Moléculas de superfície liberadas pelas formas metacíclicas do trypanosoma cruzi modulam negativamente a invasão celular

Moléculas de superfície liberadas pelas formas metacíclicas do trypanosoma cruzi modulam negativamente a invasão celular

Author Clemente, Tatiana Mordente Autor UNIFESP Google Scholar
Advisor Yoshida, Nobuko Yoshida Autor UNIFESP Google Scholar
Institution Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
Graduate program Microbiologia e Imunologia
Abstract Molecules released by pathogenic microorganisms can modulate the interaction with their hosts. We investigated whether metacyclic trypomastigote (MT) forms of diferent strains of Trypanosoma cruzi differencially released extracelular vesicles and soluble proteins, and examined their effect on MT invasion of host cells, focusing on the surface molecules gp82 and gp90. MTs of highly infective CL strain and poorly infective G strain were incubated for 1 h in complete medium (D10) or in PBS++. Conditioned medium (CM), collected after centrifugation of parasites and designated as CM-G and CM-CL, was used for cell invasion assays and Westen blot analysis. Hela cells were incubated for 1 h with MTs of CL strain in D10, or of G strain in PBS++ that induces the scattering/exocytosis of lysosomes and promotes parasite invasion, in the absence or presence of CM. Parasite internalization was significantly reduced in the presence of CM-G but not of CM-CL. Analysis of CM by Western blot, using monoclonal antibodies against gp82 and gp90, which function as promoter and negative regulator of cell invasion, respectively, revealed high levels of gp82 and gp90 in CM-G and low levels in CM-CL. G strain CM generated in PBS++, containing lower amounts of gp90 e gp82 when compared to CM produced in D10, displayed a lower inhibitory effect on invasion by MTs. Preincubation of CM-G (D10) with anti-gp90 or anti-gp82 antibody that does not recognize live MTs neutralized the cell invasion inhibitory activity. Vesicles of diverse size and soluble factors, obtained by fractionation of CM-G and containing gp82 and gp90 molecules, were capable of significantly inhibiting cell invasion by MTs. Our results suggest that factors spontaneously released by MTs, containing high levels of gp82 and gp90, interfer with parasite internalization, gp82 presumably competing for the host cell receptor with the molecule expressed on MT surface, and gp90 further contributing to down modulate invasion.

Moléculas liberadas por microrganismos patogênicos podem modular sua interação com os hospedeiros. Nós investigamos se formas tripomastigotas metacíclicas (TMs) de diferentes cepas do Trypanosoma cruzi liberam vesículas extracelulares e proteínas solúveis de maneira diferenciada, e qual o efeito desses fatores na invasão celular, com foco nas moléculas de superfície gp82 e gp90. TMs da cepa CL, altamente infectiva, e da cepa G, pouco infectiva, foram incubados por 1 hora em meio completo (D10) ou em PBS++. O meio condicionado (MC), coletado após centrifugação dos parasitas, e denominado MC-CL e MC-G, foi usado em ensaios de invasão celular e análise por Western blot. Células HeLa foram incubadas por 1 hora com TMs da cepa CL em D10, ou da cepa G em PBS++ que induz espalhamento/exocitose de lisossomos e promove a invasão, na ausência ou na presença de MC. A internalização de parasitas foi significativamente reduzida na presença de MC-G, mas não de MC-CL. Análise de MC por Western blot, usando anticorpos monoclonais contra gp82 e gp90, que funcionam como promotor e regulador negativo da invasão celular, respectivamente, revelou altos níveis de gp82 a gp90 em MC-G e baixos níveis em MC-CL. O MC da cepa G gerado em PBS++, contendo quantidades menores de gp90 e gp82 quando comparado com o MC produzido em D10, mostrou efeito inibitório menor sobre a invasão por TMs. A pré-incubação de MC-G (D10) com anticorpo anti-gp90 ou anti-gp82 que não reconhece TMs vivos neutralizou a atividade inibitória da invasão celular. Vesículas de diversos tamanhos e fatores solúveis, obtidos pelo fracionamento do MC-G e contendo moléculas gp82 e gp90, foram capazes de inibir significativamente a invasão celular de TMs. Nossos resultados sugerem que fatores espontaneamente liberados por TMs, contendo altos níveis de gp82 e gp90, interferem no processo de internalização dos parasitas, gp82 presumivelmente competindo pelo receptor da célula hospedeira com a molécula de superfície dos TMs, e gp90 contribuindo mais ainda para modular negativamente a invasão.
Keywords metacyclic trypomastigote (mt)
tripomastigotas metacíclicas (tms)
trypanosoma cruzi
Language Portuguese
Date 2016-09-06
Published in CLEMENTE, Tatiana Mordente. Moléculas de superfície liberadas pelas formas metacíclicas do trypanosoma cruzi modulam negativamente a invasão celular. 2016. 112 f. Tese (Doutorado) - Escola Paulista de Medicina, Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), São Paulo, 2016.
Research area Microbiologia
Knowledge area Ciências biológicas
Publisher Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
Extent 112 p.
Origin https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=3618204
Access rights Closed access
Type Thesis
URI http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/47283

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