Caracterização genética e bioquímica da GES-16, uma nova variante de beta-lactamase do tipo GES com atividade carbapenemase em Serratia marcescens

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dc.contributor.advisor Gales, Ana Cristina [UNIFESP]
dc.contributor.author Barbosa, Paula Peraro [UNIFESP]
dc.date.accessioned 2015-07-22T20:49:42Z
dc.date.available 2015-07-22T20:49:42Z
dc.date.issued 2011-04-27
dc.identifier.citation BARBOSA, Paula Peraro. Caracterizacao Genetica e Bioquimica da GES-16, uma nova variante de beta- lactamase do tipo GES com atividade carbapenemase em Serratia marcescens. 2011. 183 f. Dissertação (Mestrado) - Escola Paulista de Medicina, Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), São Paulo, 2011.
dc.identifier.uri http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/9188
dc.description.abstract Duas amostras clínicas de S. marcescens resistentes aos carbapenens foram isoladas em 2005 de dois pacientes hospitalizados no Hospital Universitário Pedro Ernesto (Rio de Janeiro). A tipagem molecular por PFGE revelou que os isolados eram genotipicamente idênticos. O teste de sensibilidade por microdiluição em caldo confirmou a resistência dos isolados de S. marcescens aos carbapenens. Adicionalmente, estes isolados apresentaram resistência à ticarcilina, à ceftazidima, à gentamicina, ao ácido nalidíxico e à ciprofloxacina; porém, apresentaram sensibilidade à cefepima e ao aztreonam. Ambos apresentaram teste de hidrólise do imipenem positivo, e os amplicons blaGES e blaOXA-10 foram identificados por PCR e sequenciamento. Uma nova variante GES, apresentando as substituições Gly170Ser, responsável pela atividade carbapenemase, e Gln43Glu em relação à GES-1, foi identificada e nomeada GES-16. BlaGES-16 estava inserido em um integron de classe 1 que possui um promotor fraco, um gene codificador da integrase truncado, e uma região variável composta pelos seguintes cassetes gênicos: catB3 truncado, blaGES-16, dfr22, aac(6')-IIc e aadA1. Ensaios de hibridização sugeriram a localização plasmidial de blaGES-16, posteriormente confirmada pela obtenção de transformantes. No entanto, o plasmídeo de cerca de 30 Kb contendo blaGES-16 não apresentou capacidade conjugativa. A expressão de blaGES-16 clonado em E. coli TOP10, bem como a transferência do plasmídeo carreador de blaGES-16 para esta cepa, confirmaram a elevação das CIMs dos β-lactâmicos, incluindo carbapenens. GES-16 apresentou pI igual a 5,6. Ensaios de cinética enzimática utilizando GES-16 purificada demonstraram sua atividade sobre as penicilinas, as cefamicinas, as cefalosporinas de amplo espectro e os carbapenens, mas não sobre o aztreonam. Ainda, demonstraram que GES-16 é inibida pelo ácido clavulânico, pelo tazobactam, e em menor grau pelo imipenem. O presente estudo identificou uma nova variante de GES com atividade carbapenemase em Enterobacteriaceae no Brasil pt
dc.description.abstract During 2005, two Serratia marcescens isolates showing carbapenem resistance were recovered from patients hospitalized at Hospital Universitário Pedro Ernesto (Rio de Janeiro). Molecular typing by PFGE revealed that the isolates were genetically identical. Susceptibility testing performed by CLSI broth microdilution confirmed the carbapenem resistance in S. marcescens clinical isolates. In addition, these isolates were fully resistant to ticarcilin, ceftazidime, gentamicin, nalidixic acid and ciprofloxacin, but showed susceptibility to cefepime and aztreonam. Both isolates showed carbapenemase activity and blaGES e blaOXA-10 were subsequent identified by PCR and sequencing. A new GES variant, differing from GES-1 by the Gly170Ser, responsible for its carbapenemase activity, and Gln43Glu substitutions, was identified and named GES-16. BlaGES-16 was part of a defective class 1 integron containing a weak promoter, a fragmented integrase gene, and a variable region comprising the following gene cassettes: a fragmented catB3, blaGES-16, dfr22, aac(6')-IIc and aadA1. Hybridization assays suggested the plasmid location of blaGES-16, later confirmed by transformants obtaining. However, the 30 Kb plasmid harboring blaGES-16 did not seem to be conjugative. Expression of cloned blaGES-16 and the transference of the natural plasmid carrying blaGES-16 to E. coli TOP10 resulted in increased β-lactams MICs, including carbapenems, in comparison to those of the wild recipient strain. GES-16 showed pI of 5,6. Kinetic analysis conducted with purified GES-16 showed hydrolytic activity against penicillins, cephamycins, expanded-spectrum cephalosporins, and carbapenems, but not aztreonam. Moreover, it showed that GES-16 is inhibited by clavulanic acid, tazobactam and, in less extent, by imipenem. This study identified a new GEStype enzyme with carbapenemase activity in Enterobacteriaceae in Brazil en
dc.format.extent 183 p.
dc.language.iso por
dc.publisher Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
dc.rights Acesso aberto
dc.subject Serratia marcescens pt
dc.subject Carbapenemase pt
dc.subject Resistência bacteriana pt
dc.subject Beta-lactamase pt
dc.title Caracterização genética e bioquímica da GES-16, uma nova variante de beta-lactamase do tipo GES com atividade carbapenemase em Serratia marcescens pt
dc.title.alternative Genetic and Biochemical Characterization of GES-16, a novel GES-type â-lactamase with carbapenemase activity in Serratia marcescens en
dc.type Dissertação de mestrado
dc.contributor.institution Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
dc.identifier.file Tese_12551.pdf
dc.description.source TEDE
dc.description.source BV UNIFESP: Teses e dissertações
unifesp.campus São Paulo, Escola Paulista de Medicina (EPM)
unifesp.graduateProgram Infectologia - EPM pt



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Nome: Tese_12551.pdf
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