Electrospray ionization mass spectrometry applied to study the radical acetylation of amino acids, peptides and proteins

Electrospray ionization mass spectrometry applied to study the radical acetylation of amino acids, peptides and proteins

Author Alves, Atecla Nunciata Lopes Autor UNIFESP Google Scholar
Jedlicka, Leticia Dias Lima Autor UNIFESP Google Scholar
Massari, Júlio Google Scholar
Juliano, Maria Aparecida Autor UNIFESP Google Scholar
Bechara, Etelvino José Henriques Autor UNIFESP Google Scholar
Assunção, Nilson Antonio Autor UNIFESP Google Scholar
Institution Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
Universidade de São Paulo (USP)
Abstract Recently, our group proposed a process that generated acetyl radicals in a reaction medium buffered with a diacetyl/peroxynitrite system. Diacetyl is a flavoring agent in food, cigarettes and drinks. Peroxynitrite is found in mitochondria, and in certain conditions, such as an infection in humans, its concentration is augmented significantly. In biological systems, radical compounds can easily modify the structure and activity of nucleic acids, proteins and other biomolecules, causing significant oxidative stress. Based on paramagnetic resonance and mass spectrometry data, this work discusses products that prove acetyl radicals are produced and are able to form stable covalent bonds with amino acid (acetylated products), peptide and protein adducts. These materials were separated and detected by capillary electrophoresis coupled with tandem mass spectrometry or offline mass spectrometry. The reaction medium contained a 1:2 mixture of diacetyl and peroxynitrite dissolved in 200 mmol L-1 of pH 7.2 sodium phosphate buffer. These experiments also reveal the double acetylation of lysine, demonstrating the high reactivity of these compounds when in contact with nitrogen-containing biomolecules readily found in biological systems. These structural changes might be an epigenetic source of post-translational protein modification.

Recentemente nosso grupo demostrou experimentalmente que a hipótese de produção de radical acetil em meio tamponado no sistema diacetil/peroxinitrito era possível. Diacetil é um flavorizante em alimentos, cigarros e bebidas. O peroxinitrito é encontrado na mitocôndria, e em certas condições como um processo de infeção em humanos, a concentração aumenta significativamente. Em sistemas biológicos, radicais podem facilmente modificar a estrutura e atividade de ácidos nucleicos, proteínas e outras biomoléculas, causando significativo estres oxidativo. Baseado em dados de ressonância magnética e espectrometria de massas, este artigo apresenta os produtos que provam a produção do radical acetil e a formação de compostos estáveis devido à ligação covalente entre o acetil e os aminoácidos (produtos acetilados), e os adutos de peptídeos e proteínas. Estes materiais foram separados por eletroforese capilar e identificados por espectrometria de massas. O meio reacional consistiu da mistura de diacetil e peroxynitrito em uma relação de 1:2 e em 20 mmol L-1 de fosfato de sódio, no valor de pH 7,2. Estes experimentos também revelam a dupla acetilação da lisina, demonstrando a alta reatividade do composto com biomoléculas contendo grupos de nitrogênio, abundantemente encontradas em sistemas biológicos. A mudança estrutural de uma molécula acetilada é uma fonte de modificações pós-tradução com inúmeras consequências biológicas.
Keywords acetylation of biomolecules
acetyl radical
peroxynitrite
diacetyl
mass spectrometry
CE/ESI-MS/MS
Language English
Sponsor Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)
INCT Redoxoma (National Institute of Science and Technology of Redox Processes in Biomedicine)
Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)
Grant number 2006/60245-3 e 2012/02514-9
Date 2013-12-01
Published in Journal of the Brazilian Chemical Society. Sociedade Brasileira de Química, v. 24, n. 12, p. 1983-1990, 2013.
ISSN 0103-5053 (Sherpa/Romeo, impact factor)
1678-4790 (Sherpa/Romeo, impact factor)
Publisher Sociedade Brasileira de Química
Extent 1983-1990
Origin http://dx.doi.org/10.5935/0103-5053.20130248
Access rights Open access Open Access
Type Article
Web of Science ID WOS:000328703200012
SciELO ID S0103-50532013001200012 (statistics in SciELO)
URI http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/8008

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