Estudo de catepsinas b-símile derivadas de trypanosoma congolense com a utilização de bibliotecas combinatórias sintéticas fluorescentes

Estudo de catepsinas b-símile derivadas de trypanosoma congolense com a utilização de bibliotecas combinatórias sintéticas fluorescentes

Autor Oliveira, Lilian Caroline Goncalves de Autor UNIFESP Google Scholar
Orientador Juliano Neto, Luiz Juliano Neto Autor UNIFESP Google Scholar
Instituição Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
Pós-graduação Ciências Biológicas (Biologia Molecular)
Resumo Proteolytic enzymes (proteases) have been identified in a wide variety of pathogenic protozoa to man and animais, so inhibitors for these enzymes represent potential drugs to be used in the treatment of various diseases. There is a variety of methods for detection and characterization of proteolytic activity, however with identification of new peptidases, the development of faster and more efficient method is necessary, one of them includes the use of synthetic combinatorial libraries. They allow an initial mapping of the preference of some amino acid residues by the peptidase, making possible the prediction of candidate substrate for such peptidases quickly. In this thesis a detailed study of the hydrolytic properties of a cathepsin B-like from Trypanosoma congolense (TcoCBc1), pathogenic trypanosome of domestic ruminants, with the use of synthetic combinatorial libraries that have been developed in biophysics department of the Federal University of São Paulo, was developed. The first part of the project was the validation of the endopeptidases library Abz- GXX~XXQ-EDDnp, where Abz (ortho-aminobenzoic acid) is the donor of fluorescence and Q-EDDnp (glutamine-[N-(2,4-dinitrophenyl)-ethylenediamine]) is the fluorescence acceptor, Z position is successively occupied with 1 of 19 amino acids (cysteine is omitted), and X represents residues (other than Z) incorporated randomly. The use of the library was validated with representatives enzymes of serine, cysteine, metallo, glutamic and aspartic peptidades, as well as with pH profiles and effêct of specific inhibitors for each type of peptidase. Subsequently, the specificity of the peptidase TcoCBc1 study was conducted using Iibraries for endoand carboxypeptidases and peptides with fixed sequences, analyzing its specificity and the enzyme c1eavage pattern. In addition, molecular modeling study was conducted and docking analysis with best substrate was carried out to understand the distinct specificity in S1 and S2. The results of those works are describedin

Enzimas proteolíticas (peptidases) vêm sendo identificadas em uma ampla variedade de protozoários patogênicos ao homem e aos animais, de forma que inibidores para estas enzimas representam potenciais fármacos a serem utilizados no tratamento dessas diversas patologias. Há uma variedade de métodos para detecção e caracterização de atividade proteolítica, entretanto com a identificação de novas peptidases, é necessário o desenvolvimento de métodos mais rápidos e eficientes, um deles inclui o uso de bibliotecas combinatórias sintéticas. Estas permitem um mapeamento inicial da preferência da peptidase por alguns resíduos, sendo possível a predição de candidatos a substrato para tais peptidases rapidamente. Nesta tese foi desenvolvido o estudo detalhado das propriedades hidrolíticas de uma catepsina B-símile de Trypanosoma congolense (TcoCBc1), tripanossoma patogênico de ruminantes domésticos, com a utilização de bibliotecas combinatórias sintéticas que foram desenvolvidas no departamento de biofísica da Universidade Federal de São Paulo. A primeira parte do desenvolvimento do projeto foi a validação da biblioteca de forma geral Abz-GXX~XXQ-EOOnp para endopeptidases, onde Abz (ácido orto-aminobenzóico) é o doador de fluorescência e Q-EOOnp (glutamina-[N-(2,4-dinitrofenil)-etilenodiamina]) é o grupo apagador de fluorescência, a posição Z é sucessivamente ocupada com 1 dos 19 aminoácidos (cisteína é omitida), e X representa outros resíduos (que não o Z) incorporados randomicamente. O uso da biblioteca foi validado com enzimas representantes da classe de serino, cisteíno, metalo, glutamil e aspártico peptidades, assim como com perfis de pH e efeito de inibidores específicos para cada tipo de peptidase. Posteriormente, o estudo da especificidade da peptidase TcoCBc1 foi realizado com o uso de bibliotecas para endo e carboxipeptidases e com peptídeos de posição fixa, analisando sua especificidade e o padrão de clivagem da enzima. Além disso, foi realizado estudo de modelagem molecular da peptidase e docking do melhor substrato para analise da sua especificidade distinta em S1 e S2. Os resultados destes trabalhos estão descritos nos artigos em anexo (Oliveira et ai, 2012 e Oliveira et ai, 2014).
Assunto peptídeo hidrolases
catepsina b
trypanosoma congolense
biblioteca de peptídeos
Idioma Português
Data 2015-06-24
Publicado em OLIVEIRA, Lilian Caroline Goncalves de. Estudo de catepsinas b-símile derivadas de trypanosoma congolense com a utilização de bibliotecas combinatórias sintéticas fluorescentes. 2015. 100 f. Tese (Doutorado) - Escola Paulista de Medicina, Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), São Paulo, 2015.
Linha de pesquisa Bioquímica
Área de concentração Ciências biológicas
Editor Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
Extensão 100 p.
Fonte https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=2387763
Direito de acesso Acesso restrito
Tipo Tese de doutorado
URI http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/48801

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