Eluição passiva de proteínas de géis de poliacrilamida e caracterização por MALDI-ToF

Eluição passiva de proteínas de géis de poliacrilamida e caracterização por MALDI-ToF

Título alternativo Passive elution of protein from polyacrilamyde gels and characterization by MALDI-ToF
Autor Thomé, Carolina Hassibe Autor UNIFESP Google Scholar
Orientador Greene, Lewis Joel Autor UNIFESP Google Scholar
Resumo O dogma central da biologia molecular preconizava que um gene codificava apenas uma proteina, mas agora compreendemos que modificacoes pos-transcripcionais e modificacoes pos-traducionais (MPTs) como splicing de RNA e de proteinas, proteolise limitada, ubiquitinacao, glicosilacao, entre outras, permitem que familias de proteinas similares mas nao identicas, sejam obtidas a partir de um unico gene. As modificacoes pos-traducionais sao processos que alteram as propriedades de uma proteina principalmente por adicao seletiva de grupos ou clivagem da cadeia polipeptidica, modulando a sua atividade e suas interacoes. A identificacao da proteina e caracterizacao da modificacao e o local na cadeia polipeptidica podem fornecer informacoes importantes para o entendimento da sua regulacao e funcao em um processo celular. Estudos em nosso laboratorio atraves da analise por peptide mass fingerprint (PMF) mostraram que 30 a 40 por cento das proteinas diferencialmente expressas por celulas dendriticas imaturas e maturas e por diferentes estagios de melanoma humano estao presentes em multiplas formas eletroforeticas com diferentes pontos isoeletricos (PI) e/ou massas moleculares, resultado de alteracoes quimicas ou enzimaticas nessas proteinas. Considerando as estrategias Top down e Botlon up decidimos por Top down. Nos estudamos um metodo de extracao de proteinas intactas de geis de poliacrilamida unidimensionais de 0,125 a 15 J.1g de proteinas e entre 13 ate 66 kDa. Demonstramos que eluicao passiva nao modifica a massa molecular da proteina. E esta metodologia sera utilizada em geis 2D para identificar e caracterizar as MPTs das proteinas relevantes nos processos celulares atraves da analise por espectrometria de massas MALDI-ToF
Palavra-chave Proteínas
Eletroforese em Gel de Poliacrilamida
Espectrometria de Massas por Ionização e Dessorção a Laser Assistida por Matriz
Proteins
Electrophoresis, Polyacrylamide Gel
Spectrometry, Mass, Matrix-Assisted Laser Desorption-Ionization
Idioma Português
Data de publicação 2007
Publicado em São Paulo: [s.n.], 2007. 72 p.
Publicador Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
Extensão 72 p.
Direito de acesso Acesso restrito
Tipo Dissertação de mestrado
Endereço permanente http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/23504

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