Identificação De Ceramidas Livres Em Leishmania (Viannia) Braziliensis

Identificação De Ceramidas Livres Em Leishmania (Viannia) Braziliensis

Author Brisque, Barbara Raquel Munaretti Autor UNIFESP Google Scholar
Advisor Takahashi, Anita Hilda Straus Autor UNIFESP Google Scholar
Institution Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
Graduate program Ciências Biológicas (Biologia Molecular)
Abstract Leishmania (Viannia) braziliensis, etiological agent of cutaneous, mucocutaneous and mucosal leishmaniasis, is subject to different medium modulations (pH and temperature), based on the host microenvironments. Recent studies show the role of sphingolipid metabolism in L. braziliensis biology. Thus, the objective of this study was to analyze the effect of temperature and pH in viability, morphology and sphingolipid profile of the parasite. There were used different experimental tools, like flow cytometry, scanning electron microscopy, transmission electron microscopy and mass spectrometry. Parasite growth rates were similar for parasites cultured at 23˚C in pH 7.2 medium (control condition for promastigotes) and parasites cultured in isolated stress conditions of temperature and pH, however, when the parasites were cultured in combined stress condition (pH and temperature), the parasite growth rate was reduced. Parasites cultured at 23 °C showed elongated morphology, like promastigotes, while those cultured at 35 °C were similar to amastigotes. Regarding parasites lipidomic, the presence of free ceramides in Leishmania was demonstrated for the first time. These molecules were analyzed by electrospray ionization mass spectrometry at positive mode. The main ions identified in control parasites were: m/z 540 (d20:0/14:0) and 538 (d20:1/14:0). On the other hand, it was observed an increase of the proportion of ions containing sphingoid base d20:1, that is, ions with m/z 538 (d20:1/14:0) and 566 (d20:1/16:0). Increasing temperature from 23 °C to 35 ˚C, maintaining pH at 7.2, otherwise, led to a higher proportion of m/z 568 (d20:0/16:0), and a lower proportion of the ion with m/z 566 (d20:1/16:0). Ceramide diversities detected in different stress conditions, like ceramides presenting m/z in accordant to methylated and hydroxylated fatty acids, can give rise to new perspectives in leishmaniasis therapeutic fields.

Leishmania (Viannia) braziliensis, agente etiológico da leishmaniose cutânea, mucosa e mucocutânea, sofre modulações distintas (pH e temperatura), de acordo com o microambiente do hospedeiro. Na busca por potenciais moléculas-alvo no âmbito terapêutico, estudos recentes demonstram a importância do metabolismo de esfingolipídeos na biologia da L. braziliensis. Dessa forma, o objetivo deste estudo foi analisar o efeito da temperatura e do pH na viabilidade, morfologia e no perfil esfingolipídico do parasita. Para tais análises, foram utilizadas diferentes ferramentas, como citometria de fluxo, microscopia eletrônica de varredura e de transmissão e espectrometria de massas. Quanto à taxa de crescimento do parasita, ela foi semelhante nos parasitas cultivados a 23˚C em meio pH 7,2 (condição controle para promastigotas) e cultivados em condições de estresse isolado de temperatura e pH, enquanto no estresse conjunto de pH e temperatura, ela foi menor. Já em relação à morfologia, os parasitas mantidos a 23 °C apresentaram formato alongado, característico de promastigota, enquanto os mantidos a 35 °C apresentaram características ultraestruturais semelhantes às de amastigotas. Em relação à lipidômica do parasita, pela primeira vez foi demonstrada a presença de ceramidas livres em Leishmania. Ceramida foi analisada por espectrometria de massas com fonte de ionização por electrospray, em modo positivo. Foram observadas as seguintes características na composição de ceramida entre as diferentes condições: nos parasitas controle, os íons majoritários foram os de m/z 540 (d20:0/14:0) e 538 (d20:1/14:0), enquanto no estresse de pH, observou-se um aumento da proporção dos íons contendo base esfingoide d20:1, isto é, íons de m/z 538 (d20:1/14:0) e 566 (d20:1/16:0). A elevação da temperatura de 23 °C para 35 ˚C, mantendo-se o pH 7,2, por sua vez, provocou aumento na proporção do íon de m/z 568 (d20:0/16:0), com redução do íon de m/z 566 (d20:1/16:0). Outras diferenças detectadas entre as diferentes condições de cultivo, como a presença de ceramidas com massas compatíveis com presença de ácidos graxos metilados e hidroxilados, em condições de estresse de pH e temperatura, podem trazer perspectivas para novos alvos terapêuticos.
Keywords Leishmania (Viannia) Braziliensis
Sphingolipids
Ceramides
Mass Spectrometry
Leishmania (Viannia) Braziliensis
Esfingolipídeos
Ceramidas
Espectrometria De Massas
"
Language Portuguese
Date 2017-08-31
Research area Proteases E Inibidores De Proteases
Knowledge area Bioquimica
Publisher Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
Extent 118p.
Origin https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=5064605
Access rights Closed access
Type Dissertation
URI http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/50531

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