Validation and development of an immunonephelometric assay for the determination of alpha-1 antitrypsin levels in dried blood spots from patients with COPD

Validation and development of an immunonephelometric assay for the determination of alpha-1 antitrypsin levels in dried blood spots from patients with COPD

Alternative title Desenvolvimento e validação de um método de imunonefelometria em amostras de sangue em papel-filtro para a dosagem da alfa-1 antitripsina em pacientes com DPOC
Author Zillmer, Laura Russo Google Scholar
Russo, Rodrigo Google Scholar
Manzano, Beatriz Martins Google Scholar
Ivanaga, Ivan Google Scholar
Nascimento, Oliver Augusto Autor UNIFESP Google Scholar
Souza, Altay Alves Lino de Autor UNIFESP Google Scholar
Santos Junior, Gildo Google Scholar
Rodriguez, Francisco Google Scholar
Miravitlles, Marc Google Scholar
Jardim, José Roberto Autor UNIFESP Google Scholar
Institution Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
Afip Laboratory Department of Molecular Biology
Vall d'Hebron University Hospital Departments of Biochemistry and Pulmonology
Abstract OBJECTIVE:To validate and develop an immunonephelometric assay for the determination of alpha-1 antitrypsin (AAT) levels in dried blood spots from COPD patients in Brazil.METHODS:We determined AAT levels in serum samples and dried blood spots from 192 COPD patients. For the preparation of dried blood spots, a disk (diameter, 6 mm) was placed into a tube, eluted with 200 µL of PBS, and stored overnight at 4ºC. All of the samples were analyzed by immunonephelometry in duplicate. We used the bootstrap resampling method in order to determine a cut-off point for AAT levels in dried blood spots.RESULTS:The correlation coefficient between the AAT levels in serum samples and those in dried blood spots was r = 0.45. For dried blood spots, the cut-off value was 2.02 mg/dL (97% CI: 1.45-2.64 mg/dL), with a sensitivity, specificity, positive predictive value, and negative predictive value of 100%, 95.7%, 27.2%, and 100%, respectively.CONCLUSIONS:This method for the determination of AAT levels in dried blood spots appears to be a reliable screening tool for patients with AAT deficiency.

OBJETIVO: Validar e desenvolver um método de dosagem de alfa-1 antitripsina (AAT) por imunonefelometria em amostras de sangue em papel-filtro em pacientes com DPOC no Brasil.MÉTODOS:Amostras de soro e de sangue em papel-filtro de 192 pacientes com DPOC foram utilizadas para a dosagem de AAT. Para a preparação das amostras de sangue em papel-filtro, um disco do papel com diâmetro de 6 mm foi colocado em um tubo e eluído com 200 µL de PBS, permanecendo por toda a noite a 4ºC. Todas as amostras foram analisadas em duplicata por imunonefelometria. O método de reamostragem bootstrap foi utilizado para a determinação de um ponto de corte para o nível de AAT nas amostras de sangue em papel-filtro.RESULTADOS:O coeficiente de correlação entre os níveis de AAT em soro e em sangue em papel-filtro foi de r = 0,45. Para as amostras em papel-filtro, o ponto de corte foi de 2,02 mg/dL (IC97%: 1,45-2,64 mg/dL), com sensibilidade, especificidade, valor preditivo positivo e valor preditivo negativo de 100%, 95,7%, 27,2% e 100%, respectivamente.CONCLUSÕES:Este método de determinação dos níveis de AAT em sangue em papel-filtro se mostrou uma ferramenta confiável para o rastreamento de pacientes com deficiência de AAT.
Keywords alpha 1-antitrypsin deficiency
Nephelometry and turbidimetry
Pulmonary disease, chronic obstructive
Deficiencia de alfa 1-antitripsina
Nefelometria e turbidimetria
Doenca pulmonar obstrutiva cronica
Language English
Date 2013-09-01
Published in Jornal Brasileiro de Pneumologia. Sociedade Brasileira de Pneumologia e Tisiologia, v. 39, n. 5, p. 547-554, 2013.
ISSN 1806-3713 (Sherpa/Romeo, impact factor)
Publisher Sociedade Brasileira de Pneumologia e Tisiologia
Extent 547-554
Origin http://dx.doi.org/10.1590/S1806-37132013000500004
Access rights Open access Open Access
Type Article
Web of Science ID WOS:000328875600004
SciELO ID S1806-37132013000500547 (statistics in SciELO)
URI http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/7972

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