Estudo do papel ikaros no desenvolvimento de células b-1

Estudo do papel ikaros no desenvolvimento de células b-1

Author Oliveira, Vivian Cristina de Autor UNIFESP Google Scholar
Advisor Popi, Ana Flavia Popi Autor UNIFESP Google Scholar
Institution Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
Graduate program Microbiologia e Imunologia
Abstract Objective: This study aims to investigate the role of Ikaros, chromatin remodeler factor, in the B-1 cell promiscuity. Firstly, we evaluated Ikaros expression by B-1 cells. The interaction of Ikaros with target genes was also studied. Furthermore, Ikaros expression and function in the B-1 cell derived prephagocyte (pre-B1CDP) was also investigated. Methods: B-1 cells were obtained from peritoneal cavity of BALB/c mice and this cell population enriched by cell sorter. mRNA and protein were extracted to analysis of Ikaros expression. The interaction of Ikaros to target genes were analysed by ChIP assay. Finally, the role of Ikaros in B-1 cells was investigated using siRNAsilencing strategy. To further analyse the role of Ikaros in the myeloid/lymphoid fate, expression of Ikaros and related genes were investigated in B-1 cells and pre-B-1CDP. Results/Discussion: Herein we have firstly described Ikaros expression by B-1 cells. These cells also express Il7r, Gfi1, PU.1e Flt3, and these genes promoters regions interact to Ikaros. Moreover after Ikaros silencing, Flt3, Il7r, Gfi1 expression was down-regulate, but PU.1 levels was increased. The absence of Ikaros induced decrease in Pax-5, EBF and MCSFR expression. We also have confirmed that Pu.1 expression is negatively regulated by Ikaros in B-1 cells, and this is an important point in the B-1 cell differentiation into a phagocyte. Conclusion: Ikaros is an important factor in the promiscuity profile of B-1 cells. In the absence of Ikaros, B-1 cell differentiation into a phagocyte is favorable. Contrariwise to conventional B cells, in the B-1 cell scenario Ikaros regulates Pu.1 expression, and it could be a key factor in the maintenance of lymphoid/myeloid bipotential of B-1 cells.

Objetivo: O objetivo deste estudo foi investigar o papel de Ikaros, fator remodelador de cromatina, na permissão da promiscuidade de células B-1.Primeiramente, avaliamos a expressão de Ikaros nestas células. A interação com genes alvo também foi estudada. A expressão e função de Ikaros em préfagócitos derivados de células B-1 (pré-B1CDP) foi analisada. Métodos: Células B-1 peritoneais foram enriquecidas por separação por cell sorter. Destas células foram extraídas proteínas totais e RNA mensageiro para avaliar a expressão de Ikaros e genes relacionados por Western blotting e PCR em tempo real. Além disto, foi avaliada a interação de Ikaros com seus genes alvos por ChIP. O papel de Ikaros foi avaliado utilizando-se silenciamento por RNA de interferência, seguido da avaliação da expressão dos genes lvos, mieloides e linfoides por células B-1 e pré-B1CDP. Resultados/Discussão: Neste trabalho foi visto pela primeira vez que células B-1 expressam o RNA mensageiro e a proteína Ikaros. Além disso, estas células expressam os genes Il7r, Gfi1, PU.1e Flt3, os quais possuem interação com Ikaros em suas regiões promotoras. Após o silenciamento foi visto que a ausência de Ikaros leva a diminuição na expressão de Flt3, Il7r, Gfi1 e um aumento na expressão de PU.1. Além disso, a ausência de Ikaros diminui a expressão de Pax-5, EBF e MCSF-R. Foi confirmado que a expressão de Pu.1 em células B-1 é negativamente regulada por Ikaros, e este é um ponto importante para diferenciação destas células a fagócitos. Conclusão: Este trabalho mostra que a proteína Ikaros é importante para o perfil promíscuo de células B-1. Na ausência de Ikaros, a diferenciação de células B-1 em fagócitos é favorecida. Contrariamente ao observado em linfócito B convencionais, Ikaros regula a expressão de Pu.1 em células B-1, este pode ser o fator central para a manutenção do potencial linfomieloide destas células.
Keywords role of ikaros
b-1 cells
papel de ikaros
células b-1
Language Portuguese
Date 2014-07-30
Published in OLIVEIRA, Vivian Cristina de. Estudo do papel ikaros no desenvolvimento de células b-1. 2014. Dissertação (Mestrado) - Escola Paulista de Medicina, Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), São Paulo, 2014.
Research area Microbiologia
Knowledge area Ciências biológicas
Publisher Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
Origin https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=950473
Access rights Closed access
Type Dissertation
URI http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/47735

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