C>T) e rs13962 (298G>A) que identificam o alelo FY*Bfraco. Esses individuos foram estratificados, de acordo com os fenotipos, em Duffy-Positivo [Fy(a+b-), Fy(a+b+) e Fy (a-b+)] e Duffy-Negativo [Fy(a-b-)]. Atraves de revisao de prontuarios, foram avaliados: hemoglobina basal (Hb), hemoglobina fetal (HbF), hemoglobina S (HbS), reticulocitos e dosagem de desidrogenase latica (DHL), ulceras de membros inferiores (UMI), priapismo, episodios de sindrome toracica aguda (STA), osteonecrose (ON), elevacao da pressao da arteria pulmonar (PAP . 30mmHg), acidente vascular encefalico (AVE: historia e exames de imagem alterados) e indicacao de uso de hidroxiureia (HU). A analise estatistica foi realizada com os seguintes testes: Mann-Whitney e Fisher, com nivel descritivo de 5%. RESULTADOS: Dos 90 pacientes estudados, 40% eram do genero masculino, a mediana de idade foi de 30,04 } 10,15 anos. A analise fenotipica mostrou que 73,3% dos individuos eram Duffy-Positivo e 26,7% eram Duffy-Negativo. Observamos maior prevalencia do alelo FY*B (71%), sendo que o alelo FY*B-33 foi encontrado em 43% dos alelos FY*B analisados. Os pacientes Duffy-Negativo apresentaram média de Hb de 8,32g/dL, enquanto o grupo Duffy-Positivo mostrava 9,01g/dL (p=0,039). As análises de reticulócitos, HbS, HbF não mostraram significância. O DHL, por sua vez, apresentou média de 634,59U/L nos indivíduos Duffy-Negativo e, 506,42U/L (p=0,045). 63,6% dos indivíduos Duffy-Negativo e 31,5% do outro grupo apresentaram elevação de PAP (p=0,0118; Razão de Chances: 3,792; 95% Intervalo de Confiança: 1,350- 10,652). Não houve diferença significativa na frequência de priapismo, ON, STA e UMI entre os grupos. A manifestação de AVE foi observada apenas nos pacientes Duffy-Positivo (p=0,0049; Razão de Chances: 0,0625; 95% Intervalo de Confiança: 0,0035-1,089). A indicação de uso de HU foi maior nos indivíduos Duffy-Positivo (p=0,0528; Razão de Chances: 0,3524; 95% Intervalo de Confiança: 0,1278-0,9717). CONCLUSÃO: Diante os resultados apresentados, podemos inferir que a presença das mutações estudadas está fortemente associada à expressão do Sistema Duffy. Do ponto de vista dos dados clínico-laboratoriais associados ao Sistema Duffy, embora os indivíduos Duffy-Negativo apresentem maior frequência de PAP elevada, seu índice de utilização de HU é menor e, portanto, não conseguimos afirmar que apresentam pior evolução clínica. Com isso, mais estudos, de preferência multicêntricos, são necessários para esclarecer esta questão.
Palavra-chave Antígenos de grupos sanguíneos
Genótipo
Polimorfismo genético
Sistema do grupo sanguíneo duffy
Anemia falciforme
Idioma Português
Data de publicação 2011-03-23
Publicado em MECABÔ, Grazielle. Genótipo Duffy e Gravidade das Manifestações Clínicas na Anemia Falciforme. 2011. Dissertação (Mestrado) - Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), São Paulo, 2011.
Publicador Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
Extensão 112 p.
Direito de acesso Acesso aberto Open Access
Tipo Dissertação de mestrado
Endereço permanente http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/9676

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