Caracterização da resposta imune tecidual em pacientes pós-transplante renal com infecção fúngica causada pelo complexo de espécies cryptococcus neoformans / cryptococcus gattii

Caracterização da resposta imune tecidual em pacientes pós-transplante renal com infecção fúngica causada pelo complexo de espécies cryptococcus neoformans / cryptococcus gattii

Author Solda, Marcel Vieira Autor UNIFESP Google Scholar
Advisor Colombo, Arnaldo Lopes Colombo Autor UNIFESP Google Scholar
Institution Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
Graduate program Infectologia
Abstract Introduction: Yeasts of the Cryptococcus neoformans / C. gattii species complex are an important cause of infection in humans and may cause symptoms of pneumonia and meningoencephalitis. Cryptococcosis is the second major systemic mycosis related to kidney transplantation, which is the most likely group of risk for developing cryptococcosis among solid organ transplant recipients. Aims: The objectives of this work were: a) to identify Cryptococcus spp. isolated from renal transplanted recipients with cryptococcosis, analyzing their intraspecific diversity; b) to characterize the pattern of granulomatous inflammatory response to the fungus in different clinical forms of cryptococcosis; c) to evaluate the in situ profile of T regulatory response in different clinical presentations. Methodology: The casuistic was selected at the Hospital São Paulo (HSP) and the Hospital do Rim e Hipertensão (HR) composed by 13 patients treated in these hospitals, who developed cryptococcal infection between the period of 2005 to 2012. The isolates of C. neoformans / C. gattii complex collected from these patients were identified by biochemical methods and by the Intergenic Spacer 1 (IGS1) ribosomal DNA sequencing, which was also used to assess the haplotype diversity. Paraffin tissue sections from biopsies of these same patients were used for histopathology and immunohistochemistry (IHC). The IHC analysis included the evaluation of cellular markers CD4 and Foxp3, and the cytokines IL-10 and TGF-β. Results: All clinical isolates were identified as C. neoformans var. grubii. The intraspecific analysis of the IGS1 region showed the occurrence of five genotypes, indicating some variability in this population. Histological and immunohistochemical analysis identified three different patterns of granulomas: a) compact, observed in skin biopsies exhibiting high numbers of Treg cells; b) loose, more frequent in lung biopsies and associated with low numbers of Treg cells; c) mixed, observed in lung and skin samples presenting characteristics of the two patterns of granuloma and high count of Treg cells. Conclusions: We conclude that the phenotypic and molecular methods provided accurate identification of the isolates, and intraspecific diversity within the IGS1 region suggests that this genetic target may be used for molecular epidemiology studies. Histopathologic analysis identified three different patterns of granulomatous response which reflect the differences in the efficiency of fungal containment and the extension of the lesion: a) compact epithelioid granulomas; b) loose macrophagic granulomas; c) mixed granulomas. The heterogeneity of tissue responses found in this group of patients may be associated with the immune status of the host, the different stages of infection, as well as the immunosuppressive therapy and antifungal treatment used. The analysis of markers of T regulatory response showed a predominance of this cell population in compact and mixed epithelioid granulomas. This study suggests that Treg cells may have a protective role in cryptococcosis, although more studies are needed to confirm this hypothesis.

Introdução: Leveduras do complexo de espécies Cryptococcus neoformans/C. gattii são importante causa de infecção no homem, podendo causar quadros de pneumonia e meningoencefalite. A criptococose é a segunda principal micose sistêmica relacionada a transplantes renais, sendo este o grupo de maior susceptibilidade para desenvolver criptococose dentre transplantados de órgãos sólidos. Objetivos: Os objetivos deste trabalho foram: a) identificar os isolados de Cryptococcus spp. em pacientes transplantados renais com criptococose e analisar sua diversidade intraespecífica; b) caracterizar o padrão de resposta inflamatória granulomatosa ao fungo nas diversas formas clínicas da criptococose; c) avaliar o perfil in situ de resposta T regulatória em suas diferentes apresentações clínicas. Metodologia: A casuística foi selecionada no Hospital São Paulo (HSP) e Hospital do Rim e Hipertensão (HR) de São Paulo sendo composta por 13 pacientes acompanhados nestes hospitais que apresentaram infecção criptococócica durante o período de 2005 a 2012. Os isolados de Cryptococcus spp. provenientes destes pacientes foram identificados por métodos bioquímicos e por sequenciamento da região do espaçador intergênico 1 (IGS1) do DNA ribossomal, buscando-se avaliar também a diversidade de haplótipos. Cortes de tecido parafinado provenientes das biópsias destes mesmos pacientes foram utilizados para a análise histopatológica e imuno-histoquímica (IHQ). A análise IHQ foi realizada para avaliar a presença dos marcadores CD4 e FoxP3, além das citocinas IL-10 e TGF-β. Resultados: Todos os isolados clínicos foram identificados como C. neoformans var. grubii. A análise da variabilidade das sequências da região IGS1 demonstrou a ocorrência de 5 genótipos, indicando haver diversidade intraspecífica nesta população. Na análise histopatológica e imuno-histoquímica, identificamos 3 diferentes padrões de granuloma: a) compacto, observado nas biópsias cutâneas em conjunto a um alto número de células Treg; b) frouxo, mais frequente nas biópsias pulmonares e associado a baixo número de células Treg; c) misto, observado em pulmão e pele com características dos outros 2 padrões de granuloma e alta contagem de células Treg. Conclusões: Concluímos que os métodos fenotípicos e moleculares permitiram a correta identificação dos isolados. A diversidade intraespecífica observada na região IGS1 indica a utilidade deste marcador na identificação acurada de espécies do complexo Cryptococcus neoformans/C. gattii e também em estudos de epidemiologia molecular. A análise histopatológica permitiu identificar 3 diferentes padrões de resposta granulomatosa que refletem diferenças na eficiência de contenção do fungo e extensão da área de lesão: a) granulomas compactos epitelioides; b) granulomas frouxos macrofágicos; c) granulomas mistos. A heterogeneidade das respostas teciduais encontradas nesse grupo de pacientes pode estar associada ao status imunológico do hospedeiro, aos diferentes estágios de infecção, bem como à terapia imunossupressora e o tratamento antifúngico utilizados. A análise dos marcadores da resposta T regulatória mostrou haver predomínio desta população celular em granulomas compactos epitelioides e mistos. Este estudo sugere que as células Treg podem ter papel protetor na criptococose, embora sejam necessários mais estudos para confirmação desta hipótese.
Keywords cryptococcus spp
renal transplantation
cytokines
regulatory t cells
granulomatous inflammation
cryptococcus spp
renal transplantation
cytokines
regulatory t cells granulomatous inflammation
Language Portuguese
Date 2014-09-22
Published in SOLDA, Marcel Vieira. Caracterização da resposta imune tecidual em pacientes pós-transplante renal com infecção fúngica causada pelo complexo de espécies cryptococcus neoformans / cryptococcus gattii. 2014. 128 f. Dissertação (Mestrado) - Escola Paulista de Medicina, Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), São Paulo, 2014.
Research area Medicina
Knowledge area Ciências da saúde
Publisher Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
Extent 128 p.
Origin https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=1309586
Access rights Closed access
Type Dissertation
URI http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/46582

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