Potential diagnostic of Branched-Chain Ketoaciduria by HPLC-DAD

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dc.contributor.author Trintinalia, Maíra Magalhães [UNIFESP]
dc.contributor.author Alves, Atecla Nunciata Lopes [UNIFESP]
dc.contributor.author Fernandes, Liliam [UNIFESP]
dc.contributor.author Bechara, Etelvino José Henriques [UNIFESP]
dc.contributor.author Assunção, Nilson Antonio [UNIFESP]
dc.date.accessioned 2015-06-14T13:47:21Z
dc.date.available 2015-06-14T13:47:21Z
dc.date.issued 2014-10-01
dc.identifier http://dx.doi.org/10.5935/0103-5053.20140156
dc.identifier.citation Journal of the Brazilian Chemical Society. Sociedade Brasileira de Química, v. 25, n. 10, p. 1857-1863, 2014.
dc.identifier.issn 0103-5053
dc.identifier.issn 1678-4790
dc.identifier.uri http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/8645
dc.description.abstract A system of high performance liquid chromatography (HPLC) was used for the development and validation of efficient method for quantitative determination of three aminoacids involved in the inherited metabolic disease Branched-Chain Ketoaciduria (BCK), also called maple syrup urine disease. The analytical conditions were selected in order to obtain baseline separation profiles of the amino acids known to be altered in blood plasma of BCK patients, namely L-valine, L-isoleucine, and L-leucine. Most accurate data were obtained using HPLC/diode detector. As the analytes do not have chromophore groups, they were pre-derivatized with o-phthaldialdehyde (OPA), yielding an unsaturated adduct, making thus possible the detection of amino acids. The validation was conducted according to National Health Surveillance Agency (ANVISA) and Guidance for Industry (Bioanalytical Method Validation) United States Food and Drug Administration (U.S. FDA). The results were satisfactory, with high sensitivity, good linearity, precision and accuracy, limit of detection and quantification, all within the established parameters for bioanalytical methods, showing its applicability and low cost compared to other existing techniques such as sequential mass spectrometry. For the three amino acids, L-valine, L-isoleucine and L-leucine, the detection limits (LOD) found were: 1.61, 1.84 and 1.88 mmol L- 1 and the quantification limits (LOQ) 4.37, 6.13 and 6.27 mmol L- 1, respectively. en
dc.description.abstract Neste trabalho, um sistema de cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) foi usado para desenvolver e validar um eficiente método para determinar quantitativamente aminoácidos envolvidos na desordem rara conhecida como cetonúria de aminoácidos de cadeia ramificada ou doença do xarope de bordo. As condições analíticas foram desenvolvidas para obter os perfis dos aminoácidos de L-valina, L-isoleucina e L-leucina, sabidamente alterados no plasma sanguíneo dos pacientes. Empregou-se HPLC provido de um detector com arranjo de diodo. Os analitos não possuem grupos cromóforos e, por isso, foram pré-derivatizados com o-ftalaldeído (OPA) para tornar possível sua detecção. A validação foi conduzida de acordo com as normas da Agência Nacional de Vigilância Sanitária (ANVISA) (RDC No. 27, de 17 de maio de 2012) e secção de validação de bioanalítica da United States Food and Drug Administration (U.S. FDA). Os resultados foram satisfatórios, apresentando alta sensibilidade, boa linearidade, precisão e exatidão, limite de detecção e quantificação, todos parâmetros estabelecidos para métodos bioanalíticos, demonstrando a aplicabilidade e baixo custo do método comparado com outras técnicas como espectrometria de massas. Para os três aminoácidos, L-valina, L-isoleucina e L-leucina, os limites de detecção encontrados foram: 1,61, 1,84 e 1,88 mmol L 1 e limites de quantificação 4,37, 6,13 e 6,27 mmol L 1, respectivamente. pt
dc.description.sponsorship Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)
dc.description.sponsorship INCT Redoxoma (National Institute of Science and Technology of Redox Processes in Biomedicine)
dc.description.sponsorship Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)
dc.format.extent 1857-1863
dc.language.iso eng
dc.publisher Sociedade Brasileira de Química
dc.relation.ispartof Journal of the Brazilian Chemical Society
dc.rights Acesso aberto
dc.subject high performance liquid chromatography en
dc.subject maple syrup urine disease en
dc.subject isoleucinose en
dc.subject rare diseases en
dc.subject metabolism en
dc.subject inborn error en
dc.subject branched chain aminoacids en
dc.subject α-ketoacids en
dc.title Potential diagnostic of Branched-Chain Ketoaciduria by HPLC-DAD en
dc.type Artigo
dc.contributor.institution Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
dc.contributor.institution Universidade de São Paulo (USP)
dc.description.affiliation Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP) Instituto de Ciências Ambientais, Química e Farmacêuticas
dc.description.affiliation Universidade de São Paulo Instituto de Química Departamento de Química Fundamental
dc.description.affiliationUnifesp UNIFESP, Instituto de Ciências Ambientais, Química e Farmacêuticas
dc.description.sponsorshipID 2006/60245-3 e 2007/59039-2 e 2012/02514-9
dc.identifier.file S0103-50532014001000011.pdf
dc.identifier.scielo S0103-50532014001000011
dc.identifier.doi 10.5935/0103-5053.20140156
dc.description.source SciELO
dc.identifier.wos WOS:000344490900011



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Name: S0103-50532014001000011.pdf
Size: 223.9Kb
Format: PDF
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