Optimizing nucleic acid extraction from thyroid fine-needle aspiration cells in stained slides, formalin-fixed/paraffin-embedded tissues, and long-term stored blood samples

Optimizing nucleic acid extraction from thyroid fine-needle aspiration cells in stained slides, formalin-fixed/paraffin-embedded tissues, and long-term stored blood samples

Título alternativo Otimização da extração de ácidos nucleicos de material de punção aspirativa por agulha fina de tiroide obtido de lâminas coradas, tecidos fixados em formalina e emblocados em parafina e amostras de sangue estocadas por longo período
Autor Kizys, Marina M. L. Autor UNIFESP Google Scholar
Cardoso, Mirian G. Autor UNIFESP Google Scholar
Lindsey, Susan C. Autor UNIFESP Google Scholar
Harada, Michelle Y. Autor UNIFESP Google Scholar
Soares, Fernando de Almeida Autor UNIFESP Google Scholar
Melo, Maria Clara C. Autor UNIFESP Google Scholar
Montoya, Marlyn Z. Autor UNIFESP Google Scholar
Kasamatsu, Teresa S. Autor UNIFESP Google Scholar
Kunii, Ilda S. Autor UNIFESP Google Scholar
Giannocco, Gisele Autor UNIFESP Google Scholar
Martins, João Roberto M. Autor UNIFESP Google Scholar
Cerutti, Janete Maria Autor UNIFESP Google Scholar
Maciel, Rui Monteiro de Barros Autor UNIFESP Google Scholar
Dias-da-Silva, Magnus Régios Autor UNIFESP Google Scholar
Instituição Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
Faculdade de Medicina do ABC Department of Morphology and Physiology
Resumo OBJECTIVE: Adequate isolation of nucleic acids from peripheral blood, fine-needle aspiration cells in stained slides, and fresh and formalin-fixed/paraffin-embedded tissues is crucial to ensure the success of molecular endocrinology techniques, especially when samples are stored for long periods, or when no other samples can be collected from patients who are lost to follow-up. Here, we evaluate several procedures to improve current methodologies for DNA (salting-out) and RNA isolation. MATERIALS AND METHODS: We used proteinase K treatment, heat shock, and other adaptations to increase the amount and quality of the material retrieved from the samples. RESULTS: We successfully isolated DNA and RNA from the samples described above, and this material was suitable for PCR, methylation profiling, real-time PCR and DNA sequencing. CONCLUSION: The techniques herein applied to isolate nucleic acids allowed further reliable molecular analyses. Arq Bras Endocrinol Metab. 2012;56(9):618-26

OBJETIVO: O isolamento adequado de ácidos nucleicos a partir de sangue periférico, lâmina corada de punção aspirativa por agulha fina, tecido fixado em formalina e emblocado em parafina e tecido fresco é fundamental para assegurar o sucesso de técnicas aplicadas em endocrinologia molecular, principalmente quando lidamos com amostras estocadas por longos períodos ou quando há impossibilidade de nova coleta de amostra de pacientes que perderam o seguimento. Neste trabalho, objetivamos otimizar as metodologias clássicas para a extração de DNA (salting-out) e RNA. MATERIAIS E MÉTODOS: Utilizamos proteinase K, choque térmico, dentre outras modificações, com o objetivo de aumentar a quantidade e a qualidade do material recuperado a partir das amostras descritas acima. RESULTADOS: Isolamos com sucesso DNA e RNA de tais amostras e o material obtido foi adequado para a realização de PCR, perfil de metilação, PCR em tempo real e sequenciamento de DNA. CONCLUSÃO: As técnicas aplicadas neste estudo para isolar ácidos nucleicos permitiram a realização posterior de análises moleculares consistentes e confiáveis. Arq Bras Endocrinol Metab. 2012;56(9):618-26
Palavra-chave DNA
RNA
nucleic acid extraction
FNA
FFPE tissue
blood
DNA
RNA
extração de ácido nucleico
PAAF
tecido FFEP
sangue
Idioma Inglês
Financiador Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)
Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)
Data de publicação 2012-12-01
Publicado em Arquivos Brasileiros de Endocrinologia & Metabologia. Sociedade Brasileira de Endocrinologia e Metabologia, v. 56, n. 9, p. 618-626, 2012.
ISSN 0004-2730 (Sherpa/Romeo, fator de impacto)
Publicador Sociedade Brasileira de Endocrinologia e Metabologia
Extensão 618-626
Fonte http://dx.doi.org/10.1590/S0004-27302012000900004
Direito de acesso Acesso aberto Open Access
Tipo Artigo
Web of Science WOS:000313706900004
SciELO S0004-27302012000900004 (estatísticas na SciELO)
Endereço permanente http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/7439

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Nome: S0004-27302012000900004.pdf
Tamanho: 350.6KB
Formato: PDF
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